Name: שיטה זעיר פולשנית להחדרת תרופות תוך-רחמיות במכרסמים יילודים לטיפול במחלות ריאה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: למד שיטה זעיר פולשנית להחדרת תרופות תוך-רחמיות במכרסמים יילודים לטיפול במחלות ריאה. הטכניקה משפרת את הדיוק והשרידות ומפחיתה כאב ודימום בניסויים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי R01HD09090887-01A1 מ- NICHD ל- AH. המחברים מכירים גם במתקנים שמספקת המעבדה של ד"ר פיטר מק'פרלן, כגון הרדמה בשאיפה / מערכת כרית חימום. עזרתה החשובה של גב ' קתרין מאייר בהקמת המערכת מוערכת. לא מילא כל תפקיד על ידי הגוף המממן בתכנון המחקר, האיסוף, הניתוח והפרשנות של הנתונים או בכתיבת כתב היד.

כל הניסויים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (פרוטוקול # 2020-0035) באוניברסיטת קייס ווסטרן ריזרב. כל בעלי החיים טופלו בהתאם להנחיות ה-NIH לטיפול בחיות מעבדה ולשימוש בהן.
1. בעלי חיים
<ol><li>להשיג באופן מסחרי חולדות ספראג דאולי בהריון.</li>
	<li>יש לשמור על בעלי חיים במתקן וטרינרי מאושר עם מחזור אור-חושך של 14 שעות ו-45-60% לחות יחסית.</li>
</ol>2. הכנת מתחם בדיקה
<ol><li>השתמש בצבע הכחול של אוונס כתרכובת הבדיקה כדי להעריך את היעילות של הליך ההחדרה התוך-צ'יאלי.</li>
	<li>מכינים תמיסה של 0.25% (w/v) של הצבע במי מלח עם חציצת פוספט (pH 7.2) ומסננים עיקור באמצעות מסנן מזרק של 0.45 מיקרומטר.</li>
</ol>3. ניהול הרדמה
<ol><li>מרדימים גורי חולדות באמצעות הרדמה בגז (3% איזופלורן ב-100% חמצן), באמצעות מערכת אספקה מותאמת המותאמת לילודים קטנים של חולדות.</li>
	<li>בדוק את אובדן רפלקסי הזנב והדוושה והנשימה הרדודה כדי להבטיח את עומק ההרדמה הנכון לביצוע ההליך.</li>
</ol>4. החדרה תוך-מוחית (ITI)
<ol><li>השתמשו בגורי חולדות ביום 5 שלאחר הלידה (PN 5) עבור ה-ITI. המשקל הממוצע של גור חולדה PN 5 הוא 12 גרם.</li>
	<li>לרסן את גור החולדה המרדים על פלטפורמה שטוחה משופעת באמצעות סרט תיוג מעבדה. הגור מרוסן בזווית של כ-45° בתנוחת השכיבה.</li>
	<li>פתחו את פיו של היילוד, ומשכו בעדינות את הלשון לצד אחד באמצעות מלקחיים קהים.</li>
	<li>השתמש בספקולום אוטוסקופ קטן בקוטר 2 מ"מ המחובר לאוטוסקופ כדי להחזיק את הלשון בעדינות ולהדמיה נכונה של הגרון.</li>
	<li>השתמשו במערכת תאורת הגרון, כלומר באוטוסקופ ההפעלה, ובעדשה המגדלת להדמיה נכונה של מיתרי הקול (איור 1).</li>
	<li>מקם את החיות בזווית של 45° במישור משופע. נעשה שימוש במכסים הקוויים של כלובי העכברים (איור 2). הערה: מיקום החיה בזווית של 45° מספק הדמיה טובה יותר של פתח קנה הנשימה ללא הפרעה של האפיגלוטיס.</li>
	<li>קחו לעצמכם קצה פיפטה ארוך זווית המשמש להעמסת ג'לים מערביים. חותכים את הבסיס של קצה הפיפטה באמצעות להב כירורגי כך שהוא מתאים היטב לקצה של מזרק 1 סמ"ק.</li>
	<li>השתמשו במזרק הסטרילי 1 מ"ל המותאם לקצה פיפטה בעל זווית ארוכה כדי להעביר 30-50 μL של החומר לריאה. הפכו את המזרק ושאפו כמעט 0.9 סמ"ק אוויר לתוך המזרק 1 מ"ל המחובר לקצה הפיפטה ואחריו הצבע או החומר שיש להעביר. זה מאפשר לאוויר שמאחורי הצבע להידחף לקנה הנשימה לאחר מתן הצבע כפי שמוצג באיור 3. הניהול התוך-מוחי מושג על ידי הדמיית לומן הגרון (מיתרי הקול) והחדרת קצה הפיפטה המותאם למזרק לתוך לומן קנה הנשימה.</li>
	<li>השתמש בספקולום של האוטוסקופ כדי להחזיק את הלשון ולחשוף את מיתרי הקול. ספקולום משרת את תפקיד הלהב של לרינגוסקופ. כופפו את קצה הפיפטה לזווית של 30° כדי לאפשר החדרה קלה של הסוכן דרך הספקולום בצורת חרוט לתוך פתח קנה הנשימה.</li>
	<li>הכניסו את קצה הפיפטה לפתח קנה הנשימה עד כדי כ-2 מ"מ מעבר למיתרי הקול. דחפו את הבוכנה של המזרק כדי לתת את הצבע או את התרופה דרך הספקולום של אוטוסקופ ההפעלה כפי שמוצג באיור 3. הכנסת אוויר לריאה זמן קצר לאחר מתן הסוכן מונעת מהחומר לחזור לחלל הגרון.</li>
	<li>לאחר מתן הגור עם הצבע או מי מלח רגילים, הניחו את הגורים על כרית חימום נוזלית משולבת במחזור הדם (38 מעלות צלזיוס) עד שתנועות הנשימה שלהם סדירות. לאחר התאוששות מלאה מהרדמה, לאחד מחדש את הגורים עם הסכר.</li>
</ol>5. אפיון מסירת ITI
<ol><li>לאחר ITI, הרדים את גורי החולדה על ידי מתן הרדמה מוגזמת (קטמין 100 מ"ג/ק"ג וקסילזין 10 מ"ג/ק"ג) / תיאופנטון ולאחר מכן אקסנגוויציה בזמן המתאים לאחר מתן. המתת חסד בוצעה כחלק מהניסוי לאיסוף רקמת ריאה כדי להדגים את היעילות.</li>
	<li>מאבטחים את גור החולדה המתים על לוח דיסקציה ומנגבים את החזה והבטן ב-70% אלכוהול אתילי.</li>
	<li>להערכת התפלגות הצבע לאורך הריאה, הסירו את הריאות מבעל החיים בטכניקה סטרילית והציגו את הריאות כמתאימות להדמיה (איור 4A,B).</li>
</ol>

