Name: השתלה תת-רשתית של רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע עובריים אנושיים במודל של בעלי חיים גדולים אצל חתולים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: למד טכניקה כירורגית להשתלת אורגנואידים רטינליים שמקורם בתאי גזע אנושיים לחלל תת-הרשתית בחתולים. שיטה זו מיועדת לפיתוח טיפולי תאים לניוון רטינלי ומחלות רשתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי NEI Fast-Track SBIR grant R44-EY027654-01A1 ומענק SBIR 3 R44 EY 027654 - 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; ד"ר פיטרסן-ג'ונס הוא co-PI). המחברים רוצים להודות לגב' ג'ניס קרובין (MSU RATTS) על עזרתה בהרדמה ובטיפול כללי בבעלי החיים שנכללו במחקר זה, כמו גם על עזרתה בהכנה / עיקור של מכשירים כירורגיים. המחברים רוצים להודות לד"ר פייג' וינקלר על העזרה בקבלת האורגנואידים והצבתם במדיה ביום שלפני ההשתלה ועל העזרה ביום ההשתלה. המחברים אסירי תודה גם למר רנדי גרצ'ר (LCTX) על משלוח חרוץ של אורגנואידים ברשתית, הרכבת השולח והורדת רשומות טמפרטורה ומתח G לאחר כל משלוח. עבודה זו בוצעה בזמן שהסופר איגור נסונקין הועסק על ידי Biotime (כיום Lineage).

Ratnesh K. Singh, Ph.D., פרנסואה בינט, Ph.D., ואיגור O. Nasonkin Ph.D. הם עובדים של Lineage Cell Therapeutics, Inc. . המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים.

השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים ברשתית) בחלל התת-רשתית היא גישה ניסיונית מבטיחה להשבת הראייה למחלות ניווניות של הרשתית בשלב מאוחר הנגרמות על ידי מוות של תאי PR (עיוורון עמוק או סופני). הגישה המוצגת מתבססת על טיפול ניסיוני מוקדם יותר שפותח ונבדק בהצלחה המבוסס על השתלה תת-רשתית של פיסת רקמת רשתית עוברית אנושית23,24,25. הוא מציג את השימוש במקור רקמת רשתית חלופי, מתחדש ומקובל מבחינה אתית הנגזר מ- hPSCs. הוכחת היתכנות כיר...

