Name: בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: למדו לבודד תאי גזע מסרטן שד אנושי מדגימות תאים ורקמות בטוהר וחיות גבוהים. שיטה זו מאפשרת אפיון תפקודי בתרבית ובמודלים חיים לחקר מנגנוני הגידול והגרורה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לחברי המעבדה שלנו על הדיונים המועילים והתמיכה שלהם. המחקר שלנו על תאי גזע של סרטן השד ומיקרו-סביבה של הגידול ממומן על ידי מענקים ממכון המחקר של האגודה הקנדית לחקר הסרטן ומתוכנית סרטן השד של משרד ההגנה האמריקאי (מענק # BC160912). V.B. נתמך על ידי מלגת פוסט-דוקטורט מערבית (אוניברסיטת ווסטרן), וגם A.L.A. וגם V.B. נתמכים על ידי האגודה לסרטן השד של קנדה. C.L. נתמכת על ידי מלגת בוגר ונייר קנדה מממשלת קנדה.

למחברים אין מה לחשוף.

גרורות בסרטן השד ועמידות לטיפול הפכו לגורם מרכזי לתמותה בקרב נשים ברחבי העולם. קיומה של תת-אוכלוסייה של תאי גזע מסרטן השד (BCSCs) תורם לעלייה בגרורות 26,43,44,45,46 ולעמידות לטיפול21,47,48. לכן, המיקוד של טיפולים עתידיים צריך לשאוף למיגור BCSCs כדי להשיג תוצאות טיפול...

