מדידת פעילות אנטי פטרייתית נדיפה ולא נדיפה של מוצרי ביו-בקרה

פרוטוקול זה מספק שיטה לביצוע השוואות מדויקות זו לצד זו של היעילות היחסית של תרכובות אנטי פטרייתיות נדיפות ולא נדיפות בשלבי גידול פטרייתיים שונים. שיטה זו מתאימה היטב להערכת הפעילות האנטי פטרייתית של מוצרים שמקורם בצמחים המשמשים בצורות מיובשות או נוזליות המכילות מגוון רחב של מולקולות. שיטה זו יכולה לספק מידע רב ערך על אופן היישום של מוצרים שמקורם בצמחים והיא מתאימה במיוחד בתחום ההדברה הביולוגית.

מי שתדגים את ההליך תהיה ולנטינה גליגורייביץ', עוזרת מהנדסת ממעבדת Sup'Biotech. לאיסוף קונידיה, יש להניח שלושה מיליליטר של 0.05% Tween 20 על תרבית תפטיר טריכודרמה ולהשתמש במגרפה כדי לשחרר את הקונידיות מהקונידיופורים תוך הקפדה לא ללחוץ על התפטיר כדי למנוע את קריעת הקורים. כאשר כל הקונידיות שוחררו, השתמש במיקרופיפטה כדי להתאושש במהירות והוסף את תמיסת הקונידיה לשפופרת של 15 מיליליטר לספירה.

להכנת צלחות פטרייתיות, הפקידו 100 מיקרוליטר נבגים בריכוז שלוש פעמים 10 לששת הנבגים למיליליטר על צלחת פטרי של תשעה סנטימטרים המכילה מדיום PDA, והשתמשו במרית סטרילית כדי להוסיף לצלחת 10 גרם של חרוזי זכוכית בקוטר שני מילימטרים. לאחר מכן נער בעדינות את הצלחת קדימה ואחורה וסובב וסובב את הצלחת במקטעים של 90 מעלות עד שהיא סובבה במלואה כדי לפזר באופן שווה את הנבגים על פני האגר. לאחר מכן דגרו את הצלחת ב-30 מעלות צלזיוס עד לניתוח עיכוב גדילה.

כדי לבצע בדיקת עיכוב מגע עם אבקת שום, השתמש במרית סטרילית כדי לשקול את כמות אבקת השום הרצויה לתוך צינורות בודדים של 50 מיליליטר. כדי להשיג ריכוזים הנעים בדרך כלל בין 0.25 ל-16 מיליגרם למיליליטר. הוסף 10 מיליליטר של כ- 45 מעלות צלזיוס PDA לכל צינור והפוך בזהירות כל צינור מספר פעמים כדי לפזר את האבקה באופן שווה בכל האגר.

במהירות, שפכו את המתלים ההומוגניים לצלחות פטרי בקוטר חמישה סנטימטרים ואפשרו לאגר להתמצק בטמפרטורת החדר. כדי לבצע בדיקת עיכוב מגע, השתמש בצינור נירוסטה סטרילי בקוטר חמישה מילימטר כדי לשרטט מעגל במרכז האגר בכלי הבקרה והטיפול בתרכובות אנטי פטרייתיות, והשתמש בקיסם סטרילי כדי להיפטר מגלילי האגר. לאחר מכן, השתמש בצינור נירוסטה חדש בקוטר חמישה מילימטר כדי לשרטט 15 עד 20 עיגולים באופן אקראי לתוך לוחות הפטרייה, והשתמש בקיסמים סטריליים כדי להעביר בזהירות את הנבגים, הקורים או הגלילים המכוסים בתפטיר לאזורים הריקים של לוחות ה-PDA.

לאחר מכן החזירו את הצלחות לחממה של 30 מעלות צלזיוס. להכנת צלחות לבדיקת עיכוב אנטי פטרייתי בשלב אדים, שפכו 10 מיליליטר של מדיום PDA למכסה של צלחת פטרי בקוטר חמישה סנטימטרים המכילה 10 מיליליטר של מדיום PDA המכיל תרכובות אנטי פטרייתיות או מדיום PDA בלבד, ואפשר לאגר להתמצק בטמפרטורת החדר. בעזרת צינור צנטריפיקלי של 50 מיליליטר ככלי כיול, צרו עיגול של PDA במרכז האגר והשתמשו במרית סטרילית כדי להסיר את האגר סביב העיגול.

השתמש בצינור נירוסטה סטרילי בקוטר חמישה מילימטר כדי לשרטט עיגול במרכז המדיום במכסה והשתמש בקיסם סטרילי כדי להשליך את גליל המקדחה. לאחר מכן השתמש בצינור נירוסטה סטרילי בקוטר חמישה מילימטר כדי ליצור באופן אקראי תקעים בצלחות הפטריות המוכנות, והשתמש בקיסם סטרילי כדי להעביר בזהירות נבגים, קורים או תקעים מצופים תפטיר למכסי לוחות הבדיקה. בניתוח זה, עיכוב צמיחה SBT 10-2018 של מיני טריכודרמה המופעל על ידי שלוש תרכובות אנטי פטרייתיות הוערך באמצעות מבחני עיכוב מגע ושלב אדים כפי שהודגם עבור כל שלב פטרייתי.

רגישות גבוהה יותר של נבגים לקרבנדזים נצפתה בהשוואה לרשתות קורים ותפטירים מוקדמות כאשר טריכודרמה ותרכובות אנטי פטרייתיות היו במגע. לעומת זאת, לקרבנדוזים לא הייתה השפעה אנטי פטרייתית על טריכודרמה כאשר הפטרייה הוצבה במרחק מקוטל הפטריות בהתאם לתנודתיות הנמוכה של חומר זה. כאשר נעשה שימוש בשמן אתרי של בלוטת התימוס הוולגריס כתרכובת אנטי פטרייתית, נצפתה רגישות גבוהה יותר לנבגים ולקורים מוקדמים בהשוואה לעיכוב צמיחת תפטיר ב-0.025% שמן אתרי.

כצפוי, שמן אתרי Thymus vulgaris הציג פעילות אנטי פטרייתית זהה ללא קשר למרחק בין הפטרייה לשמן. כאשר נעשה שימוש באבקת שום, נצפתה יעילות גבוהה יותר נגד נביטת נבגים והתארכות קורים מוקדמת מאשר לצמיחת תפטיר. יש להקדיש תשומת לב מיוחדת במהלך הכנת צלחת הפטרייה כדי לוודא שהנבגים מפוזרים באופן שווה על פני צלחת האגר כדי להבטיח תוצאות דומות.