<ol><li>Prakash, Y. S. Pulmonary Cell Biology Lab: Neonatal Lung Disease. Mayo Clinic. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.mayo.edu/research/labs/pulmonary-cell-biology/projects/neonatal=lung-disease">https://www.mayo.edu/research/labs/pulmonary-cell-biology/projects/neonatal=lung-disease</a> (2020).</li>
<li>Martínez-Burnes, J., López, A., Lemke, K., Dobbin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transoral+intratracheal+inoculation+method+for+use+with+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transoral intratracheal inoculation method for use with neonatal rats.</a> Comparative Medicine. 51 (2), 134-137 (2001).</li>
<li>Pinkerton, K. E., Crapo, J. D. Morphometry of the alveolar region of the lung. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPinkerton%2C+KE+%22Toxicology+of+Inhaled+Materials+Handbook+of+Experimental+Pharmacology%22">Toxicology of Inhaled Materials Handbook of Experimental Pharmacology</a>. Witschi, H., Brain, J. D. 95, Springer, Berlin. 259-285 (1985).</li>
<li>Nardiello, C., Mižíková, I., Morty, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+ahead%3A+where+to+next+for+animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Looking ahead: where to next for animal models of bronchopulmonary dysplasia.</a> Cell and Tissue Research. 367 (3), 457-468 (2017).</li>
<li>Sugimoto, M., Ando, M., Senba, H., Tokuomi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+defenses+in+neonates%3A+Effects+of+bronchial+lavage+fluids+from+adult+and+neonatal+rabbits+on+superoxide+production+by+their+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Reticuloendothelial+Society%22%5BJournal%5D)">Lung defenses in neonates: Effects of bronchial lavage fluids from adult and neonatal rabbits on superoxide production by their alveolar macrophages.</a> Journal of the Reticuloendothelial Society. 27 (6), 595-606 (1980).</li>
<li>Grayson, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controls+for+lung+dendritic+cell+maturation+and+migration+during+respiratory+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Controls for lung dendritic cell maturation and migration during respiratory viral infection.</a> Journal of Immunology. 179 (3), Baltimore, Md. 1438-1448 (2007).</li>
<li>Moreira, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+human+umbilical+cord+Wharton%27s+jelly+mesenchymal+stromal+cells+restores+lung+alveolarization+and+vascularization+in+experimental+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of human umbilical cord Wharton's jelly mesenchymal stromal cells restores lung alveolarization and vascularization in experimental bronchopulmonary dysplasia.</a> Stem Cells Translational Medicine. 9 (2), 221-234 (2020).</li>
<li>Bar-Haim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrelationship+between+dendritic+cell+trafficking+and+Francisella+tularensis+dissemination+following+airway+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Interrelationship between dendritic cell trafficking and Francisella tularensis dissemination following airway infection.</a> PLoS Pathogens. 4 (11), 1000211(2008).</li>
<li>Linderholm, A. L., Franzi, L. M., Bein, K. J., Pinkerton, K. E., Last, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+comparison+of+intranasal+and+intratracheal+administration+of+coarse+PM+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Pharmacology%2C+Toxicology+and+Genotoxicology%22%5BJournal%5D)">A quantitative comparison of intranasal and intratracheal administration of coarse PM in the mouse.</a> Integrative Pharmacology, Toxicology and Genotoxicology. 1 (1), 5-10 (2015).</li>
<li>Guerra, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+a+naked+plasmid+expressing+stromal+derived+factor-1+improves+lung+structure+in+rodents+with+experimental+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of a naked plasmid expressing stromal derived factor-1 improves lung structure in rodents with experimental bronchopulmonary dysplasia.</a> Respiratory Research. 20 (1), 255(2019).</li>
<li>Thomas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+particle+size+on+the+pathology+and+efficacy+of+vaccination+in+a+murine+model+of+inhalational+anthrax%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax.</a> Journal of Medical Microbiology. 59, Pt 12 1415-1427 (2010).</li>
<li>Sakurai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combination+of+the+aerosolized+PPAR-%CE%B3+agonist+pioglitazone+and+a+synthetic+surfactant+protein+B+peptide+mimic+prevents+hyperoxia-induced+neonatal+lung+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">A combination of the aerosolized PPAR-γ agonist pioglitazone and a synthetic surfactant protein B peptide mimic prevents hyperoxia-induced neonatal lung injury in rats.</a> Neonatology. 113 (4), 296-304 (2018).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2702(2011).</li>
<li>Brain, J. D., Knudson, D. E., Sorokin, S. P., Davis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+distribution+of+particles+given+by+intratracheal+instillation+or+by+aerosol+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary distribution of particles given by intratracheal instillation or by aerosol inhalation.</a> Environmental Research. 11 (1), 13-33 (1976).</li>
<li>Pritchard, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+dust+in+the+rat+lung+following+administration+by+inhalation+and+by+single+intratracheal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">The distribution of dust in the rat lung following administration by inhalation and by single intratracheal instillation.</a> Environmental Research. 36 (2), 268-297 (1985).</li>
<li>Ruzinski, J. T., Skerrett, S. J., Chi, E. Y., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deposition+of+particles+in+the+lungs+of+infant+and+adult+rats+after+direct+intratracheal+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Deposition of particles in the lungs of infant and adult rats after direct intratracheal administration.</a> Laboratory Animal Science. 45 (2), 205-210 (1995).</li>
<li>Sun, B., Curstedt, T., Song, G. W., Robertson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+improves+lung+function+and+morphology+in+newborn+rabbits+with+meconium+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+the+Neonate%22%5BJournal%5D)">Surfactant improves lung function and morphology in newborn rabbits with meconium aspiration.</a> Biology of the Neonate. 63 (2), 96-104 (1993).</li>