הבנת המנגנונים התאיים והמולקולריים של תאי גזע מסרטן השד האנושי (BCSCs) היא חיונית להתמודדות עם האתגרים המטופלים בטיפול בסרטן השד. הופעתו של מושג BCSC מתוארכת לתחילת המאהה-21, שם אוכלוסייה קטנה של תאי סרטן שד נמוכים מסוג CD44+CD24/Low נמצאה מסוגלת לייצר גידולים הטרוגניים בעכברים 1,2. לאחר מכן, נצפה כי תאי סרטן שד אנושיים עם פעילות אנזימטית גבוהה של אלדהיד דהידרוגנאז (ALDHגבוה) הציגו גם תכונות דומות דמויות תאי גזע3. BCSCs אלה מייצגים אוכלוסייה קטנה של תאים המסוגלים להתחדשות עצמית והתמיינות, ותורמים לאופי ההטרוגני של גידולים בתפזורת 1,2,3. ראיות מצטברות מצביעות על כך ששינויים במסלולי איתות משומרים אבולוציונית מניעים הישרדות ותחזוקה של BCSC 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 . בנוסף, המיקרו-סביבה החיצונית של התא הוכחה כממלאת תפקיד מרכזי בהכתבת פונקציות BCSC שונות15,16,17. מסלולים מולקולריים אלה והגורמים החיצוניים המווסתים את תפקוד BCSC תורמים להישנות סרטן השד, גרורות18 ופיתוח עמידות לטיפולים 19,20,21, כאשר הקיום השיורי של BCSCs לאחר הטיפול מציב אתגר גדול להישרדות הכוללת של חולות סרטן השד22,23 . לפיכך, הערכה פרה-קלינית של גורמים אלה חשובה מאוד לזיהוי טיפולים ממוקדי BCSC שיכולים להועיל להשגת תוצאות טיפול טובות יותר ולשיפור ההישרדות הכוללת בחולות סרטן השד.
מספר מודלים של קו תאי סרטן שד אנושיים במבחנה ומודלים של קסנוגרפט אנושי in vivo שימשו לאפיון BCSCs 24,25,26,27,28,29. היכולת של קווי תאים להתאכלס מחדש ברציפות לאחר כל מעבר עוקב הופכת אותם למערכת מודל אידיאלית לביצוע מחקרים מבוססי אומיקה ופרמקוגנומיה. עם זאת, קווי תאים לעתים קרובות אינם מצליחים לשחזר את ההטרוגניות שנצפתה בדגימות של מטופלים. לפיכך, חשוב להשלים את נתוני קו התא עם דגימות שמקורן בחולה. בידוד של BCSCs בצורתם הטהורה ביותר חשוב כדי לאפשר אפיון מפורט של BCSCs. השגת טוהר זה תלויה בבחירת סמנים פנוטיפיים ספציפיים ל- BCSCs. נכון לעכשיו, הפנוטיפ של תאי CD44+CD24הגבוהשל ALDH משמש בדרך כלל להבחנה ולבידוד של BCSCs אנושיים מאוכלוסיות תאי סרטן שד בתפזורת באמצעות מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנציה (FACS) לטוהר מרבי1, 3,26. יתר על כן, ניתן להעריך את התכונות של BCSCs מבודדים כגון התחדשות עצמית, התפשטות והתמיינות באמצעות טכניקות in vitro ו- in vivo.
לדוגמה, ניתן להשתמש במבחנים ליצירת מושבות חוץ גופיות כדי להעריך את יכולתו של תא בודד לחדש את עצמו וליצור מושבה של 50 תאים או יותר בנוכחות תנאי טיפול שונים30. ניתן להשתמש במבחני ממוספרה גם כדי להעריך את פוטנציאל ההתחדשות העצמית של תאי סרטן השד בתנאים שאינם תלויים בעוגן. בדיקה זו מודדת את יכולתם של תאים בודדים ליצור ולגדול ככדורים (תערובת של BCSCs ושאינם BCSCs) בכל מעבר עוקב בתנאי תרבית ללא סרוםללא דבק 31. בנוסף, ניתן להשתמש במודלים של תרביות תלת-ממדיות (3D) כדי להעריך את תפקוד ה-BCSC, כולל אינטראקציות תא-תא ומטריצת תאים, אשר מסכמות מקרוב את המיקרו-סביבה in vivo ומאפשרות לחקור את הפעילות של טיפולים פוטנציאליים ממוקדי BCSC32. למרות היישומים המגוונים של מודלים במבחנה, קשה למדל את המורכבות של תנאי in vivo באמצעות מבחני in vitro בלבד. ניתן להתגבר על אתגר זה על ידי שימוש במודלים של xenograft עכבר כדי להעריך את התנהגות BCSC in vivo. בפרט, מודלים אלה משמשים כמערכת אידיאלית להערכת גרורות של סרטן השד33, חקירת אינטראקציות עם המיקרו-סביבה במהלך התקדמות המחלה 34, הדמיה in vivo 35, ולניבוי רעילות ויעילות ספציפיות למטופל של חומרים אנטי-סרטניים34.
פרוטוקול זה מספק תיאור מפורט לבידוד של CD44+CD24- BCSCsגבוהיםשל ALDH אנושי בטוהר מרבי מאוכלוסיות גדולות של תאי סרטן שד הטרוגניים. אנו מספקים גם תיאור מפורט של שלוש טכניקות in vitro (בדיקת יצירת מושבה, בדיקת ממוספרה ומודל תרבית תלת-ממדית) ובדיקת קסנוגרפט גידול in vivo שניתן להשתמש בה כדי להעריך פונקציות שונות של BCSCs. שיטות אלה יתאימו לשימוש על ידי חוקרים המעוניינים לבודד ולאפיין BCSCs מקווי תאי סרטן שד אנושיים או מתאי סרטן שד שמקורם בחולה ראשוני ורקמת הגידול לצורך הבנת הביולוגיה של BCSC ו/או חקירת טיפולים חדשניים המכוונים ל-BCSC.

