Name: השפעות אקולוגיות של מיקרופלסטיק על התפתחות עובר ציפור על ידי בקיעה ללא קליפת ביצה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: חקור שיטת בקיעה ללא קליפת ביצה לחקר רעילות מיקרופלסטיק בעוברי ציפורים. גישה זו משפרת את אמינות התוצאות במחקרי זיהום סביבתי ומאפשרת הערכה מדויקת של השפעות החומרים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי פרויקטים מרכזיים של מחקר ופיתוח באזור האוטונומי שינג'יאנג אויגור (2017B03014, 2017B03014-1, 2017B03014-2, 2017B03014-3).

1. הכנה לפני החשיפה
<ol><li>בחר ביצי שליו מופרות שנולדו באותו יום לבדיקת החשיפה.</li>
	<li>בחר ביצי שליו עם משקולות דומות. כל ביצת שליו מופרית היא בערך 10-12 גרם.</li>
	<li>נקה לחלוטין את כל ביצי שליו מופרות מצואה חיצונית ופסולת אחרת.</li>
	<li>לחטא כל ביצית שליו מופרית מראש ואת הביצים לשימוש (בחר ביצים עם צורת קליפה דומה, במיוחד את קצה הביצית) עם פתרון אנטיביוטי (פניצילין וסטסטרוטומיצין, 1:1000, טמפרטורת החדר). לחטא את האינקובטור עם 75% אתנול.</li>
	<li>פתח את הביצים עם הקצה הקהה של מקדחה דנטלית, משאיר את קליפת הביצה בקצה לשימוש נוסף. לפני העברת הביציות המופרות, את התוכן של הביצים נשפכים החוצה. זה כדי לשמור על הלחות של קליפת הביצה. קוטר הפתיחה של הביצה היה כ -3 ס"מ. הערה: כדי להפחית את הנזק לעובר שליו, השתמש מקדחה דנטלית כדי לפתוח את הקצה הקהה של הביצה ולהפוך את הסדק חלק ככל האפשר.</li>
	<li>לאחר העיקור, מניחים את ביצי השליו מופרות באינקובטור 38 מעלות צלזיוס עם 60% לחות ל-24-48 שעות. ודא כי הקצה הקהה של ביצת שליו פונה למעלה.</li>
	<li>במהלך הדגירה של ביצי שליו מופרות, לעקר את הכלים הדרושים בניסויים הבאים בסיר עיקור. כלים אלה כוללים ניילון נצמד,, מים סטריליים, טיפים פיפטה, מספריים ישרים כירורגיים, פינצטה, וכפית. הערה: השתמש בסרט עם סובלנות טמפרטורה גבוהה מספיק כדי למנוע בעיות עם עיקור בטמפרטורה גבוהה.</li>
</ol>2. בוקעים את ביצת שליו ללא קליפה
<ol><li>מעבירים את ביצי שליו המופריות מראש מהאינקובטור לספסל נקי ומניחים אותן שטוחות על המיכל כדי לייצב אותן במשך כ 1-2 דקות.</li>
	<li>השתמש במספריים (12.5 ס"מ מספריים ישרים כירורגיים) כדי לתקוע חור קטן (קוטר 3 מ"מ) בציר המרכזי של ביצי שליו מופרות מראש ולחתוך 1-2 ס"מ פתח קטן. מעבירים בזהירות את הביצית הלבנה והחלמון של ביצי שליו מופרות לקליפת הביצית החתכה. הערה: בעת חיתוך פתח קטן עם מספריים, להימנע מגע של חלמון של ביצי שליו.</li>
	<li>הוסף את פתרון הבקרה (ללא חברי פרלמנט) ואת הפתרון החשוף של מסות שונות (0.1, 0.2 ו-0.3 מ"ג) של מיקרופלסטיק עם שלושה גדלי חלקיקים (100, 200 ו- 500 ננומטר) לתכולת הביצה באמצעות פיפטה. יחד עם זאת, להוסיף 1 טיפה של פניצילין 1 טיפה של סטרפטומיצין עם מזרק 1 מ"ל.</li>
	<li>מכסים את פתיחת קליפת הביצה בסרט המעוקר (שלב 1.6).</li>
	<li>על פי שלב 2.1-2.4, לטפל בכל ביצי שליו מופרות.</li>
	<li>מניחים את עוברי השליו המועברים לתוך אינקובטור 38 °C עם 60% לחות לתקופה הדרושה. בניסוי זה, השתמש בזווית סיבוב ביצה של ±30°. להפוך את הביצים פעם בשעה. הערה: ההעברה צריכה להיות מהירה ככל האפשר, מה שדורש יותר תרגול בשלב המוקדם.</li>
</ol>3. איסוף דוגמאות
<ol><li>לאחר שבעה ימים של תרבות, להסיר עוברים מפותחים שנצפו בעין בלתי מן החלמון לשטוף עם פתרון חוצץ פוספט (PBS).</li>
	<li>יבשו את התמיסה העודפת מחוץ לעובר המנוקה בנייר סופג ושקלו צלחת פטרי נקייה.</li>
	<li>פתחו את כל חלל החזה, הפרידו את הכבד והלב מהפנים עם צבת מחט-האף, והכניסו לצינורות צנטריפוגות בגודל 1.5 מ"ל מיד לאחר הניקוי.</li>
	<li>תעד במהירות את המשקל על איזון אלקטרוני וחשב את האינדקס הפטוסומטי (HIS = משקל כבד / משקל גוף x 100). למדוד את אורך החזה והגוף.</li>
	<li>בהתבסס על האינדיקטורים לעיל, להעריך את ההשפעה של חברי פרלמנט על התפתחות עוברית. הערה: איכות העובר כאן מתייחסת לאיכות הסרת החלמון.</li>
</ol>4. ניתוח נתונים
<ol><li>דווח על הנתונים הניסיוניים בצורה של שגיאת תקן ± ממוצעת (SEM).</li>
	<li>השתמש בניתוח חד-גורם של שונות כדי להשוות את האמצעים של קבוצות מרובות של דגימות. ערך ההפרש המשמעותי היה α = 0.05.</li>
</ol>

