Name: מודל לימפאדמה זנב מורין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: חקור מודל כרוני של לימפאדמה בזנב עכברים באמצעות ננו-שינוי רקמות להעברת חומר גנטי. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני המחלה ופיתוח אסטרטגיות טיפול חדשניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מימון מענקים שסופקו על ידי האגודה האמריקאית של מנתחים פלסטיים מלגה אקדמית ומשרד ההגנה W81XWH2110135   ל AHH. מענק קרן חינוך ומחקר לכירורגיה אסתטית ל- MS. NIH U01DK119099, R01NS042617 ו- R01DK125835 ל- CKS.

הפרוטוקול פועל על פי הנחיות ועדת האתיקה לחקר בעלי החיים של המוסד. כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי בית הספר לרפואה של אוניברסיטת אינדיאנה מוסדי טיפול ושימוש בוועדה. בעלי חיים שוכנו תחת מחזור של 12 שעות של אור-חושך עם מזון ומים עד ליביטום.
1. הפרעה כירורגית של לימפטיקה זנב העכבר
<ol><li>השתמש בשמונה עכברי C57BL/6 בני שבוע של חלוקה מגדרית שווה.</li>
	<li>מניחים עכבר תחת הרדמה כללית בתא אינדוקציה עם 3-4% איזופלוראן ב -100% חמצן ואחריו סם תחזוקה ב 1-3% במהלך ההליך.</li>
	<li>יש לתת 0.5 מ"ג/ק"ג בופרנורפין בתת עורית לשליטה בכאב. הערה: תרופות נוספות למרצך פעולה מנוהלות לאחר הניתוח: Carprofen אחת ל 24 שעות לפחות 48 שעות ו Bupivacaine פעם אחת או לאחר החתיכה נעשה או לפני סגירת החתיכה, מוחל על ידי טפטוף על קצות העור (נמשך עד 4 - 6 שעות).</li>
	<li>מקם את העכבר באופן אחורי והכן את הזנב עם 70% אלכוהול איזופרופיל.</li>
	<li>מדוד את קוטר הזנב לפני ההליך במרווחים של 5 מ"מ החל מ-20 מ"מ מבסיס הזנב באמצעות קליפר. מדידות אלה ישמשו לחישוב אמצעי האחסון באמצעות משוואת החרוט החתוך37.</li>
	<li>סמן כריתה היקפית של 3 מ"מ על הזנב 20 מ"מ מהבסיס.</li>
	<li>בצע כריתת עור קפדנית בעובי 3 מ"מ עם להב כירורגי סטרילי (מידה 15), והותיר את כל כלי ההשמדה הבסיסיים ללא פגע תחת הגדלה מיקרוסקופית כירורגית. יש להסית את סימן ההיקף המעולה (20 מ"מ מבסיס הזנב) תחילה דרך הדרמיס ואחריו פירוק 3 מ"מ בעובי מלא היקפי לפירוק הראשון.<ol>
<li>הפוך תפירה אנכית בעובי מלא בניצב כדי לחבר את שני החתכים. השתמש בטנדר עדין עם שיניים כדי לתפוס קצה מוביל ולהשתמש במיקרו-סיסורים כדי לנתח בזהירות עמוק בתוך מישור כלי הדם לדרמיס ושטחי לאפוונטיטיה של הווריד.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הזריקו 0.1 מ"ל של כחול איזוסולפן (1%) פרוקסימלי תת עורי לקצה הזנב.</li>
	<li>זהה את שני ערוצי הלימפה הסמוכים לוורידים לרוחב הזנב מתחת למיקרוסקופ הכירורגי. הלימפה תיראה כחולה בגלל הזרקת איזוסולפן. תעביר את הלימפה בעזרת מספריים מיקרו-כירורגיים ישרים. השתמש במספריים כדי לנתח בזהירות מישור בין הווריד לרוחב ללימפה. לאחר מכן להעביר את קצה של להב מספריים אחד בין כלי הלימפה לבין הווריד לרוחב ולסגור את הלהבים כדי להעביר את כלי הלימפה.</li>
	<li>הלבישו את פצע הזנב ברוטב סטרילי ברור. בדוק חותרים לאחר הניתוח מדי יום כדי לוודא שהם לא נגועים או מדממים ולספק טיפול פצע במשך שבועיים.</li>
	<li>לשכן את בעלי החיים בסינגל כדי למנוע כל פגיעה נוספת בזנב ולמנוע מבעלי החיים לנשוך אחד את השני, מה שיוביל לסיבוכים כירורגיים.</li>
</ol>2. הערכת כלי דם בזנב עם הדמיית ניגודיות כתמי לייזר
<ol><li>עשיית העכבר כמו בשלב 1.2.</li>
	<li>כדי להשתמש בהדמיית ניגודיות כתמי לייזר כדי לדמיין את כלי הדם של הזנב, הגדר את הרוחב ל-0.8 ס"מ, גובה ל-1.8 ס"מ, צפיפות הנקודות לגבוהה, קצב הפריימים ל-44 תמונות לשנייה, זמן ל-30 שניות ותמונה צבעונית ל-1 ל-10 שניות.</li>
	<li>להעריך את זלוף ורידים ועורקים עבור patency. מבחינה איכותית, יש לדמיין את המשכיות הזרימה.</li>
</ol>3. הערכה לימפתית תפקודית עם אנגיוגרפיה לייזר אינפרא אדום קרוב
<ol><li>להפנט את החיה כמו בשלב 1.2</li>
	<li>תזרים את ירוק האינדוציאנין (ICG) (25 מ"ג/10 מ"ל) ותנהל 0.1 מ"ל בתת עורית בזנב העכבר הדיסטלי ליד הקצה.</li>
	<li>עמעמו את אורות החדר. מקם אנגיוגרפיה של לייזר כמעט אינפרא-אדום בהגדרת אגירה ואחריה לכידה חיה.</li>
</ol>4. משלוח מוקד של מטען חומצה גרעין לזנב העכבר באמצעות TNT
<ol><li>להעייש את החיה כמו בשלב 1.2.</li>
	<li>פילינג זנב העכבר באמצעות קרם פילינג עור אקטואלי.</li>
	<li>לטבול את זנב העכבר בתמיסת collagenase (10 מ"ג / מ"ל) ב 37 °C במשך 5 דקות.</li>
	<li>לטעון DNA לתוך מאגר השבב TNT2.0 35.</li>
	<li>מקם את התקן שבב הסיליקון TNT2.0 מעל אתר המסירה הרצוי על הזנב עם ננו-נוי במגע עם הזנב.</li>
	<li>הנח בדיקה חשמלית חיובית במאגר. חבר את הבדיקה השלילית למחט 30 G ולהכניס את המחט תת עורית לזנב לאתר המסירה.</li>
	<li>החל גירוי חשמלי פולס גל מרובע (10 x 10 ms פולסים, 250 V, 10 mA).</li>
</ol>

