Name: מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: למדו פרוטוקול ליצירת פצעי חתך דו-צדדיים בעכברים וניתוח מורפומטרי היסטולוגי. השיטה מאפשרת זיהוי מדויק של פגמים בריפוי פצעים באמצעות חתכים טוריים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה לכל חברי מעבדת דאנוולד שתרמו לייעול הפרוטוקול הזה לאורך השנים, וגם לג'ינה שטמן, שהתעקשותה לקדם את השימוש במקטעים סדרתיים לניתוח פצעים אפשרה את יצירתה. עבודה זו נתמכה על ידי מימון מ-NIH/NIAMS למרטין דנוואלד (AR067739).

<ol><li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%3A+mechanisms%2C+signaling%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li>
<li>Park, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-scale+coordination+of+cellular+behaviour+promotes+epidermal+wound+repair+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue-scale coordination of cellular behaviour promotes epidermal wound repair in live mice.</a> Nature Cell Biology. 19 (2), 155-163 (2017).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453 (7193), 314-321 (2008).</li>
<li>Ansell, D. M., Campbell, L., Thomason, H. A., Brass, A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+statistical+analysis+of+murine+incisional+and+excisional+acute+wound+models%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">A statistical analysis of murine incisional and excisional acute wound models.</a> Wound Repair Regeneration. 22 (2), 281-287 (2014).</li>
<li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Modeling+Conundrum%3A+Murine+Models+for+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A Modeling Conundrum: Murine Models for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li>
<li>Crowe, M. J., Doetschman, T., Greenhalgh, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+wound+healing+in+immunodeficient+TGF-beta+1+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Delayed wound healing in immunodeficient TGF-beta 1 knockout mice.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (1), 3-11 (2000).</li>
<li>Pietramaggiori, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+cutaneous+healing+in+diabetic+mice+exposed+to+healthy+peripheral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Improved cutaneous healing in diabetic mice exposed to healthy peripheral circulation.</a> Journal of Investigative Dermatology. 129 (9), 2265-2274 (2009).</li>
<li>Cold Spring Harbor. Paraformaldehyde in PBS. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. 1 (1), (2006).</li>
<li>Gerharz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+analysis+of+murine+skin+wound+healing%3A+standardization+of+experimental+procedures+and+impact+of+an+advanced+multitissue+array+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Morphometric analysis of murine skin wound healing: standardization of experimental procedures and impact of an advanced multitissue array technique.</a> Wound Repair Regeneration. 15 (1), 105-112 (2007).</li>
<li>Colwell, A. S., Krummel, T. M., Kong, W., Longaker, M. T., Lorenz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+wounds+in+the+MRL%2FMPJ+mouse+heal+with+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar.</a> Wound Repair Regeneration. 14 (1), 81-90 (2006).</li>
<li>Le, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor+beta+3+is+required+for+proper+excisional+wound+repair+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor beta 3 is required for proper excisional wound repair in vivo.</a> PLoS One. 7 (10), 48040(2012).</li>
<li>Sato, T., Yamamoto, M., Shimosato, T., Klinman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+wound+healing+mediated+by+activation+of+Toll-like+receptor+9%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Accelerated wound healing mediated by activation of Toll-like receptor 9.</a> Wound Repair Regeneration. 18 (6), 586-593 (2010).</li>
<li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cells+during+wound+repair%3A+the+good%2C+the+bad+and+the+ugly%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li>
<li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair%3A+a+showcase+for+cell+plasticity+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Wound repair: a showcase for cell plasticity and migration.</a> Current Opinion in Cell Biology. 42, 29-37 (2016).</li>
<li>Hoffman, M., Monroe, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+intensity+laser+therapy+speeds+wound+healing+in+hemophilia+by+enhancing+platelet+procoagulant+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Low intensity laser therapy speeds wound healing in hemophilia by enhancing platelet procoagulant activity.</a> Wound Repair Regeneration. 20 (5), 770-777 (2012).</li>
<li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (5), 349-363 (2002).</li>
<li>Uchiyama, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOX2+Epidermal+Overexpression+Promotes+Cutaneous+Wound+Healing+via+Activation+of+EGFR%2FMEK%2FERK+Signaling+Mediated+by+EGFR+Ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">SOX2 Epidermal Overexpression Promotes Cutaneous Wound Healing via Activation of EGFR/MEK/ERK Signaling Mediated by EGFR Ligands.</a> Journal of Investigative Dermatology. 139 (8), 1809-1820 (2019).</li>
<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).</li>
<li>Rhea, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+regulatory+factor+6+is+required+for+proper+wound+healing+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Interferon regulatory factor 6 is required for proper wound healing in vivo.</a> Developmental Dynamics. 249 (4), 509-522 (2020).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