<li>Nicholson, J. W., Kinkead, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+device+for+intratracheal+injections+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A simple device for intratracheal injections in rats.</a> Laboratory Animal Science. 32 (5), 509-510 (1982).</li>
<li>Carlon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+mouse+lung+by+fetal+intratracheal+injection+of+rAAV2%2F6.2%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%3A+The+Journal+of+the+American+Society+of+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the mouse lung by fetal intratracheal injection of rAAV2/6.2.</a> Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18 (12), 2130-2138 (2010).</li>
<li>Chen, C. -M., Chen, Y. -J., Huang, Z. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+Instillation+of+Stem+Cells+in+Term+Neonatal+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (159), e61117(2020).</li>
<li>Reynolds, R. D. Preventing maternal cannibalism in rats. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aReynolds%2C+RD+%22Science%22">Science</a>. 213 (4512), New York, N.Y. 1146(1981).</li>
<li>Park, C. M., Clegg, K. E., Harvey-Clark, C. J., Hollenberg, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+successful+neonatal+rat+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for successful neonatal rat surgery.</a> Laboratory Animal Science. 42 (5), 508-513 (1992).</li>
<li>Cleary, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exudative+lung+injury+is+associated+with+decreased+levels+of+surfactant+proteins+in+a+rat+model+of+meconium+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Exudative lung injury is associated with decreased levels of surfactant proteins in a rat model of meconium aspiration.</a> Pediatrics. 100 (6), 998-1003 (1997).</li>
<li>Das, S., MacDonald, K., Chang, H. -Y. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).</li>
<li>Oka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+method+for+intratracheal+instillation+of+materials+to+the+entire+lung+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">A reliable method for intratracheal instillation of materials to the entire lung in rats.</a> Journal of Toxicologic Pathology. 19 (2), 107-109 (2006).</li>
<li>Watanabe, A., Hashimoto, Y., Ochiai, E., Sato, A., Kamei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+confirming+correct+endotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A simple method for confirming correct endotracheal intubation in mice.</a> Laboratory Animals. 43 (4), 399-401 (2009).</li>
<li>Kim, J. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automatic+video+instillator+for+intratracheal+instillation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">An automatic video instillator for intratracheal instillation in the rat.</a> Laboratory Animals. 44 (1), 20-24 (2010).</li>
<li>Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intubation-mediated+intratracheal+%28IMIT%29+instillation%3A+a+noninvasive%2C+lung-specific+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52261(2014).</li>
<li>Ordodi, V. L., Mic, F. A., Mic, A. A., Sandesc, D., Paunescu, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+device+for+intubation+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A simple device for intubation of rats.</a> Lab Animal. 34 (8), 37-39 (2005).</li>
<li>Cleary, G. M., Wiswell, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meconium-stained+amniotic+fluid+and+the+meconium+aspiration+syndrome.+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Meconium-stained amniotic fluid and the meconium aspiration syndrome. An update.</a> Pediatric Clinics of North America. 45 (3), 511-529 (1998).</li>
<li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+rapid+intubation+of+the+trachea+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An improved method for rapid intubation of the trachea in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771(2016).</li>
<li>Litvin, D. G., Dick, T. E., Smith, C. B., Jacono, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung-injury+depresses+glutamatergic+synaptic+transmission+in+the+nucleus+tractus+solitarii+via+discrete+age-dependent+mechanisms+in+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Lung-injury depresses glutamatergic synaptic transmission in the nucleus tractus solitarii via discrete age-dependent mechanisms in neonatal rats.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 70, 398-422 (2018).</li>
<li>Spoelstra, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+simple+method+for+endotracheal+intubation+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A novel and simple method for endotracheal intubation of mice.</a> Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80 (3), 415-424 (2016).</li>
<li>Chang, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+human+umbilical+cord+blood-derived+mesenchymal+stem+cells+dose-dependently+attenuate+hyperoxia-induced+lung+injury+in+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells dose-dependently attenuate hyperoxia-induced lung injury in neonatal rats.</a> Cell Transplantation. 20 (11-12), 1843-1854 (2011).</li>
<li>Chang, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+umbilical+cord+blood+derived+mesenchymal+stem+cells+transplantation+determines+therapeutic+efficacy+in+the+neonatal+hyperoxic+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Timing of umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells transplantation determines therapeutic efficacy in the neonatal hyperoxic lung injury.</a> PloS One. 8 (1), 52419(2013).</li>
<li>Mowat, V., Alexander, D. J., Pilling, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+rodent+and+nonrodent+laryngeal+and+tracheal+bifurcation+sensitivities+in+inhalation+toxicity+studies+and+their+relevance+for+human+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">A comparison of rodent and nonrodent laryngeal and tracheal bifurcation sensitivities in inhalation toxicity studies and their relevance for human exposure.</a> Toxicologic Pathology. 45 (1), 216-222 (2017).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

