השתלה תת-רשתית של רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע עובריים אנושיים במודל של בעלי חיים גדולים אצל חתולים

הפרוטוקול הנוכחי מראה בפירוט העברה תת-רשתית של אורגנואידים ברשתית כולה במודל של בעלי חיים גדולים, במטרה לפתח גישות טיפול תאי לניוון הרשתית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת משלוח של אורגנואידים ישירות לרקמת המטרה, הרשתית. הטכניקה נועדה לטפל במצבים ניווניים רשתית מסנוורים מתקדמים, כגון ניוון מקולרי הקשור לגיל, רטיניטיס פיגמנטוזה או אמאורוזיס מולד לבר.

מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר פיטרסון ג'ונס. להשתלה תת-רשתית של האורגנואידים, השתמש במספריים של סטיבנס טנוטומיה כדי לבצע קנטומיה צידית של 0.5 עד 1 ס"מ בחתול מורדם בן ארבעה חודשים בצום לילה, והכנס ספקולום עפעפיים בגודל מתאים לתוך החתך כדי לשמור על העפעפיים פתוחים עם עוזר כירורגי המשקה באופן קבוע את הקרנית עם BSS לאורך כל ההליך. השתמש 0.5 Castroviejo מלקחיים קשירת הקרנית ו hemostat יתוש קטן לתפוס בעדינות את הלחמית bulbar ליד הלימבוס.

הניחו שני תפרי משי 6-0 בלחמית הסמוכה ללימבוס בתנוחות 4 ו-8 כדי להחזיק את העין במבט ראשוני ולמשוך את העפעף השלישי. מהדקים את קצות התפרים עם המוסטטים קטנים של יתושים כדי לעזור למניפולציה שלהם, ומניחים תפר נוסף במצב השעה 12 בלימבוס חלקית דרך עובי הלימבוס, תוך הקפדה שלא לחדור לעין. קשרו באופן רופף את התפר, חתכו את הקצה קצר, והניחו תפר שהייה בלחמית הסמוכה ללימבוס במצב השעה 4 כדי להחזיק את העין ואת המבט הראשוני.

שיקפו את לחמית הבולבר בין השעה 10 ל -2, והשתמשו במספריים טנוטומיים כדי לחתוך את הלחמית שניים עד שלושה מילימטרים מהלימבוס. ערערו את הלחמית ונקו את הקפסולה של טנון כדי לחשוף את לובן העין באתרי נמל הוויטרקטומיה של השעה שתיים ועשר במרחק של שלושה עד חמישה מילימטרים מהלימבוס. השתמש קליפרים כדי לזהות את האתרים עבור סקלרוטומיה, הימנעות כלי הדם העיקריים שיכולים להיות בולטים אצל החתול.

תכנון אזור של שלושה מילימטרים ביציאת המכשיר בשעה 10 עבור מנתח ימני, מקום מראש 6-0 או 7-0 תפרים בתבנית פוליגלקטין צולב ללא קשירה באתרי הסקלרוטומיות המוצעות. ברגע שהתפרים נמצאים במקומם, בקש מהעוזר לתפוס את התפרים של השעה 12 כדי לעזור לשמור על כדור הארץ במקומו, והשתמש במלקחיים Castroviejo בקוטר 0.12 מ"מ כדי להחזיק את הרקמה ליד אתר הסקלרוטומיה. משתמש בטרוקאר כדי להציג יציאת ויטרקטומיה של 23 מד דרך לובן העין הן במצב 2 והן בשעה 10 בזווית לכיוון עצב הראייה כדי למנוע מגע עם העדשה, והשתמש במלקחיים קשירה כדי לדחוף בעדינות את יציאת ההשקיה כדי לקבוע אם ניתן לדמיין את הקצוות בתוך הזגוגית.

בקש מהעוזר להניח עדשת ויטרקטומיה מגדילה להשקיה על הקרנית כדי לאפשר הדמיה של החלק האחורי של העין, וחותך בדיקה ויטרקטומיה של 23 מד דרך יציאת המכשיר לביצוע ויטרקטומיה חלקית של הליבה. לאחר מכן, להציג את המחט של מזרק מיליליטר אחד המכיל מיליליטר אחד של פתרון triamcinolone לתוך יציאת המכשיר להזריק 250 עד 500 מיקרוליטר של השעיית גביש. לאחר מתן התמיסה, יש לקדם את בדיקת ויטרקטומיה דרך יציאת המכשיר כדי לסגור את ראש עצב הראייה כאשר היציאה פונה הרחק מפני השטח של הרשתית.