<ol><li>Geyer, R., Jambeck, J. R., Law, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+use%2C+and+fate+of+all+plastics+ever+made%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Production, use, and fate of all plastics ever made.</a> Science Advances. 3 (7), 5(2017).</li>
<li>Thompson, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lost+at+sea%3A+Where+is+all+the+plastic%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lost at sea: Where is all the plastic.</a> Science. 304 (5672), 838-838 (2004).</li>
<li>Barletta, M., Lima, A. R. A., Costa, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution%2C+sources+and+consequences+of+nutrients%2C+persistent+organic+pollutants%2C+metals+and+microplastics+in+South+American+estuaries%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Distribution, sources and consequences of nutrients, persistent organic pollutants, metals and microplastics in South American estuaries.</a> Science of the Total Environment. 651, 1199-1218 (2019).</li>
<li>Eriksson, C., Burton, H., Fitch, S., Schulz, M., vanden Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+accumulation+rates+of+marine+debris+on+sub-Antarctic+island+beaches%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Daily accumulation rates of marine debris on sub-Antarctic island beaches.</a> Marine Pollution Bulletin. 66 (1-2), 199-208 (2013).</li>
<li>Zhang, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+offshore+sediment+in+the+Yellow+Sea+and+East+China+Sea%2C+China%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastics in offshore sediment in the Yellow Sea and East China Sea, China.</a> Environmental Pollution. 244, 827-833 (2019).</li>
<li>Obbard, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+warming+releases+microplastic+legacy+frozen+in+Arctic+Sea+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Earths+Future%22%5BJournal%5D)">Global warming releases microplastic legacy frozen in Arctic Sea ice.</a> Earths Future. 2 (6), 315-320 (2014).</li>
<li>Van Cauwenberghe, L., Vanreusel, A., Mees, J., Janssen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+pollution+in+deep-sea+sediments%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastic pollution in deep-sea sediments.</a> Environmental Pollution. 182, 495-499 (2013).</li>
<li>Wilcox, C., Van Sebille, E., Hardesty, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Threat+of+plastic+pollution+to+seabirds+is+global%2C+pervasive%2C+and+increasing%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Threat of plastic pollution to seabirds is global, pervasive, and increasing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (38), 11899-11904 (2015).</li>
<li>Wright, S. L., Thompson, R. C., Galloway, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physical+impacts+of+microplastics+on+marine+organisms%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">The physical impacts of microplastics on marine organisms: A review.</a> Environmental Pollution. 178, 483-492 (2013).</li>
<li>Ferreira, G. V. B., Barletta, M., Lima, A. R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+estuarine+resources+by+top+predator+fishes.+How+do+ecological+patterns+affect+rates+of+contamination+by+microplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Use of estuarine resources by top predator fishes. How do ecological patterns affect rates of contamination by microplastics.</a> Science of the Total Environment. 655, 292-304 (2019).</li>
<li>Provencher, J. F., Vermaire, J. C., Avery-Gomm, S., Braune, B. M., Mallory, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Garbage+in+guano%3F+Microplastic+debris+found+in+faecal+precursors+of+seabirds+known+to+ingest+plastics%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Garbage in guano? Microplastic debris found in faecal precursors of seabirds known to ingest plastics.</a> Science of the Total Environment. 644, 1477-1484 (2018).</li>
<li>Baulch, S., Perry, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+impacts+of+marine+debris+on+cetaceans%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Evaluating the impacts of marine debris on cetaceans.</a> Marine Pollution Bulletin. 80 (1-2), 210-221 (2014).</li>
<li>Rochman, C. M., Kurobe, T., Flores, I., Teh, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+warning+signs+of+endocrine+disruption+in+adult+fish+from+the+ingestion+of+polyethylene+with+and+without+sorbed+chemical+pollutants+from+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Early warning signs of endocrine disruption in adult fish from the ingestion of polyethylene with and without sorbed chemical pollutants from the marine environment.</a> Science of the Total Environment. 493, 656-661 (2014).</li>
<li>Mattsson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+damage+and+behavioural+disorders+in+fish+induced+by+plastic+nanoparticles+delivered+through+the+food+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Brain damage and behavioural disorders in fish induced by plastic nanoparticles delivered through the food chain.</a> Scientific Reports. 7, 7(2017).</li>
<li>Brown, D. M., Wilson, M. R., MacNee, W., Stone, V., Donaldson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+proinflammatory+effects+of+ultrafine+polystyrene+particles%3A+A+role+for+surface+area+and+oxidative+stress+in+the+enhanced+activity+of+ultrafines%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+and+Applied+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Size-dependent proinflammatory effects of ultrafine polystyrene particles: A role for surface area and oxidative stress in the enhanced activity of ultrafines.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 175 (3), 191-199 (2001).</li>