מיליוני אנשים ברחבי העולם מושפעים מניוון רשתית (RD) עם ליקוי ראייה או עיוורון כתוצאה מכך הקשורים לאובדן קולטני האור קולטי האור (PRs). ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD) הוא גורם עיקרי לעיוורון הנובע משילוב של גורמי סיכון גנטיים וגורמים סביבתיים / אורח חיים. בנוסף, מעל 200 גנים ואתרים נמצאו כגורמים ל- RD תורשתי (IRD)1. רטיניטיס פיגמנטוזה (RP), ה-IRD הנפוץ ביותר, הוא הטרוגני מבחינה גנטית עם יותר מ-3,000 מוטציות גנטיות בכ-70 גנים המדווחים 2,3,4. Leber Congenital Amaurosis (LCA), הגורם לעיוורון בילדות הוא גם הטרוגני גנטית 5,6. טיפול בהגדלת גנים פותח ונמצא בניסויים קליניים לטיפול במספר קטן של IRDs 3,7. עם זאת, יש לפתח טיפול נפרד לטיפול בכל צורה גנטית נפרדת של IRD ובכך לטפל רק בתת-קבוצה קטנה של חולים. יתר על כן, הגדלת גנים מסתמכת על נוכחות של אוכלוסייה של פוטורצפטורים הניתנים להצלה ולכן אינה ישימה לניוון מתקדם.
יש, אם כן, צורך קליני דחוף ועדיין לא מסופק בפיתוח טיפולים המטפלים ומטפלים ב- RDs מתקדמים ובעיוורון עמוק עד סופני. במהלך 2 העשורים האחרונים שתלים נוירו-תותבים פותחו ונבדקו במודלים גדולים של בעלי חיים, כגון החתול, לפני השימוש האנושי 8,9,10,11,12,13,14. כמו כן, ב-20 השנים האחרונות פותחו טיפולים בתחליפי רשתית באמצעות יריעות רשתית עוברית או אפילו בוגרת של יונקים שהושתלו באופן תת-רשתי 15,16,17,18,19,20,21,22 ואף נבדקו בהצלחה בחולי RD 23,24,25. שתי הגישות משתמשות ברעיון של החדרת חיישנים חדשים (פוטודיודות סיליקון פוטו-וולטאיות במקרה של התקנים נוירו-תותבים26,27, ופוטורצפטורים בריאים ללא מוטציות המאורגנים ביריעות, במקרה של השתלת יריעות רשתית) לרשתית עם PRs מנוונים. מחקרים אחרונים חקרו את השימוש בגישות מבוססות תאי גזע כגון השתלת תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) שמקורם באבות רשתית28,29, hPSC-photoreceptors 30 ואורגנואידים hPSC-רשתית31,32,33. אורגנואידים ברשתית מאפשרים היווצרות רקמת רשתית בצלוחית וגזירה של יריעות קולטי אור עם אלפי PRs נטולי מוטציות, הדומים לשכבת קולטי האור ברשתית העובר האנושית המתפתחת 34,35,36,37,38,39,40 . השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים) בחלל התת-רשתית של חולים עם תנאי RD היא אחת הגישות החדשות והמבטיחות לטיפול תאי ניסיוני, הננקטת על ידי מספר צוותים 31,32,41,42. בהשוואה להשתלת תרחיף התא (של פוטורצפטורים צעירים או אבות רשתית), יריעות מושתלות של פוטורצפטורים עובריים הוכחו כמביאות לשיפור בראייה בניסויים קליניים23,24.
הפרוטוקול המוצג כאן מתאר, בפירוט, הליך השתלה למסירה תת-רשתית של אורגנואידים רשתית שלמים (במקום שולי אורגנואיד33,41) כדרך טובה יותר להציג יריעות רשתית שלמות עם PRs, כדי להגדיל את הישרדות השתל ולשפר את שימור היריעה. למרות שהליכים להחדרת חתיכה שטוחה של רשתית אנושית וגם מדבקות RPE פותחו 43,44,45, השתלת שתלים תלת ממדיים גדולים יותר לא נחקרה. אורגנואידים ברשתית שמקורם בתאי גזע מספקים מקור בלתי נדלה של יריעות קולטי אור לפיתוח טכנולוגיות שיקום ראייה, חופשיים ממגבלות אתיות, ונחשבים למקור מצוין של רקמת רשתית אנושית לטיפולים המתמקדים בטיפול ב- RD מתקדם ובעיוורון סופני46. פיתוח שיטות כירורגיות להשתלה תת-רשתית מדויקת של אורגנואידים ברשתית עם פגיעה מינימלית בנישת הרשתית המארחת (רשתית עצבית, אפיתל פיגמנט רשתית וכלי דם רשתית וכורואידיים) הוא אחד הצעדים הקריטיים לקידום טיפול כזה לקראת יישומים קליניים31,32. מודלים גדולים של בעלי חיים כגון חתולים, כלבים, חזירים וקופים הוכיחו את עצמם כמודלים טובים לחקר שיטות מסירה כירורגיות, כמו גם כדי להדגים את הבטיחות של יריעות רקמה מושתלות (תאי אפיתל פיגמנט ברשתית (RPE) ולחקור את השימוש באורגנואידים 41,44,45,47,48,49,50 . לעין החיה הגדולה יש גודל גלובוס דומה לאדם, כמו גם אנטומיה דומה כולל נוכחות של אזור בעל צפיפות פוטורצפטור גבוהה, כולל מדוכים (האזור centralis), הדומה למקולה האנושית 6,51,52.
בכתב יד זה מתוארת טכניקה להשתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC (אורגנואידים) בחלל התת-רשתי של מודלים של חיות גדולות של חתולים (הן חתולי בר והן חתולי CrxRdy/+), אשר יחד עם תוצאות יעילות מבטיחות32,53 בונה בסיס לפיתוח נוסף של טיפול ניסיוני כזה לקראת יישומים קליניים לטיפול במצבי RD.

