Name: העכבר שלי בהריון? הערכת אולטראסאונד בתדר גבוה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 39 s
Description: למדו להעריך הריון בעכברים באמצעות אולטראסאונד ברזולוציה גבוהה. שיטה זו מאפשרת זיהוי מדויק של מצב ההריון, גיל ההיריון והפסדי הריון, תוך הימנעות מטעויות הנגרמות על ידי ארטיפקטים בדימוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל השלבים בפרוטוקול זה פועלים בהתאם למדריך לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות ואושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של בית הספר לרפואה גרוסמן באוניברסיטת ניו יורק.
1. הזדווגות של עכברים עבור הריונות מתוזמן
<ol><li>שייך את העכבר הנשי המתאים (בדרך כלל הטרוזיגוטה) בכלוב עם העכבר הגברי המתאים (בדרך כלל הטרוזיגוטה) להזדווגות לילה.</li>
	<li>הפרד את העכברים למחרת בבוקר. לחלופין, ברציפות להזדווג עם העכברים הנשיים והזכריים, ובכך להגדיל את הסיכויים להריון. הערה: עם זאת, הריון מתוזמן במדויק לא יכול להיות סמוך ובטוח עם החלופה, ובימוי של עוברי עכבר על ידי אולטרסאונד אינו ברור, במיוחד כאשר תהליך המחלה תוצאות פיגור צמיחה תוך רחמי. אם מניחים שהעוברים הנושאים את וריאנט הגנים קטנים, חפשו את חברי המלטה הגדולים יותר כדי לאמוד את גיל ההיריון.<ol>
<li>אופציונלי: חפש את תקע הנרתיק. אם אין תקע נרתיקי, העכבר הנשי לא הזדווג. אם יש תקע בנרתיק, זה עדיין סביר כי העכבר הנשי אינו נכנס להריון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>זמן יום לאחר הזדווגות לילה כמו E0.5.</li>
	<li>בצע הדמיה ב E6.5-E.8.5 כדי לקבוע הריון, ולהזדווג מחדש את העכברים אם העכבר אינו בהריון (ראה שלב 1.1). הערה: בשלב זה, הסכר הנשי הוא לא ברור בהריון לעין; לפיכך, הדמיית אולטרסאונד מאפשר נחישות מוקדמת והזדווגות מחדש.</li>
</ol>2. הרדמה והכנת עכבר
<ol><li>מניחים את העכבר ההרה בתא האינדוקציה ההרדמה.</li>
	<li>מערבבים isoflurane עם אוויר בחדר או חמצן רפואי, בריכוז של 2%-3% בקצב זרימה של 1 L / min כדי לגרום להרדים את העכבר בהריון בתא האינדוקציה. הערה: סם ההיתוך מתרחש בדרך כלל תוך דקה עד 2 דקות. העכבר ישכב בשקט, ונשימתה תאט.</li>
	<li>העבר במהירות את העכבר לפלטפורמת ההדמיה. פלטפורמת ההדמיה כוללת בדרך כלל גם רכיבי חימום, שיכולים לסייע בשמירה על חום העכבר.</li>
	<li>מניחים את האף של העכבר לתוך האף ההרדמה.</li>
	<li>נתב מחדש במהירות את תערובת החמצן/isoflurane לפלטפורמת ההדמיה nosecone. לשמור על isoflurane ב 2%-3% ב 1 L / min זרימה.</li>
	<li>לקבוע את רמת הסם על ידי קמצוץ כפה, רפלקס הקרנית, רמת הנשימה, וכל תנועה. הערה: רפלקס הקרנית יכול להיקבע בתחילה על ידי החלת משחה לחות על העיניים כדי למנוע מהם להתייבש בזמן שהעכבר מורדם (העכבר אינו עוצם את עיניה).</li>
	<li>כשהעכבר שוכב על גבו, מדביק את כפות הרגליים לרפידות האלקטרוקרדיוגרמה (EKG) של פלטפורמת ההדמיה. הערה: עם זאת, אק"ג אינו נחוץ עבור סוג זה של הדמיה.</li>
	<li>הסר את הפרווה מהבטן של הסכר ההריוני כדלקמן:<ol>
<li>הרטב את פרוות הבטן ביסודיות עם 70% אתנול, כולל עד הקצוות לרוחב. אל תחיל כל כך הרבה שיש בורח על הפלטפורמה. הערה: אתנול עובד טוב יותר כחומר סיכה גילוח מאשר מים.</li>
		<li>השתמש בסכין הגילוח כדי לגלח בזהירות את הבטן. תיזהר לא לחתוך את הפטמות.</li>
		<li>לנגב את הפרווה מגולח את הבטן עם גזה או כמה מגבונים.</li>
		<li>לחלופין, השתמש קרם depilatory לאחר שימוש קוצץ פרווה כדי להסיר את רוב הפרווה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. הדמיה טרנסבדומינלית של העכבר ההריוני (המשוער)