<ol><li>Kataru, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+secondary+lymphedema%3A+chicken+or+egg%5BTitle%5D)+AND+%22Translation+Research%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and secondary lymphedema: chicken or egg.</a> Translation Research. 209, 68-76 (2019).</li>
<li>Brayton, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+prevalence+and+treatment+benefits+in+cancer%3A+impact+of+a+therapeutic+intervention+on+health+outcomes+and+costs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphedema prevalence and treatment benefits in cancer: impact of a therapeutic intervention on health outcomes and costs.</a> PLoS One. 9 (12), 114597(2014).</li>
<li>Mendoza, N., Li, A., Gill, A., Tyring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filariasis%3A+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Filariasis: diagnosis and treatment.</a> Dermatology and Therapy. 22 (6), 475-490 (2009).</li>
<li>Rockson, S. G., Rivera, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+population+burden+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Estimating the population burden of lymphedema.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 147-154 (2008).</li>
<li>Soran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-related+lymphedema--what+are+the+significant+predictors+and+how+they+affect+the+severity+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Journal%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-related lymphedema--what are the significant predictors and how they affect the severity of lymphedema.</a> Breast Journal. 12 (6), 536-543 (2006).</li>
<li>Hayes, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper-body+morbidity+after+breast+cancer%3A+incidence+and+evidence+for+evaluation%2C+prevention%2C+and+management+within+a+prospective+surveillance+model+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Upper-body morbidity after breast cancer: incidence and evidence for evaluation, prevention, and management within a prospective surveillance model of care.</a> Cancer. 118, 8 Suppl 2237-2249 (2012).</li>
<li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li>
<li>Garza, R., Skoracki, R., Hock, K., Povoski, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+overview+on+the+surgical+management+of+secondary+lymphedema+of+the+upper+and+lower+extremities+related+to+prior+oncologic+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A comprehensive overview on the surgical management of secondary lymphedema of the upper and lower extremities related to prior oncologic therapies.</a> BMC Cancer. 17 (1), 468(2017).</li>
<li>Hassanein, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+Inferior+Epigastric+Artery+Vascularized+Lymph+Node+Transfer%3A+A+Simple+and+Safe+Option+for+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive%2C+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Deep Inferior Epigastric Artery Vascularized Lymph Node Transfer: A Simple and Safe Option for Lymphedema.</a> Journal of Plastic, Reconstructive, Aesthetic Surgery. 73 (10), 1897-1916 (2020).</li>
<li>Hassanein, A. H., Sacks, J. M., Cooney, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+perioperative+lymphatic-venous+anastomosis+localization+using+transcutaneous+vein+illumination%2C+isosulfan+blue%2C+and+indocyanine+green+lymphangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Optimizing perioperative lymphatic-venous anastomosis localization using transcutaneous vein illumination, isosulfan blue, and indocyanine green lymphangiography.</a> Microsurgery. 37 (8), 956-957 (2017).</li>
<li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%3A+Surgical+and+Medical+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138, 3 Suppl 209-218 (2016).</li>
<li>Gould, D. J., Mehrara, B. J., Neligan, P., Cheng, M. H., Patel, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+transplantation+for+the+treatment+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Lymph node transplantation for the treatment of lymphedema.</a> Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 736-742 (2018).</li>
<li>Cook, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+Lymphatic+Reconstruction+after+Axillary+Lymphadenectomy%3A+A+Single-Institution+Early+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immediate Lymphatic Reconstruction after Axillary Lymphadenectomy: A Single-Institution Early Experience.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Cook, J. A., Hassanein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASO+Author+Reflections%3A+Immediate+Lymphatic+Reconstruction%3A+A+Proactive+Approach+to+Breast+Cancer-Related+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">ASO Author Reflections: Immediate Lymphatic Reconstruction: A Proactive Approach to Breast Cancer-Related Lymphedema.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Johansson, K., Branje, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arm+lymphoedema+in+a+cohort+of+breast+cancer+survivors+10+years+after+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncologica%22%5BJournal%5D)">Arm lymphoedema in a cohort of breast cancer survivors 10 years after diagnosis.</a> Acta Oncologica. 49 (2), 166-173 (2010).</li>
<li>Johnson, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+Incidence+After+Axillary+Lymph+Node+Dissection%3A+Quantifying+the+Impact+of+Radiation+and+the+Lymphatic+Microsurgical+Preventive+Healing+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema Incidence After Axillary Lymph Node Dissection: Quantifying the Impact of Radiation and the Lymphatic Microsurgical Preventive Healing Approach.</a> Annals of Plastic Surgery. 82, 4S Suppl 3 234-241 (2019).</li>
<li>Gartner, R., Mejdahl, M. K., Andersen, K. G., Ewertz, M., Kroman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+in+self-reported+arm-lymphedema+in+Danish+women+treated+for+early-stage+breast+cancer+in+2005+and+2006--a+nationwide+follow-up+study%5BTitle%5D)+AND+%22Breast%22%5BJournal%5D)">Development in self-reported arm-lymphedema in Danish women treated for early-stage breast cancer in 2005 and 2006--a nationwide follow-up study.</a> Breast. 23 (4), 445-452 (2014).</li>
<li>Shin, W. S., Rockson, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+molecular+and+mechanistic+study+of+lymphatic+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models for the molecular and mechanistic study of lymphatic biology and disease.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 50-74 (2008).</li>
<li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li>