<table><tbody><tr><td>7-Aminoactinomycin D (7AAD)</td><td>BD</td><td>51-68981E</td><td>מוצע: 0.25 ומיקרו; g/1x106 תאים</td></tr><tr><td>מצע אצטון</td><td>פישר</td><td>A18-1</td><td></td></tr><tr><td>אלדהיד דהידרוגנאז (ALDH)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>1700</td><td>נמכר באופן מסחרי כחלק מערכת הבדיקה ALDEFLOUR; עקוב אחר הוראות היצרן להכנת מצע ALDH</td></tr><tr><td>תמצית קרום הבסיס (BME)</td> <td>Corning</td><td>354234</td><td>נמכר תחת השם המסחרי Matrigel</td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים: 6 בארות</td><td>קורנינג</td><td>877218</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים: 60 מ"מ</td><td>קורנינג</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית תאים: 96 בארות חיבור נמוך במיוחד</td><td>קורנינג</td><td>3474</td><td></td></tr><tr><td>מסננת תאים: 40 מיקרון</td><td>BD</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>טכנולוגיות תאי גזע קולגן</td><td></td><td>7001</td><td>הכן דילול 1:30 של 3 מ"ג/מ"ל קולגן ב-PBS</td></tr><tr><td>קולגנאז</td><td>סיגמא</td><td>11088807001</td><td>1x</td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים: 50 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>05-539-7</td><td></td></tr><tr><td>סגול קריסטל</td><td>סיגמא</td><td>C6158</td><td>השתמש בתמיסת סגול קריסטל 0.05% במים לצביעה</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7913</td><td>5U/mL</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, עם L-גלוטמין ו-15 מ"מ HEPES</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5052</td><td>0.1 מ"ג/מ"ל ריכוז סופי</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Avantor Seradigm Lifescience</td><td>97068-085</td><td><חזק>&nbsp; </חזק</td></tr><tr><td>>צינורות זרימה: 5 מ"ל</td><td>BD</td><td>352063</td><td>פוליפרופילן צינורות תחתונים עגולים</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>פישר</td><td>84124</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD24 נוגדן</td><td>BD</td><td>561646</td><td>R-phycoerythrin וצבע ציאנין מצומד שיבוט: ML5</td></tr><tr><td>עכבר אנטי אנושי CD44 נוגדן</td><td>BD</td><td>555479</td><td>R-phycoerythrin מצומד, שיבוט: G44-26</td></tr><tr><td>N, N-diethylaminobenzaldehyde (DEAB)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>1700</td><td>נמכר באופן מסחרי כחלק מערכת הבדיקה ALDEFLOUR; עקוב אחר הוראות היצרן הכנת DEAB</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wisent Inc</td><td>311-425-CL</td><td>1x, ללא סידן ומגנזיום</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mammosphere Media הרכב</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F2006</td><td>10 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioshop</td><td>ALB003</td><td>04%</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, עם L-גלוטמין ו-15 מ"מ hepes</td></tr><tr><td>egf</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>20 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>סיגמא</td><td>16634</td><td>5 ומיקרו; g/mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3D Organoid Media Composition</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A8301</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, עם L-גלוטמין ו-15 מ"מ hepes</td></tr><tr><td>egf</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>5 ng/mL</td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>20 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>FGF7</td><td>Peprotech</td><td>100-19</td><td>5 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>1x</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td>10 מ"מ</td></tr><tr><td>N-אצטילציסטאין</td><td>סיגמא</td><td>A9165</td><td>1.25 מ"מ</td></tr><tr><td>נוירגולין ובטא; 1</td><td>פפרוטק</td><td>100-03</td><td>5 ננומטר</td></tr><tr><td>ניקוטינאמיד</td><td>סיגמא</td><td>N0636</td><td>5 מ"מ</td></tr><tr><td>נוגין</td><td>פפרוטק</td><td>120-10C</td><td>100 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>R-spondin3</td><td>R& D</td><td>3500</td><td>250 ננוגרם/מ"ל</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma</td><td>S7067</td><td>500 ננומטר</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td>5 ומיקרו; מ</td></tr></tbody></table>

