Name: שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: למד את פרוטוקולי הוויטריפיקציה והחימום של אוציטים לשימור פוריות. שיטה זו מספקת תוצאות קליניות עקביות ומאפשרת להתגבר על מגבלות אתיות הקשורות בהקפאת עוברים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין מה לחשוף.

שיקולים קליניים 
למרות אסטרטגיות המתעוררות, כגון קריופרה של רקמת השחלות והבשלת הפריה חוץ גופית, נחקרו, vitrification oocyte לאחר COS היא טכניקה סטנדרטית זהב לשימור פוריות. בתרחיש זה, מספר הביציות שאוחזרו והקפאה צריך להיות מוגדל בזמן הקצר ביותר האפשרי כמו רוב חולי הסרטן עשויים להפיק תועלת אך ורק ממחזור שחלות אחד לפני שהם צריכים להתחיל את הטיפול בסרטן שלהם(ים). לכן, פרוטוקול גירוי שחלות תקין הוא חיוני כדי לנצל באופן מלא את עתודת השחלות ולהגדיל את הסיכוי המצטבר של לידה חיה בעתיד<...

פיתוח ויישום של תוכנית הקפאה יעילה עבור ביציות אנושיות היוו פריצת דרך משמעותית ברפואת הרבייה. על פי עדויות אחרונות, vitrification היא האסטרטגיה היעילה ביותר כדי cryopreserve metaphase II (MII) ביציות, כפי שהוא מביא שיעורי הישרדות גבוהים יותר סטטיסטית לעומת הקפאה איטית, ללא תלות באוכלוסיית המטופלים(חוליםעקרים או תוכנית תרומת ביציות) 1,2,3. ההישגים המדהימים של vitrification oocyte הובילו את ועדות התרגול של האגודה האמריקאית לרפואת פוריות (ASRM) והאגודה לטכנולוגיית פוריות בסיוע (SART) לבטא טכניקה זו כיעילה ביותר לשימור פוריות אלקטיבית אצל נשים לאחר הפוסט-pubertal, עבור אינדיקציות רפואיות ולא רפואיות4,5,6. אינדיקציות רפואיות לשימור פוריות כוללות (i) סרטן ומחלות אוטואימוניות הדורשות טיפולים7 כגון הקרנות, כימותרפיה ציטוטוקסית וטיפול אנדוקריני (שהשפעתו המזיקה על שמורת השחלות קשורה לגיל אימהי כמו גם לסוג ומינון הטיפול); (ii) מחלות השחלות הדורשות ניתוח חוזר או רדיקלי (כגון אנדומטריוזיס)8; וכן (iii) תנאים גנטיים (למשל, שברירי X) או אי ספיקת שחלות מוקדמת. בנוסף, שימור פוריות הפך לאופציה חשובה עבור כל הנשים שלא השיגו את מטרתן ההורית מסיבות שאינן רפואיות (הידועות גם בשם הקפאה חברתית).
ללא קשר לאינדיקציה לשימור פוריות ועל פי ההנחיות הבינלאומיות העיקריות לשמירה על פוריות, כל המטופלים המוכנים להמחיש את הביציות שלהם צריכים לקבל ייעוץ מתאים כדי לקבל מידע על סיכוייהם הריאליים להצלחה, העלויות, הסיכונים והמגבלות של ההליך9,10,11,12,13. והכי חשוב, זה צריך להיות ברור כי vitrifying קבוצה של ביציות MII אינו מבטיח הריון, אבל זה מציע סיכוי גבוה יותר להצלחה בעתיד הפריה חוץ גופית (הפריה חוץ גופית) טיפול, במידת הצורך14. בהקשר זה, גיל האישה בזמן vitrification הביצית הוא ללא ספק הגורם המגביל החשוב ביותר15 כמו גיל אימהי מתקדם (AMA; >35 שנים) הוא הגורם העיקרי לאי פוריות נשית16. מלבד הפחתה הדרגתית בשמורת השחלות, AMA קשורה לפגיעה בכשירות הביצית עקב מסלולים פיזיולוגיים פגומים כגון חילוף חומרים, רגולציה אפיגנטית, מחסומי מחזור תאים והפרדה מיוטית17. לכן, המספר הסביר של ביצים כדי לvitrify תלוי בעיקר בגיל האימהי. אצל נשים מתחת לגיל 36, לפחות 8-10 ביוצים18 נדרשים כדי למקסם את סיכויי ההצלחה. באופן כללי, ככל שמספר היוציטים גבוה יותר, כך גדל הסיכוי להצלחה. לכן, התאמת גירוי השחלות על פי סמני עתודה השחלות כגון רמות הורמון אנטי מולרי (AMH) או ספירת זקיק אנטרלי (AFC) חיוני כדי לנצל באופן מלא את עתודת השחלות בזמן הקצר ביותר האפשרי.
הבטיחות של ההליך כולו היא הנושא המרכזי השני בעת רישום חולים לשימור פוריות. רופאים צריכים להשתמש באסטרטגיות הטובות ביותר כדי למזער את הסיכונים ולמנוע (i)תסמונת גירוי יתר השחלות (OHSS) באמצעות גישות בטוחות כגון הורמון משחרר גונדוטרופין (GnRH) פרוטוקול אנטגוניסט ואחריו גורם אגוניסט GnRH19 ו -(ii) את המרוחק, עדיין אפשרי, סיכונים של דימום צפק, פגיעה במבני האגן (השופכן, המעי, נספח, עצבים), או זיהום באגן במהלך אחזור ביציות. לבסוף, (iii) משטרים מסורתיים לגירוי קשורים אסטרדיול סרום סופרפיזיולוגי ולכן, אינם מומלצים במחלות רגישות לאסטרוגן כגון סרטן השד. פרוטוקולים מעורבים מעכבי ארומטאז (כגון letrozole או טמוקסיפן) מתאימים יותר במקרים אלה20,21. בסביבת המעבדה, הפרוטוקול הנפוץ ביותר עבור vitrification oocyte הוא עדיין אחד שתואר לראשונה על ידי Kuwayama ועמיתיו 2,23, אשר מורכבהליךצעד הכולל תוספת הדרגתית של cryoprotectants (CPAs). בשלב הראשון (שיווי משקל/התייבשות), ביציות נחשפות בתמיסת רו"ח המכילה 7.5% v/v אתילן גליקול ו-7.5% v/v דימתיל סולפוקסיד (DMSO), ואילו בשלב השני, ביציות מועברות לתמיסת vitrification עם 15% v/v אתילן גליקול ו-15% v/v DMSO, בתוספת 0.5 סול/ל סוכרוז. לאחר דגירה קצרה באמצע של vitrification, הביציות ניתן להציב ב קריודוויצים מעוצבים במיוחד, פתוח ולבסוף צללו חנקן נוזלי ב -196 °C כדי להיות מאוחסן עד השימוש.
כאן, כל העבודה הקלינית והמעבדה של טיפול לשימור פוריות תוארה על ידי (1) מתווה המלצות לייעוץ אובייקטיבי ומבוסס ראיות, (ii) תוך התמקדות בעלויות האפקטיביות של ההליך, ו-(iii) תיאור האסטרטגיות המתאימות ביותר לניצול מלא של עתודת השחלות ולמקסם את מספר הביציות שאוחזרו בזמן הקצר ביותר האפשרי. הערכת עתודת השחלות, ההגדרה של פרוטוקול גירוי אידיאלי, כמו גם הליכי אחזור ביציות, גינוי והתחדשות יפורטו יחד עם גישות כדי למקסם את היעילות שלהם, יעילות, ובטיחות. מאחר שפרוטוקולים או התאמות אחרות של פרוטוקול זה קיימות בספרות, התוצאות הייצוגיות וסעיפי הדיון בכתב יד זה חלים רק על הליך זה.