<table><tbody><tr><td>0.22 ומיקרו; מסנן מזרק נקבוביות m עם קרום PES</td><td>Cameo</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>מזרק תת רשתית 23G עם צינורית 41 G הניתנת להרחבה</td><td>DORC</td><td>1270.EXT</td><td></td></tr><tr><td>250 &micro; L המילטון גז הדוק מזרק נעילת לואר</td><td>המילטון</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>6-0 תפר משי</td><td>Ethicon</td><td>707G</td><td></td></tr><tr><td>6-0/7-0 תפר פוליגלקטין</td><td>Ethicon</td><td>J570G</td><td></td></tr><tr><td>אצפרומזין מלאט 500 מ"ג/5 מ"ל (Aceproject)</td> <td>ניתן למצוא את Henry Schein Animal Health</td><td></td><td>NA דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>בופרנורפין 0.3 מ"ג/מ"ל</td><td>Par </td> ניתן למצוא <td>NA</td><td>פרמצבטי דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>cSLO + SD-OCT</td><td>היידלברג ספקטרליס הנדסי</td><td>HRA+ OCT</td><td></td></tr><tr><td>ציקלוספורין</td><td>נוברטיס</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>דקסמתזון 2 מ"ג/מ"ל (אזיום)</td> ניתן למצוא את <td>Vetone</td><td>NA</td><td>דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>דוקסיצילין 25 מ"ג/5 מ"ל</td><td>Cipla</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>פתרון קטלני פלוס (פתרון פנטוברביטל)</td> ניתן למצוא את <td>Vortech</td><td>NA</td><td>דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>Gentamicin 20mg/2mL</td><td>Hospira</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>נימי זכוכית (קיר דק חד-חבית סטנדרטי בורוסיליקט (Schott Duran) צינורות זכוכית</td><td>מכשירים מדויקים עולמיים</td><td>TW150-4</td><td></td></tr><tr><td>ניתן למצוא מתילפרדניזולון אקטטט 40 מ"ג/מ"ל</td><td>פייזר</td><td>NA</td><td>דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>זייס</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>מדיום OCT (תרכובת Tissue-Tek O.C.T)</td> <td>סאקורה</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Olympic Vac-Pac גודל 23</td><td>Natus</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 16% פתרון</td><td>EMS</td><td>15719</td><td></td></tr><tr><td>פנילפרין הידרוכלוריד 10% תמיסת עיניים</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>פרדניזולון 15 מ"ג / 5 מ"ל</td> ניתן למצוא את <td>Akorn</td><td>NA</td><td>דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>פרופופול 500 מ"ג / 50 מ"ל (10 מ"ג / מ"ל) (PropoFlo28)</td> ניתן למצוא את <td>Zoetis</td><td>NA</td><td>דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>RetCam II מצלמת פונדוס וידאו</td><td>Clarity Medical Systems</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40)</td> <td>Bristol -Myers Squibb Company</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>Tropicamide 1% פתרון עיניים</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>ניתן למצוא דרך ספקים שונים</td></tr><tr><td>ויטרקטומיה יציאת 23G</td> מערכות <td>Alcon</td><td>Accurus</td><td></td></tr><tr><td>מכונת ויטרקטומיה</td> מערכות <td>Alcon</td><td>Accurus</td><td></td></tr><tr><td>מספריים אנכיים של זגוגית-רשתית 80&deg; עם ידית סחיטה</td><td>Frimen</td><td>FT170206T</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלה תת-רשתית של רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע עובריים אנושיים במודל של בעלי חיים גדולים אצל חתולים

