Name: מדידת פעילות אנטי פטרייתית נדיפה ולא נדיפה של מוצרי ביו-בקרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-12-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: למד שיטת העברת פלאג לבדיקת פעילות אנטי פטרייתית של תרכובות נדיפות ולא נדיפה בשלבי גידול שונים של פטריות. השיטה מאפשרת השוואה ישירה של יעילות חומרי בקרה ביולוגית ממקור צמחי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה לפרנק ייטס על עצתו היקרה. עבודה זו נתמכה על ידי Sup'Biotech.

1. הכנת אינקולה
<ol><li>לפני הניסוי, שכב 5 μL של טריכודרמה spp. נבגי SBT10-2018 המאוחסנים ב-4 °C (60 °F) על מדיום אגר דקסטרוז תפוחי אדמה (PDA) ודגדוג במשך 4 ימים ב 30 מעלות צלזיוס עם חשיפה רגילה לאור כדי לקדם היווצרות conidia42 (איור 1, פאנל A). הערה: טריכודרמה spp. SBT10-2018 מבודד מעץ ומשמש כמודל במחקר זה לצמיחה מהירה וקלות של התאוששות נבגים. זן זה נשמר על ידי המעבדה שלנו.</li>
	<li>שחזור קונידיה(איור 1, פאנל A)<ol>
<li>שכב 3 מ"ל של 0.05% Tween-20 על מיסליום Trichoderma.</li>
		<li>השתמש מגרפה כדי לשחרר conidia מ conidiophores; להימנע מלחיצה על mycelium כדי למנוע hyphae מלהיות נקרע משם.</li>
		<li>לשחזר את הפתרון במהירות עם micropipette כדי למנוע את זה נספג על ידי מדיום אגר ולהעביר לתוך צינור 15 מ"ל.</li>
		<li>לספור את המספר הכולל של נבגים באמצעות hemocytometer ולהכין פתרון המכיל 3 x 106 נבגים / מ"ל. הערה: שלב זה חייב להתבצע בקפידה כדי למנוע חילוץ של hyphae. הכנת הנבג נבדקת לאחר מכן תחת מיקרוסקופ. בסופו של דבר, עבור זנים המציגים mycelium אווירי מאוד רך, צעד של סינון באמצעות מסנן מסננת μM 40 ניתן להוסיף כדי לחסל שבר mycelium שיורית.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. הכנת צלחות פטרייתיות(איור 1, פאנל ב')
<ol><li>הפקדה 100 μL של 3 x 106 נבגים / מ"ל עם micropipette על צלחת פטרי בקוטר 9 ס"מ המכילה מדיום מחשב כף יד כדי להשיג 4,800 נבגים / ס"מ2 המתאים 925 נבגים / 5 מ"מ קוטר אגר תקע.</li>
	<li>מוסיפים 10 גרם של חרוזי זכוכית בקוטר 2 מ"מ עם מרית סטרילית ומבצעים תנועות קדימה ואחורה במקביל ובניצב לזרוע המפעיל כדי להפיץ באופן שווה את הנבגים על פני השטח של האגר.</li>
	<li>סובב את הצלחת ב- 90° וחזור על התנועות המסתובבות (כמו בסעיף 2.2); חזור על שלבים אלה עד שהצלחת תסתובב לחלוטין.</li>
	<li>השתמש בצלחת מיד כדי להגדיר ניסויים הדורשים נבגים או דגירה הצלחות ב 30 מעלות צלזיוס עבור 17 שעות או 24 שעות כאשר hyphae מוקדם או mycelium, בהתאמה, יש צורך. הערה: כדי להשוות פעילות אנטי פטרייתית שנמדדה לאחר העברת תקע mycelium והעברת דיסק mycelium, להשתמש פינצטה סטרילית ומניחים דיסקים תאית סטרילית 5 מ"מ באופן אקראי על פני השטח של צלחת אגר לאחר התפשטות נבג.</li>
</ol>3. הכנת תרכובות נגד פטריות
<ol><li>הכנת מוצר ממקור צמחי: הכנת אבקת שום<ol>
<li>מקלפים את שיני השום הטרי וחותכים את הציפורן לפרוסות ברוחב 2-3 מ"מ באמצעות להב אזמל.</li>
		<li>מייבשים את הפרוסות ליומיים ב-40 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>טוחנים את הפרוסות במשך 3 x 15 שניות באמצעות טחנת סכין כדי להשיג אבקה דקה.</li>
		<li>לאחסן את אבקת השום ב 4 מעלות צלזיוס ב 50 צינורות מ"ל לפני השימוש. הערה: כמו שום אינו autoclaved (כדי למנוע השפלה של תרכובות אנטי פטרייתיות רגישות לטמפרטורה) לנקות את המטחנה, אזמל, ואת מייבש האוויר עם 70% אתנול לפני השימוש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת שמן אתרי<ol>
<li>הכן 0.5%, 1%, 2.5%, 5% ו 20% תימוס וולגריס פתרונות שמן אתרי ב 0.5% Tween-80.</li>
		<li>מערבבים היטב ליצירת אמולסיה לפני הוספתה למדיום מחשב כף יד (ראה סעיף 4.2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת כרבנדזים<ol>
<li>לשקול carbendazim להכין פתרון אתנול 200 מ"ג / ליטר (carbendazim הוא מסיס במים).</li>
		<li>אחסן את הפתרון בטמפרטורת החדר לפני הוספתו למדיית מחשב כף יד (ראה סעיף 4.2). התראה: קרבנדזים מהווה סכנה בריאותית וסביבתית. יש ללבוש כפפות ומסכה בעת הטיפול במוצר זה. אחסן אותו בחלל מאוורר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. מבחני עיכוב מגע
<ol><li>הכנת צלחות אגר המכילות אבקת שום<ol>
<li>הכן ו autoclave מחשב כף יד בינוני.</li>
		<li>לשקול את כמות אבקת השום הרצויה לתוך צינור 50 מ"ל באמצעות מרית סטרילית, כדי לקבל ריכוזים הנעים בדרך כלל בין 0.25 מ"ג / מ"ל ל 16 מ"ג / מ"ל.</li>
		<li>הוסף 10 מ"ל של מחשב כף יד לאחר שבדק את הטמפרטורה של המדיום בחלק הפנימי של פרק כף היד. הטמפרטורה חייבת להיות נמוכה ככל האפשר כדי למנוע השפלה של מולקולות רגישות. באופן אידיאלי, טמפרטורה זו צריכה להיות 45 °C (69 °F).</li>
		<li>הומוגנית בזהירות על ידי הפיכת הצינור במהופך כדי להפיץ את האבקה באופן שווה למדיום מחשב כף היד. יוצקים במהירות 10 מ"ל לצלחת פטרי בקוטר 5 ס"מ(איור 1,פאנל C).</li>
		<li>עם צלחת פטרי להציב בטמפרטורת החדר, לחכות עד אגר מתגבש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת צלחות אגר המכילות שמן אתרי או קרבנדזים<ol>
<li>הכנס 10 מ"ל של מחשב כף יד לתוך צינור 50 מ"ל. בדוק את הטמפרטורה באשר לסעיף 4.1.3.</li>
		<li>הוסף 100 μL של הפתרונות השונים של שמן אתרי Thymus vulgaris ב PDA כדי להשיג 0.005%, 0.01%, 0.025%, 0.05% ו 0.2% פתרונות (ראה סעיף 3.2.1).</li>
		<li>הוסף את הנפח הנדרש של carbendazim מן הפתרון 200 מ"ג / ליטר כדי להשיג פתרונות החל 0.0625-2 מ"ג / ליטר (ראה סעיף 3.3.1).</li>
		<li>להומוגניזציה בזהירות על ידי הפיכת הצינור במהופך, יוצקים במהירות 10 מ"ל לצלחת פטרי בקוטר 5 ס"מ(איור 1,פאנל C).</li>
		<li>עם צלחת פטרי להציב בטמפרטורת החדר, לחכות עד אגר מתגבש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מבחני עיכוב מגע (איור 1)<ol>
<li>עם צינור נירוסטה סטרילי בקוטר 5 מ"מ, התווה עיגול במרכז צלחות פטרי המכילות מחשב כף יד או מחשב כף יד כולל תרכובות נגד פטריות. להיפטר גליל אגר באמצעות קיסם סטרילי (פאנל C).</li>
		<li>עם צינור נירוסטה סטרילי בקוטר 5 מ"מ, עיגולי עלילה באופן אקראי לתוך הצלחות הפטריות מחלק 2. עלילה בין 15-20 עיגולים לצלחת (לוח B).</li>
		<li>בזהירות למשוך את אגר צילינדרים מכוסה נבגים, hyphae מוקדם, או mycelium עם קיסם סטרילי ומניחים את התקעים לחלל הריק של צלחות פטרי המכילות מחשב כף יד או מחשב כף יד כולל תרכובות נגד פטריות (פאנל C).</li>
		<li>דגירה הצלחות המכילות נבגים עבור 48 שעות ב 30 מעלות צלזיוס, 31 שעות עבור הצלחות המכילות hyphae מוקדם, 24 שעות עבור הצלחות מכוסה mycelium (פאנל C).</li>
		<li>למדוד את קוטר הצמיחה הרדיאלית ולחשב את אחוז עיכוב הצמיחה הפטרייתית על השליטה באמצעות הנוסחה (פאנל D) % עיכוב גדילה פטרייתית = (C - מיזוג אוויר)* 100 כאשר C הוא קוטר הצמיחה הרדיאלית במדיום מחשב כף יד וקוטר גידול רדיאלי במדיום מחשב כף יד המכיל את תרכובות נגד פטריות. הערה: כדי להשוות פעילות אנטי פטרייתית נמדדה לאחר העברת תקע mycelium והעברת דיסק mycelium, באמצעות פינצטה סטרילית, להעביר דיסק אחד בקוטר 5 מ"מ שהופקדו בעבר על פני השטח של הצלחות הפטריות (סעיף 2 הערה) במרכז מנות פטרי המכילות מחשב כף יד או מחשב כף יד המכיל תרכובות אנטי פטרייתיות ולהמשיך בדיוק כמו להעברת תקע אגר</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. מבחני עיכוב פאזה אדים