<li>Salvati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+and+theoretical+comparison+of+intracellular+import+of+polymeric+nanoparticles+and+small+molecules%3A+toward+models+of+uptake+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine-Nanotechnology+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Experimental and theoretical comparison of intracellular import of polymeric nanoparticles and small molecules: toward models of uptake kinetics.</a> Nanomedicine-Nanotechnology Biology and Medicine. 7 (6), 818-826 (2011).</li>
<li>Frohlich, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+polystyrene+nanoparticles+of+different+sizes+on+lysosomal+function+and+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+and+Fibre+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Action of polystyrene nanoparticles of different sizes on lysosomal function and integrity.</a> Particle and Fibre Toxicology. 9, 13(2012).</li>
<li>Bexiga, M. G., Kelly, C., Dawson, K. A., Simpson, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAi-mediated+inhibition+of+apoptosis+fails+to+prevent+cationic+nanoparticle-induced+cell+death+in+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">RNAi-mediated inhibition of apoptosis fails to prevent cationic nanoparticle-induced cell death in cultured cells.</a> Nanomedicine. 9 (11), 1651-1664 (2014).</li>
<li>Lehner, R., Weder, C., Petri-Fink, A., Rothen-Rutishauser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Nanoplastic+in+the+Environment+and+Possible+Impact+on+Human+Health%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science%2C+Technology%22%5BJournal%5D)">Emergence of Nanoplastic in the Environment and Possible Impact on Human Health.</a> Environmental Science, Technology. 53 (4), 1748-1765 (2019).</li>
<li>Pinsino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino-modified+polystyrene+nanoparticles+affect+signalling+pathways+of+the+sea+urchin+%28Paracentrotus+lividus%29+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicology%22%5BJournal%5D)">Amino-modified polystyrene nanoparticles affect signalling pathways of the sea urchin (Paracentrotus lividus) embryos.</a> Nanotoxicology. 11 (2), 201-209 (2017).</li>
<li>El-Ghali, N., Rabadi, M., Ezin, A. M., De Bellard, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Methods+for+Chicken+Embryo+Manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+and+Technique%22%5BJournal%5D)">New Methods for Chicken Embryo Manipulations.</a> Microscopy Research and Technique. 73 (1), 58-66 (2010).</li>
<li>Rashidi, H., Sottile, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+embryo%3A+hatching+a+model+for+contemporary+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">The chick embryo: hatching a model for contemporary biomedical research.</a> Bioessays. 31 (4), 459-465 (2009).</li>
<li>Faez, T., Skachkov, I., Versluis, M., Kooiman, K., de Jong, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+ultrasound+contrast+agents%3A+microbubble+spectroscopy+in+a+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of ultrasound contrast agents: microbubble spectroscopy in a chicken embryo.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 38 (9), 1608-1617 (2012).</li>
<li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Ribeiro, C. A. O., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li>
<li>Li, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caffeine+interferes+embryonic+development+through+over-stimulating+serotonergic+system+in+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Caffeine interferes embryonic development through over-stimulating serotonergic system in chicken embryo.</a> Food and Chemical Toxicology. 50 (6), 1848-1853 (2012).</li>
<li>Lokman, N. A., Elder, A. S. F., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+Chorioallantoic+Membrane+%28CAM%29+Assay+as+an+In+Vivo+Model+to+Study+the+Effect+of+Newly+Identified+Molecules+on+Ovarian+Cancer+Invasion+and+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an In Vivo Model to Study the Effect of Newly Identified Molecules on Ovarian Cancer Invasion and Metastasis.</a> International Journal of Molecular Sciences. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li>
<li>Burns, E. E., Boxall, A. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+aquatic+environment%3A+Evidence+for+or+against+adverse+impacts+and+major+knowledge+gaps%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (11), 2776-2796 (2018).</li>
<li>Alejo-Plata, M. D., Herrera-Galindo, E., Cruz-Gonzalez, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+of+buoyant+fibers+adhering+to+Argonauta+nouryi+%28Cephalopoda%3A+Argonautidae%29+collected+from+the+stomach+contents+of+three+top+predators+in+the+Mexican+South+Pacific%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Description of buoyant fibers adhering to Argonauta nouryi (Cephalopoda: Argonautidae) collected from the stomach contents of three top predators in the Mexican South Pacific.</a> Marine Pollution Bulletin. 142, 504-509 (2019).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף. כל המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים ידועים או יחסים אישיים שיכולים היו להיראות כמשפיעים על עבודתו של מאמר זה.