<ol><li>לאחר גילוח הבטן, יש להפחית את הטופוריה ל-1%-1.5%, תוך שמירה על קצב זרימה של 1 ל'/דקה. לפקח על רמת הסיד לפי רמת הנשימה וכל התנועות, כמו גם קמצוץ כפות ו / או רפלקס הקרנית. הערה: קצב הלב של העכבר המומר יהיה בדרך כלל 400-500/min, בהתאם לטמפרטורת הליבה (רקטלית). לצורך בדיקת הריון מהירה, אין לחמם את העכבר לטמפרטורת ליבה פיזיולוגית; קצב הלב יהיה קרוב יותר 400-450/min, אבל עשוי לרדת עוד יותר עם קצב לא סדיר אם העכבר להיות קר עם הדמיה ממושכת.<ol>
<li>חשוב לציין, ודא כי הנשימה היא מתונה לעומק וסדירה, לא יציב או מייסר (מתנשף: עמוק, איטי, ולא יציב, עם נסיגות intercostal עמוק subcostal). הערה: קצב הנשימה של העכבר הלא מאוורר והמ מורדם יהיה בדרך כלל 60-100/min. ראה https://ahcs.ninds.nih.gov/ACUC_pages/pg_003_anesth_animals.html https://az.research.umich.edu/animalcare/guidelines/guidelines-anesthesia-and-analgesia-mice.</li>
	</ol></li>
	<li>יש למרוח ג'ל אולטרסאונד (צימוד אקוסטי) על הבטן בנדיבות.</li>
	<li>מניחים את מתמר ההדמיה על הבטן כדי לכוון אותו במישור אופקי: לכוון את החללית כדי להשיג כיוון שמאלי-ימני על מערכת ההדמיה; "נקודה" או רכס המצוין בצד של גשוש ההדמיה צריך להיות פונה ימינה. הערה: החלקת גשוש ההדמיה ימינה של העכבר אמורה להעביר את התמונה המתאימה במערכת האולטרסאונד ימינה של העכבר (דמיינו שאתם מסתכלים "למעלה" מזנב העכבר – זכות העכבר תישאר על הצג).<ol>
<li>בדרך כלל, השתמש במערכת המתמרים של מערכת ההדמיה ובמערכת המניפולטורים של המסילה. כאן נעשה שימוש בהדמיית "יד חופשית" שבה מתמר ההדמיה מוחזק ביד (שתי ידיים יציבות יותר מאחת) ומאפשר תנועות מהירות יותר סביב הבטן. תנועות אלה, כמתואר להלן, כוללות תנועות סיבוביות ותרגומיות. עם זאת, זה דורש תרגול נוסף.</li>
	</ol></li>
	<li>זהה את שלפוחית השתן על המסך (וידאו 1).</li>
	<li>סריקה caudally בשלפוחית השתן, לזהות את הנרתיק. לאחר מכן, סריקה איטית וחלקה בכיוון גולגולתי, לזהות את bifurcation של הנרתיק לתוך קרני הרחם שמאלה וימינה (איור 2; וידאו 1).</li>
	<li>התחילו את הסקר של הרחם (קרני הרחם השמאלי והימני)13 (איור 3; וידאו 2). הערה: עד אמצע ההיריון (E10.5 או E11.5), עוברי העכבר יהיו ממוקמים לאורך הפריפריה הימנית והשמאלית. ככל שהם גדלים, החלקים הדיסטליים יותר של הרחם והעוברים המתאימים שלהם יהפכו כלפי חוץ ואחורי. ככל שהעוברים גדלים עוד יותר (E15.5 ואילך, בדרך כלל), עוברי העכבר ימוקמו כמעט באופן אקראי בכיוונים שונים, ויהיה קשה "לעקוב" אחר רחם מקרובימלי לדיסאלי.<ol>
<li>סרוק במהירות פשוט כדי לבדוק אם עכבר בהריון או לא. שיטה מהירה זו דורשת רק הכרה בעוברים של רחם ועכבר.</li>
		<li>לחלופין, קח זמן נוסף כדי למנות את העוברים (לחיות, מת, resorbed) בכל קרן הרחם. הערה: באופן כללי, עובר חי יציג איברים נפרדים כגון לב, גפיים, ראש עם חדרים ועיניים. עובר מת מקבל מראה הומוגני ו"רגשני", אלא אם כן הוא מת. לעוברים שעברו תפירה חוזרת יש נקודת הד מדויקת באמצע רחם בעל מראה גראביד(איור 4, איור 5, איור 6, איור 7, איור 8).</li>
		<li>כדי לקבוע אם עובר באמת בחיים, חפשו את פעימות הלב ו/או זרימת הדם. הערה: מיפוי זרימת דופלר צבע יכול לסייע בקביעת נוכחות של זרימת הדם, הן בעובר והן בחבל הטבור. באופן כללי, זה עשוי להיות מיושם על עוברים מעל גיל E8.5.</li>
		<li>זהה ממצאים פוטנציאליים שעשויים לחקות רחם גראביד(איור 9, איור 10). בנוסף, כמו גז מעיים וחפצי "צל" אולטרסאונד אחרים עשויים לטשטש קטעים של קרן הרחם, לבצע את ההדמיה מנקודות תצפית מרובות כדי להבטיח הדמיה נאותה של הרחם.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר השלמת הסקר, לנגב את הג'ל מהבטן עם גזה או מגבונים. נסה להסיר ככל האפשר כמו ג'ל נוטה לקרר את העכבר למטה.</li>
	<li>שחרר את כפות הרגליים, והסר את העכבר מההרדמה.</li>
	<li>תזיז בעדינות את העכבר בחזרה לכלוב שלה. היא צריכה להתעורר ולהתחיל לנוע תוך דקה בערך. הערה: עכברים מהונדסים גנטית עשויים להימשך קצת יותר זמן כדי להתאושש מהרדמה ויש להשגיח עליך מקרוב יותר.</li>
</ol>