<ol><li>הכנת צלחות אגר המכילות אבקת שום<ol>
<li>המשך כמו בסעיף 3.1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת צלחת אגר המכילה שמן אתרי או קרבנדזים<ol>
<li>המשך כמו בסעיף 3.2 ו- 3.3.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת צלחות פטרייתיות<ol>
<li>המשך כמו בסעיף 2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בדיקת עיכוב נגד פטריות בשלב אדים (איור 1)<ol>
<li>יוצקים 10 מ"ל של מחשב כף יד בינוני לתוך המכסה של 5 ס"מ קוטר פטרי מנות המכילות גם 10 מ"ל מחשב כף יד בינוני או 10 מ"ל של מחשב כף יד בינוני המכיל תרכובות נגד פטריות לתחתית הכלים. המתן עד להתמצקות מלאה של האגר בטמפרטורת החדר (לוח C).</li>
		<li>השתמש צינור צנטריפוגלי 50 מ"ל ככלי כיול כדי לקבל מעגל של מחשב כף יד במרכז המכסה; להסיר את מחשב כף יד סביב העיגול עם מרית סטרילית (לוח C).</li>
		<li>התווה עיגול במרכז מדיום מחשב כף יד הממוקם במכסה עם צינור נירוסטה סטרילי בקוטר 5 מ"מ. השלך את צילינדר האגר עם קיסם סטרילי (לוח C).</li>
		<li>טופס תקעים עם צינור נירוסטה סטרילי בקוטר 5 מ"מ באופן אקראי לתוך לוחות פטרייתי כמו בסעיף 4.3.2 (פאנל B).</li>
		<li>באמצעות קיסם סטרילי, להעביר בזהירות את התקעים מכוסה או עם נבגים, hyphae מוקדם, או mycelium מצלחות פטרייתי לתוך העפעפיים של צלחות assay (פאנל C).</li>
		<li>דגירה ב 30 °C (60 °F) כמו בסעיף 4.3.4 (פאנל C).</li>
		<li>למדוד את קוטר הצמיחה הרדיאלית ולחשב את אחוז עיכוב הצמיחה הפטרייתית באמצעות הנוסחה בסעיף 4.3.5 (פאנל D).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>FAO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+food+losses+and+food+waste+-+Extent%2C+causes+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22FAO%22%5BJournal%5D)">Global food losses and food waste - Extent, causes and prevention.</a> FAO. , Rome. (2011).</li>
<li>da Cruz Cabral, L., Fernández Pinto, V., Patriarca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+plant+compounds+to+control+fungal+spoilage+and+mycotoxin+production+in+foods%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Food+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Application of plant compounds to control fungal spoilage and mycotoxin production in foods.</a> International Journal of Food Microbiology. 166 (1), 1-14 (2013).</li>
<li>Romanazzi, G., Smilanick, J. L., Feliziani, E., Droby, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postharvest+biology+and+technology+integrated+management+of+postharvest+gray+mold+on+fruit+crops%5BTitle%5D)+AND+%22Postharvest+Biology+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Postharvest biology and technology integrated management of postharvest gray mold on fruit crops.</a> Postharvest Biology and Technology. 113, (2016).</li>
<li>Morton, V., Staub, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Short+History+of+Fungicides%5BTitle%5D)+AND+%22APSnet+Feature+Articles%22%5BJournal%5D)">A Short History of Fungicides.</a> APSnet Feature Articles. (1755), 1-12 (2008).</li>
<li>Brandhorst, T. T., Klein, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncertainty+surrounding+the+mechanism+and+safety+of+the+post-+harvest+fungicide+Fludioxonil%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Uncertainty surrounding the mechanism and safety of the post- harvest fungicide Fludioxonil.</a> Food and Chemical Toxicology. 123, 561-565 (2019).</li>
<li>Bénit, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionarily+conserved+susceptibility+of+the+mitochondrial+respiratory+chain+to+SDHI+pesticides+and+its+consequence+on+the+impact+of+SDHIs+on+human+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Evolutionarily conserved susceptibility of the mitochondrial respiratory chain to SDHI pesticides and its consequence on the impact of SDHIs on human cultured cells.</a> PLoS ONE. 14 (11), 1-20 (2019).</li>
<li>Usall, J., Torres, R., Teixidó, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+control+of+postharvest+diseases+on+fruit%3A+a+suitable+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Food+Science%22%5BJournal%5D)">Biological control of postharvest diseases on fruit: a suitable alternative.</a> Current Opinion in Food Science. 11, 51-55 (2016).</li>
<li>Tripathi, P., Dubey, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploitation+of+natural+products+as+an+alternative+strategy+to+control+postharvest+fungal+rotting+of+fruit+and+vegetables%5BTitle%5D)+AND+%22Postharvest+Biology+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Exploitation of natural products as an alternative strategy to control postharvest fungal rotting of fruit and vegetables.</a> Postharvest Biology and Technology. 32 (3), 235-245 (2004).</li>
<li>Abbey, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofungicides+as+alternative+to+synthetic+fungicide+control+of+grey+mould+%28Botrytis+cinerea%29-prospects+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Biocontrol+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Biofungicides as alternative to synthetic fungicide control of grey mould (Botrytis cinerea)-prospects and challenges.</a> Biocontrol Science and Technology. 29 (3), 241-262 (2019).</li>
<li>Soylu, E. M., Kurt, Ş, Soylu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+antifungal+activities+of+the+essential+oils+of+various+plants+against+tomato+grey+mould+disease+agent+Botrytis+cinerea%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Food+Microbiology%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo antifungal activities of the essential oils of various plants against tomato grey mould disease agent Botrytis cinerea.</a> International Journal of Food Microbiology. 143 (3), 183-189 (2010).</li>
<li>Liu, S., Shao, X., Wei, Y., Li, Y., Xu, F., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solidago+canadensis+L.+essential+oil+vapor+effectively+inhibits+botrytis+cinerea+growth+and+preserves+postharvest+quality+of+strawberry+as+a+food+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Solidago canadensis L. essential oil vapor effectively inhibits botrytis cinerea growth and preserves postharvest quality of strawberry as a food model system.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 0-9 (2016).</li>