מאמר זה מספק תוכנית ניסיונית יעילה להערכת התפתחות העובר שליו על ידי זיהוי מדדי הפיתוח הבסיסיים. עם זאת, יש עדיין כמה מגבלות לניסוי זה. 
ראשית, התמותה של עוברים שליו בשלב מאוחר יותר של הבקיעה גבוהה יותר בגלל הבקיעה ללא קליפה. ישנם גורמים בלתי נשלטים באופן מלאכותי כגון הרס של יחס חלבון נורמלי בתהליך הניסוי. הגבלתנו את זמן החשיפה של העוברים כדי להבטיח את דיוק הניסוי. המחקר של עובר יכול להתרחש רק בשלבים המוקדמים והאמצעיים של התפתחות העובר. שנית, המחקר של חברי פרלמנט על התפתחות עובר שליו מתרחש רק ב...

ייצור פסולת הפלסטיק היה כ-6,300 הרים בשנת 2015, עשירית ממנו מוחזר, והשאר נשרף או נקבר מתחת לאדמה. ההערכה היא כי כ -12,000 הר של פסולת פלסטיק ייקבר מתחת לאדמה עד 20501. עם תשומת הלב של הקהילה הבינלאומית לפסולת פלסטיק, תומפסון הציע לראשונה את הרעיון של מיקרופלסטיק בשנת 20042. מיקרופלסטיק (MPs) מתייחס פלסטיק חלקיקים קטנים עם קוטר חלקיקים פחות מ 5 מ"מ. כיום, חוקרים זיהו את נוכחותם בכל מקום של חברי פרלמנט בקו החוף של יבשות שונות, האיים האטלנטיים, האגמים היבשתיים, הקוטב הצפוני ובתי גידול במעמקי הים3,4,5,6,7. לכן, חוקרים נוספים החלו לחקור את הסיכונים הסביבתיים של חברי פרלמנט.
אורגניזמים יכולים לבלוע חברי פרלמנט בסביבה. חברי פרלמנט נמצאו במערכת העיכול של 233 אורגניזמים ימיים ברחבי העולם (כולל 100% מיני צבים, 36% מיני כלבי ים, 59% מיני לווייתנים, 59% מיני עופות ים, 92 סוגים של דגי ים ו -6 סוגים של חסרי חוליות)8. יתר על כן, חברי פרלמנט עשויים לחסום את מערכת העיכול של האורגניזמים, לצבור ולעבור בבובות שלהם9. נמצא כי חברי פרלמנט ניתן להעביר באמצעות שרשרת המזון, ואת צריכתם שונה עם השינויים של בית הגידול, שלב הצמיחה, הרגלי האכלה, ומקורותמזון 10. כמה חוקרים דיווחו על קיומם של חברי פרלמנט גללים של עופותים 11, כלומר עופות ים לפעול כנשא של חברי פרלמנט. בנוסף, בליעה של חברי פרלמנט יכולה להשפיע על בריאותם של אורגניזמים מסוימים. לדוגמה, חברי פרלמנט יכולים להסתבך במערכת העיכול, ובכך להגדיל את התמותה של cetaceans12.
חברי פרלמנט לבדם יש השפעות רעילות על אורגניזמים, כמו גם השפעות רעילות משותפות על אורגניזמים עם מזהמים אחרים. בליעה של ריכוזים הקשורים לסביבה של פסולת פלסטיק עלולה להפריע לתפקוד המערכת האנדוקרינית של דגים בוגרים13. גודל המיקרופלסטיק הוא אחד הגורמים החשובים המשפיעים על ספיגתם והצטברותם על ידי אורגניזמים14,15. הפלסטיק בגודל קטן, במיוחד הפלסטיק בגודל ננו, נוטים אינטראקציה עם תאים ואורגניזמים עם רעילות גבוהה16,17,18,19. למרות ההשפעות המזיקות של מיקרופלסטיק בגודל ננו-חלקיקים על אורגניזמים עולה על רמת המחקר הנוכחית, זיהוי וכימות של מיקרופלסטיק עם גדלים פחות מכמה מיקרומטרים, במיוחד תת מיקרו מיקרומטר / ננו-פלסטיק בסביבה, הוא עדיין אתגר גדול. בנוסף, ננו-פלסטיק יש גם כמה השפעות על עוברים. פוליסטירן יכול לפגוע בהתפתחות עוברים של קיפודי ים על ידי ויסות פרופילי חלבון וגנים20.