<ol><li>Bogue, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Phenome+Database%3A+an+integrative+database+and+analysis+suite+for+curated+empirical+phenotype+data+from+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice.</a> Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).</li>
<li>Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+models%3A+Application+to+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse models: Application to human diseases.</a> Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).</li>
<li>Law, M., Shaw, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Genome+Informatics+%28MGI%29+is+the+international+resource+for+information+on+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).</li>
<li>Rydell-Törmänen, K., Johnson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+applicability+of+mouse+models+to+the+study+of+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The applicability of mouse models to the study of human disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).</li>
<li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Reviews+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li>
<li>Dickinson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+discovery+of+novel+developmental+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">High-throughput discovery of novel developmental phenotypes.</a> Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).</li>
<li>Tam, P. P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+embryonic+head+in+the+mouse%3A+attributes+of+a+gene+regulatory+network%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network.</a> Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).</li>
<li>Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell-independent+hematopoiesis%3A+emergence+of+erythroid%2C+megakaryocyte%2C+and+myeloid+potential+in+the+mammalian+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo.</a> FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).</li>
<li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selecting+female+mice+in+estrus+and+checking+plugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Selecting female mice in estrus and checking plugs.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).</li>
<li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).</li>
<li>Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+weight+gain+as+a+predictor+of+litter+size+in+Swiss+Webster%2C+C57BL%2F6J%2C+and+BALB%2FcJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).</li>
<li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+for+multifrequency+ultrasound+biomicroscopy+in+mice+from+implantation+to+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood.</a> Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).</li>
<li>Ji, R. P., Phoon, C. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+localization+of+nuclear+factor+of+activated+T+cells+c1-%2F-+mouse+embryos+by+ultrasound+biomicroscopy-Doppler+allows+genotype-phenotype+correlation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).</li>
<li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).</li>
<li>Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+quantification+of+embryonic+and+placental+growth+during+gestation+in+mice+using+micro-ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Biology+and+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34(2008).</li>
<li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+imaging+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular imaging in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 15-38 (2016).</li>
<li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+biomicroscopy-Doppler+in+mouse+cardiovascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development.</a> Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).</li>
<li>Peavey, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+use+of+three-dimensional+high-frequency+ultrasonography+for+early+pregnancy+characterization+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56207(2017).</li>
<li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PLoS One. 8 (10), 77205(2013).</li>
<li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kühl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Biology+and+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38(2014).</li>
<li>Norton, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refinements+for+embryo+implantation+surgery+in+the+mouse%3A+comparison+of+injectable+and+inhalant+anesthesias+-+tribromoethanol%2C+ketamine+and+isoflurane+-+on+pregnancy+and+pup+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal%22%5BJournal%5D)">Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival.</a> Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).</li>
<li>Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anaesthetics+and+analgesics+on+fetal+growth+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal%22%5BJournal%5D)">Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse.</a> Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).</li>
<li>Phoon, C. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tafazzin+knockdown+in+mice+leads+to+a+developmental+cardiomyopathy+with+early+diastolic+dysfunction+preceding+myocardial+noncompaction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction.</a> Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הצעד הראשון החשוב ביותר בהדמיה הוא לזהות את הנרתיק ולאחר מכן לקבוע את bifurcation של קרן הרחם שמאלה וימינה. על ידי ביצוע כל קרן הרחם, imager סביר פחות לזהות לולאות של המעי כמו הרחם. יתר על כן, הבנת הווריאציות במראה המעי (עם / בלי חומר צואה) חשוב להבדיל בין אלה לרחם; מדי פעם, "כדורים" צואה בלולאות מעיים עשוי לחקות רחם gravid (בהריון). למרות שמחברים אחרים תיארו את האבחנה של הריון ובימוי של התפתחות עוברית עכבר17,18,19 כולל גילוי של...