<li>Olszewski, W., Machowski, Z., Sokolowski, J., Nielubowicz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+lymphedema+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental lymphedema in dogs.</a> Journal of Cardiovascular Surgery. 9 (2), 178-183 (1968).</li>
<li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail%3A+Lymphatic+hyperplasia%2C+VEGF-C+upregulation%2C+and+the+protective+role+of+MMP-9%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li>
<li>Tabibiazar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+manifestations+of+experimental+lymphatic+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory manifestations of experimental lymphatic insufficiency.</a> PLoS Medicine. 3 (7), 254(2006).</li>
<li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+deficiency+worsens+inflammation+and+lymphedema+after+lymphatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor deficiency worsens inflammation and lymphedema after lymphatic injury.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 302 (4), 709-719 (2012).</li>
<li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> JCI Insight. 1 (15), 84095(2016).</li>
<li>Weiler, M. J., Cribb, M. T., Nepiyushchikh, Z., Nelson, T. S., Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+tail+lymphedema+model+for+observing+lymphatic+pump+failure+during+lymphedema+development%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A novel mouse tail lymphedema model for observing lymphatic pump failure during lymphedema development.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10405(2019).</li>
<li>Avraham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2+differentiation+is+necessary+for+soft+tissue+fibrosis+and+lymphatic+dysfunction+resulting+from+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Th2 differentiation is necessary for soft tissue fibrosis and lymphatic dysfunction resulting from lymphedema.</a> FASEB J. 27 (3), 1114-1126 (2013).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29+cells+regulate+fibrosis+and+lymphangiogenesis+in+response+to+lymphatic+fluid+stasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD4(+) cells regulate fibrosis and lymphangiogenesis in response to lymphatic fluid stasis.</a> PLoS One. 7 (11), 49940(2012).</li>
<li>Arruda, G., Ariga, S., de Lima, T. M., Souza, H. P., Andrade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+mouse-tail+lymphedema+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphology%22%5BJournal%5D)">A modified mouse-tail lymphedema model.</a> Lymphology. 53 (1), 29-37 (2020).</li>
<li>Jun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Mouse+Models+of+Chronic+Secondary+Lymphedema%3A+Tail+and+Hind+Limb+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Modified Mouse Models of Chronic Secondary Lymphedema: Tail and Hind Limb Models.</a> Annals of Vascular Surgery. 43, 288-295 (2017).</li>
<li>Karkkainen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+gene+therapy+of+human+hereditary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for gene therapy of human hereditary lymphedema.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (22), 12677-12682 (2001).</li>
<li>Yoon, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-C+gene+therapy+augments+postnatal+lymphangiogenesis+and+ameliorates+secondary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">VEGF-C gene therapy augments postnatal lymphangiogenesis and ameliorates secondary lymphedema.</a> Journal of Clinical Investigation. 111 (5), 717-725 (2003).</li>
<li>Gallego-Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+tissue+nano-transfection+mediates+non-viral+stroma+reprogramming+and+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Topical tissue nano-transfection mediates non-viral stroma reprogramming and rescue.</a> Nature Nanotechnology. 12 (10), 974-979 (2017).</li>
<li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanochannel-Based+Poration+Drives+Benign+and+Effective+Nonviral+Gene+Delivery+to+Peripheral+Nerve+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Biosystems%22%5BJournal%5D)">Nanochannel-Based Poration Drives Benign and Effective Nonviral Gene Delivery to Peripheral Nerve Tissue.</a> Advanced Biosystems. , 2000157(2020).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-Mediated+Crosstalk+between+Keratinocytes+and+Macrophages+in+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Exosome-Mediated Crosstalk between Keratinocytes and Macrophages in Cutaneous Wound Healing.</a> ACS Nano. 14 (10), 12732-12748 (2020).</li>
<li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+tissue+nanotransfection+in+the+management+of+cutaneous+diabetic+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Neurogenic tissue nanotransfection in the management of cutaneous diabetic polyneuropathy.</a> Nanomedicine. 28, 102220(2020).</li>
<li>Sitzia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+measurement+in+lymphoedema+treatment%3A+examination+of+formulae%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer+Care%22%5BJournal%5D)">Volume measurement in lymphoedema treatment: examination of formulae.</a> European Journal of Cancer Care. 4 (1), 11-16 (1995).</li>
<li>Smeltzer, D. M., Stickler, G. B., Schirger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+lymphedema+in+children+and+adolescents%3A+a+follow-up+study+and+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Primary lymphedema in children and adolescents: a follow-up study and review.</a> Pediatrics. 76 (2), 206-218 (1985).</li>
<li>Maclellan, R. A., Greene, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema.</a> Seminars in Pediatric Surgery. 23 (4), 191-197 (2014).</li>
<li>Clavin, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta1+is+a+negative+regulator+of+lymphatic+regeneration+during+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">TGF-beta1 is a negative regulator of lymphatic regeneration during wound repair.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 295 (5), 2113-2127 (2008).</li>
<li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retooling+Laser+Speckle+Contrast+Analysis+Algorithm+to+Enhance+Non-Invasive+High+Resolution+Laser+Speckle+Functional+Imaging+of+Cutaneous+Microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Retooling Laser Speckle Contrast Analysis Algorithm to Enhance Non-Invasive High Resolution Laser Speckle Functional Imaging of Cutaneous Microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048(2017).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים מתחרים.