כדי לחקור את ההשפעה הפוטנציאלית של חברי פרלמנט על אורגניזמים, ערכנו את המחקר הזה. בשל הדמיון בין עוברים ציפורים ועוברים אנושיים, הם משמשים בדרך כלל במחקר ביולוגי התפתחותי21 כולל אנגיוגנזה ו antiangiogenesis, הנדסת רקמות, שתל ביו חומרי, וגידולים במוח22,23,24. לעוברי ציפורים יש את היתרונות של עלות נמוכה, מחזור תרבות קצר ותפעול קל25,26. לכן, בחרנו עוברים שליו עם מחזור צמיחה קצר כחיה ניסיונית במחקר זה. בו זמנית, אנו יכולים לצפות ישירות בשינויים המורפולוגיים של עוברים שליו שנחשפו לחברי פרלמנט במהלך שלב ההתפתחות העוברית באמצעות טכנולוגיית בקיעה ללא קליפת ביצה. החומרים הניסיוניים בהם נעשה שימוש היו פוליפרופילן (PP) ופוליסטירן (PS). מכיוון ש- PP ו- PS27 מהווים את השיעור הגדול ביותר של סוגי פולימרים המתקבלים משקעים וגופי מים ברחבי העולם, סוגי הפולימר הנפוצים ביותר המופקים מאורגניזמים ימיים שנתפסו הם אתילן ופרופילן28. פרוטוקול ניסיוני זה מתאר את כל התהליך להערכה חזותית של השפעות טוקסיקולוגיות של חברי פרלמנט על עוברים שליו שנחשפו לחברי פרלמנט. אנו יכולים בקלות להרחיב שיטה זו כדי לבחון רעילות של מזהמים אחרים להתפתחות העובר של בעלי חיים אחרים.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; מטחנת רקמות מרובת דגימה</td><td>שנחאי Jingxin פיתוח תעשייתי ושות', בע"מ</td><td>Tissuelyser-24</td><td>טוחנים פלסטיק בגודל גדול לגדלים קטנים בטמפרטורה נמוכה</td></tr><tr><td>איזון אלקטרוני</td><td>OHAUS corporation</td><td>PR Series דיוק</td><td>משמש לשקילת</td></tr><tr><td>ביצי שליו מופרות</td><td>גואנגג'ואו קנגמו פיתוח חקלאי ושות 'בע"מ.</td><td></td><td>ביצי שליו לבקיעה ללא קליפה</td></tr><tr><td>חלקיקי פוליפרופילן פלואורסצנטיים</td><td>פושאן ג'וליאנג חומר אופטי ושות', בע"מ</td><td></td><td>סוגי הפלסטיק שנבחרו לניסוי</td></tr><tr><td>חממת</td><td>שאנדונג, בנגדה ציוד דגירה ושות 'בע"מ.</td><td>264 יח</td>' <td>ספק מקום לצמיחה והתפתחות של עוברים</td></tr><tr><td>מיקרוספירות פוליסטירן בקנה מידה ננומטרי</td><td>Xi' חברת Ruixi Biological Technology Co., Ltd.</td><td>100 ננומטר, 200 ננומטר, 500 ננומטר</td><td>סוגי פלסטיק שנבחרו לניסוי</td></tr><tr><td>סרגל פלדה</td><td>קבוצת מעדנייה</td><td>20 ס"מ</td><td>משמש למדידה&nbsp; אורך</td></tr><tr><td>מעקר קיטור בלחץ חימום אנכי</td><td>מפעל המכשור הרפואי שנחאי שנאן</td><td>LDZM-80KCS-II</td><td>עקר את מאמרי הניסוי</td></tr></tbody></table>