<li>El-Mogy, M. M., Alsanius, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cassia+oil+for+controlling+plant+and+human+pathogens+on+fresh+strawberries%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Cassia oil for controlling plant and human pathogens on fresh strawberries.</a> Food Control. 28 (1), 157-162 (2012).</li>
<li>Balouiri, M., Sadiki, M., Ibnsouda, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+in+vitro+evaluating+antimicrobial+activity%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 6 (2), 71-79 (2016).</li>
<li>Arikan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+antifungal+susceptibility+testing+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Mycology%22%5BJournal%5D)">Current status of antifungal susceptibility testing methods.</a> Medical Mycology. 45 (7), 569-587 (2007).</li>
<li>Girmay, Z., Gorems, W., Birhanu, G., Zewdie, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+yield+performance+of+Pleurotus+ostreatus+%28Jacq.+Fr.%29+Kumm+%28oyster+mushroom%29+on+different+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">Growth and yield performance of Pleurotus ostreatus (Jacq. Fr.) Kumm (oyster mushroom) on different substrates.</a> AMB Express. 6 (1), 87(2016).</li>
<li>Fischer, M. S., Glass, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Communicate+and+fuse%3A+how+filamentous+fungi+establish+and+maintain+an+interconnected+mycelial+network%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Communicate and fuse: how filamentous fungi establish and maintain an interconnected mycelial network.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 1-20 (2019).</li>
<li>Mohana, D. C., Raveesha, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-fungal+evaluation+of+some+plant+extracts+against+some+plant+pathogenic+field+and+storage+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+Technology%22%5BJournal%5D)">Anti-fungal evaluation of some plant extracts against some plant pathogenic field and storage fungi.</a> Journal of Agricultural Technology. 4 (1), 119-137 (2007).</li>
<li>Balamurugan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+activity+of+aurantifolia+plant+extracts+against+phytopathogenic+fungi+phaseolina%5BTitle%5D)+AND+%22International+Letters+of+Natural+Sciences%22%5BJournal%5D)">In vitro activity of aurantifolia plant extracts against phytopathogenic fungi phaseolina.</a> International Letters of Natural Sciences. 13, 70-74 (2014).</li>
<li>Ameziane, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+activity+of+Moroccan+plants+against+citrus+fruit+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Agronomy+for+sustainable+development%22%5BJournal%5D)">Antifungal activity of Moroccan plants against citrus fruit pathogens.</a> Agronomy for sustainable development. 27 (3), 273-277 (2007).</li>
<li>Rizi, K., Murdan, S., Danquah, C. A., Faull, J., Bhakta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rapid%2C+reliable+and+quantitative+method+-+%22SPOTi%22+for+testing+antifungal+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a rapid, reliable and quantitative method - "SPOTi" for testing antifungal efficacy.</a> Journal of Microbiological Methods. 117, 36-40 (2015).</li>
<li>Imhof, A., Balajee, S. A., Marr, K., Marr, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+methods+to+assess+susceptibilities+of+Aspergillus+isolates+to+caspofungin%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">New methods to assess susceptibilities of Aspergillus isolates to caspofungin.</a> Microbiology. 41 (12), 5683-5688 (2003).</li>
<li>Goussous, S. J., Abu el-Samen, F. M., Tahhan, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+activity+of+several+medicinal+plants+extracts+against+the+early+blight+pathogen+%28Alternaria+solani%29%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Phytopathology+and+Plant+Protection%22%5BJournal%5D)">Antifungal activity of several medicinal plants extracts against the early blight pathogen (Alternaria solani).</a> Archives of Phytopathology and Plant Protection. 43 (17), 1745-1757 (2010).</li>
<li>Ng, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+proteins+and+peptides+of+leguminous+and+non-leguminous+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Antifungal proteins and peptides of leguminous and non-leguminous origins.</a> Peptides. 25 (7), 1215-1222 (2004).</li>
<li>Hu, Z., Zhang, H., Shi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+peptides+in+plant+defense+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Signaling+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Plant peptides in plant defense responses.</a> Plant Signaling and Behavior. 13 (8), (2018).</li>
<li>Iriti, M., Faoro, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+diversity+and+defence+metabolism%3A+How+plants+cope+with+pathogens+and+ozone+pollution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Chemical diversity and defence metabolism: How plants cope with pathogens and ozone pollution.</a> International Journal of Molecular Sciences. 10 (8), 3371-3399 (2009).</li>
<li>Lanzotti, V., Bonanomi, G., Scala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+makes+Allium+species+effective+against+pathogenic+microbes%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry+Reviews%22%5BJournal%5D)">What makes Allium species effective against pathogenic microbes.</a> Phytochemistry Reviews. 12 (4), 751-772 (2013).</li>
<li>Kyung, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+properties+of+allium+species%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial properties of allium species.</a> Current Opinion in Biotechnology. 23 (2), 142-147 (2012).</li>
<li>Hyldgaard, M., Mygind, T., Meyer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+oils+in+food+preservation%3A+mode+of+action%2C+synergies%2C+and+interactions+with+food+matrix+components%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+microbiology%22%5BJournal%5D)">Essential oils in food preservation: mode of action, synergies, and interactions with food matrix components.</a> Frontiers in microbiology. 3, 12(2012).</li>