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

מצבים ניווניים ברשתית (RD) הקשורים לאובדן קולטני אור כגון ניוון מקולרי תלוי גיל (AMD), רטיניטיס פיגמנטוזה (RP) ואמאורוזיס מולד Leber (LCA) גורמים לאובדן ראייה מתקדם ומתיש. יש צורך בלתי מסופק בטיפולים שיכולים לשחזר את הראייה לאחר פוטורצפטורים אבדו. השתלת רקמת רשתית (אורגנואידים) שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) בחלל התת-רשתית של עין עם RD מתקדם מביאה יריעות רקמת רשתית עם אלפי פוטורצפטורים בריאים ללא מוטציות ויש לה פוטנציאל לטפל ברוב/כל המחלות המסנוורות הקשורות לניוון קולטני אור עם פרוטוקול מאושר אחד. השתלת רקמת רשתית עוברית בחלל התת-רשתית של מודלים של בעלי חיים ואנשים עם RD מתקדם פותחה בהצלחה אך אינה יכולה לשמש כטיפול שגרתי בשל חששות אתיים ואספקת רקמות מוגבלת. מודלים של ניוון רשתית תורשתי בעין גדולה (IRD) הם בעלי ערך לפיתוח טיפולים לשיקום ראייה תוך שימוש בגישות כירורגיות מתקדמות להשתלת תאים/רקמות רשתית בחלל התת-רשתית. הדמיון בגודל כדור הארץ, ובפיזור קולטני האור (למשל, נוכחות של אזור מרכזי דמוי מקולה) והזמינות של מודלי IRD המסכמים מקרוב IRD אנושי יאפשרו תרגום מהיר של טיפול מבטיח למרפאה. מוצגת כאן טכניקה כירורגית של השתלת רקמת רשתית שמקורה ב-hPSC בחלל התת-רשתית של מודל בעל חיים גדול, המאפשרת הערכה של גישה מבטיחה זו במודלים של בעלי חיים.

הליך זה מאפשר השתלה מוצלחת וניתנת לשחזור של אורגנואידים ברשתית שמקורם ב-hPSC בחלל התת-רשתית של מודל של בעלי חיים גדולים (שהודגם כאן באמצעות 2 דוגמאות: חתולי בר עם פוטורצפטורים בריאים (PRs) וחתולי CrxRdy/+ עם PRs ורשתית מנוונים). באמצעות השלבים המצוינים באיור 1, הכינו וטענו את אורגנואידי הרשתית שמקורם ב-hPSC לתוך צינורית זכוכית בורוסיליקט של מכשיר ההזרקה, כך שהאורגנואידים לא ייפגעו. ניתן לאשר זאת על-ידי הדמיה ישירה במהלך העמסת האורגנואידים (שלב 2.10) ובמהלך הניתוח...

מוצגת כאן טכניקה כירורגית להשתלת רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSC) בחלל התת-רשתית של מודל בעל חיים גדול.

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

הפרוטוקול הנוכחי מראה בפירוט העברה תת-רשתית של אורגנואידים ברשתית כולה במודל של בעלי חיים גדולים, במטרה לפתח גישות טיפול תאי לניוון הרשתית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת משלוח של אורגנואידים ישירות לרקמת המטרה, הרשתית. הטכניקה נועדה לטפל במצבים ניווניים רשתית מסנוורים מתקדמים, כגון ניוון מקולרי הקשור לגיל, רטיניטיס פיגמנטוזה או אמאורוזיס מולד לבר.מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר פיטרסון ג'ונס. להשתלה תת-רשתית של האורגנואידים, השתמש במספריים של סטיבנס טנוטומיה כדי לבצע קנטומיה צידית של 0.5 עד 1 ס"מ בחתול מורדם בן ארבעה חודשים בצום לילה, והכנס ספקולום עפעפיים בגודל מתאים לתוך החתך כדי לשמור על העפעפיים פתוחים עם עוזר כירורגי המשקה באופן קבוע את הקרנית עם BSS לאורך כל ההליך. השתמש 0.5 Castroviejo מלקחיים קשירת הקרנית ו hemostat יתוש קטן לתפוס בעדינות את הלחמית bulbar ליד הלימבוס.הניחו שני תפרי משי 6-0 בלחמית הסמוכה ללימבוס בתנוחות 4 ו-8 כדי להחזיק את העין במבט ראשוני ולמשוך את העפעף השלישי. מהדקים את קצות התפרים עם המוסטטים קטנים של יתושים כדי לעזור למניפולציה שלהם, ומניחים תפר נוסף במצב השעה 12 בלימבוס חלקית דרך עובי הלימבוס, תוך הקפדה שלא לחדור לעין. קשרו באופן רופף את התפר, חתכו את הקצה קצר, והניחו תפר שהייה בלחמית הסמוכה ללימבוס במצב השעה 4 כדי להחזיק את העין ואת המבט הראשוני.שיקפו את לחמית הבולבר בין השעה 10 ל -2, והשתמשו במספריים טנוטומיים כדי לחתוך את הלחמית שניים עד שלושה מילימטרים מהלימבוס. ערערו את הלחמית ונקו את הקפסולה של טנון כדי לחשוף את לובן העין באתרי נמל הוויטרקטומיה של השעה שתיים ועשר במרחק של שלושה עד חמישה מילימטרים מהלימבוס. השתמש קליפרים כדי לזהות את האתרים עבור סקלרוטומיה, הימנעות כלי הדם העיקריים שיכולים להיות בולטים אצל החתול.תכנון אזור של שלושה מילימטרים ביציאת המכשיר בשעה 10 עבור מנתח ימני, מקום מראש 6-0 או 7-0 תפרים בתבנית פוליגלקטין צולב ללא קשירה באתרי הסקלרוטומיות המוצעות. ברגע שהתפרים נמצאים במקומם, בקש מהעוזר לתפוס את התפרים של השעה 12 כדי לעזור לשמור על כדור הארץ במקומו, והשתמש במלקחיים Castroviejo בקוטר 0.12 מ"מ כדי להחזיק את הרקמה ליד אתר הסקלרוטומיה. משתמש בטרוקאר כדי להציג יציאת ויטרקטומיה של 23 מד דרך לובן העין הן במצב 2 והן בשעה 10 בזווית לכיוון עצב הראייה כדי למנוע מגע עם העדשה, והשתמש במלקחיים קשירה כדי לדחוף בעדינות את יציאת ההשקיה כדי לקבוע אם ניתן לדמיין את הקצוות בתוך הזגוגית.בקש מהעוזר להניח עדשת ויטרקטומיה מגדילה להשקיה על הקרנית כדי לאפשר הדמיה של החלק האחורי של העין, וחותך בדיקה ויטרקטומיה של 23 מד דרך יציאת המכשיר לביצוע ויטרקטומיה חלקית של הליבה. לאחר מכן, להציג את המחט של מזרק מיליליטר אחד המכיל מיליליטר אחד של פתרון triamcinolone לתוך יציאת המכשיר להזריק 250 עד 500 מיקרוליטר של השעיית גביש. לאחר מתן התמיסה, יש לקדם את בדיקת ויטרקטומיה דרך יציאת המכשיר כדי לסגור את ראש עצב הראייה כאשר היציאה פונה הרחק מפני השטח של הרשתית.