השפעות אקולוגיות של מיקרופלסטיק על התפתחות עובר ציפור על ידי בקיעה ללא קליפת ביצה

Ecotoxicological Effects of Microplastics on Bird Embryo Development by Hatching without Eggshell

מיקרופלסטיק הוא סוג מזהם עולמי מתפתח המהווה איום בריאותי גדול על בעלי חיים בשל ספיגתם והעברתם ברקמות ובאיברים של בעלי חיים. השפעות אקולוגיות של מיקרופלסטיק על התפתחות עוברים ציפורים אינן ידועות. ביצת הציפור היא מערכת פיתוח ותזונה מלאה, וכל התפתחות העובר מתרחשת על קליפת הביצה. לכן, תיעוד ישיר של התפתחות העובר ציפור תחת הלחץ של מזהמים כגון מיקרופלסטיק מוגבל מאוד על ידי קליפת ביצה אטומה בקיעה המסורתית. במחקר זה, ההשפעות של מיקרופלסטיק על התפתחות עובר שליו היו מנוטרים חזותית על ידי בקיעה ללא קליפת ביצה. השלבים העיקריים כוללים ניקוי וחיטוי של ביצים מופרות, דגירה לפני החשיפה, הדגירה לטווח קצר לאחר החשיפה, ואת מיצוי המדגם. התוצאות מראות כי בהשוואה לקבוצת הביקורת, המשקל הרטוב ואורך הגוף של הקבוצה החשופה למיקרופלסטיק הראו הבדל סטטיסטי ושיעור הכבד של כל הקבוצה החשופה גדל באופן משמעותי. בנוסף, הערכנו גורמים חיצוניים המשפיעים על הדגירה: טמפרטורה, לחות, זווית סיבוב ביצה, ותנאים אחרים. שיטה ניסיונית זו מספקת מידע רב ערך על האקוטוקסיולוגיה של מיקרופלסטיק ודרך חדשנית לחקור את ההשפעות השליליות של מזהמים על התפתחות העוברים.