לימפאדמה מסווגת כפגיעה ראשונית (מולדת) או משנית (לימפתית iatrogenic)38,39. לימפאדמה משנית מהווה 99% מהמקרים39. לימפאדמה משנית נגרמת בדרך כלל על ידי זיהום (פילריאזיס) או טיפול פוסט-אונקולוגי עם כריתת לימפאדן או קרינה4,39. מודל בעלי חיים תרגום מאתגר עבור לימפאדמה משנית, כמו 70% של בעלי חיים שטופלו עם כריתת לימפאדמה וקרינה אינם רוכשים לימפאדמה2,<sup ...

לימפאדמה היא נפיחות בגפיים הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של הלימפה. הגפיים המושפעות גדלות בגלל הצטברות של נוזלים, שומן, פיברוזיס1. לימפאדמה משפיעה על 250 מיליון אנשים ברחבי העולם2,3,4. ההערכה היא כי 20-40% מהחולים שעוברים טיפול ממאיר מוצק, כגון סרטן השד, מלנומה, גידולים גינקולוגיים / אורולוגיים, או סרקומות, לפתח לימפאדמה2,4,5. תחלואה מבדים לימפאדמה כוללת זיהומים חוזרים ונשנים, כאב, עיוות6. אין תרופה למחלה מתקדמת זו לכל החיים. הטיפולים הנוכחיים הם variaby יעיל7 וכוללים דחיסה, טיפול decongestive מלא על ידי פיזיותרפיסטים, הליכים excisional, ניתוחים מיקרוכירורגיים, כולל העברת בלוטות לימפה וסקולרית מעקף לימפובלוס7,8,9,10,11,12,13,14. הטיפול האידיאלי לבצה לימפתית טרם התגלה.
לימוד המנגנון והטיפול של במצקת הלימפה היה מוגבל. יש הכנסה מתעכבת ממוצעת של שנה אחת בעקבות הפגיעה הלימפתית15,16 ורוב האנשים שחווים עלבון iatrogenic עם קרינה וניתוח לא לפתח לימפאדמה4,6,17. למרות מודלים בעלי חיים גדולים, כולל כלבים, כבשים, חזיר תוארו18,19,20, מודל זנב העכבר כבר מיושם הנפוץ ביותר בגלל קלות, עלות, רבייה. מודלים עכבר לחקירת לימפאדמה כוללים מודל זנב, אבלציה לימפתית בתיווך דיפתריה-רעלן, וניתוח בלוטות לימפה צירי או פופליטי21,22,23,24,25,26. רוב דגמי הזנב משתמשים בחתך עור בעובי מלא עם גזירת ערוץ לימפה המבוצעת בסמוך לבסיס הזנב22, וכתוצאה מכך נפיחות בזנב ותכונות היסטולוגיות הדומות לבתי לימפה אנושית24,27,28,29. עם זאת, מודל זנב מורין סטנדרטי בדרך כלל פותר כמה זמן עד 20 ימים והוא מלווה נמק זנב תקופתי30. מודל זנב עכבר לימפאדמה מאריך לימפאדמה מתמשכת מעבר ל -15 שבועות, מדגים טפיחה עורקית ורידית מאושרת, ומאפשר הערכה תפקודית של תפקוד לקוי של הלימפה.
מודל זנב מורין של לימפאדמה מאפשר הערכה של טיפוליים חדשניים לטיפול בבמצת לימפה. אסטרטגיות מבוססות גנים שימשו במודל העכבר בתיווך וקטורים ויראליים31,32. אנו משתמשים גם בטכנולוגיית ננו-טרנזיזיה חדשנית של רקמות (TNT) להעברת מטען גנטי לזנב העכבר הלימפדימטי. TNT מאפשרת אספקת גנים ישירה, עורית באמצעות שבב עם nanochannels בשדה חשמלי ממוקד מהיר33,34,35,36. המודל כולל שימוש ב- TNT2.0 כדי לאפשר אספקת גנים מוקדיים של טיפולים פוטנציאליים מבוססי גנים לאתר הפגיעה הלימפתית של זנב העכבר35.