השתמשו בוואקום גבוה כדי לנתק את הפנים הוויטריאליות מהרשתית, הכניסו את המזרק דרך יציאת המכשיר לכיוון משטח הרשתית ומשכו את קצה הצינורית. לחץ בעדינות על קצה משטח הרשתית ובקש מהעוזר לתת דחיפה מהירה קלה על בוכנה המזרק כדי להתחיל את היפרדות הרשתית, הפחתת לחץ ההזרקה כדי לאפשר עלייה איטית של היפרדות הרשתית עד להשגת הגודל הרצוי. השתמש בצינורית 41 מד של המזרק כדי להגדיל מעט את הניתוק עד שניתן להכניס מספריים ברשתית, והסר את היציאה הסקלרלית של השעה 10.לאחר מכן השתמש בסכין חריץ ישרה בקוטר 2.850 מ"מ המכוונת לעצב הראייה כדי להימנע מלגעת בעדשה כדי להגדיל את סקלרוטומיה באתר זה. הפוך את רטינוטומיה על bleb הרחק לעצב הראייה כדי למנוע פגיעה סיבי עצב הרשתית שמקורם באזור המושתל, ולהימנע חיתוך כלי דם רשתית גדולים כדי להפחית את הסיכון לדימום. כדי להשתיל את האורגנואידים, הכנס נימי זכוכית עמוסים באורגנואידים דרך סקלרוטומיה מוגדלת לכיוון אתר הרטינוטומיה, והשתמש בקצה הנימים כדי לפתוח מעט את הרטינוטומיה כדי לאפשר גישה לפתח הבלם התת רשתית.בקש מהעוזר ללחוץ שוב באיטיות על הבוכנה של המזרק כדי להזריק את האורגנואידים לתוך הבוכנה התת-רשתית. BSS צריך להמשיך אורגנואידים, האיברים, ולשטוף את רטינוטומיה פתוח. כאשר כל האורגנואידים סופקו, השאירו את נימי הזכוכית במקומם למשך מספר שניות לפני שתוציאו לאט את הנימים מהעין, תוך הקפדה על שחרור פתאומי של נוזלים.לאחר הסרת הנימים, סגור את הסקלרוטומיה באמצעות התפר שהונח מראש בתבנית צליבה. בקש מהעוזר להסיר את יציאת העירוי, ולקשור במהירות את תפר הסקלרוטומיה ולסגור את הצפק עם התפרים פוליגלקטין בתבנית רציפה פשוטה. סגור את הקנטוטומיה הצידית עם תפר פוליגלקטין 6-0 ותפרי עור הספרה שמונה לביצוע הקנטוס הצידי והשתמש בתפרי עור פשוטים קטועים כדי לסגור את שאר הפצע.לאחר מכן יש לתת את הסטרואידים המתאימים לאחר הניתוח ואת קוקטייל האנטיביוטיקה. ניתן לאשר העמסת אורגנואיד רשתית פלוריפוטנטית של תאי גזע אנושיים בתוך צינורית הזכוכית של מכשיר ההזרקה ובמהלך הניתוח על ידי הדמיה ישירה. נוכחות האורגנואידים בתוך החלל התת-רשתית יכולה להיות מאושרת לאחר הניתוח על ידי בדיקה אופתלמית והדמיית פונדוס.לפני המתת חסד, סריקה קונפוקלית לייזר אופטלמוסקופיה ותחום ספקטרלי הדמיית טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית ניתן לבצע גם כדי להעריך את המיקום של אורגנואידים. טכניקות אלה יכולות לשמש כדי להדגים את ההתמדה של אורגנואידים ברשתית בחלל התת-רשתית בין הרשתית העצבית לבין אפיתל פיגמנט הרשתית של העין המקבלת. ניתן להשתמש בניתוחים היסטולוגיים ואימונוהיסטוכימיים כדי להמחיש את הישרדותם של הגרפים הקסנוגניים בתוך החלל התת-רשתי של עין גדולה בחיה מדוכאת חיסון.רק אלה המיומנים בניתוחי זגוגית, כגון רופאי עיניים וטרינריים מיומנים או מנתחי זגוגית המכירים את ההבדלים בין המינים בעין החתול לעומת עין האדם צריכים לבצע הליך זה. הטכניקה המוצגת בסרטון זה צריכה להיות ישימה למודלים אחרים של בעלי חיים גדולים המשמשים לתרגום טכניקות כירורגיות זגוגיות למרפאות.

