שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

התחדשות הביצית והליכי ההתחממות חיוניים לשימור פוריות. ביצוע פרוטוקול זה כפי שהודגם מאפשר למשתמש למקסם את האפקטיביות של הליכים אלה. שימור פוריות להתחדשות ביציות הוא כיום גישה מבוססת ומקובלת מבחינה אתית.

זה מאפשר להשיג תוצאות קליניות יעילות ועקביות ולהתגבר על המגבלה המוסרית והמשפטית הקשורה עם שימור קריופרציה עוברית. כדי להשיג מיומנות עם תהליך vitrification, חשוב להכיר את כל הנקודות הקריטיות של הפרוטוקול, לשים לב במיוחד לזמן החשיפה של הדגימות cryoprotectants. תוך 38 שעות מרגע האחזור ומיד לאחר ההקפאה, תייג את כל חומרי הפלסטיק עם שמו, תעודת הזהות וסוג הפתרון של המטופל, ובקש מעד לאשר את פרטי המטופל במכשיר ההקפאה.

כאשר כל האספקה תויגה, הפוך בזהירות כל מקטורן של ביציות מספר פעמים כדי לערבב ולהניח טיפה של 30 מיקרוליטר של מדיום חיץ HEPES בתוספת אלבומין סרום אנושי טיפה סמוכה 30 מיקרוליטר של פתרון שיווי משקל על צלחת פטרי. השתמש pipette חשפנית למקם את oocytes בטיפה הראשונה וליצור גשר של בינוני עד 30 טיפה מיקרוליטר של פתרון שיווי משקל כדי להשיג עלייה הדרגתית בריכוז של cryoprotectants. לאחר שלוש דקות, להוסיף טיפה שנייה 30 microliter של פתרון שיווי משקל לצלחת ולהשתמש pipette כדי ליצור גשר בינוני בין טיפות הפתרון.

בעוד ביוציטים הם שיווי משקל, להוסיף טיפה אחת 30 microliter של פתרון שיווי משקל עבור כל מכשיר קריו לשמש על הצלחת. לאחר שלוש דקות, להעביר את oocytes לתוך פתרון שיווי משקל טהור במשך שש עד תשע דקות כדי לאפשר את oocytes לחזור לגודל הראשוני שלהם. כאשר הביציות התאוששו, להכין צלחת IVF באר מרכזית המכילה מיליליטר אחד של פתרון vitrification.

מעבירים את היוציטים לצלחת במדיום קטן ככל האפשר ומעבירים אותם בזהירות כדי להסיר כל פתרון שיווי משקל עודף. כ-10 שניות לפני סיום הדגירה, הניחו מכשיר קריו המסומן במידע של המטופל מתחת למיקרוסקופ והתכוו את המיקוד בקצה מכשיר ההקפאה. מניחים את הביציות על מכשיר ההקפאה ליד הקצה בכמות המינימלית של פתרון vitrification ולהזיז את פיפטת החשפנית מן הביצית כדי להסיר כל פתרון vitrification עודף, משאיר את הביציות מכוסה בשכבה דקה של בינוני.

במהירות לצלול את מכשיר ההקפאה לתוך חנקן נוזלי במהירות לנער את המכשיר כדי להסיר את כל בועות אוויר מפני השטח שלה. מחזיק את מכסה המגן של מכשיר ההקפאה עם פינצטה, למלא את המכסה עם חנקן נוזלי לפני החדרת המכשיר לתוך המכסה תוך שמירה על רצועות פרופילן בחנקן נוזלי. לאחר מכן לאחסן את מכשיר ההקפאה ב visotube שכותרתו עם המידע של המטופל ולעדכן את גיליון המעבדה.

להתחממות ביציות, הפוך בקפידה כל מקטורינה של הפשרה, דילול ופתרון כביסה מחומם לטמפרטורת החדר, והוסיפו מיליליטר אחד של פתרון הפשרה לבאר המרכזית של צלחת פטרי לפחות שעה אחת דגירה ב 37 מעלות צלזיוס. תייג את כל אספקת הפלסטיק עם שמו ותעודת הזהות של המטופל וסוג הפתרון, ובקש מעד לאשר את פרטי המטופל במכשיר ההקפאה. כדי שכל מכשיר יתחמם, הוסיפו 200 מיקרוליטרים של תמיסת דילול לבאר הראשונה של צלחת שש בארות והוסיפו נפח שווה של תמיסת כביסה לבאר השנייה והשלישית של הצלחת.