<table><tbody><tr><td>Tegaderm Film</td><td></td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Leica, Wetzlar, גרמניה</td><td>MSV266</td><td></td></tr><tr><td>חבישה דבקה (Tegaderm)</td> <td>3M, סנט פול, מינסוטה.</td><td>כתם לייזר 1626W</td><td></td></tr><tr><td>(מערכת Pericam PSI )</td><td>Perimed AB, סטוקהולם, שוודיה)</td><td>לייזר קרוב</td> לאינפרא אדום PSIZ <td></td></tr><tr><td>(LUNA)</td><td>סטרייקר (לשעבר Novadaq Technologies, טורונטו, קנדה)</td><td>LU3000</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 עכברים</td><td>מעבדות ג'קסון</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-אדסון - 1x2 Teeth</td><td>Fine Science Tools (ארה"ב) בע"מ.</td><td>11019-12</td><td></td></tr><tr><td>V-Hook</td><td>Fine Science Tools (ארה"ב) בע"מ</td><td>18052-12</td><td></td></tr><tr><td>אזמל SS NO15</td><td>Fischer Scientific</td><td>29556</td><td></td></tr><tr><td>מחט חד פעמית 30GX1</td><td>Fischer Scientific</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>מספריים הפעלה</td><td>Fischer Scientific</td><td>12-460-796</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של Surgi-Or Jeweler, Sklar 4-1/2 in</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-118-4255</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים - ישרים/חדים-חדים/ 8 מ"מ חדשני</td><td>Fine Science Tools (ארה"ב) בע"מ</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Cardiogreen</td><td>Sigma</td><td>I2633-25MG</td><td></td></tr><tr><td>איזוסולפן כחול (לימפזורין)&nbsp; 50 מ"ג/5 מ"ל</td><td>מיילן</td><td>67457-220-05</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל לימפאדמה זנב מורין