לניתוח נתונים ניסיוניים השווינו משקל רטוב, אורך גוף, אורך רכי החזה ושינוי מדד הפטוסומטי בין קבוצת הביקורת לבין 6 קבוצות הניסוי, תוך מדידה והשתקפות של הצמיחה וההתפתחות של עוברים שליו מנקודת מבט מאקרו. זיהינו שישה עוברים שליו רגילים בכל קבוצה. כל עובר הגיע לשלב ההמבורגר והמילטון (HH) הנדרשים.
באיור 1העברנו את תכולת ביצית שליו המופרית מראש לתוך קליפות הביציות בחצי הכדור ושמנו אותן באינקובטור. ואז תיעדנו את התפתחות העוברים באמצע הדגירה במשך שלושה ימים. כפי שמוצג <stro...

מאמר זה מציג שיטה של בקיעה ללא שימוש קליפת ביצה למחקרים טוקסיקולוגיים של מזהמי חלקיקים כגון מיקרופלסטיק.

Microplastics are an emerging global pollutant type that poses a great health threat to animals due to their uptake and translocation in animal tissues ...

הניסוי הזה יקיף ארבעה חלקים. הכנה לפני החשיפה, ביצת שליו בוקעת ללא קליפה, תהליך דגירה ואיסוף מדגם, ותוצאות מייצגות. נא צפה בסרטון הבא עבור התהליך הניסיוני הספציפי. במבחן החשיפה, אותה אצווה של ביצים מופרות שליו נבחרו לניסוי. הביצים בגודל דומה נבחרו כדי להפחית את השגיאה הניסיונית. יחד עם זאת כל שליו להפרות את הביצים והביצים צריך להיות נקי לחלוטין, כי יהיו צואה וחומרים אחרים על הקליפות שלהם. לאחר מכן, בקעו מראש, ביצי שליו מופרות, והביצים לשימוש היו מחוטאים עם פניצילין ומיצין בעת הצבת אתה צריך לשים לב למעלה פונה כלפי מטה ולאחר מכן את הקצה קהה פונה למעלה. תהליך הניקוי של הביצה לא מוצג בסרטון. השלב הבא הוא תהליך הארקת קליפת הביצה. זה הצעד החשוב ביותר בהכנה. קליפת הביצה המזמרת היא חתך בגודל הביצה המרכזי עם מקדחה דנטלית, אבל לא ניתן לשבור. מנסה להפוך את פני השטח שבר של ההסתה חלק מספיק, אז האינקובטור היה מחוטא עם 75% תמיסת Acinol. ביצית מופרית שליו שהונחה באינקובטור עם לחות של 60% ו -38

ecotoxicological-effects-microplastics-on-bird-embryo-development

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

קלות הנגישות של העובר אפשרה לניסויים למפות גורלות התא באמצעות גישות שונות, כולל חומוס שליו מפלצות וסימון צבע מוקד. במאמר זה אנו מדגים אחד הכנת ביצה שיטה כי כבר מותאם במיוחד פעמים הישרדות ארוכה.

עוף Windowing ביצים למחקרים התפתחותיים

במאמר זה, אנו מציגים מתודולוגיה פשוטה כדי לאפשר לטווח...

לשעבר אובו העובר עוף התרבות מתאים ליישומים הדמיה microsurgery מערכת

פרוש הזברה (Taeniopygiaguttata) הוא אורגניזם מודל בעל ערך; עם זאת, שלבים מוקדמים של התפתחות פרוש הזברה לא נחקרו בהרחבה. הפרוטוקול מתאר כיצד לנתח עוברים מוקדמים ליישומים התפתחותיים ומולקולריים.