<li>Bueno, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+evaluation+of+antimicrobial+activity+of+essential+oils+in+vapour+phase%3A+a+promising+use+in+healthcare+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Volatiles+%26+Essential+Oils%22%5BJournal%5D)">Models of evaluation of antimicrobial activity of essential oils in vapour phase: a promising use in healthcare decontamination.</a> Natural Volatiles & Essential Oils. 2 (2), 16-29 (2015).</li>
<li>Doi, N. M., Sae-Eaw, A., Suppakul, P., Chompreeda, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+synergistic+effects+on+antimicrobial+activity+in+vapour-+and+liquidphase+of+cinnamon+and+oregano+essential+oils+against+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22International+Food+Research+Journal%22%5BJournal%5D)">Assessment of synergistic effects on antimicrobial activity in vapour- and liquidphase of cinnamon and oregano essential oils against Staphylococcus aureus.</a> International Food Research Journal. 26 (2), 459-467 (2019).</li>
<li>Amat, S., Baines, D., Alexander, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vapour+phase+assay+for+evaluating+the+antimicrobial+activities+of+essential+oils+against+bovine+respiratory+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A vapour phase assay for evaluating the antimicrobial activities of essential oils against bovine respiratory bacterial pathogens.</a> Letters in Applied Microbiology. 65 (6), 489-495 (2017).</li>
<li>Feyaerts, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+oils+and+their+components+are+a+class+of+antifungals+with+potent+vapour-phase-mediated+anti-Candida+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Essential oils and their components are a class of antifungals with potent vapour-phase-mediated anti-Candida activity.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1-10 (2018).</li>
<li>Wang, T. H., Hsia, S. M., Wu, C. H., Ko, S. Y., Chen, M. Y., Shih, Y. H., Shieh, T. M., Chuang, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+antibacterial+potential+of+liquid+and+vapor+phase+phenolic+essential+oil+compounds+against+oral+microorganisms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the antibacterial potential of liquid and vapor phase phenolic essential oil compounds against oral microorganisms.</a> PLoS ONE. 11 (9), 1-17 (2016).</li>
<li>Dean, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Top+10+fungal+pathogens+in+molecular+plant+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The Top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 414-430 (2012).</li>
<li>Leadbeater, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+and+challenges+in+chemical+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Protection+Science%22%5BJournal%5D)">Recent developments and challenges in chemical disease control.</a> Plant Protection Science. 51 (4), 163-169 (2015).</li>
<li>Jin, C., Zeng, Z., Fu, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+imazalil+exposure+induces+gut+microbiota+dysbiosis+and+colonic+inflammation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Oral imazalil exposure induces gut microbiota dysbiosis and colonic inflammation in mice.</a> Chemosphere. 160, 349-358 (2016).</li>
<li>Kumar, R., Ghatak, A., Balodi, R., Bhagat, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decay+mechanism+of+postharvest+pathogens+and+their+management+using+non-chemical+and+biological+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Postharvest+Technology%22%5BJournal%5D)">Decay mechanism of postharvest pathogens and their management using non-chemical and biological approaches.</a> Journal of Postharvest Technology. 6 (1), 1-11 (2018).</li>
<li>Talibi, I., Boubaker, H., Boudyach, E. H., Ait Ben Aoumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+methods+for+the+control+of+postharvest+citrus+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Alternative methods for the control of postharvest citrus diseases.</a> Journal of Applied Microbiology. 117 (1), 1-17 (2014).</li>
<li>Arya, R., Sharma, R., Malhotra, M., Kumar, V., Sharma, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradation+Aspects+of+Carbendazim+and+Sulfosulfuron%3A+Trends%2C+Scope+and+Relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Biodegradation Aspects of Carbendazim and Sulfosulfuron: Trends, Scope and Relevance.</a> Current Medicinal Chemistry. 22 (9), 1147-1155 (2015).</li>
<li>European Food Safety Authority. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conclusion+on+the+peer+review+of+the+pesticide+risk+assessment+of+the+active+substance+carbendazim%5BTitle%5D)+AND+%22EFSA+Journal%22%5BJournal%5D)">Conclusion on the peer review of the pesticide risk assessment of the active substance carbendazim.</a> EFSA Journal. 8 (5), 1-76 (2010).</li>
<li>Sakkas, H., Papadopoulou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+basil%2C+oregano%2C+and+thyme+essential+oils%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of basil, oregano, and thyme essential oils.</a> Journal of Microbiology and Biotechnology. 27 (3), 429-438 (2017).</li>
<li>Steyaert, J. M., Weld, R. J., Mendoza-Mendoza, A., Stewart, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+without+sex%3A+conidiation+in+the+filamentous+fungus+Trichoderma%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Reproduction without sex: conidiation in the filamentous fungus Trichoderma.</a> Microbiology. 156, Reading, England. Pt 10 2887-2900 (2010).</li>
<li>Leontiev, R., Hohaus, N., Jacob, C., Gruhlke, M. C. H., Slusarenko, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comparison+of+the+antibacterial+and+antifungal+activities+of+thiosulfinate+analogues+of+allicin%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A Comparison of the antibacterial and antifungal activities of thiosulfinate analogues of allicin.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1-19 (2018).</li>
<li>Scorzoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+standard+methodology+for+determination+of+antifungal+activity+of+natural+products+against+medical+yeasts+Candida+sp+and+Cryptococcus+sp%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The use of standard methodology for determination of antifungal activity of natural products against medical yeasts Candida sp and Cryptococcus sp.</a> Brazilian Journal of Microbiology. 38 (3), 391-397 (2007).</li>
</ol>