מודל הפצע ים דו צדדי הוא הליך להתאמה אישית מאוד אשר יכול לשמש כדי ללמוד היבטים רבים ושונים של ריפוי הפצע. לפני תחילת פרויקט ריפוי הפצע, החוקרים צריכים לבצע ניתוח כוח כדי לקבוע את מספר הפצעים הדרושים כדי לזהות פגם בגודל אפקט מסוים. חוסר עקביות קיים בתוך הספרות על אם עכברים בודדים או פצעים צריך לשמש משכפלים ביולוגיים, עם זאת, מחקר שנערך לאחרונה הראה כי אין מתאם משמעותי בין שני פצעים על בעלחיים יחיד 4. הדבר מצביע על כך שפצעים מאדם יחיד אינם תלויים זה בזה ותוכלים להיחשב כמשכפלים ביולוגיים, מה שמפחית א...

ריפוי פצעים עוריים הוא תהליך ביולוגי מורכב עם שלבים חופפים באופן רצף. היא דורשת תיאום של תהליכים תאיים ומולקולריים המוסדרים באופן זמני ומרחבי על מנת לשחזר את תפקוד המחסום של האפיתל הפגוע. בשלב הראשון, דלקת, נויטרופילים מקרופאגים נודדים לתוך הפצע, מגייסים הגנות מקומיות ומערכתיות1. מעקב וחפיפה של השלב הדלקתי הוא שלב ההתפשטות. פיברובלסטים מתחילים להתרבות במהירות ולנדוד לתוך רקמת הגרגר. Keratinocytes הרחק מהקצה המוביל להתרבות לכיוון הפצע כמו keratinocytes מובדיל בקצה המוביל לנדוד כדי לאפיתל מחדש את הפצע2. לבסוף, שלב השיפוץ וההתבגרות מתחיל, שבמהלכו פיברובלסטים ברקמת הגרגר מתחילים לסנתז ולהפקיד קולגן. השיפוץ והארגון של המטריצה החדשה יכולים להימשך עד שנה אחת בעקבות פציעה3. בשל המורכבות של אירועים חופפים מעורבים שיחה צולבת בין סוגי תאים מרובים, ולמרות שנים של מחקר, רבים מהמנגנונים הסלולריים והמולקולריים הבסיסיים ריפוי הפצע להישאר מובן היטב.
מודל העכבר הוא המודל היונקים הדומיננטי לחקירת מנגנונים של ריפוי פצעים בשל קלות השימוש שלהם, עלות נמוכה יחסיתוניפולנטיות גנטית 1,4,5. למרות סוגים שונים של פצעים תוארו במודל murine, הנפוץ ביותר הוא פצע excisional (או אגרוף דו צדדי או ביופסיה אגרוף ישיר), ואחריו מודלים פצעחתך 4. מודל הפצע excisional יש יתרון מובהק על המודל החתך כפי שהוא מטבעו יוצר רקמת שליטה שלא עברה את תהליך הריפוי. רקמת ביופסיית הפונץ' המחרוטת כחלק מהפרוטוקול הכירורגי יכולה להיות מעובדת באותו אופן כמו הרקמה הפצועה ולהשתמש בה כדי לבסס את התנאים ההמו-סטטיים לקריטריון הרצוי. רקמת בקרה excised עשוי להיות שימושי גם אם להעריך את ההשפעות של טיפול מוקדם בעור או אישור שינוי גנים מוצלח בזמן פציעה4.
ניתן להעריך פרמטרי ריפוי על ידי טכניקות רבות ושונות, כולל תכנון או היסטרולוגיה. עם זאת, planimetry יכול רק להעריך מאפיינים גלויים של הפצע, ו בשל הנוכחות של גלד, לעתים קרובות אינו תואם למדידות של ריפוי כי הם הדמיה על ידי היסטולוגיה, ובכך מה שהופך את ההיטולוגיה "תקן הזהב" שלניתוח 4. למרות ניתוח היסטולוגי להיות תקן הזהב, הוא מבוצע בדרך כלל על קבוצת משנה שרירותית שלהפצע 6,7. לדוגמה, חיתוך הפצע ב"חצי" לפני הטבעה וניתוח הפצע הוא כיום נוהג נפוץ כדי להפחית את הזמן והמשאבים שהושקעו על חומרי ניתוח נתונים וחיתוך. שיטת הניתוח המורפומטרי המתואר בפרוטוקול זה פותחה כדי להקיף את רקמת הפצע כולה, כדי לשקף במדויק את המאפיינים המורפולוגיים של הפצע, ולהגדיל את הסבירות לגילוי פגמים בריפוי פצעים עם גודל אפקט קטן. בפרוטוקול זה, אנו מפרטים שיטה כירורגית ליצירת פצע murine הנפוץ ביותר, פצע כריתה בעובי מלא דו צדדי, כמו גם שיטה מפורטת וקפדנית לניתוח היסטולוגי כזה משמש לעתים נדירות בתחום.