העכבר הוא המודל היונק המועדף על מחלות אנושיות רבות ותהליכים ביולוגיים1,2,3,4. מחקר בביולוגיה התפתחותית דורש לעתים קרובות עכברים בהריון מבוים כדי לקבוע תהליכים מתפתחים בנקודות זמן שונות5,6,7,8. יתר על כן, רבייה אופטימלית ויעילה של עכברי מודל דורשת הערכה של הריונות מתוזמן, במיוחד כאשר החוקרים חוקרים את ההשפעות של מוטציה בגן על ההתפתחות. בדרך כלל, החוקרים להזדווג עכברים הטרוזיגואליים לילה, לחפש תקע הנרתיק מוקדם בבוקר שלמחרת, ולקוות כי הריון מתרחש9. קביעת אובדן תוך רחמי בדרך כלל מתחילה בבדיקת המלטה שזה עתה נולדה ליחסי מנדליאן של גנוטיפים, ולאחר מכן עבודה לאחור על ידי הקרבת עכברים בהריון בשלבי הריון שונים, ושחזור העוברים. החוקרים עשויים לקבוע עלייה במשקל כמדד של הריון חיובי10,11; עם זאת, במיוחד עם עכברים מהונדסים גנטית, המלטה עשויה להיות קטנה מאוד ולאחר מכן resorbed כאשר יש אובדן תוך רחמי בשל אשר העלייה במשקל לא יכול להיות ברור (במיוחד בשלב מוקדם של ההריון, ~ E6.5-8.5). עכבר עשוי להופיע בהריון כוזב עקב, למשל, לגידול שפיר בבטן. בעיקרו של דבר, אחד עובד "עיוור".
ביומיקרוסקופיית אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה מאפשרת הדמיה ישירה של הרחם gravid ופיתוח עוברי עכבר12,13,14,15,16. למרות שפיתחנו בתחילה שיטות להערכת פיזיולוגיה לב וכלי דם של עכבר עוברי16,17, זיהינו את התועלת של מודאליות הדמיה זו כדי לייעל את הרבייה של העכבר שלנו. באופן ספציפי, אנחנו כבר לא צריכים לחכות "לראות" אם עכבר היה בהריון, מבוסס על עלייה במשקל ברור או משלוח של המלטה; אנחנו יכולים לקבוע את מצב gravid ולהזדווג מחדש עכברים במהירות אם הסכר לא היה בהריון. יתר על כן, הפסדים תוך רחמיים יכולים גם להיות בתמונה בקלות, וציר זמן של אובדן יכול להיקבע מבלי להקריב את העכבר (ראה איור 1 עבור סכמטי). זמן, עכברים מודל יקר, וקרנות ולכן ניתן לחסוך.