A Murine Tail Lymphedema Model

לימפאדמה היא נפיחות בגפיים הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של הלימפה. הגפיים המושפעות גדלות בגלל הצטברות של נוזלים, שומן ופיברוזיס. אין תרופה למחלה זו. מודל זנב עכבר המשתמש כריתת עור בעובי מלא מוקד ליד בסיס הזנב, וכתוצאה מכך נפיחות הזנב, שימש לחקר בצקת הלימפה. עם זאת, מודל זה עלול לגרום נמק זנב מורכב וכתוצאה מכך ורזולוציה נפיחות זנב מוקדם, הגבלת התרגום הקליני שלה. מודל לימפאדמה זנב מורין כרונית מתמשכת משכיל לימפאדמה במשך 15 שבועות וזלוף אמין לזנב. שיפורים של מודל לימפאדמה זנב מורין המסורתי כוללים 1) כריתה מדויקת בעובי מלא גזירת לימפה באמצעות מיקרוסקופ כירורגי, 2) אישור של זלוף עורקי ורידים לאחר הניתוח באמצעות כתמ לייזר ברזולוציה גבוהה, ו 3) הערכה תפקודית באמצעות אינדוקינין ירוק ליד לימפנגיוגרפיה לייזר אינפרא אדום. אנו משתמשים גם בטכנולוגיית ננו-טרנזיזיה של רקמות (TNT) עבור משלוח חדשני לא ויראלי, עורי, מוקדי של מטען גנטי ל vasculature זנב העכבר.

הטכניקה של דגם זנב העכבר לבוצת לימפה מתמשכת מוצגת באיור 1. הדמות מציגה את האנטומיה הרלוונטית של דגם זנב העכבר. איור 2 מדגים את הנפיחות המתקדמת ואת קיום לימפאדמה עמידה בזנב העכבר לאחר אינדוקציה של לימפאדמה. נפח זנב העכבר, כפי שחושב על ידי משוואת החרוט החתוך, מגיע לשיאו בשבוע 4 ומישורים לשבוע 6 ואחריו שיפור הדרגתי המתמשך לשבוע 15. נפח הזנב יכול לשמש כמשתנה תוצאה כדי להעריך את ההשפעה של התערבויות טיפוליות עבור במצקת הלימפה במודל. <s...