<table><tbody><tr><td>100% אתנול</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>80% אתנול</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>95% אתנול</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>הכנה לאלכוהול</td><td>NOVAPLUS</td><td>V9100</td><td>70% אלכוהול איזופרופיל</td></tr>, <tr><td>אמוניום הידרוקסיד</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סטרילי רפידות ביופסיה</td><td>Cellpath</td><td>22-222-012</td><td></td></tr><tr><td>יריעת</td><td></td><td></td> פלסטיק <td>שחורה משהו מוצק אך ניתן למניפולציה בגודל של גיליון נייר</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td></td><td></td> ברייטפילד <td>עם יכולות רכישה דיגיטליות ואובייקטיבי פי 4</td></tr><tr><td>אפליקטורים</td><td></td><td></td><td></td>עם קצה כותנה</tr><tr><td>כיסויים</td><td></td><td></td><td>22 x 60 #1</td></tr><tr><td>יריעות</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>שעווה דנטליותמצלמה דיגיטלית</td><td></td><td></td><td>כלול סרגל לקנה מידה, אם רלוונטי</td></tr><tr><td>מחט התגרות דיסקציה (ישרה)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>תבניות הטבעה</td><td></td><td></td><td>22 x 22 x 12</td></tr><tr><td>טבעות הטבעה</td><td>Simport Scientific Inc.</td><td>M460</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה</td><td></td><td></td><td></td>אצטית קרחונית</tr><tr><td>קוצץ</td><td></td><td></td><td></td>שיער</tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Conair</td><td></td><td>לחות יבשה כרית חימום</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtome להבי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td> מיקרוטום <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מברשות</td><td></td><td></td><td></td>צבע</tr><tr><td>פרפין סוג 6</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חיץ פוספט (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Povidone-iodine</td><td>Aplicare</td><td>82-255</td><td></td></tr><tr><td>קלטת עיבוד</td><td>Simport Scientific Inc.</td>סכיני גילוח <td>M490-2</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>ASR.009</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>להבי אזמל רגילים #10</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ידית</td><td></td><td></td><td></td>אזמל</tr><tr>מספריים <td></td><td></td><td>כירורגיים חדים</td><td>סטריליים לניתוח</td></tr><tr><td>אגרופים</td><td></td><td></td> ביופסיית עור <td>גודל כפי שנקבע על ידי החוקר</td></tr><tr><td>קופסאות</td><td></td><td></td><td></td> שקופיות</tr><tr><td>מחממי שקופיות שקופיות</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ Superfrosted</td><td>Fisher Scientific</td><td>22 037 246</td><td></td></tr><tr><td>בקרת טמפרטורה אמבט</td><td></td><td></td><td></td>מים</tr><tr><td>תחנת</td><td></td><td></td> הטמעת רקמות <td>מינימום מתקן פרפין וצלחת קרה</td></tr><tr><td>מעבד</td><td></td><td></td> רקמות <td>מינימום תנור עם משאבת ואקום</td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה משולשת </td> פינצטה משחה <td></td><td></td><td></td>אופתלמית</tr><tr><td>, קצה</td><td></td><td></td> מעוקל <td>סטרילי לניתוח</td></tr><tr><td>פינצטה, קצה</td><td></td><td></td> מחודד <td>סטרילי לניתוח</td></tr><tr><td>WypAll X60</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34865</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

Murine Excisional Wound Healing Model and Histological Morphometric Wound Analysis