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

תאי גזע של סרטן השד (BCSCs) הם תאים סרטניים בעלי מאפיינים תורשתיים או נרכשים דמויי תאי גזע. למרות התדירות הנמוכה שלהם, הם תורמים עיקריים להתחלת סרטן השד, הישנות, גרורות ועמידות לטיפול. חובה להבין את הביולוגיה של תאי גזע מסרטן השד על מנת לזהות מטרות טיפוליות חדשניות לטיפול בסרטן השד. תאי גזע של סרטן השד מבודדים ומאופיינים על סמך ביטוי של סמני פני שטח ייחודיים של תאים כגון CD44, CD24 ופעילות אנזימטית של אלדהיד דהידרוגנאז (ALDH). תאי CD44+CD24גבוהיםאלה של ALDH מהווים את אוכלוסיית ה-BCSC וניתן לבודד אותם באמצעות מיון תאים המופעל על-ידי פלואורסצנציה (FACS) לצורך מחקרים פונקציונליים במורד הזרם. בהתאם לשאלה המדעית, ניתן להשתמש בשיטות in vitro ו- in vivo שונות כדי להעריך את המאפיינים הפונקציונליים של BCSCs. כאן, אנו מספקים פרוטוקול ניסיוני מפורט לבידוד BCSCs אנושיים הן מאוכלוסיות הטרוגניות של תאי סרטן השד והן מרקמת גידול ראשונית המתקבלת מחולות סרטן השד. בנוסף, אנו מדגישים את הבדיקות הפונקציונליות in vitro ו- in vivo במורד הזרם, כולל מבחנים ליצירת מושבה, מבחני ממוספרה, מודלים של תרביות תלת-ממדיות ומבחני xenograft של גידולים שניתן להשתמש בהם כדי להעריך את תפקוד BCSC.

הפרוטוקול המתואר מאפשר בידוד של BCSCs אנושיים מאוכלוסייה הטרוגנית של תאי סרטן השד, בין אם מקווי תאים או מרקמת גידול מנותקת. עבור כל קו תאים נתון או דגימת רקמה, חיוני ליצור תרחיף חד-תאי אחיד כדי לבודד BCSCs בטוהר מרבי, שכן זיהום אוכלוסיות שאינן BCSC עלול לגרום לתגובות תאיות משתנות, במיוחד אם מטרת המחקר היא להעריך את היעילות של חומרים טיפוליים המכוונים ל-BCSCs. יישום אסטרטגיית מיון מחמירה ימזער את נוכחותם של מזהמים שאינם BCSCs ויביא ליכולת לאסוף את חלקם היחסי של תאי סרטן השד עם מאפיינים דמויי תאי גזע המציגים פנוטיפ תאי המב...

פרוטוקול ניסיוני זה מתאר את הבידוד של BCSCs מדגימות תאים ורקמות של סרטן השד, כמו גם את מבחני in vitro ו - in vivo שניתן להשתמש בהם כדי להעריך את הפנוטיפ והתפקוד של BCSC.