החדרה תוך-רחמית היא שיטה מצוינת המציעה מספר יתרונות על פני השיטות הקיימות להתערבויות במחלות בדרכי הנשימה, כמו גם לפיתוח מודל המחלה. זוהי שיטה מהירה ועם ניסיון, ניתן לבצע במהירות ממוצעת של 2-3 דקות לכל חיה. השיקולים המרכזיים לאינטובציה מוצלחת הם הרגעה נכונה של החיה, זהו מיקום נכון, במיוחד הראש, כמו גם עומק מדויק של מיקום / גודל הספקולולה בלוע. הרגעה נכונה תאפשר מספיק זמן עבודה למפעילים, במיוחד למתחילים. מיקום החיה בזווית של 45° חשוב להדמיה נכונה של מיתרי הקול. מיקום הספקולום בעומק הנכון מסייע בנסיגה של הלשון לאורך כל ההלי...

לילודים שנולדו בטרם עת יש ריאות מפותחות בצורה גרועה הדורשות טיפולים התערבותיים רבים כגון הנשמה ארוכת טווח. התערבויות אלה ממקמות את היילודים ששרדו בסיכון גבוה להמשךהבא 1. מודלים ניסיוניים של בעלי חיים משמשים ככלי חשוב בהדמיית מצבי מחלה שונים, בחקר הפתוביולוגיה של מחלות ובהערכת התערבויות טיפוליות. אף על פי שמגוון רחב של מודלים של בעלי חיים, מעכברים, חולדות וארנבות ועד כבשים וחזירים טרום-קדנציה זמינים, עכברים וחולדות הם הנפוצים ביותר. 
היתרון העיקרי של שימוש בעכברים ובחולדות הוא תקופת ההיריון הקצרה יחסית והעלות המופחתת. הם גם זמינים בקלות, קלים לתחזוקה בסביבות נטולות מחלות, הומוגניים מבחינה גנטית ויש להם דאגה פחות אתית יחסית 2,3. יתרון מרכזי נוסף של מודל המכרסם הוא שבלידה הגור היילודי נמצא בשלב קנליקולרי/מוקדם מוקדם של התפתחות הריאה, אשר שווה מבחינה מורפולוגית לריאה של תינוק אנושי פג בן 24 שבועות שממשיך לפתח דיספלסיה ברונכופולמונרית4. בנוסף, ככל שהתפתחות הריאות שלהם מתקדמת במהירות להשלמה במהלך 4 השבועות הראשונים לחיים, ניתן לחקור את ההבשלה שלאחר הלידה של הריאה במסגרת זמן סבירה4. למרות יתרונות אלה, גודלם הקטן של העכברים וגורי החולדות הוא מקור לדאגה להתערבויות שונות, מה שמאלץ את רוב החוקרים להשתמש בבעלי חיים בוגרים ולא בגורים5. ריאות יילודים נמצאות בשלב התפתחותי והתגובה של יילוד לסוכן מסית שונה מזו של מבוגר. זה עושה את זה מתאים להשתמש במודלים של בעלי חיים יילודים כדי לחקור מצבים של מחלות יילודים אנושיות.
ישנן שיטות שונות למתן תרופות/ חומרים ביולוגיים לריאה. זה כוללהחדרה תוך-ורידית 6,7 או תוך-תאית 8,9,10 וכן שאיפת אירוסול 11,12. לכל גישה יש אתגרים טכניים משלה, יתרונות, כמו גם מגבלות13. מסלול תוך-נפשי של מתן חומרים טיפוליים עדיף לחקור את ההשפעה הטיפולית הישירה באיבר העוקף את ההשפעות המערכתיות. מסלול זה יכול לשמש גם לחקר הפתולוגיה של הריאות הנגרמת על ידי גורמים מסיתים. ישנן גם טכניקות פולשניות וגם זעיר פולשניות לעשות זאת והוא קל לביצוע במבוגרים. עם זאת, בגורים, בגלל גודלה הקטן של החיה, ישנם אתגרים טכניים הקשורים לתהליך האינטובציה. המחקר הנוכחי מציג שיטת החדרה תוך-רחמית פשוטה, עקבית ולא כירורגית (ITI) בגורי חולדות, שניתן להשתמש בה כדי לחקור את היעילות של התערבויות טיפוליות יילודיות שונות, כמו גם כדי ליצור מודלים של בעלי חיים המדמים מחלות נשימה בילודים.