השתמשו בוואקום גבוה כדי לנתק את הפנים הוויטריאליות מהרשתית, הכניסו את המזרק דרך יציאת המכשיר לכיוון משטח הרשתית ומשכו את קצה הצינורית. לחץ בעדינות על קצה משטח הרשתית ובקש מהעוזר לתת דחיפה מהירה קלה על בוכנה המזרק כדי להתחיל את היפרדות הרשתית, הפחתת לחץ ההזרקה כדי לאפשר עלייה איטית של היפרדות הרשתית עד להשגת הגודל הרצוי. השתמש בצינורית 41 מד של המזרק כדי להגדיל מעט את הניתוק עד שניתן להכניס מספריים ברשתית, והסר את היציאה הסקלרלית של השעה 10.

לאחר מכן השתמש בסכין חריץ ישרה בקוטר 2.850 מ"מ המכוונת לעצב הראייה כדי להימנע מלגעת בעדשה כדי להגדיל את סקלרוטומיה באתר זה. הפוך את רטינוטומיה על bleb הרחק לעצב הראייה כדי למנוע פגיעה סיבי עצב הרשתית שמקורם באזור המושתל, ולהימנע חיתוך כלי דם רשתית גדולים כדי להפחית את הסיכון לדימום. כדי להשתיל את האורגנואידים, הכנס נימי זכוכית עמוסים באורגנואידים דרך סקלרוטומיה מוגדלת לכיוון אתר הרטינוטומיה, והשתמש בקצה הנימים כדי לפתוח מעט את הרטינוטומיה כדי לאפשר גישה לפתח הבלם התת רשתית.

בקש מהעוזר ללחוץ שוב באיטיות על הבוכנה של המזרק כדי להזריק את האורגנואידים לתוך הבוכנה התת-רשתית. BSS צריך להמשיך אורגנואידים, האיברים, ולשטוף את רטינוטומיה פתוח. כאשר כל האורגנואידים סופקו, השאירו את נימי הזכוכית במקומם למשך מספר שניות לפני שתוציאו לאט את הנימים מהעין, תוך הקפדה על שחרור פתאומי של נוזלים.

לאחר הסרת הנימים, סגור את הסקלרוטומיה באמצעות התפר שהונח מראש בתבנית צליבה. בקש מהעוזר להסיר את יציאת העירוי, ולקשור במהירות את תפר הסקלרוטומיה ולסגור את הצפק עם התפרים פוליגלקטין בתבנית רציפה פשוטה. סגור את הקנטוטומיה הצידית עם תפר פוליגלקטין 6-0 ותפרי עור הספרה שמונה לביצוע הקנטוס הצידי והשתמש בתפרי עור פשוטים קטועים כדי לסגור את שאר הפצע.

לאחר מכן יש לתת את הסטרואידים המתאימים לאחר הניתוח ואת קוקטייל האנטיביוטיקה. ניתן לאשר העמסת אורגנואיד רשתית פלוריפוטנטית של תאי גזע אנושיים בתוך צינורית הזכוכית של מכשיר ההזרקה ובמהלך הניתוח על ידי הדמיה ישירה. נוכחות האורגנואידים בתוך החלל התת-רשתית יכולה להיות מאושרת לאחר הניתוח על ידי בדיקה אופתלמית והדמיית פונדוס.

לפני המתת חסד, סריקה קונפוקלית לייזר אופטלמוסקופיה ותחום ספקטרלי הדמיית טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית ניתן לבצע גם כדי להעריך את המיקום של אורגנואידים. טכניקות אלה יכולות לשמש כדי להדגים את ההתמדה של אורגנואידים ברשתית בחלל התת-רשתית בין הרשתית העצבית לבין אפיתל פיגמנט הרשתית של העין המקבלת. ניתן להשתמש בניתוחים היסטולוגיים ואימונוהיסטוכימיים כדי להמחיש את הישרדותם של הגרפים הקסנוגניים בתוך החלל התת-רשתי של עין גדולה בחיה מדוכאת חיסון.

רק אלה המיומנים בניתוחי זגוגית, כגון רופאי עיניים וטרינריים מיומנים או מנתחי זגוגית המכירים את ההבדלים בין המינים בעין החתול לעומת עין האדם צריכים לבצע הליך זה. הטכניקה המוצגת בסרטון זה צריכה להיות ישימה למודלים אחרים של בעלי חיים גדולים המשמשים לתרגום טכניקות כירורגיות זגוגיות למרפאות.