יצירת מודלים ניסיוניים אקוטיים וכרוניים של ביטוי טיק מוטורי בחולדות

פרוטוקול זה מתאר מודל ניסיוני ייחודי של הפרעות טיק על ידי פריסת השיטה לגרימת טיקים מוטוריים בחולדה שמתנהגת בחופשיות, באופן חולף או כרוני. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא מתארת את המודל הזמין היחיד של ביטוי טיק, אשר נעשה שימוש נרחב ללמוד תסמונת טורט והפרעות טיק אחרות. הדגמה חזותית מבהירה את התהליך המורכב של הכנת מכשיר בהתאמה אישית וניתוח השתלה.

מי שידגימו את ההליך יהיו אסתר וינר, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלי, וקטיה בלובסקי, מנהלת המעבדה. כדי להתחיל, להכין צינורית שתל על ידי חיתוך 25 מד היפוטובה נירוסטה חוט פנימי דמה 0.013 אינץ'. הכנס חוט דמה זה לתוך הצינורית השתל עד שהוא מגיע לסוף לכופף את החוט עודף.

ואז לחתוך צינור מיקרובור פולימר גמיש 70 ס"מ כדי להכין את המזרק. הכן צינורית הזרקה על ידי חיתוך hypotube נירוסטה 30 מד עם כלי סיבובי. הכנס שלושה מילימטרים של צינור הזרקה זה לתוך צינור גמיש, ולהדביק את המפרק ביניהם כדי לקבל מזרק.

בעת ביצוע הניתוח, החלק את צינורית השתל על מחזיק הצינורית והורד אותו עד ליעד ההשתלה במוחו של החולדה. חבר את הצינורית המושתלת לגולגולת החולדה על ידי החלת מלט דנטלי. הכנס את הבובה המוכנה לתוך הצינורית שתל זה לכסות את כל השתלים על ידי החלת מלט שיניים על שאר אזור הגולגולת.

כדי לבצע את microinjection, לצרף את המזרק microsyringe זכוכית דיוק מלא bicuculline ולהגדיר את ההגדרות לקצב של 0.35 microliters לדקה ונפח כולל של 0.35 microliters. שים את החולדה בכלוב הניסוי. מוציאים את הבובה ומכניסים את המזרק לתוך הצינורית המושתלת עד הסוף.

הפעל את מכונת משאבת העירוי ועקוב אחר זמני החניכה והסיום של טיק באמצעות סטופר. לאחר דקה אחת של הזרקה, להסיר את המזרק ולאט לאט להחזיר את הבובה. הכן מדריך קנולה על ידי חיתוך 12 מילימטר 25 מד היפוטובה נירוסטה קנולה עירוי על ידי חיתוך 30 מד היפוטובה נירוסטה.

הכנס חוט בקוטר 0.005 אינץ' לתוך הצינורית לכופף אותו לצורת L במיקום המיועד. לאחר מכן, הכינו צינורות קטטר גמישים על ידי חיתוך צינור פוליאתילן PE10 באורך שמונה סנטימטרים. הסר את החוט הפנימי מן הצינורית, להדביק את מדריך הצינורית על חפיפה שלושה מילימטר ליד החלק הכפוף של הצינורית באמצעות דבק cyanoacrylate ומאיץ.

לאחר מכן הכנס את החלק האופקי של הצינורית לעירוי על צינורות הקטטר. הוצא את המכסה השקוף של מנחה זרימת המשאבה. לטבול את מתאם צינורות ב 70% אלכוהול ולחבר אותו לחלק הצינורית הקצרה של מנחה הזרימה עד שהוא נוגע באגן הלבן.

הכנס את צינורות הקטטר הגמישים למתאם הצינור והחזק את חלק הצינור הארוך שלו באמצעות מעמד קליפ תוך הדבקת כל החיבורים. לעטוף את המשאבה osmotic מיני עם נייר לנגב ולתקן אותו אנכית עם הפתח פונה כלפי מעלה באמצעות מעמד מחזיק קליפ. למלא את המשאבה עם aCSF באמצעות מזרק עם מחט קהה 27 מד, דואג למנוע כניסת אוויר.

למלא את החלק קנולה ארוכה של צינור עירוי עם aCSF באמצעות מזרק עם מחט קהה 27 מד. ותכניס אותו למשאבה. מניחים את המשאבה במזווה מלוחה לפחות ארבע עד שש שעות ב 37 מעלות צלזיוס.

צור כיס תת עורי בגבו של החולדה על ידי לחילופין פתיחה וסגירה של המוסטט מעוקר אלכוהול מתחת לעור דרך קו השכם האמצעי. מוציאים את המשאבה מאמבט המים ומניחים אותה על החולדות בחזרה מכוסות במגבון נייר. החלק את מדריך הצינור קנולה של צינור העירוי על מחזיק הצינורית.

החזיקו את המשאבה עם ההמוסטט והכניסו אותה בעדינות לכיס התת עורי. שתל את הצינורית בעירוי במטרה והדבק אותה לגולגולת באמצעות דבק ג'ל. לתקן את הצינורית עירוי, להבטיח כי הקטטר הוא קינקי כדי לאפשר תנועת צוואר לכסות את כל השתלים עם מלט שיניים.

כדי לבצע ניתוח החלפת משאבה, להתחיל להזריק bicuculline לתוך המשאבה באמצעות מזרק עם מחט קהה 27 מד. המשך להזריק bicuculline בעת הסרת המזרק כדי למנוע אוויר מלהיכנס. הכנס את מנחה הזרימה לתוך המשאבה והנח את המשאבה במזווה מלוחים למשך ארבע עד שש שעות לפחות באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס.

בצע חתך על העור מעל המשאבה המושתלת. לשטוף את הכיס עם טמפרטורת החדר aCSF ולייבש אותו עם רפידות גזה. נתק את המשאבה המלאה ב- ACSF ממנחה הזרימה באמצעות המוסטט והשליך אותה.

באופן דומה, נתק והשליך את מנחה הזרימה מהמשאבה המלאה בביקוקולין. מחברים בעדינות את המשאבה המלאה בביקוקולין למתווך הזרימה המושתל ומדביקים את קו החתך עם דבק רקמה. במודל החריף, טיקים מתחילים להופיע מספר דקות לאחר microinjection bicuculline ונמשך עשרות דקות ואז בסופו של דבר להירקב ולהפסיק.

במודל הכרוני, טיקים בדרך כלל מתחילים להופיע ביום הראשון לאחר השתלת משאבה מלאה bicuculline, אשר משתנה במהלך היום והוא נצפה בבירור במהלך מצב ערות שקטה. טיקים מוטוריים יש חתימה קינמטית סטריאוטיפית שניתן לזהות אותות תאוצה וג'ירוסקופ. באופן דומה, תזמון טיק ניתן גם להעריך באמצעות אות השדות המקומיים פוטנציאל לאורך מסלול הגרעינים קורטיקו-בזל בגלל המראה של קוצים חולפים LFP משרעת גדולה.

מודלים אלה אפשרו את חקר ביטוי טיק בעקבות התערבויות התנהגותיות, סביבתיות ופרמקולוגיות שונות לפרקי זמן ממושכים.