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

טכניקה זו תאפשר לחוקרים לבודד תאי גזע של סרטן השד בטוהר ובכדאיות מקסימליים לביצוע מבחני אפיון תפקודי הן במבחנה והן ב-vivo. תאי גזע מבודדים של סרטן השד יכולים לשמש גם כדי לסייע בהבהרת האירועים המולקולריים השולטים בגידול ובגרורות, ולתכנן אסטרטגיות טיפוליות להתמקדות בתאים אלה. עם שינויים קלים ספציפיים לסוגי התאים והרקמות המעניינים, ניתן ליישם שיטה זו גם במערכות אחרות.כדי ליצור תרחיף תא בודד מתרבית תאים, יש לשטוף תרבית תאי סרטן שד קונפלונטית של 80% עם PBS ולטפל בתאים בתמיסת דיסוציאציה תאית מתאימה למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר שהתאים התנתקו, הוסף חמישה מיליליטר של מדיום תרבית כדי לנטרל את תמיסת הדיסוציאציה של התאים והעביר את התאים לצינור חרוטי של 50 מיליליטר לצנטריפוגה. השעו מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר PBS לספירה.לאחר הספירה, צנטריפוגה שוב את התאים, ואז השעו מחדש את התאים בבת אחת 10 עד שישה תאים למיליליטר של מאגר סובסטרט ALDH. כדי ליצור תרחיף תא בודד מדגימת רקמה, השתמש בלהבים כירורגיים בטכניקה צולבת כדי לטחון את רקמת הגידול לחתיכות בגודל מילימטר אחד בערך. מניחים את החלקים בצינור חרוטי של 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מאגר דיסוציאציה.אטמו את הצינור עם פרפילם למשך 40 דקות דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בשייקר ושקעו את חתיכות הרקמה המעוכלות על ידי צנטריפוגה. השעו מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר טריפסין באמצעות פיפטה של חמישה מיליליטר ודגרו על הרקמה באמבט מים של 37 מעלות למשך חמש דקות. בסוף הדגירה, פיפטה נמרצת של הרקמה מספר פעמים כדי לשחרר תאים בודדים ולהוסיף מספיק מדיום DMEM/F-12 כדי להביא את הנפח הכולל בצינור ל-25 מיליליטר.אסוף את התאים על ידי צנטריפוגה, השהה מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של דנאז עקור, ודגר במשך חמש דקות באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס. בתום הדגירה, הביאו את הנפח הכולל ל -10 מיליליטר בעזרת PBS. מערבבים את התאים על ידי פיפטינג ומעבירים אותם דרך מסננת תאים של 40 מיקרון לתוך צינור של 50 מיליליטר.לאחר צנטריפוגה, השעו מחדש את התאים בחמישה מיליליטר PBS טרי לספירה. כדי לבצע בדיקה ליצירת מושבה, לאחר המיון, יש להשהות מחדש את התאים בתווך שלם ולהוסיף את המספר המתאים של תאי גזע של סרטן השד לכל אחד משלושת הצינורות המכילים שני מיליליטר מדיום לכל צינור, המסומן אחת כפול 10 לשנייה, פעמיים כפול 10 לשנייה, או חמש פעמים 10 לתאים השניים. פיפטה למעלה ולמטה חמש פעמים כדי לערבב היטב את תרחיף התאים וצלחת התאים לבארות בודדות של צלחת שש בארות.סובב בעדינות את הצלחת לקבלת התפלגויות תאים אחידות והנח את הצלחת בחממת תרבית התאים עד להופעת מושבות. בתום הדגירה יש לשטוף את התאים במיליליטר PBS אחד לבאר ולהכתים את התאים ב -500 מיקרוליטר של תמיסת סגול קריסטל 0.05% לבאר למשך 30 שניות. בתום הדגירה יש לשטוף את הבארות פעמיים בשני מיליליטר מים לבאר כדי להסיר את עודפי הצבע, ולספור ולרשום את המספר הכולל של מושבות לבאר במיקרוסקופ אור בהגדלה של פי 4 או 10.כדי לבצע בדיקת ממוספרה, לאחר המיון, יש להשעות מחדש את התאים במדיום ממוספירה שלם ולצלחת בצפיפות ישיבה של חמש פעמים 10 מהתאים השניים לשטח סנטימטר רבוע לבאר בצלחת תרבית תאים צמודה נמוכה במיוחד של 96 בארות. לפני ספירת מספר הממוספרות לבאר במיקרוסקופ אור, הנח את הצלחת בחממת תרבית התאים למשך חמישה עד 10 ימים. כדי להגדיר מודל תרבית תלת מימדי, הוסף בזהירות 50 מיקרוליטר של תמצית קרום מרתף לכל באר של צלחת 96 באר ללא בועות והנח את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס למשך שעה כדי לאפשר לתמיסה להתפלמר.הוסף 100 מיקרוליטר PBS לאחר 10 דקות כדי למנוע ייבוש של שכבת הג'ל. בתום הדגירה, השעו את התאים הממוינים לחמישה עד 50 פעמים 10 לתאים השלישיים לכל 200 מיקרוליטר של ריכוז מדיום תרבית תלת מימד והחליפו את ה-PBS בכל באר של צלחת 96 בארות ב-200 מיקרוליטר של תאים המכילים מדיה. לאחר מכן הנח את הצלחת בחממת תרבית התאים למשך 10 עד 14 יום לפני הערכת התרביות להיווצרות אורגנואידים.תאי סרטן שד אנושיים המציגים פעילות אנזימטית מוגברת של ALDH מבטאים רמות גבוהות של CD44 ורמות נמוכות עד שליליות של ביטוי CD24, וניתן לסווג אותם כתאי גזע של סרטן השד. שיעור תאי הגזע של סרטן השד באוכלוסייה הגדולה יכול להשתנות בין שורות תאים או חולים ולעתים קרובות תלוי בשלב המחלה, כאשר סרטן שד אגרסיבי יותר מציג בדרך כלל שיעור גבוה יותר של תאי גזע של סרטן השד. ניתן להעריך את יכולתו של תא סרטן שד בודד להתחדש בעצמו ולייצר מושבות של 50 תאים על ידי מבחני יצירת מושבה.ניתן להעריך את יכולתם של תאי גזע של סרטן השד להתחדש בעצמם בתנאי ניסוי בלתי תלויים בעיגון על ידי מבחני ממוספרה. תרבית תאי סרטן השד ותמצית קרום הבסיס מאפשרת לתאי גזע של סרטן השד ליצור מבנים תלת מימדיים המסכמים בתנאי in vivo. בנוסף, ניתן להשתמש במודלים של קסנוגרפט עכברים in vivo כדי להבין את ההבדלים בגדילה, חידוש עצמי, התמיינות ו/או יכולת התחלת הגידול של תאי גזע של סרטן השד בהשוואה לתאי גזע שאינם סרטן השד או אוכלוסיות תאים בתפזורת.לאחר הליך זה, ניתן להשתמש בתאי הגזע המבודדים של סרטן השד במחקרים טרנסקריפטומיים, קינומיים ומטבולומיים. שיטה זו מספקת לחוקרים הזדמנות לחקור את תפקידם של תאי גזע של סרטן השד בהתחלת גידול, גרורות, הישנות ועמידות לטיפול.