<table><tbody><tr><td>צבע כחול אוונס</td><td>סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>314-13-6</td><td>אישור מתן תרופה לריאות</td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד</td><td>הוספירה. בע"מ, לייק פורסט, אילינוי, ארה"</td><td>ב מופק ממתקן לטיפול בבעלי חיים</td><td>להרגעה</td></tr><tr><td>הפעלת אוטוסקופ</td><td>וולש אלין, הילרום, שיקגו, אילינוי, ארה"ב</td><td>21770- 3.5V</td><td>להדמיה של מיתרי הקול</td></tr><tr><td>אוטוסקופ ידית נטענת</td><td>וולש אלין, הילרום, שיקגו, אילינוי, ארה"ב</td><td>71050-C</td><td></td></tr><tr><td>קצה פיפטה (העמסת ג'ל)</td><td>פישרברנד</td><td>02-707-139</td><td>מתן התרופה</td></tr><tr><td>פלטפורמה לריסון (מטוס נוטה)</td><td>מתקן לטיפול בבעלי חיים</td> מחולק <td>ממתקן לטיפול בבעלי חיים</td><td>ניתן להשתמש בגג קווי של כלוב עכברים</td></tr><tr><td>3M נייר לבן כירורגי מיקרופורי (סרט הדבקה)</td><td>3M, סנט פול, מינסוטה, ארה"ב</td><td>1530-2</td><td></td></tr><tr><td>מזרקי Luer Lock (1 מ"ל)</td><td>BD פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>NBD2515</td><td>מתן התרופה</td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>הוספירה. בע"מ, לייק פורסט, אילינוי, ארה"ב</td><td></td><td>להרגעה</td></tr></tbody></table>