מודל הפצע ים-10-00 שימש בהרחבה כדי לחקור כל אחד מהשלבים החופפים באופן רציפה של ריפוי פצעים: דלקת, התפשטות ושיפוץ. פצעים מורין יש היסטולוגית מוגדר היטב ומיטה לזיהוי בקלות פצע שעליה שלבים שונים אלה של תהליך הריפוי הם מדידים. בתוך השדה, נפוץ להשתמש ב"אמצע" המוגדר באופן שרירותי של הפצע לניתוחים היסטולוגיים. עם זאת, פצעים הם ישות תלת מימדית ולעתים קרובות לא סימטרית היסטולוגית, התומכת בצורך בשיטה מוגדרת היטב וחזקה של כימות כדי לזהות פגמים מורפומטריים עם גודל אפקט קטן. בפרוטוקול זה, אנו מתארים את ההליך ליצירת פצעים דו-צדדיים בעובי מלא בעכברים, כמו גם הוראה מפורטת כיצד למדוד פרמטרים מורפומטריים באמצעות תוכנית עיבוד תמונה על מקטעים טוריים נבחרים. המדידות הדו-ממדיות של אורך הפצע, אורך האפידרמיס, אזור האפידרמיס, אזור הפצע משמשים בשילוב עם המרחק הידוע בין מקטעים כדי לשער את האזור האפידרמיס תלת מימד מכסה את הפצע, אזור הפצע הכולל, נפח אפידרמי ונפח הפצע. למרות ניתוח היסטולוגי מפורט זה הוא יותר זמן ומשאבים רב מאשר ניתוחים קונבנציונליים, הקשיחות שלה מגבירה את הסבירות של גילוי פנוטיפים חדשניים בתהליך ריפוי פצע מורכב מטבעו.

איור 5 מתאר את הטווח בערכים מדודים ומחושבים שהושגו על ידי ביצוע ניתוח מורפומטרי על פצעים מסוג פראי שנוצרו בזנים שונים של העכבר על ידי מנתחים מרובים וניתחו על ידי אנשים שונים. עכברים מסוג פראי זנים שונים יכולים להציג הבדלים סטטיסטיים כמתואר הן במחקרים שלנו והןבספרות 9,10. בהתבסס על תוצאות מייצגות אלה, אנו ממליצים כי, בתוך מחקר אחד, עכברים מזן אחד בלבד ישמשו. למרות שאנו ממליצים כי אותו אדם לבצע את כל הפצעים בתוך מחקר מסוים, אנשים מרובי...

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור פצעים דו-צדדיים בעובי מלא בעכברים וכיצד לעקוב אחר, לקצור ולהכין את הפצעים לניתוח מורפומטרי. כלול תיאור מעמיק של אופן השימוש בסעיפים היסטולוגיים טוריים כדי להגדיר, לכמת ולזהות פגמים מורפומטריים במדויק.

The murine excisional wound model has been used extensively to study each of the sequentially overlapping phases of wound healing: inflammation, ...