<table><tbody><tr><td>קרם</td><td></td><td></td><td></td>אפילציה</tr><tr><td>אתנול, קוצץ</td> פרווה 70% <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>גזה או KimWipes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>חמצן רפואי (לא חובה)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרט</td><td></td><td></td><td></td> רפואי</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת הדמיית עכבר (כולל הגדרת הרדמה ופלטפורמת הדמיה)</td> <td>Fujifilm Visual Sonics</td><td>מגוון</td><td>כל מערכת עם בדיקת מתמר אולטרסאונד בתדר מרכזי של 40 מגה-הרץ</td></tr><tr><td>סכין גילוח (לא סכין גילוח בטיחותי)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>סולם (לשקילת עכבר)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>ג'ל</td><td></td><td></td><td></td> אולטרסאונד</tr></tbody></table>

העכבר שלי בהריון? הערכת אולטראסאונד בתדר גבוה

Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

העכבר הוא המודל של בעלי חיים יונקים של בחירה עבור מחלות אנושיות רבות ותהליכים ביולוגיים. ביולוגיה התפתחותית דורשת לעתים קרובות עכברים בהריון מבוים כדי לקבוע תהליכים מתפתחים בנקודות זמן שונות. יתר על כן, רבייה אופטימלית ויעילה של עכברי מודל דורש הערכה של הריונות מתוזמן. בדרך כלל, עכברים הם הזדווגו לילה, ואת נוכחותו של תקע הנרתיק נקבע; עם זאת, הערך החיזוי החיובי של טכניקה זו הוא תת-אופטימלי, וצריך לחכות כדי לדעת אם העכבר באמת בהריון. ביומיקרוסקופיה אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה היא כלי יעיל ויעיל להדמיה: 1) אם עכבר בהריון; 2) לאיזה שלב הריון הגיע העכבר; ו -3) אם יש הפסדים תוך רחמיים. בנוסף לעוברים והעוברים, החוקר חייב גם לזהות חפצים נפוצים בחלל הבטן כדי לא לטעות אלה עבור רחם gravid. מאמר זה מספק פרוטוקול להדמיה יחד עם דוגמאות הממחישות.

פרוטוקול זה יאפשר לחוקר לקבוע בביטחון אם עכבר בהריון, כולל בשלבים המוקדמים ולקבוע אם יש הפסדים עובריים או עובריים ברורים לפני הלידה ללא צורך להקריב את הסכר ההריוני. פרוטוקול זה שימושי במיוחד בעת רבייה עכברים מהונדסים גנטית; בדרך כלל, צלבים הטרוזיגוזיים x הטרוזיגיים להניב צאצאים הומוזיגיים מובילים לכישלון בהתפתחות נאותה, מה שגורם לקטלניות טרום לידתית. איור 1 מתאר מצב מייצג שבו עוברים מתים בהדרגה ולאחר מכן עוברים הריון מחדש באמצע ההיריון. איור 2 מראה כיצד למצוא את...

אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יכול לעזור לייעל ניסויים הדורשים עכברים מתוזמן בהריון על ידי קביעת מצב ההריון, גיל ההיריון, ואובדן הריון. מוצג כאן הוא פרוטוקול כדי להמחיש שיטות להערכת הריונות העכבר, כמו גם מלכודות פוטנציאליות (חפצי תמונה) שעשויים לחקות הריון.

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יכול לעזור לייעל ניסויים הדורשים עכברים בהריון מתוזמן על ידי קביעת מצב ההריון, גיל ההיריון, ואובדן הריון. פרוטוקול זה מדגים כיצד להעריך הריונות עכבר ולזהות חפצי תמונה פוטנציאליים שעשויים לחקות הריון. כדי להתחיל, לזהות את שלפוחית השתן על המסך.סריקה caudally בשלפוחית השתן, לזהות את הנרתיק. כאשר מתמר אולטרסאונד ממוקם באמצע נמוך על הבטן, שלפוחית השתן והנרתיק גלויים. לאחר מכן סריקה איטית וחלקה בכיוון גולגולתי, לזהות את bifurcation של הנרתיק לתוך קרני הרחם שמאלה וימינה.סקר את קרני הרחם שמאלה וימינה. עד אמצע ההיריון, עוברי העכבר יהיו ממוקמים לאורך הפריפריה הימנית והשמאלית. ככל שהם גדלים, החלקים הדיסטליים יותר של הרחם והעוברים המתאימים שלהם יהפכו כלפי חוץ ודורסיים.פרוטוקול זה שימושי במיוחד בעת רבייה עכברים מהונדסים גנטית. בדרך כלל, הטרוזיגוזי עם צלבים הטרוזיגיים להניב צאצאים homozygous להוביל לכישלון של התפתחות נאותה, גרימת קטלניות טרום לידתית. עוברי עכבר בשלבים שונים של התפתחות מוצגים כאן.עוברי עכבר בשלב מוקדם, עוברים מתים, או עוברים resorbed עשויים להידמות איברים אחרים בבטן או צואה במעיים, בעוד לולאות מעיים עשוי לחקות את הרחם שאינו gravid. חלק מהחוקרים מעדיפים להשתמש מתמר רכוב שלב, כגון מוצג בתמונה זו, אבל אנחנו מעדיפים את שיטת כף היד של סריקה, שכן זה מאפשר הדמיה מהירה ויעילה בכל הבטן.

is-my-mouse-pregnant-high-frequency-ultrasound-assessment

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מוות עובר ולידה הוא תכונה נפוצה כאשר לומדים שינויים גנטיים המשפיעים על התפתחות לב. הדמית אולטרסאונד בתדר גבוה השתפרה רזולוצית 2-D ויכולה לספק מידע מצוין על התפתחות מוקדמת ולב היא שיטה אידיאלית כדי לזהות את ההשפעה על מבנה ותפקוד לב לפני המוות.

אקו העוברי Murine

בסרטון זה, אנו מדגימים אולטרה-סאונד בתדירות גבוהה כדי לדמיין אתרי השתלת עוברים במודל מורין בהריון. טכניקת הדמיה זו מזהה בהצלחה הריון בר קיימא ומאפיינת אתרי השתלת עוברים במהלך הריון מורין מוקדם.

אולטרה-סאונד בתדירות גבוהה מבוסס אפיון הריון מוקדם: טכניקה לחקר השתלת עוברים והתקדמות הריון במודל מורין בהריון

אולטרסאונד בתדירות גבוה במיוחד הוא כלי הדמיה חיה רב עוצמה כדי לבחון מומים לב בבעלי חיים קטנים. noninvasiveness שלו מאפשר שמירה על המצב הפיזיולוגי של עוברים. בזאת, אנו מציגים את השימוש באולטרסאונד M-mode כדי למדוד את קצב הלב של עוברים בE18.5 ברחם.