הגישה המוצגת כאן מאפשרת הערכה של תכונות אנטי פטרייתיות של מוצרים צמחיים מעובדים מינימלית. בפרוטוקול זה, התפלגות הומוגנית של נבגים על פני השטח אגר מושגת באמצעות חרוזי זכוכית 2 מ"מ. שלב זה דורש טיפול במיומנויות כדי להפיץ כראוי את החרוזים כדי להשיג תוצאות לשחזור, בסופו של דבר המאפשר השוואה של השפעות אנטי פטרייתיות בשלבים שונים של צמיחה פטרייתית. מצאנו כי חרוזי זכוכית 5 מ"מ או סיבוב מוגזם תוך הומוגניזציה במהלך התפשטות יכול לגרום קוטר צמיחה משתנה. לכן, אנו ממליצים להתאמן כדי לשלוט בהפצת נבגים לפני הניסויים. בנוסף, כאשר אבקות ...

הפסדים גלובליים של פירות וירקות יכולים להגיע עד 50% מהייצור1 ונבעים בעיקר מריקבון מזון שנגרם על ידי קלקול פטריות בשדה או במהלך אחסון שלאחר הקציר2,3, למרות התעסוקה הנרחבת של קוטלי פטריות סינתטיים מאז אמצע המאה העשרים4. השימוש בחומרים אלה נשקל מחדש שכן הוא מייצג מפגעים סביבתיים ובריאותיים חמורים. כמו ההשלכות המזיקות של השימוש בהם מופיעים ברחבי מערכות אקולוגיות ועדויות של השפעות בריאותיות פוטנציאליות צברה5,6, חלופות הרומן אסטרטגיות מניעתיות ישנות מפותחים עבור טיפולים לפני ואחרי הקציר7,8,9. לפיכך האתגר העומד בפנינו הוא כפול. אסטרטגיות פטרייתיות חדשניות חייבות, ראשית, לשמור על רמות היעילות של הגנה על מזון מפני פיטופטוגנים ובוי-זמנית, שנית, לתרום לצמצום דרמטי של טביעת הרגל הסביבתית של שיטות חקלאיות. כדי להגשים מטרה שאפתנית זו, אסטרטגיות בהשראת ההגנות הטבעיות שהתפתחו בצמחים מוצעות כמו יותר מ 1000 מיני צמחים הודגשו עבור תכונות מיקרוביאלית שלהם8. לדוגמה, צמחים אשר פיתחו קוטלי פטריות טבעיים להילחם phytopathogens הם משאב חדשני לחקור את הפיתוח של מוצרים חדשים biocontrol2. שמנים אתריים הם מולקולות דגל מסוג זה. לדוגמה, שמן אתרי Origanum מגן על צמחי עגבניות מפני עובש אפור בחממות 10 ו Solidago canadensis L. ושמנים אתריים קאסיה הוכחו לשמר תותים שלאחר שנקטפו מנזק עובש אפור11,12. דוגמאות אלה ממחישות כי ביו-בקרה ובמיוחד מוצרים שמקורם בצמחים מייצגים פתרון המשלב יעילות ביולוגית וקיימות סביבתית.
לכן, צמחים הם משאב חשוב של מולקולות בעלות עניין פוטנציאלי לתעשיית הגנת היבול. עם זאת רק קומץ של מוצרים צמחיים הוצעו לשמש מוצרים biocontrol למרות שהם מוכרים בדרך כלל בטוח, לא פיטוטוקסי וידידותי לסביבה2. כמה קשיים טרנספוזיציה מהמעבדה לשדה נצפו, כגון יעילות פוחתת פעם להחיל vivo2,9. לכן, חשוב לשפר את היכולת של בדיקות מעבדה כדי לחזות טוב יותר את יעילות השדה. בהקשר זה, שיטות בדיקה נגד פטריות עבור מוצרים שמקורם בצמחים נחוצים הן כדי להעריך את היעילות שלהם נגד פטריות והן כדי להגדיר את התנאים האופטימליים שלהם לשימוש. באופן ספציפי, מוצרי ביו-בקרה הם בדרך כלל פחות יעילים מאשר קוטלי פטריות כימיים, ולכן הבנה טובה יותר של אופן הפעולה שלהם חשובה להצעת ניסוחים מתאימים, לזהות את אופן היישום בשדות, ולהגדיר איזה שלב התפתחותי של הפתוגן פגיע לייצור הביולוגי המועמד.
הגישות הנוכחיות המטפלות בפעילויות אנטיבקטריאליות ונוגדות פטריות כוללות שיטות דיפוזיה כגון דיפוזיה של אגר-דיסק, דילול, ביואוטוגרפיה וציטומטריית זרימה13. רוב הטכניקות הללו, וליתר דיוק, בדיקות הרגישות האנטי-פטרייתיות הסטנדרטיות - דיפוזיה של אגר-דיסק ובדיקות דילול - מותאמות היטב להערכת הפעילות האנטי-מיקרוביאלית של תרכובות מסיסות על נבגים חיידקיים ופטריות בהשעיות נוזליות14. עם זאת, שיטות אלה אינן מתאימות בדרך כלל לבדיקת תרכובות מוצקות כגון אבקת צמחים מיובשים או לכמת פעילות אנטי פטרייתית במהלך צמיחת mycelium כפי שהם דורשים דילול נבג או נבג מתפשט על צלחות אגר ו / או דילול של תרכובות נגד פטריות13. בשיטה מורעלת מזון, צלחות אגר המכילות את הסוכן נגד פטריות מחוסנים עם דיסק בקוטר 5-7 מ"מ שנדגם מתרבות פטריות בת 7 ימים מבלי לקחת בחשבון את הכמות המדויקת של מיסליום מתחיל. לאחר הדגירה, הפעילות נגד פטריות נקבעת כאחוז של עיכוב צמיחה רדיאלית17,18,19. עם גישה זו אנו יכולים להעריך את הפעילות נגד פטריות על צמיחה mycelial. לעומת זאת, שיטת דילול אגר מבוצעת כדי לקבוע את הפעילות נגד פטריות על נבגים מחוסנים ישירות על פני השטח של צלחת אגר המכילה את תרכובות נגד פטריות13,20,21. שתי גישות אלה לתת תוצאות משלימות על פעילות נגד פטריות. עם זאת אלה שתי טכניקות עצמאיות המשמשות במקביל שאינן מספקות השוואה מדויקת זה לצד זה של היעילות היחסית של תרכובות אנטי פטרייתיות על נבגים ומיסליום17,20,22 כמו כמות החומר הפטרייתית ההתחלתית שונה בשתי הגישות. יתר על כן, הפעילות נגד פטריות של מוצר שמקורו בצמחים נובעת לעתים קרובות משילוב של מולקולות אנטי פטרייתיות מסונתז על ידי צמחים להתמודד עם פתוגנים. מולקולות אלה מקיפות חלבונים, פפטידים23,24ומטבוליטים בעלי מגוון כימי רחב ושייכים לסוגים שונים של מולקולות כגון פוליפנולים, טרפנים, אלקלוואידים25גלוקוסינולטים,8ותרכובות אורגנוסולפור,26. חלק ממולקולות אלה הן נדיפות או הופכות נדיפות במהלך התקפת פתוגן27. סוכנים אלה הם לרוב מסיסים במים גרועים ותרכובות בלחץ אדים גבוה שיש לשחזר באמצעות זיקוק מים כמו שמנים אתריים, שחלק מהפעילויות האנטי מיקרוביאליות שלהם הוקמו היטב28. מבחני רגישות מתווכים בשלב האדים פותחו כדי למדוד את הפעילות האנטי-מיקרוביאלית של תרכובות נדיפות לאחר אידוי והגירה דרך שלב האדים29. שיטות אלה מבוססות על כניסתה של תרכובות נגד פטריות במרחק מהתרבות המיקרוביאלית29,30,31,32,33. ב Assay אגר שלב אדים נפוץ, שמנים אתריים מופקדים על דיסק נייר ממוקם במרכז הכיסוי של צלחת פטרי במרחק מן ההשעיה נבג חיידקי או פטרייתי, אשר מתפשט על מדיום אגר. קוטר אזור עיכוב הגדילה נמדד באותו אופן כמו בשיטת הדיפוזיה של אגר-דיסק20,24. גישות אחרות פותחו כדי לספק מדידה כמותית של הרגישות נגד פטריות שלב האדים של שמנים אתריים, נגזר משיטת דילול המרק שממנה חושבה פעילות מיקרוביאלית מתווכת שלב אדים מעכבת32או נגזר ממאיורי דיפוזיה של דיסק אגר,31. שיטות אלה הן בדרך כלל ספציפיות מחקרי פעילות שלב האדים ולא מתאים למגע עיכוב מבחנים. זה מונע את קביעת התרומה היחסית של סוכנים תנודתיים ולא תנודתיים לפעילות אנטי פטרייתית של תערובת ביו-אקטיבית מורכבת.
השיטה הכמותית שפיתחנו שואפת למדוד את ההשפעה האנטי פטרייתית של אבקת צמחים מיובשים על כמויות מבוקרות של נבגים ומיסליום גדל שהופקד על פני השטח של מדיום אגר כדי לשחזר את הצמיחה האווירית של פיטופטוגנים במהלך זיהום שלצמחים 15, כמו גם רשת mycelial מחובר16. הגישה היא התקנה ניסיונית שונה המבוססת על דילול אגר ושיטות מורעלות מזון המאפשרות גם, באותה התקנה ניסיונית, כימות זה לצד זה של תרומתם של מטבוליטים אנטי נדיפים ולא נדיפים. במחקר זה, השיטה כבר benchmarked נגד הפעילות של שלוש תכשירים אנטי פטרייתיים מאופיינים היטב.