פרוטוקול זה משתמש בניתוח היסטולוגי כדי להשיג מדידות מורפומטריות חזקות של פצעי כריתת עכבר. באמצעות טכניקה זו, אנו יכולים לנתח את הפצע כולו באמצעות תת קבוצה של חלקים סדרתיים, המאפשר לנו לזהות בצורה מדויקת יותר פגמים שעלולים להחמיץ אחרת. הדגימה של ההליך תהיה לינדסי ריאה, עמיתת מחקר מהמעבדה שלי.לאחר אישור חוסר תגובה לרפלקס הדוושה בעכבר בוגר הרדמה, להחיל משחה על העיניים של החיה ולהשתמש קוצץ גילוח חשמלי בתנועה caudal-rostral כדי להסיר את הפרווה על גב העכבר בגובה הכתף. השתמש סכין גילוח מוחזק בזווית של 20 מעלות מאחור בתנועה rostral-caudal כדי להסיר את כל השיער שנותר מן העור החשוף, ולאחר מכן לנקות את העור עם יוד povidone אחד 70% isopropyl אלכוהול הכנה לנגב. עבור אינדוקציה פצע, לעטוף מגבת מבוססת נייר נקי על משטח שטוח מכוסה שעווה שיניים ומניחים את העכבר על המגבת במצב נוטה.צובטים את עור העכבר בין השכמות לאורך קו האמצע הגבי ומושך את קפל העור הכריך מהגוף. מעבירים את העכבר לתקרת שכיבה צדדית, מניחים אגרוף ביופסיה בגודל הפצע הרצוי קרוב ככל האפשר לגוף ומאפשרים לעור להירגע. לחץ על האגרוף באמצעות תנועת נדנדה כדי לנקב את כל השכבות של העור ולהסיר את ביופסיות האגרוף מהפצע באמצעות מספריים סטריליים פינצטה כדי לשחרר את האגרוף מן העור שמסביב לפי הצורך.לאחר מכן לאפשר לעכבר להתאושש עם ניטור משככי כאבים. לניתוח מורפומטרי של מיטת הפצע, פתחו תמונת פצע מוכתמת דיגיטלית. להגדרה של העדפות קנה המידה והמדידה, בחרו 'נתח', בחרו 'קבע קנה מידה' והזינו את המרחק בפיקסלים, במרחק הידוע וביחידה של האורך.בחרו 'כללי' ו'אישור' כדי לשמור על שינוי גודל זהה לכל תמונה פתוחה ובחרו 'נתח' ו'קבע מידות' כדי לוודא שתיבה האזור מסומנת. כדי למדוד את אורך הפצע, בחר ביד חופשית, ולהשתמש בכלי כדי לעקוב אחר לאורך צומת עורי-epidermal, החל זקיק השיער האחרון של הרקמה פצוע בצד אחד של הפצע זקיק השיער הראשון של הרקמה שלא נפגעה בצד השני. אם האפידרמיס אינו מכסה את הפצע כולו, בצע את צומת עורית-אפידרמיס בצד אחד של הפצע שבו הלשון נודדת מסתיים ולהמשיך בעקבות ההיבט המעולה של רקמת הגרירה או הצומת בין רקמת הגרירה ואת הגלד עד הלשון נודדת זקיק השיער הראשון של הרקמה הבלתי פצועה בצד השני של הפצע הם הגיעו.לאחר מכן לחץ על נתח ולמדוד. אורך המדידה יופיע באותן יחידות כמו שנקבעו בסולם. אם האפידרמיס אינו מכסה את הפצע כולו, למדוד את המרחק בין כל קצה מוביל אפידרמיס בעקבות ההיבט מעולה של רקמת הגרירה או הצומת בין רקמת הגרירה ואת גלד זקיק השיער הראשון.כדי למדוד את אזור הפצע, השתמש בכלי ביד חופשית כדי לעקוב אחר ההיבט המעולה של האפידרמיס או ההיבט המעולה של רקמת הגרירה החל זקיק השיער האחרון של הרקמה הבלתי פצועה בצד אחד של הפצע זקיק השיער הראשון של הרקמה שלא נפגעה בצד השני. המשך לעקוב אנכית לאורך זקיק השיער לתוך רקמת ההתחסנות. לאחר זקיק השיער הנגדי רקמת השומן או השריר הם הגיעו, בצע את הגבול הנחות של רקמת הגרירה לצד הנגדי של הפצע ולהצטרף לנקודת ההתחלה לאורך זקיק השיער כדי לסגור את האזור.אם הפצע אינו אפתלציה מלאה, עקבות לאורך ההיבט העליון של האפידרמיס עד הקצה המוביל ולחזור לנקודת ההתחלה לאחר צומת עורי-אפידרמיס. כפי שמודגם, כאשר לוקחים מדידות דו-ממדיות לאורך כל הפצע, הצלחנו לחשב פרמטרים לא אפשריים עם ניתוח דו-ממדי באמצע הפצע בלבד, שהוא שיטה נפוצה בתחום. בניסוי זה נעשה שימוש במדידות דו-ממדיות של אזור הפצע ובממוצע על כל הפצע או על תת-קבוצה אמצעית של הפצע ולא התגלה הבדל משמעותי בין קבוצות ניסוי או שיטות ניתוח.נפח הפצע המחושב, לעומת זאת, היה שונה באופן משמעותי בין קבוצות הניסוי, והדגים את החשיבות של ניתוח היסטולוגי מעמיק של פרמטרים של ריפוי פצעים. יצירת פצעים בגודל עקבי לניתוח היסטולוגי וביצוע ניתוח סדרתי קפדני הם קריטיים לניתוח מורפומטרי מדויק. חלקים שאינם מזוהמים יכולים לשמש לשפעת חיסונית או כתם טריכרום של מאסון כדי למדוד היבטים אחרים של ריפוי פצעים בעוד פצעים קפואים הבזק ניתן להשתמש לצד מורפומטריה לניתוח חלבון כמותי.

murine-excisional-wound-healing-model-histological-morphometric-wound

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

בסרטון זה, אנו מתארים הליך לבידוד מיטת הפצע המושרה על ידי קולונוסקופיה, בנקודת זמן מתאימה לניתוח מולקולרי מפורט. ניתוח זה מסייע להבין את תהליך ריפוי הפצע במצבים דלקתיים של מערכת העיכול.