במדידת רחם של קצב לב בעכבר על ידי אקו M-המצב פולשנית

פרוטוקול זה מתאר את היישום של אולטרסאונד בתדר גבוה (HFUS) לבלוטות לימפה בצוואר הרחם עכבר הדמיה. טכניקה זו מייעלת הדמיה וכימות של מורפולוגיה בלוטה לימפה בצוואר הרחם, נפח וזרימת דם. ביופסיה מונחה הדמיה של בלוטות לימפה בצוואר הרחם ועיבוד של רקמה לימפה להערכה היסטולוגית הוא הוכיח גם.

בתדירות גבוהה אולטראסאונד הדמיה של בלוטות לימפה עכבר צוואר הרחם

עכברים נמצאים בשימוש נרחב ללמוד ביולוגיה הריונית. עם זאת, סיום ההריון נדרשת עבור מחקרים כאלה אשר מונע חקירות האורך, מחייבת השימוש במספר גדול של בעלי חיים. לכן, אנו מתארים שיטה לא פולשנית של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה לגילוי מוקדם ומעקב אחר האירועים שלאחר ההשתלה העכבר בהריון.

שימוש הרומן של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה תלת מימדי אפיון בתחילת ההריון העכבר

אולטראסאונד בתדירות גבוהה הדמיה של העכבר עוברית השתפרה דימות ברזולוציה, יכול לספק אפיון פולשני מדויק של התפתחות הלב, פגמים מבניים. פרוטוקול המתוארים במסמך זה מיועדת לביצוע בזמן אמת עוברי עכברים אקוקרדיוגרפיה ויוו.

הדמיה באמצעות מערכת סאונד בתדירות גבוהה (30 / 45MHZ) וכלי דם עוברי העכבר

כאן נתאר את הטכניקה של אולטראסאונד בתדירות גבוהה עבור ויוו ניתוח של העוברים בעכברים. שיטה זו מאפשרת את המעקב של עוברים הניתוח של היפרדות פרמטרים, כמו גם זרימת דם אימהי ו העובר במהלך ההריון.

אולטרסאונד בתדירות גבוהה לניתוח של התפתחות עוברית היפרדות In Vivo

פרוטוקול זה מתאר שיטה למעקב אחר התקדמות שינויים מורפולוגיים לאורך זמן ברחם במודל עכברי מושרה של סרטן רירית הרחם באמצעות הדמיית אולטרסאונד עם קורלציה לשינויים גסים והיסטולוגיים.

הערכת אולטרסאונד לא פולשנית של התקדמות סרטן רירית הרחם במחיקה מכוונת Pax8 של מדכאי הגידול Arid1a ו - Pten בעכברים

רישום סימולטני של פעילות אוטונומית והתנהגות אימהית מפורטת של עכברים אמהות מההריון ועד ההנקה הושג באמצעות מערכת טלמטריה. שיטה זו מסייעת להבין את הדינמיקה של המאפיינים הפיזיולוגיים וההתנהגותיים אצל אמהות מההריון ועד הגמילה.

ניתוח אלקטרוקרדיוגרמות והתנהגות בעכברים מתקופת ההריון ועד ההנקה

שינויים בזרימת הדם בשחלות בתקופה שלפני הביוץ חיוניים לביוץ. אולטרסאונד דופלר שימש בבני אדם ובבעלי חיים גדולים כדי להעריך המודינמיקה של השחלות וזלוף. מוצג פרוטוקול ליישום אולטרסאונד דופלר להערכת המודינמיקה של השחלות במהלך השלבים הקדם-ביוציים והפרי-ביוץ בעכברים.

אולטרסאונד דופלר להדמיה חיה וכימות של תפקוד כלי הדם בשחלות בעכברים

למדו להעריך הריון בעכברים באמצעות אולטראסאונד ברזולוציה גבוהה. שיטה זו מאפשרת זיהוי מדויק של מצב ההריון, גיל ההיריון והפסדי הריון, תוך הימנעות מטעויות הנגרמות על ידי ארטיפקטים בדימוי.

העכבר שלי בהריון? הערכת אולטראסאונד בתדר גבוה

גלה סרטונים נוספים