שיטה זעיר פולשנית להחדרת תרופות תוך-רחמיות במכרסמים יילודים לטיפול במחלות ריאה

A Minimally Invasive Method for Intratracheal Instillation of Drugs in Neonatal Rodents to Treat Lung Disease

טיפול במכרסם יילודים עם תרופות המוחדרות ישירות לקנה הנשימה יכול לשמש ככלי רב ערך לחקר ההשפעה של תרופה מקומית. יש לכך השפעה תרגומית ישירה מכיוון שחומרים פעילי שטח ותרופות ניתנים באופן מקומי לריאות. אף על פי שבספרות יש פרסומים רבים המתארים אינטובציה טרנס-אוראלית זעיר פולשנית של עכברים וחולדות בוגרים בניסויים טיפוליים, גישה זו בגורי חולדות יילודים לוקה בחסר. הגודל הקטן של אזור/לוע האורוטרכאלי אצל הגורים מקשה על הדמיה של לומן הגרון (מיתרי הקול), מה שתורם לשיעור ההצלחה המשתנה של אספקת תרופות תוך-רחמיות. אנו מדגימים בזאת אינטובציה אוראלית יעילה של גור חולדות יילודים - טכניקה שאינה טראומטית ומזערית פולשנית, כך שניתן להשתמש בה למתן סדרתי של תרופות. השתמשנו באוטוסקופ הפעלה עם מערכת תאורה ועדשה מגדלת כדי לדמיין את פתח קנה הנשימה של יילודי החולדות. לאחר מכן מחדירים את התרופה באמצעות מזרק 1 מ"ל המחובר לקצה פיפטה. הדיוק של שיטת המסירה הודגם באמצעות ניהול הצבע הכחול של אוונס. קל להכשיר שיטה זו והיא יכולה לשמש כדרך יעילה להחדיר סמים לקנה הנשימה. שיטה זו יכולה לשמש גם למתן אינוקולום או סוכנים כדי לדמות תנאי מחלה בבעלי חיים, וגם, עבור אסטרטגיות טיפול מבוססות תאים למחלות ריאה שונות.

ההחדרה של כחול אוונס חשפה התפלגות מולטיפוקלית של הצבע המערב את כל האונות הריאתיות (איור 4A,B). התוצאה שלנו כפי שמוצגת באיור 4 מדגימה את יעילות ההתפלגות לכל האונות. התמונה צולמה מיד לאחר ITI של הצבע לתוך קנה הנשימה. יעילות של 100% הושגה בהחדרת הצבע לקנה הנשימה ולאחר מכן התפשטותו לכל האונות משני הצדדים. צפוי כי הצבע יתפשט עוד יותר בתוך אונת הריאה. עם ניהול חוזר ונשנה, הצלחנו להבטיח 100% הצלחה בהעברת זה לריאה הן לאונות והן לכל האונות. הבטחנו ששום צ...

טכניקה זו של החדרת תרופות ישירות לקנה הנשימה של מכרסמים יילודים חשובה לחקר ההשפעה של תרופות או ביולוגים מקומיים על מחלות ריאה בילודים. בנוסף, שיטה זו יכולה לשמש גם לגרימת פגיעה בריאה במודלים של בעלי חיים.