isolation-functional-assessment-human-breast-cancer-stem-cells-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטן בתאי גזע (CSCs) זוהו במספר מחלות ממאירות. בפרוטוקול זה אנו מתארים שיטת תזרים cytometric ניצול אלדהיד דהידרוגנז הפעילות CD44 ו CD24 ביטוי לבודד CSCs מ xenografts אדנוקרצינומה של הלבלב האנושי. תאים אלה קיימא לאחר מכן ניתן להשתמש במחקרים פונקציונלי אנליטית.

בידוד של בתאי גזע xenografts סרטן הלבלב האנושי

זיהוי של תאי מוח סרטני ייזום (BTICs), תאים הנדירים בטווח של תכונות הטרוגניות גידול בעלי תאי גזע, מספק תובנה חדשות על היווצרות גידול במוח האנושית. יש לנו מעודנים תנאי התרבות ספציפיים להעשרה לBTICs, ואנו משתמשים באופן שגרתי cytometry זרימה להעשיר אוכלוסיות אלה עוד יותר. מבחנים עצמי חידוש וניתוח תמליל של התא הבודד RT-PCR לאחר מכן ניתן לבצע בתאים מבודדים.

עיבוד של רקמת גידול במוח העיקרית למבחנים בתאי גזע וזרימת מיון

הבידוד של תאי גזע סרטני (CSCs) ישירות מרקמות אנושיות הוא הנדרש לאפיון הביולוגי שלהם. כתב יד זה מתאר מתודולוגיה לבידודה של CSCs ערמונית מרקמות אנושיות, תוך מתן טיפים על פתרון בעיות בצעדים קשים גם.