לימפאדמה היא נפיחות בגפיים הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של הלימפה. אנו מתארים מודל זנב מורין כרוני של ביצנית לימפה ושימוש חדשני בטכנולוגיית ננו-טראנספקטו רקמות (TNT) להעברת מטען גנטי לזנב.

Lymphedema is extremity swelling caused by lymphatic dysfunction. The affected limb enlarges because of accumulation of fluid, adipose, and fibrosis. ...

לימפאדמה היא מצב כרוני ללא תרופה. זה משפיע על שליש מהחולים שעברו ניתוח בלוטות לימפה צירי והקרנות בטיפול בסרטן השד. מודל בעל חיים תקף מקל על הבנת המנגנון והפיתוח של אסטרטגיות טיפול חדשניות.מודל זנב העכבר של לימפאדמה הוא אמין ושחזור עם התפשטות מהירה. הוא מציג שינויים היסתולוגיים העולים בקנה אחד עם בטסת הלימפה האנושית. מדגים את ההליך יהיה ד"ר גאנש מוהאן, פוסט דוקטורט מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, למקם את העכבר מסומם שמונה שבועות ברצינות ולהכין את הזנב עם 70%אלכוהול איזופרופיל. השתמש בקליפר כדי למדוד את קוטר הזנב במרווחים של חמישה מילימטר החל מ-20 מ"מ מבסיס הזנב. סמן כריתה היקפית של שלושה מילימטר על הזנב 20 מילימטרים מהבסיס.תחת הגדלה מיקרוסקופית כירורגית, בצע כריתת עור בעובי מלא של שלושה מילימטרים ומשאירה את כל כלי ההשמדה הבסיסי ללא פגע. הסתמכו תחילה על סימן ההיקף המעולה דרך הדרמיס ואחריו תרסיס היקפי בעובי מלא של שלושה מילימטרים דיסטליים לראשון. בצע חתך אנכי בעובי מלא מאונך כדי לחבר את שני החתכים, ולאחר מכן השתמש בטנדר עדין עם שיניים כדי לתפוס קצה מוביל ולנתח עמוק בתוך מישור כלי הדם אל הדרמיס ושטחי לאדוונטיטיה הווריד עם מספריים מיקרו.הזריק 0.1 מיליליטר של 1%איזוסולפן כחול תת עורי קרוב לקצה הזנב. זהה את שני ערוצי הלימפה המופיעים כחולים עקב הזריקה הסמוכה לוורידים לרוחב הזנב. ניתחו את הלימפה בזהירות, ניתחו מישור בין הווריד לרוחב לבין הלימפה עם מספריים מיקרו-כירורגיים ישרים.להעביר את קצה של להב מספריים אחד בין כלי הלימפה לבין הווריד לרוחב ולסגור את הלהבים כדי להעביר את כלי הלימפה. בסיום, הלבישו את פצע הזנב בכתובת חסידות סטרילית. יש לנהל אינדוקינין ירוק 0.1 מיליליטר תת עורית לתוך זנב העכבר הדיסטלי ליד הקצה.עמעמו את אורות החדר ואז הניחו ליד אנגיוגרפיה לייזר אינפרא אדום בהגדרת אגירה ולבצע הדמיה חיה. לאחר מתן כחול איזוסולפן לתוך קצה הזנב, הלימפה הציגה צבע כחול. הלימפה שובשה בזמן שהוורידים לרוחב הסמוכים נשמרו.נפיחות מתקדמת ובזמת לימפה מתמשכת מתמשכת בזנב העכבר לאחר אינדוקציה לימפאדמה מוצג כאן. נפח זנב העכבר כפי שחושב על ידי משוואת חרוט קטועה, הגיע לשיאו בשבוע הרביעי והגיע לשבוע השישי ואחריו שיפור הדרגתי שנמשך עד שבוע 15. הדמיית ניגודיות כתמי לייזר ברזולוציה גבוהה נעשתה כדי לאשר זלוף זנב העכבר במודל זנב לימפאדמה מראה ורידים לרוחב פצועים ורידים לרוחב שלמים להערכת קשיות כלי הזנב.ליד לימפנגיוגרפיה לייזר אינפרא אדום הפגין לימפתיה ללא פגע טרום ניתוחי ולא מעבר ICG מעבר לאתר כירורגי לאחר הניתוח, ובכך לאשר כי נפיחות נגרמה על ידי disfunction הלימפה. היעילות של אספקת מטען גנטי באמצעות טכנולוגיית ננו-זיהום רקמות הודגמה על ידי אספקת פלואורסצין בין DNA שכותרתו לזנב מורין. שימוש בהתאמות למודל לימפאדמה זנב העכבר ו- ICG ליד אנגיוגרפיה לייזר אינפרא אדום הוא מודל בעלי חיים מתורגם קלינית ומרגש עם השלכות טיפול.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