Treatment of neonatal rodent with drugs instilled directly into the trachea could serve as a valuable tool to study the impact of a locally administered ...

פרוטוקול זה מדגים כי ניתן להחדיר חומר מחקרי לקנה הנשימה של גורי חולדות יילודים, בני חמישה ימים, על ידי הדמיה ישירה. שיטה זו משפרת את האמינות של מתן חומר מחקר או תרופה לתוך קנה הנשימה על ידי הדמיה ישירה. על ידי הימנעות מהזרקה לקנה הנשימה, שיטה זו מפחיתה את הכאב, וחשוב מכך, דימום לקנה הנשימה, ומאפשרת הישרדות משופרת.פיתוח מיומנויות עדינות נדרש כדי לבצע פרוטוקול זה, כולל מיקום מתאים של החיה, שימוש נכון באוטוסקופ הפעלה כדי לדמיין את מיתרי הקול, ויעילות מתן לריאות. מי שידגימו את ההליך יהיו טארה סודהאדווי, פוסט-דוקטורנטית מהמעבדה שלי, ואליסון הא, סטודנטית לתואר שני. לפני תחילת הניסוי, אשרו את אובדן רפלקס הזנב והדוושה בגור חולדה מורדם בן חמישה ימים והשתמשו בסרט סימון מעבדה כדי לרסן את הגור במצב שכיבה על פלטפורמה שטוחה הנוטה ל-45 מעלות.השתמש במלקחיים קהים כדי למשוך בעדינות את הלשון לצד אחד, ובעזרת ספקולום אוטוסקופ בקוטר שני מילימטרים, החזק בעדינות את הלשון במקומה כך שהגרון נראה לעין. באמצעות אוטוסקופ ההפעלה עם הספקולום בגודל הנכון, אתר את מיתרי הקול דרך העדשה המגדלת של האוטוסקופ. להחדרה תוך-תאית, טענו מזרק של מיליליטר אחד המצויד בקצה פיפטה בעל זווית ארוכה וטעינת ג'ל עם 0.9 סנטימטרים מעוקבים של אוויר, ואחריו 30 עד 50 מיקרוליטרים של חומר העניין.כופפו את קצה הפיפטה לזווית של 30 מעלות והכניסו את קצה הפיפטה הטעון דרך הספקולום לכ-2 מילימטרים מעבר למיתרי הקול. לדחוף את הבוכנה של המזרק כדי לתת את החומר המעניין ואת האוויר דרך הספקולום לתוך מיתרי הקול. לאחר שכל החומר נמסר, הניחו את הגור על כרית חימום נוזלים משולבת של 38 מעלות צלזיוס עם ניטור עד לנשימה סדירה, לפני שתאחדו מחדש את הגור עם הסכר.כדי להעריך את התפלגות החומר בתוך דגימת רקמת ריאה, נגבו את החזה והבטן של גורי החולדה המתים עם 70% אלכוהול אתיל והשתמשו בטכניקה סטרילית כדי להסיר את הריאות על פי פרוטוקולים סטנדרטיים להערכת הראייה שלהם. במחקר זה, היעילות של טכניקת ההחדרה התוך-קנה הנשימה הוערכה על ידי בדיקה חזותית של רקמת הריאה שנאספה מגור חולדה בן חמישה ימים שהוחדר לצבע כחול של אוונס. ההחדרה הייתה יעילה בכמעט 100%, שכן הצבע התפשט לריאה מיד עם מתן התרופה והתפזר על פני כל האונות של רקמת הריאה.הצבע לא נצפה בתוך רקמות כלשהן מחוץ לריאות, מה שאישר את יכולתה של הטכניקה לשמש להעברה סלקטיבית של טיפול בעל עניין לריאות. הצבת החיה בתחילה בזווית הנכונה על פני משטח יציב חיונית להצלחת השלב הבא של הדמיית מיתרי הקול באמצעות אוטוסקופ ההפעלה.

a-minimally-invasive-method-for-intratracheal-instillation-drugs

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Instillations Intratracheal לספק מומסים ישירות לריאות. הליך זה מטרות אספקת instillate לתוך אזורים דיסטלי של הריאה, ולכן שולבו לעתים קרובות במחקרים שמטרתם ללמוד alveoli. אנו מספקים הישרדות פרוטוקול מפורט לביצוע instillations intratracheal בעכברים.