הוסף PBS לאזור בצד החיצוני של הבארות כדי למנוע אידוי פתרון. מניחים את צלחת פתרון ההפשרה מתחת למיקרוסקופ הסטריאו ומתאימה את המיקוד למרכז המנה. יש לסובב בזהירות כדי להסיר את מכסה המגן של מכשיר קריו תוך שמירה על רצועות פרופילן בחנקן נוזלי ולהעביר את מכשיר ההקפאה מן החנקן הנוזלי לתוך פתרון הפשרה מהר ככל האפשר כדי למנוע את הסיכון של devitrification.

לאחר דקה אחת, התמקד בקצה מכשיר ההקפאה כדי לאתר את היוציטים ובסופו של דבר להשתמש בצינור חשפנית כדי לשחרר בעדינות את היוציטים מהמכשיר. השתמש פיפטה חשפנית בקוטר 170 מיקרון כדי להעביר את oocytes ונפח קטן של פתרון הפשרה לתוך פתרון דילול בבאר הראשונה של צלחת שש היטב. לאחר שלוש דקות, להעביר את oocytes לתוך הבאר הראשונה של פתרון כביסה במשך חמש דקות.

בסוף הדגירה, להעביר את oocytes לבאר השנייה של פתרון כביסה ודגור ב 37 מעלות צלזיוס במשך דקה אחת לפני העברת oocytes לתוך נפח מתאים של מדיום תרבות הפריה IVF pre-equilibrated במשך שעה אחת ועדכון גיליון המעבדה. במשך תקופה של 12 שנה, 285 נשים עברו לפחות אחזור ביציות אחד שנובע את ההבשלה של כל קבוצת הביצים הבוגרות שנאספו. רוב הנשים האלה עברו אחזור אחד.

35 עברו אחזורים מרובים. הסיבות לאחזור הביצית להתחדשות ביצים אופיינו בדרך כלל כרפואה מלבד סרטן, סרטן, לא רפואי ואחרים. חולים עם סיבה רפואית לvitrification ביצים וחולים שעברו שימור פוריות בגלל סרטן היו צעירים יותר והראו ספירת זקיקים אנטרלי גבוה יותר מאשר חולים עם סיבות לא רפואיות או אחרות.

עם זאת, מכיוון ששיעורי ההבשלה הממוצעים היו מעט נמוכים יותר בסיבות הרפואיות, מספר היוציטים שהובטחו בממוצע היה דומה בין הקבוצות. כמחצית מהחולים עם סיבות רפואיות שאינן סרטן, ורוב החולים עם סיבות אחרות להתחדשות ביצים חזרו למעשה להתחממות. לעומת זאת, מעט מאוד חולים אשר עברו שימור פוריות לסרטן או מסיבות לא רפואיות השתמשו הביציות שלהם עבור הפריה חוץ גופית.

למרות ההבדלים בזמן שחלפו בין vitrification והתחממות, שיעור ההישרדות של הביציות היה דומה בין קבוצות המטופל, המאשר את היעילות והבטיחות של vitrification הביצית והתחממות פרוטוקולים. יתר על כן, שיעור ההישרדות היה בלתי תלוי בחוויה של מפעיל ההתחדשות וההתחממות. הצעדים המכריעים ביותר שעשויים להשפיע על עקביות התוצאות הם אלה הקשורים להתחממות.

לכן, חשוב מאוד לשלוט בזהירות בנפח ובטמפרטורה של פתרונות ההפשרה. הקפאה של רקמת השחלות האסטרטגיה היחידה שנמצאת כרגע תחת חקירה כאופציה עבור חולים לפני גיל ההתבגרות. למרות הבטחה, גישה זו יש מגבלה חשובה אשר הגבילה את היישום שלה.