<table><tbody><tr><td>חיטוי-ואקוקלאב 24B+</td><td>מלאג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קרבנדזים</td><td>סיגמא </td><td>378674-100G</td><td></td></tr><tr>מים <td></td><td></td><td></td><td>מזוקקים</td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף</td><td>Sarstedt</td><td>72.706</td><td>1.5 מ"ל</td></tr><tr><td>צינורות בזים</td><td>Sarstedt</td><td>547254</td><td>50 מ"ל</td></tr><tr><td>חמישה מילימטרים קוטר צינור נירוסטה</td><td>חנות</td><td></td> קמעונאית <td>/</td></tr> <tr><td>מייבש מזון</td><td>Sancusto</td><td></td><td>שישה מגשים</td></tr><tr><td>אבקת</td> <td>שוםחנות</td><td></td><td></td>אורגנית</tr><tr><td>חרוזי זכוכית</td><td>CLOUP</td><td>65020</td><td><img alt="משוואה 1" src="/files/ftp_upload/61798/61798eq1.png"> 2 מ"מ</td></tr><tr><td>תא ספירת המוציטומטר</td><td>ג'ולין</td><td>713442</td><td>/</td></tr><tr><td>אינקובטור</td><td>Memmert</td><td>  UM400</td><td>30 &amp; deg; C</td></tr><tr><td>טחנת סכינים</td><td>Bosch</td><td>TSM6A013B</td><td></td></tr><tr><td>דלפק תאים ידני</td><td>Labbox</td><td>HCNT-001-001</td><td>/</td></tr><tr><td>סרגל מדידה</td><td>חנות</td><td></td><td></td>קמעונאית</tr><tr><td>ארונות בטיחות מיקרוביולוגיים</td><td>מהיר יותר</td><td></td><td>מהיר יותר BHA36, TYPE II, Cat 2</td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Mettler-Toledo</td><td>17014407</td><td>100 - 1000 ומיקרו; L</td></tr><tr><td>מיקרופיפטה</td><td>מטלר-טולדו</td><td>17014411</td><td>20 - 200 ומיקרו; L</td></tr><tr><td>מיקרופיפטה</td><td>מטלר-טולדו</td><td>17014412</td><td>2 - 20 ומיקרו; </td></tr><tr><td>L צלחת פטרי</td><td>Sarstedt</td><td>82-1194500</td><td><img alt="משוואה 1" src="/files/ftp_upload/61798/61798eq1.png"> צלחת פטרי 55 מ"מ</td></tr><tr><td></td><td>Sarstedt</td><td>82-1473 </td><td><img alt="משוואה 1" src="/files/ftp_upload/61798/61798eq1.png"> 90 מ"מ</td></tr><tr><td>בקרי פיפטה-EASY 60</td><td>Labbox</td><td>EASY-P60-001</td><td>/</td></tr><tr><td>תפוח אדמה דקסטרוז אגר</td><td>סיגמה </td><td>סולם דיוק 70139-500G-RADWAG</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Grosseron</td><td>B126698</td><td>AS220. R2-ML 220 גרם/0.1 מ"ג </td></tr><tr><td>מגרפה</td><td>Sarstedt</td><td>86-1569001</td> <td>/</td></tr> <tr><td>מיקרוסקופ הפוך AE31E משולש</td><td>גרוסרון</td><td>M097917</td><td></td></tr> / <tr><td>פיפטה סטרילית מדורגת</td><td>Sarstedt</td><td>1254001</td><td>10 מ"ל</td></tr><tr><td>שמן אתרי תימוס</td> שמן אתרי <td>בית מרקחת</td><td></td><td>100%</td></tr> <tr><td>טיפים 1000 ומיקרו; L </td><td>Sarstedt</td><td>70.762010</td><td></td></tr><tr><td>טיפים 20 ומיקרו; L </td><td>Sarstedt</td><td>70.760012</td><td></td></tr><tr><td>טיפים 200 ומיקרו; L</td><td>Sarstedt</td><td>70.760002</td><td></td></tr><tr><td>קיסם</td><td></td><td></td>שיניים חנות <td>קמעונאית</td></tr><tr><td>Trichoderma spp זן</td><td></td><td></td><td>של מעבדת LRPIA</td></tr><tr><td>Tween-20 </td><td>סיגמא </td><td>P1379-250 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>Tween-80</td><td>סיגמא </td><td>P1754-1L</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>Labbox</td><td>FORS-001-002</td><td>/</td></tr></tbody></table>