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

מבחני מבחנה משמשים בדרך כלל לזיהוי תאי גזע סרטניים. כאן אנו משווים מבחני כדורים בודדים עם רב-תאים מבוססי תאים. הבדיקות המבוססות על תאים בודדים או תוספי מתיל צלולוז נותנים תוצאות מדויקות יותר בעוד שבדיקות מבוססות תאים מרובות תאים המבוצעות במדיום נוזלי יכולות להיות מושפעות מאוד מצפיפות התאים.

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים

בדיקות ממוספירה צפה יכולות לחקור את תת-הקבוצה של תאי סרטן שד דמויי גזע ששורדים בתנאי השעיה ומראים גידול משופר כאשר הם מושתלים בעכברים.  פרוטוקול זה מספק מדד נוח במבחנה של יכולת יצירת כדור, פרוקסי לגידול in vivo, תוך הקלה על ניתוח נוף השעתוק הקשור לגבעול.

Assay גיבוש Mammosphere משד אדם סרטן רקמות וקווים סלולריים

הנוכחות של תאי גזע סרטניים (CSCS) ב סרקומות עצם נקשר לאחרונה בפתוגנזה שלהם. במאמר זה, אנו מציגים את הבידוד של CSCS מתרבויות תא ראשוניים המתקבלות ביופסיות אדם של אוסטאוסרקומה קונבנציונלי (OS) באמצעות היכולת של CSCS לגדול בתנאי nonadherent.

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

הבנת תפקידם של תאים דמויי גזע סרטניים בהישנות גידול ועמידות לטיפולים הפכה לנושא בעל עניין רב בעשור האחרון. מאמר זה מתאר את הבידוד והאפיון של תת-אוכלוסייה של תאים דמויי גזע סרטניים מקווי תאי קרצינומה קשקשית בראש ובצוואר (HNSCC).

בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש Cell Carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר

הליך זה ידגים כיצד סינתזנו ואפיינו את פעילות תאי הגזע האנטי-NFκB והאנטי-סרטניים של פרו-תרופה אספירין-פומרט.

סינתזה ואפיון של prodrug אספירין-fumarate המעכבת תאי גזע סרטניים פעילות השד NFκB

מטרת מתודולוגיה זו היא לזהות את תאי גזע הסרטן (csc) בקווי התאים של סרטן ודגימות הגידול האנושי הראשוני עם הפרוטוקול ליצירת כדור, בצורה איתנה, באמצעות בחני פונקציונלי ואפיון פנוטימית עם זרימה cy, try ומערבי מחוק.

קבלת סרטן גזע כדורים מגינקולוגית סרטן השד גידולים

שימוש בתאי אפיתל הערמונית העיקרי האנושי, אנו מדווחים על שיטה ביוארינקר הרומן החופשי של אפיון פונקציונלי של תאים גזע דמוי על ידי שמירת תווית מבוסס ספרואיד מבוססי. פרוטוקול צעד אחר צעד מתואר עבור BrdU, CFSE, או הרחוק האדום תיוג תא 2D; היווצרות ספרואיד תלת מימדי; זיהוי תאים מתמך בתוויות באמצעות כימיה חיסונית מדומה; ובידוד על ידי FACS.

בידוד של תאים כמו גזע מתרבויות תלת ממדיות ספרואיד

פרוטוקול זה מתאר את השיטה להקמת מבחן היווצרות הממוספירה לחקר גזע סרטן שנגרם על ידי מעכב אפופטוזיס 5 (Api5) בתאי אפיתל שד שאינם גידוליים. ליזטים שנאספו מממוספירות דור ראשוני מנותחים לסמנים שונים של גבעול כדי להעריך את השראת תכונות דמויות תאי גזע.

בדיקת ממוספירה חושפת גבעול מושרה על ידי API 5 בקווי תאים אפיתליים של השד שאינם גידוליים

למדו לבודד תאי גזע מסרטן שד אנושי מדגימות תאים ורקמות בטוהר וחיות גבוהים. שיטה זו מאפשרת אפיון תפקודי בתרבית ובמודלים חיים לחקר מנגנוני הגידול והגרורה.

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

גלה סרטונים נוספים