נתיחה וניתוח במורד הזרם של הזברה פינק עוברים בשלבים מוקדמים של פיתוח

חשיפה ל: רעלנים סביבתיים יכולים להשפיע בחריפות עוברי המתפתח. משבשי כגון bisphenols ידועים להשפיע לרעה על מערכת העצבים. כאן נתאר פרוטוקול באמצעות מודל הרשת העצבית בעלי חוליות (אפרוח העובר) במבחנה לחקור את ההשפעה הפונקציונלית של חשיפה הרעלן על עוברי מוקדם.

הערכת ההשפעה של משבשי תרכובות על הפיתוח של רשת עצבית חוליות הפונקציה באמצעות אלקטרודה מרובה מערכים

חשיפה חשיפה לרעלים סביבתיים יכולים להשפיע בחריפות פיתוח עם השפעות ארוכות טווח. פרוטוקולים מפורט ניתנים כדי להמחיש אסטרטגיה באמצעות מודל מעבדה יעילה כדי לחקור את ההשפעה של חשיפה מוקדמת עובריים ביספנול איי אנו מספקים פוריות, מבחני התנהגות לעקוב אחר האפקטיביות של הביו-מבחני שלנו החשיפה toxicant.

השלכות התנהגותיות, הרבייה לטווח ארוך של חשיפה עובריים חשיפה לרעלים במינון נמוך

פרוטוקול זה מתאר שלוש שיטות כיצד להשיג ולהשתמש בעוברי עוף בני 5 עד 8 ימים ובממברנה הכוריאואלנטואית שלהם (CAM) כמודל in vivo לחקר הדמיית אולטרסאונד משופרת ניגודיות ואספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות.

הכנת עוברי עוף אקס אובו וכלי קרום כוריואלנטואיים כמודל In Vivo להדמיית אולטרסאונד משופר ניגודיות ומחקרי אספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות

זוהי שיטה יעילה לסנן מדכאים או נהגים של גרורות סרטן. תאים, המועברים בספריית ביטויים, מוזרקים לתוך כלי הקרום chorioallantoic עוף כדי ליצור מושבות גרורתיות. מושבות שיש להם ירידה או פולשניות מוגברת הם excised, מורחב, reinjected כדי לאשר פנוטיפ שלהם, ולבסוף, מנותח באמצעות רצף תפוקה גבוהה.

גילוי של רגולטורים גרורתיים באמצעות מודל ממברנה צ'יק תוך-ויאטואי מהיר וכמותי

עוברים/זחלים של דגי זברה מתפתחים חיצונית והם שקופים אופטית. הביואקומולציה של מיקרופלסטיק בדגים בשלבי חיים מוקדמים מוערכת בקלות עם מיקרוביאדות בעלות תווית פלואורסצנטית.

הצטברות והפצה של מיקרופלסטיק פלואורסצנטי בשלבי החיים המוקדמים של דגי זברה

עוברים עוף, כמודל התפתחותי קלאסי, משמשים במעבדה שלנו להערכת cardiotoxicic התפתחותי בעקבות חשיפה מזהמים סביבתיים שונים. שיטות חשיפה ושיטות הערכה מורפולוגיות/פונקציונליות שנקבעו מתוארות בכתב יד זה.

שימוש בעובר עוף ככלי רב עוצמה להערכת לב-קרדיוקסיות התפתחותית

בדיקת החרוזים הספוגים כוללת אספקה ממוקדת של ריאגנט הבדיקה בכל נקודת זמן התפתחותית כדי לחקור את ויסות התמיינות התאים והמורפוגנזה. מוצג פרוטוקול מפורט, החל על כל מודל ניסיוני של בעלי חיים, להכנת שלושה סוגים שונים של חרוזים מושרים והשתלתם באינטרדיגיט של עובר עוף.

ניתוח התמיינות תאים, מורפוגנזה ותבניות במהלך עוברי עוף באמצעות בדיקת החרוזים המושרים

חקור שיטת בקיעה ללא קליפת ביצה לחקר רעילות מיקרופלסטיק בעוברי ציפורים. גישה זו משפרת את אמינות התוצאות במחקרי זיהום סביבתי ומאפשרת הערכה מדויקת של השפעות החומרים.

השפעות אקולוגיות של מיקרופלסטיק על התפתחות עובר ציפור על ידי בקיעה ללא קליפת ביצה

גלה סרטונים נוספים