מודל פצע מורין מונחה קולונוסקופי: שיטה לבידוד מיטת פצע המושרה ביופסיה מהמעי הגס כדי להבין את תהליך הריפוי

מודל עכברי של ריפוי פצע עורי שניתן להשתמש כדי להעריך את התרכובות טיפוליות בהגדרות פיסיולוגיות וpathophysiological.

מודל עכברי של ריפוי פצע

במהלך התפתחות היונקים, פצעי עור הריון מוקדמים נרפאים ללא צלקת. כאן אנו מפרטים מודל אמין וניתן לשחזור של ריפוי פצעים עובריים ללא צלקת בגב העורי של עוברי עכברים E16.5 (ללא צלקת) ו-E18.5 (צלקות).

דגם עור עכבר עוברי של תיקון פצע צלקות

אנו מתארים יישום לא פולשנית ויוו הדמיה פרוטוקול מאופין בעיצוב חסכוני, ניצול L-012, chemiluminescent הלומינול-אנלוגי, כדי להמחיש ולכמת מינים חמצן תגובתי (ROS) שנוצר במודל של עכברים excisional פצע.

אין ויוו הדמיה של מינים חמצן תגובתי ב מאתר פצע מודל

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור התיקון שריטות מבחנה באמצעות הפיברוכדורים העיקריים עבור vivo העור הפצע הריפוי הטיפול בעכברים. שניהם מספר שיטות ברורות כדי להעריך בתוך מבחנה וריפוי פצעים vivo.

שיטת העברת שריטות וחדר מתקפל לחלל מתורבת בניתוח Vivo של ריפוי פצעים

כאן, שני מודלים מורתיים ריפוי הפצע מתוארים, אחד שנועד להעריך את התגובה התאית הפצע ריפוי והשני כדי לכמת את שיעור סגירת הפצע. שיטות אלה ניתן להשתמש עם דגמי מחלות מורכבות כגון סוכרת כדי לקבוע מנגנונים של היבטים שונים של ריפוי הפצע המסכן.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

מטרת המחקר הזה היתה לפתח מודל מורטין של ריפוי פצע כוויות. כוויה תרמית המושרה על העור החלק של עכברים באמצעות תבנית פליז מחומם מראש. הרקמה הנשרפה הייתה מצופה בשתל עור שנקטפו מזנבו של עכבר תורם דומה גנטית.

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

כאן אנו מדגימים טכניקה ממוטבת להערכת תיקון פצעים באמצעות עור אנושי ex vivo בשילוב עם גישה מוכתמת שלם. מתודולוגיה זו מספקת פלטפורמה פרה-קלינית להערכת טיפולים פוטנציאליים לפצעים.

מודל פצע Ex vivo אנושי וגישה מוכתמת בהר שלם להערכה מדויקת של תיקון העור

מחקר זה מציג שתי טכניקות ניסיוניות חיוניות: בניית מודל פצע עכברים להערכת סגירת פצע והכנת תרחיפים חד-תאיים מעור העכברים כדי לשמר את כדאיות התאים.

מודלים של פצעים בעכברים והכנת תרחיפי תאים בודדים

פצעים מייצגים אתגר בריאותי עולמי. מחקר זה פיתח תא צילום סטנדרטי המשתמש בפלנימטריה דיגיטלית כדי למזער את שונות מדידת הפצעים. ניטור פצעים בעכברים במשך 14 יום חשף עלייה ראשונית באזור הפצע ובהיקפו, ואחריו סגירה הדרגתית. מתודולוגיה זו עשויה לסייע בהערכת קינטיקה של סגירת פצע במודלים פרה-קליניים.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

מתואר מודל פצע מעור עכברוש המאפשר הערכה של תרופות שונות בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים בשלבים שונים של תהליך ההחלמה. בנוסף, מפורט פרוטוקול לביצוע פלנימטריה ידנית למעקב אחר קצב התכווצות הפצע במהלך תיקון הרקמות.

מודל פצע עור כירורגי לעכברוש: גישה למחקרי ריפוי פצעים והערכת ביוחומרים

למדו פרוטוקול ליצירת פצעי חתך דו-צדדיים בעכברים וניתוח מורפומטרי היסטולוגי. השיטה מאפשרת זיהוי מדויק של פגמים בריפוי פצעים באמצעות חתכים טוריים.

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

גלה סרטונים נוספים