מדידת פעילות אנטי פטרייתית נדיפה ולא נדיפה של מוצרי ביו-בקרה

Measuring Volatile and Non-volatile Antifungal Activity of Biocontrol Products

הפרוטוקול המתואר מבוסס על טכניקת העברת פלאג המאפשרת קביעה מדויקת של כמויות מיקרואורגניזם ושלבי ההתפתחות שלהם. מספר מסוים של נבגים מפוזרים על צלחת אגר. צלחת אגר זו דגירה לתקופה מוגדרת כדי לאפשר לפטריות להגיע לשלב ההתפתחותי הצפוי, למעט נבגים שבהם אין צורך בדגירה. תקעי אגר המכוסים בנבגים, היפאי או מיסליום נסוגים ומועברים לאחר מכן למדיית אגר המכילה את התרכובת נגד פטריות להיבדק או ממוקמת במרחק מהפטריות או במגע. שיטה זו ישימה כדי לבדוק הן תמציות נוזלי ודגימות מוצקות (אבקות). היא מתאימה במיוחד לכימות התרומות היחסיות של סוכנים נדיפים ולא נדיפים בתערובות ביו-אקטיביות ולקביעת השפעותיהם, במיוחד על נבגים, היפה מוקדמת ומיסליום.
השיטה רלוונטית מאוד לאפיון הפעילות האנטי פטרייתית של מוצרי ביו-בקרה, בעיקר מוצרים שמקורם בצמחים. ואכן, לטיפול בצמחים, ניתן להשתמש בתוצאות כדי להנחות את הבחירה של מצב היישום ולהקים את סף ההדק.

כדי להעריך את היכולת של השיטה הכמותית להפלות את אופן הפעולה של סוגים שונים של תרכובות נגד פטריות, השווינו את היעילות של שלושה סוכנים ידועים נגד פטריות. Carbendazim הוא קוטל פטריות סינתטי לא נדיף אשר נעשה שימוש נרחב כדי לשלוט במגוון רחב של מחלות פטרייתיות בצמחים39,40. תימוס וולגריס שמן אתרי תוארה במידה רבה עבור פעילות אנטיבקטריאלית שלה נגד פטריות ומשמש חומר משמר מזון טבעי41. אבקת שום נבחרה כמודל של ביו-פרוצרקט ממקור צמחי. זה שימש ב...

אנו מתארים שיטה מבוססת אגר שונה שנועדה לכמת את ההשפעות האנטי פטרייתיות של מוצרים שמקורם בצמחים. ניתן להעריך הן תרומות תנודתיות והן תרומות לא תנודתיות לפעילות האנטי-פטרייתית באמצעות פרוטוקול זה. בנוסף, ניתן למדוד את היעילות נגד פטריות בשלבים התפתחותיים מרכזיים במערך ניסיוני יחיד.

The protocol described is based on a plug-transfer technique that allows accurate determination of microorganism quantities and their developmental ...

פרוטוקול זה מספק שיטה לביצוע השוואות מדויקות זו לצד זו של היעילות היחסית של תרכובות אנטי פטרייתיות נדיפות ולא נדיפות בשלבי גידול פטרייתיים שונים. שיטה זו מתאימה היטב להערכת הפעילות האנטי פטרייתית של מוצרים שמקורם בצמחים המשמשים בצורות מיובשות או נוזליות המכילות מגוון רחב של מולקולות. שיטה זו יכולה לספק מידע רב ערך על אופן היישום של מוצרים שמקורם בצמחים והיא מתאימה במיוחד בתחום ההדברה הביולוגית.מי שתדגים את ההליך תהיה ולנטינה גליגורייביץ', עוזרת מהנדסת ממעבדת Sup'Biotech. לאיסוף קונידיה, יש להניח שלושה מיליליטר של 0.05% Tween 20 על תרבית תפטיר טריכודרמה ולהשתמש במגרפה כדי לשחרר את הקונידיות מהקונידיופורים תוך הקפדה לא ללחוץ על התפטיר כדי למנוע את קריעת הקורים. כאשר כל הקונידיות שוחררו, השתמש במיקרופיפטה כדי להתאושש במהירות והוסף את תמיסת הקונידיה לשפופרת של 15 מיליליטר לספירה.להכנת צלחות פטרייתיות, הפקידו 100 מיקרוליטר נבגים בריכוז שלוש פעמים 10 לששת הנבגים למיליליטר על צלחת פטרי של תשעה סנטימטרים המכילה מדיום PDA, והשתמשו במרית סטרילית כדי להוסיף לצלחת 10 גרם של חרוזי זכוכית בקוטר שני מילימטרים. לאחר מכן נער בעדינות את הצלחת קדימה ואחורה וסובב וסובב את הצלחת במקטעים של 90 מעלות עד שהיא סובבה במלואה כדי לפזר באופן שווה את הנבגים על פני האגר. לאחר מכן דגרו את הצלחת ב-30 מעלות צלזיוס עד לניתוח עיכוב גדילה.כדי לבצע בדיקת עיכוב מגע עם אבקת שום, השתמש במרית סטרילית כדי לשקול את כמות אבקת השום הרצויה לתוך צינורות בודדים של 50 מיליליטר. כדי להשיג ריכוזים הנעים בדרך כלל בין 0.25 ל-16 מיליגרם למיליליטר. הוסף 10 מיליליטר של כ- 45 מעלות צלזיוס PDA לכל צינור והפוך בזהירות כל צינור מספר פעמים כדי לפזר את האבקה באופן שווה בכל האגר.במהירות, שפכו את המתלים ההומוגניים לצלחות פטרי בקוטר חמישה סנטימטרים ואפשרו לאגר להתמצק בטמפרטורת החדר. כדי לבצע בדיקת עיכוב מגע, השתמש בצינור נירוסטה סטרילי בקוטר חמישה מילימטר כדי לשרטט מעגל במרכז האגר בכלי הבקרה והטיפול בתרכובות אנטי פטרייתיות, והשתמש בקיסם סטרילי כדי להיפטר מגלילי האגר. לאחר מכן, השתמש בצינור נירוסטה חדש בקוטר חמישה מילימטר כדי לשרטט 15 עד 20 עיגולים באופן אקראי לתוך לוחות הפטרייה, והשתמש בקיסמים סטריליים כדי להעביר בזהירות את הנבגים, הקורים או הגלילים המכוסים בתפטיר לאזורים הריקים של לוחות ה-PDA.לאחר מכן החזירו את הצלחות לחממה של 30 מעלות צלזיוס. להכנת צלחות לבדיקת עיכוב אנטי פטרייתי בשלב אדים, שפכו 10 מיליליטר של מדיום PDA למכסה של צלחת פטרי בקוטר חמישה סנטימטרים המכילה 10 מיליליטר של מדיום PDA המכיל תרכובות אנטי פטרייתיות או מדיום PDA בלבד, ואפשר לאגר להתמצק בטמפרטורת החדר. בעזרת צינור צנטריפיקלי של 50 מיליליטר ככלי כיול, צרו עיגול של PDA במרכז האגר והשתמשו במרית סטרילית כדי להסיר את האגר סביב העיגול.השתמש בצינור נירוסטה סטרילי בקוטר חמישה מילימטר כדי לשרטט עיגול במרכז המדיום במכסה והשתמש בקיסם סטרילי כדי להשליך את גליל המקדחה. לאחר מכן השתמש בצינור נירוסטה סטרילי בקוטר חמישה מילימטר כדי ליצור באופן אקראי תקעים בצלחות הפטריות המוכנות, והשתמש בקיסם סטרילי כדי להעביר בזהירות נבגים, קורים או תקעים מצופים תפטיר למכסי לוחות הבדיקה. בניתוח זה, עיכוב צמיחה SBT 10-2018 של מיני טריכודרמה המופעל על ידי שלוש תרכובות אנטי פטרייתיות הוערך באמצעות מבחני עיכוב מגע ושלב אדים כפי שהודגם עבור כל שלב פטרייתי.רגישות גבוהה יותר של נבגים לקרבנדזים נצפתה בהשוואה לרשתות קורים ותפטירים מוקדמות כאשר טריכודרמה ותרכובות אנטי פטרייתיות היו במגע. לעומת זאת, לקרבנדוזים לא הייתה השפעה אנטי פטרייתית על טריכודרמה כאשר הפטרייה הוצבה במרחק מקוטל הפטריות בהתאם לתנודתיות הנמוכה של חומר זה. כאשר נעשה שימוש בשמן אתרי של בלוטת התימוס הוולגריס כתרכובת אנטי פטרייתית, נצפתה רגישות גבוהה יותר לנבגים ולקורים מוקדמים בהשוואה לעיכוב צמיחת תפטיר ב-0.025% שמן אתרי.כצפוי, שמן אתרי Thymus vulgaris הציג פעילות אנטי פטרייתית זהה ללא קשר למרחק בין הפטרייה לשמן. כאשר נעשה שימוש באבקת שום, נצפתה יעילות גבוהה יותר נגד נביטת נבגים והתארכות קורים מוקדמת מאשר לצמיחת תפטיר. יש להקדיש תשומת לב מיוחדת במהלך הכנת צלחת הפטרייה כדי לוודא שהנבגים מפוזרים באופן שווה על פני צלחת האגר כדי להבטיח תוצאות דומות.