subretinal-transplantation-human-embryonic-stem-cell-derived-retinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

השתלת תאים מייצגת אסטרטגיה לטיפול ניוון רשתית המאופיינת על ידי אובדן פוטורצפטור. כאן אנו מתארים שיטה להעשרת פוטורצפטורים הניתנים להשתלה והשתלתם התת-קרקעית בעכברים בוגרים.

השתלת Subretinal של MACS מטוהרים פוטורצפטור קודמן תאים לתוך הרשתית עכבר בוגר

כאן אנו מציגים פרוטוקול מקובל על הקהילה בפורמט מולטימדיה להזרקה תת-רשתית של תאי RPE בחולדות ועכברים. גישה זו יכולה לשמש לקביעת פוטנציאל הצלה, פרופילי בטיחות ויכולות הישרדות של תאי RPE מושתלים עם השתלה במודלים של ניוון רשתית בבעלי חיים.

ביצוע subretinal זריקות במכרסמים כדי לספק תאי הרשתית פיגמנט האפיתל בהשעיה

הזרקת subretinal הוחל נרחב במחקרים פרה של טיפול בתאי גזע חלופי עבור ניוון מקולרי הקשור לגיל. במאמר זה דמיינו, נתאר טכניקה הזרקת subretinal פחות מסוכן, הדירים בדיוק ששונתה באמצעות הגישה הטרנס-scleral להעביר תאים לתוך עיניו חולדה.

פיתוחו של פרוטוקול מעודן עבור השתלת Subretinal טרנס-scleral של תאי אפיתל הפיגמנט ברשתית האנושי בעיניים עכברוש

תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית יכול לשמש כטיפול חלופי תא עבור הטופס מתקדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש. פרוטוקול זה מתאר את הדור של מודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית והשתלות את subretinal של תאי אפיתל כנגד האדם מתחלקים נגזר תאי הפיגמנט ברשתית לתוך מודל זה של המחלה.

השתלת subretinal של תאי גזע עובריים אנושיים לתאי האפיתל של פיגמנט הרשתית נגזר למודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית

הפרימט הלא אנושי (NHP) הוא מודל אידיאלי לחקר טיפולי תאי רשתית אנושית בשל הדמיון האנטומי והגנטי. כתב יד זה מתאר שיטה להשתלה תת-עינית של תאי אפיתל פיגמנט רשתית בעין NHP ואסטרטגיות למניעת סיבוכים תוך ניתוחיים הקשורים למניפולציה מקולרית.

השתלת אפיתל פיגמנט רשתית במודל פרימטים לא אנושי למחלות רשתית ניוונית

פרוטוקול זה מציג גישה טרנס-סקלרלית מונחית ראייה טרנס-אישונים להעברה בטוחה ומדויקת של שתלים תאיים תת-רשתית, עם שיעור נמוך של סיבוכים כירורגיים, במושתלי עכבר עם או בלי ניוון רשתית.

השתלה טרנס-סקלרלית מונחית אישונים של שתלים תת-רשתית במודל עכבר ניוון רשתית

אנו מתארים פרוטוקול מפורט להכנת תאי אב קולטי אור שמקורם בתאי גזע עובריים עובריים (photoreceptor) שמקורם בהקפאה, ואת ההעברה התת-רשתית של תאים אלה בעכברי RD10 .

העברה תת-רשתית של אבות פוטורצפטור שמקורם בתאי גזע עובריים אנושיים בעכברי RD10

הקמנו פרוטוקול לזירוז של neuroblasts ישירה אנושי לתאי גזע עובריים pluripotent נשמר בתנאים מוגדרים עם מולקולות קטנות, המאפשרת גזירת אספקה ​​גדולה של אבות העצבית האנושית העצבית תא סוגים של פיתוח עבור מערכת העצבים המרכזית העצבית לתיקון.

גזירת יעיל של אבות עצב נוירונים האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

הבידוד של הרכס העצבי העובר מן הצינור העצבי מאפשרת את...

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

Xenopus laevis מספק מערכת מודל אידיאלית ללימוד מפרט גורל תא ותפקוד פיסיולוגי של תאי רשתית בודדים בתרבית תאים ראשוניות. כאן אנו מציגים טכניקה לביתור רקמות רשתית ויצירת תרביות תאים ראשוניות שהם צלמו לפעילות הסידן ונותחו על ידי כלאה באתר.

Dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

למד טכניקה כירורגית להשתלת אורגנואידים רטינליים שמקורם בתאי גזע אנושיים לחלל תת-הרשתית בחתולים. שיטה זו מיועדת לפיתוח טיפולי תאים לניוון רטינלי ומחלות רשתית.

השתלה תת-רשתית של רקמת רשתית שמקורה בתאי גזע עובריים אנושיים במודל של בעלי חיים גדולים אצל חתולים

גלה סרטונים נוספים