החדרה ישירה של קנה הנשימה אל הריאות מומסים עכבר

פתחנו גישה ניתוחית חדשנית לממשל intratracheal של סוכני יו לעובר העכבר. מסלול המשלוח הוא יעיל יותר במיקוד ריאות העכבר העובריות מהזרקה תוך מי השפירה בשימוש נפוץ. הליך זה עד כה לא תואר במודל של עכברים.

גישה ניתוחית חדשנית למנהל Intratracheal של סוכני יו במודל של עכברים עוברי

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום הריאות במודל מכרסם חיסוני באמצעות אינטובציה והתקנת תרחיפים חיידקיים באונות הריאה. מודל זה מאפשר מחקרי יעילות אנטיבקטריאליים בבעלי חיים בעלי יכולת חיסון.

החדרה תוך סימפונית של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס במודלים של מכרסמים חיסוניים

השימוש במודל המחקה את המצב של מחלות ריאה בבני האדם הוא קריטי ללימוד הפתופיזיולוגיה ו / או אטיולוגיה של מחלה מסוימת ולפתח התערבות טיפולית. הנה שיטת אינטובציה intratracheal לא פולשנית שיכול ישירות לספק חומרים אקסוגניים לריאות עכבר מוצגת.

פולשנית Intratracheal אינטובציה ללמוד פתולוגיה והפיזיולוגיה של עכבר ריאות

intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT) של חומרים כימיים היא שיטה מצוינת, לא פולשנית ללימוד מחלות בדרכי הנשימה, כמו גם שיטה להחדרת חומרים כימיים טיפוליים ישירות לתוך הריאות. זוהי שיטה מהירה ושחזור ביותר אשר מתאימה לניסויים פרה-קליניים.

Intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח

מאמר זה מציג שיטה מהירה ופשוטה לניהול בליאומיצין ישירות לתוך קנה הנשימה העכבר באמצעות אינטובציה. יתרונות עיקריים של שיטה זו הם כי הוא מאוד לשחזור, קל לשלוט, ואינו דורשים ציוד מיוחד או פעמי החלמה ממושכות.

שיטה משופרת עבור אינטובציה מהירה של קנה הנשימה של עכברים

המטרה של מאמר זה היא לתאר שיטה מעודנת של צנרור העכבר המעבדה. השיטה אינה פולשנית, ולכן אידיאלית למחקרים הדורשים ניטור סדרתי של תפקודי הנשימה ו/או הערכת טיפולים בריאה.

וחזר אורוקנה אל בעכברים

תיאר הוא פרוטוקול לביצוע השתלת intratracheal של תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) באמצעות הזרקת intratracheal בטווח חולדות הלאומית. טכניקה זו היא אופציה מעשית מבחינה קלינית לאספקת תאי גזע ותרופות לתוך הריאות חולדה התינוק כדי להעריך את יעילותם.

בלתי מתאים של תאי גזע בתוך מונח של חולדות הנוטרסית

פרוטוקול זה מציג כיצד מיקום אופטימלי של עכבר והחדרת אוטוסקופ מבוסס מצלמה באופן טרנסאורלי מאפשר הדמיה של הגלוטיס, אינטובציה מהירה עם טראומה מינימלית לרקמות ואספקת נוזלים עקבית לריאות.

מתודולוגיה משופרת לאספקת נוזלים לריאת העכבר: אינטובציה באמצעות אוטוסקופ צרכני

במחקר זה, טכניקת החדרה אנדוטרכיאלית לא פולשנית הוכחה כמפתחת ALI בעכברים באמצעות לרינגוסקופ בסיסי להבטחת העברת LPS מדויקת לריאות. ה-LPS מושתל דרך צינור אנדוטרכיאלי באמצעות לרינגוסקופ. גודל הפגיעה בריאתיות מוערך במספר נקודות זמן.

מתן לא פולשני של ליפופוליסכריד באנדוטרכיה כדי לגרום לפגיעה ריאתית חריפה אצל מכרסמים

למד שיטה זעיר פולשנית להחדרת תרופות תוך-רחמיות במכרסמים יילודים לטיפול במחלות ריאה. הטכניקה משפרת את הדיוק והשרידות ומפחיתה כאב ודימום בניסויים.

שיטה זעיר פולשנית להחדרת תרופות תוך-רחמיות במכרסמים יילודים לטיפול במחלות ריאה

גלה סרטונים נוספים