measuring-volatile-non-volatile-antifungal-activity-biocontrol

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

כתב יד זה מדגים ודן בשימוש בטכניקות סקר הרגישות חומרי הדברה לזהות התנגדות לפנות וחומרי הדברה מזיקים arthropod מערכתי.

Bioassays עבור ההתנגדות הדברה ניטור

אנו מתארים שיטה פשוטה, מהירה וחזקה...

96 microtiter ובכן פלייט מבוססי שיטה ליצירת ניטור ובדיקה של רגישות נגד פטריות קנדידה אלביקנס Biofilms

ההרס של פלחה ידי זרעים מדביק פטריות גרם מאמצי מחקר רבים כדי להבין טוב יותר הצמח לפתוגן אינטראקציות. ללמוד זרעים פטרייתיים אינטראקציות במעבדה להגדרה, פיתחנו שיטה חזקים כימות של רבייה ביומסה פטרייתי, וזיהום mycotoxin באמצעות bioassays ליבה.

כימות של קולוניזציה Sporogenesis פטרייתי, ולאחר הפקה של mycotoxins שימוש bioassays-Kernel

השיטה במהירות המארחות נדיפים מסך צמחים ידי מדידת התגובה של אלקטרו orangeworm הטבור מבוגר...

המבדק Electroantennographic ככלי מיון עבור נדיפים צמחים מארח

סרטון זה מדגים בדיקת מבחנה לסינון תרכובות אנטי פטרייתיות באמצעות בדיקת מיקרודילוציה של מרק. תרכובות הבדיקה מדוללות באופן סדרתי בצלחת מיקרוטיטר ומודגרות עם חיסון פטרייתי. לאחר הדגירה, הצלחת נבדקת עבור בארות ללא צמיחה פטרייתית נראית לעין כדי להעריך את הפוטנציאל האנטי פטרייתי של תרכובות הבדיקה ואת הריכוז המעכב המינימלי שלהם (MIC).

בדיקת מיקרודילוציה במבחנה של מרק להקרנה של תרכובות אנטי פטרייתיות

שיטת microdilution מרק קל וישימה לסינון תרכובות פטריות ותמציות.

מרק Microdilution במבחנה הקרנה: שיטה קלה ומהירה כדי לזהות תרכובות חדשות נגד פטריות

כאן אנו מציגים פרוטוקול המבוסס על מערכת פיתיון תולעי הארוחות (Tenebrio molitor) ששימשה לבידוד ובחירה של פטריות אנטומופתוגניות (EPF) מדגימות קרקע. נוסחת מספר קונידיה יעילה (ECN) משמשת לבחירת EPF עמיד בפני מתח גבוה המבוסס על מאפיינים פיזיולוגיים לבקרת מזיקים מיקרוביאלית בתחום.

בידוד ובחירה של פטריות אנטומופתוגניות מדגימות קרקע והערכה של אלימות פטרייתית נגד מזיקי חרקים

פרוטוקול זה מתאר שיטה לקבלת נתונים כמותיים על הפעילות האנטי-פטרייתית של פפטידים ותרכובות אחרות, כגון חומרים אנטי-פטרייתיים בעלי מולקולות קטנות, כנגד קנדידה אלביקנס. השימוש בו בצפיפות אופטית במקום לספור יחידות יוצרות מושבה כדי לכמת עיכוב גדילה חוסך זמן ומשאבים.

כימות הפעילות האנטי פטרייתית של פפטידים נגד קנדידה אלביקנס

אנו מתארים את השימוש בכרומטוגרפיה בשכבה דקה, בדיקת ביואוטוגרפיה ישירה וספקטרומטריית מסה של כרומטוגרפיה נוזלית כדי לזהות מוצרים טבעיים מיקרוביאליים המציגים אנטגוניזם נגד פתוגנים פטרייתיים באמצעות הפתוגן Sclerotinia sclerotiorum והדברה ביולוגית Bacillus isolates כמערכת מודל.

זיהוי מונחה ביואסי של מוצרים טבעיים להדברה ביולוגית על ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה - ביואוטוגרפיה ישירה

מטרת פרוטוקול זה היא לכמת את ייצור הוויולצאין על ידי Chromobacterium violaceum ATCC 12472 כפרוקסי להערכת עיכוב חישת מניין על ידי תרכובות ביו-אקטיביות.

כימות ויולאצין ב - Chromobacterium violaceum ועיכובו על ידי תרכובות ביו-אקטיביות

למד שיטת העברת פלאג לבדיקת פעילות אנטי פטרייתית של תרכובות נדיפות ולא נדיפה בשלבי גידול שונים של פטריות. השיטה מאפשרת השוואה ישירה של יעילות חומרי בקרה ביולוגית ממקור צמחי.

מדידת פעילות אנטי פטרייתית נדיפה ולא נדיפה של מוצרי ביו-בקרה

גלה סרטונים נוספים