שיטות הדמיה שפותחו לאחרונה באמצעות פלואורסצנטי קרוב אינפרא אדום (NIRF) עשויות לעזור להבהיר את תפקיד מערכת הלימפה משחקת בהתפשטות גרורה סרטני, תגובה חיסונית, תיקון פצע, ומחלות אחרות הקשורים לימפטי.

דימות אופטי לא פולשנית של כלי דם הלימפה של עכבר

בסרטון זה, תאי מלנומה מוזרקים דרך וריד הזנב במודל העכבר. תאי המלנומה ממשיכים לנוע במערכת הדם, מסתגלים למיקרו-סביבה הרחוקה וגורמים לגרורות באיברים כמו ריאות.

מודל ניסיוני של עכבר מלנומה גרורתי: פלטפורמה לחקר הפוטנציאל הגרורתי של תאי מלנומה בריאות

סרטון זה מתאר טכניקת in vivo ליצירת לימפאדמה בזנב מורין, הצטברות נוזלים חריגה בחלל הרקמה הבין-תאית המובילה לנפיחות בזנב. המודל מוחל על מנגנוני לימוד וטיפול בלימפדמה.

מודל לימפדמה של זנב מורין: טכניקת In Vivo ליצירת לימפאדמה מתמשכת בזנב מורין

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד הכירורגי של בלוטת הלימפה המתנקזת מפשעתית מדגם עכבר. חתך באזור הבטן מספק גישה לבלוטת הלימפה המפשעה, אשר נקטף בניתוח. בלוטת הלימפה השקופה שנקטפה יכולה לשמש למחקרים אימונולוגיים.

קצירת בלוטת לימפה מנקזת מפשעתית ממודל מורין

מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.

שיטה מתוקנת לגרימת ימפתית משנית בתוך הגפיים של עכברים

פרוטוקול לחסום את זרימת הלימפה על ידי תפירה כירורגית של כלי לימפה שונים מוצג.

חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי לימפה אפילנט בעכברים

כאן, אנו מציגים שיטה יעילה ויעילה להזרקות ורידים בזנב מכרסם באמצעות מכשיר התחממות /הרחקה שתוכנן באופן ייחודי. על ידי ייעול ייזום תהליכי ויתור וריסון, פרוטוקול זה מאפשר זריקות מדויקות ותוך ורידי בזמן של קבוצות גדולות של בעלי חיים עם מצוקה מינימלית.

מכשיר התחממות/ריסון עכשווי להזרקות יעילות של וריד זנב במודל אלח דם פטרייתי מורין

מלנומה היא מחלה אגרסיבית מאוד שמתפשטת במהירות לאיברים אחרים. פרוטוקול זה מתאר את היישום של הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, יחד עם עיבוד 3D, כדי לפקח על הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות במודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית.

ניתוח נפח בלוטות הלימפה על ידי הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד במודל העכבר המהונדס גנטית Braf /Pten של מלנומה

התכנון הניסיוני המוצג כאן מספק מודל רבייה שימושי למחקרים של תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן במהלך גרורות בלוטות הלימפה (LN), אשר אינו כולל את ההפרעה של תאי CD8+ T עוברי אורח.

ניקוז גרורות בלוטות הלימפה מודל להערכת הדינמיקה של תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן במהלך הגידול

הפרוטוקול נועד לתאר מודל עכברי ליצירת הישנות של לוקמיה לימפובלסטית חריפה, בהתבסס על הדינמיקה של התגובה לכימותרפיה אינדוקציה.

מודל עכברי של הישנות לוקמיה לכימותרפיה אינדוקציה ללוקמיה לימפובלסטית חריפה

חקור מודל כרוני של לימפאדמה בזנב עכברים באמצעות ננו-שינוי רקמות להעברת חומר גנטי. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני המחלה ופיתוח אסטרטגיות טיפול חדשניות.

מודל לימפאדמה זנב מורין

גלה סרטונים נוספים