<table><tbody><tr><td>Collection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>IVF TECH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lab Markers</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A זרימת אוויר</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>מדחום</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מבחנה מבחנה חממה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תלת-גז</td><td>Panasonic</td><td>MCO-5M-PE</td><td>02/CO2</td></tr><tr><td>משאבת ואקום</td><td>בישול</td><td>K-MAR-5200</td><td></td></tr><tr><td>חומרים מתכלים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CSCM (Continuos תרבית יחידה הושלמה) בינוני</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90165</td><td>מדיום תרבית IVF בתוספת</td></tr><tr><td>שמן מינרלי HSA לתרבית עוברים</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>מחט שאיבת ביצית (לומן יחיד)</td> <td>Cook</td><td>K-OSN-1730-B-60</td><td></td></tr><tr><td>Primaria Dish</td><td>Corning</td><td>353803</td><td>Corning Primaria Dish 100x20 מ"מ צלחת תרבית תאים סטנדרטית בסגנון 100x20 מ"מ</td></tr><tr><td>צינורות עגולים תחתונים בז</td><td></td><td>352001</td><td>פלקון 14 מ"ל מבחנה פוליסטירן תחתון עגול עם מכסה הצמד</td></tr><tr><td>צינורות עגולים תחתונים</td> צינורות איסוף <td>ביציות פלקון</td><td>352003</td><td>/ פלקון 5 מ"ל 12x75 מבחנה פוליפרופילן תחתונה עגולה עם מכסה הצמד</td></tr><tr><td>נורת גומי</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>Z111589-12EA</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטר מזכוכית סטרילית</td><td>האנטר סיינטיפיק</td><td>PPB150-100PL</td><td>פיפטה פסטר קוטונאטה, 150 מ"מ, MEA e CE</td></tr><tr><td><חזק>צמצום</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 אינקובטור</td><td>אפנדורף</td><td>גלקסי 14S</td><td></td></tr><tr><td>Flexipet סט ידיות מתכוונן</td><td>קוק</td><td>G18674</td><td>חשפנית&nbsp; מחזיק</td></tr><tr><td>גילסון פיפטמן</td><td>גילסון</td><td>66003</td><td>p20</td></tr><tr><td>k-System Incubator</td><td>Coopersurgical</td><td>G210Invicell</td><td></td></tr><tr><td>סמני מעבדה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מכסה מנוע זרימה למינארי</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A זרימת אוויר</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>חומרים מתכלים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS מתלה</td><td>אפנדורף</td><td>30075331</td><td>מיקרופיפטות epTIPS Biopur 2-200 ומיקרו; l</td></tr><tr><td>סרום אנושי אלבומין</td><td>thermoFisher Scietific</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td>80 IU/mL של אנזים היאלורונידאז בצלחת תרבית HTF IVF חוצץ HEPES</td></tr><tr><td>(60 x 15 מ"מ)</td> <td>קורנינג</td><td>353802</td><td>קורנינג פרימריה פלקון צלחת 60X15 מ"מ TC Primaria צלחת תרבית תאים סטנדרטית</td></tr><tr><td>צלחת IVF צלחת 4 בארות עם מכסה הזזה</td><td>ThermoFisher Scietific</td><td>176740</td><td>Multidish 4 בארות (Nunc)</td></tr> <tr><td>IVF צלחת באר אחת</td><td>Falcon</td><td>353653</td><td>Falcon 60 x 15 מ"מ TC מטופל במרכז באר IVF</td></tr><tr><td>שמן מינרלי לתרבית עובר</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>שונה HTF בינוני</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90126</td><td>נורת גומי בינונית חוצצת HEPES</td></tr><tr><td></td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>Z111589-12EA</td><td>1 מ"ל עבור פיפטות פסטר</td></tr><tr><td>פיפטות פסטר זכוכית סטרילית</td><td>האנטר סיינטיפיק</td><td>PPB150-100PL</td><td>פיפטה פסטר קוטונאטה, 150 מ"מ, MEA e CE</td></tr><tr><td>פיפטה הפשטה&nbsp; טיפים (140 ומיקרו; m)</td> <td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-6</td><td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td></tr><tr><td>קצות פיפטה הפשטה (130 ומיקרו; מ )</td> <td>Cook</td><td>K-FPIP-1130-10BS-7</td><td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td></tr><tr><td>קצות פיפטה הפשטה (170 ומיקרו; מ)</td> <td>בישול</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td>פיפטה FLEXIPETS לכל DENUDING</td></tr><tr><td><חזק>ויטריפיקציה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אלקטרוני טיימר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet סט ידית מתכוונן</td><td>בישול</td><td>G18674</td><td>חשפנית&nbsp; מחזיק</td></tr><tr><td>גילסון פיפטמן</td><td>גילסון</td><td>F123601</td><td>p200</td></tr><tr><td>סמני מעבדה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קולט אדים זרימה למינרית</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>דרגה מיכל אל</td></tr><tr><td>חלד זרימת אוויר לקירור מתלה</td><td>Kitazato</td><td></td><td>מיכל חנקן נוזלי לזיגוג</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>חומרים מתכלים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS מתלה</td><td>אפנדורף</td><td>30075331</td><td>מיקרופיפטות epTIPS Biopur 2-200 ומיקרו; L</td></tr><tr><td>סרום אנושי אלבומין</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית IVF (60 x 15 מ"מ)</td><td>קורנינג</td><td>353802</td><td>קורנינג פרימריה פלקון צלחת 60 x 15 מ"מ TC Primaria צלחת תרבית תאים</td></tr><tr><td>סטנדרטית צלחת IVF 6 בארות</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-SW02</td><td>OOSAFE&nbsp; 6 צלחת באר עם מחזיק קש</td></tr><tr><td>שונה HTF בינוני</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90126</td> קצות פיפטה <td>בינוניים עם HEPES-Buffered</td></tr><tr><td>(170 ומיקרו; m)</td> <td>Cook</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td></tr><tr><td>ערכת הקפאת ויטריפיקציה</td><td>Fujifilm Irvine</td><td>Scientific 90133-so</td><td>2 בקבוקונים של ES (תמיסת שיווי משקל, 2 x 1 מ"ל) ו-2 בקבוקונים של VS (תמיסת ויטריפיקציה, 2 x 1 מ"ל)</td></tr><tr><td>Vitrifit</td><td>Coopersurgical Origio</td><td>42782001A</td><td>VitriFit&nbsp; קופסה</td></tr><tr><td><חזק>חימום</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אלקטרוני טיימר</td><td></td><td></td><td></td>סט</tr><tr><td>ידית מתכווננת Flexipet</td><td>קוק</td><td>G18674</td><td>חשפנית&nbsp; מחזיק</td></tr><tr><td>גילסון פיפטמן</td><td>גילסון</td><td>F123601</td><td>p200</td></tr><tr><td>k-System Incubator</td><td>Coopersurgical</td><td>G210Invicell</td><td></td></tr><tr><td>Lab Markers</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A</td></tr><tr><td>זרימת אוויר מיכל אל חלד לקירור</td><td>Kitazato</td><td></td><td>מיכל חנקן נוזלי לזיגוג</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>חומרים מתכלים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS מתלה</td><td>אפנדורף</td><td>30075331</td><td>מיקרופיפטות epTIPS Biopur 2-200 ומיקרו; L</td></tr><tr><td>CSCM (Continuos תרבית יחידה שלמה) בינוני</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90165</td><td>מדיום תרבית IVF בתוספת</td></tr><tr><td>צלחת תרבית HSA IVF (60 x 15 מ"מ)</td> <td>קורנינג</td><td>353802</td><td>קורנינג פרימריה פלקון צלחת 60X15 מ"מ TC Primaria צלחת תרבית תאים סטנדרטית</td></tr><tr><td>צלחת IVF צלחת 4 בארות עם מכסה הזזה</td><td>ThermoFisher Scietific</td><td>176740</td><td>Multidish 4 בארות (Nunc)</td></tr> <tr><td>צלחת IVF 6 בארות</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-SW02</td><td>OOSAFE&reg; &nbsp; 6 צלחת באר עם מחזיק קש</td></tr><tr><td>שמן מינרלי לתרבית עוברים</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה (300&micro; מ)</td> <td>קוק</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>פיפטה פלקסיפטים לכל</td></tr><tr><td>ערכת הפשרה של ויטריפיקציה</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90137-so</td><td>4 בקבוקונים של TS (תמיסת הפשרה, 4 x 2 מ"ל) + 1 בקבוקון DS (תמיסת דילול, 1 x 2 מ"ל) +1 בקבוקון WS (תמיסת כביסה, 1 x 2 מ"ל)</td></tr></tbody></table>

שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

שמירה על פוריות האישה חיונית במערכת בריאות רב תכליתית המטפלת באיכות החיים העתידית של המטופלים. שימור קריופרציה של Oocyte מוכר על ידי מספר חברות מדעיות בינלאומיות כסטנדרט הזהב לשימור פוריות אצל נשים לאחר הפוסט-פוסט-פוסט-רפואיות, הן עבור אינדיקציות רפואיות והן עבור אינדיקציות לא רפואיות. הסימנים הרפואיים העיקריים הם מחלות אונקולוגיות, מחלות גניקולוגיות כגון אנדומטריוזיס חמור, מחלות מערכתיות המתפשרות על שמורת השחלות, ותנאים גנטיים הכרוכים בגיל המעבר בטרם עת. מאמר זה מתאר את כל העבודה הקלינית והמעבדה של טיפול לשימור פוריות על ידי מתווה המלצות לייעוץ אובייקטיבי ומבוסס ראיות. יתר על כן, הוא מתמקד ביעילות ההליך ומתאר את האסטרטגיות המתאימות ביותר לנצל באופן מלא את עתודת השחלות ולמקסם את מספר הביציות שאוחזרו בזמן הקצר ביותר האפשרי. הערכת עתודת השחלות, ההגדרה של פרוטוקול גירוי אידיאלי, כמו גם הליכי אחזור ביציות, גינוי ו- vitrification פורטו יחד עם גישות כדי למקסם את היעילות שלהם, יעילות, ובטיחות.

סקירה כללית של התוכנית לשימור פוריות במרכז
במשך תקופה של 12 שנים (2008-2020), 285 נשים עברו לפחות אחזור ביציות אחד שנובע את ההבשלה של כל קבוצת הביצים הבוגרות שנאספו. רוב הנשים הללו (n=250) עברו אחזור אחד, ו-35 עברו אחזורים מרובים. הסיבות לאחזור הביצית לוויטוריזציה של ביצים מסוכמות ל-4 קטגוריות: רפואי (למעט סרטן), סרטן, לא רפואי ועוד. בין 250 הנשים שעברו בדיקת ביציות אחת לוויטוריזציה של ביצים, ל-8% היו סיבות רפואיות מלבד סרטן (10 אנדומטריוזיס, 3 מיומה, 4 ציסטות שחלות, 1 הידרוסל...

שימור קריופרציה של Oocyte מוכר על ידי מספר חברות מדעיות בינלאומיות כסטנדרט הזהב לשימור פוריות אצל נשים לאחר הפוסט-פוסט-פוריות. אסטרטגיות קליניות ומעבדות מתאימות מבטיחות יעילות מרבית, יעילות ובטיחות של טיפולי שימור פוריות.

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

התחדשות הביצית והליכי ההתחממות חיוניים לשימור פוריות. ביצוע פרוטוקול זה כפי שהודגם מאפשר למשתמש למקסם את האפקטיביות של הליכים אלה. שימור פוריות להתחדשות ביציות הוא כיום גישה מבוססת ומקובלת מבחינה אתית.זה מאפשר להשיג תוצאות קליניות יעילות ועקביות ולהתגבר על המגבלה המוסרית והמשפטית הקשורה עם שימור קריופרציה עוברית. כדי להשיג מיומנות עם תהליך vitrification, חשוב להכיר את כל הנקודות הקריטיות של הפרוטוקול, לשים לב במיוחד לזמן החשיפה של הדגימות cryoprotectants. תוך 38 שעות מרגע האחזור ומיד לאחר ההקפאה, תייג את כל חומרי הפלסטיק עם שמו, תעודת הזהות וסוג הפתרון של המטופל, ובקש מעד לאשר את פרטי המטופל במכשיר ההקפאה.כאשר כל האספקה תויגה, הפוך בזהירות כל מקטורן של ביציות מספר פעמים כדי לערבב ולהניח טיפה של 30 מיקרוליטר של מדיום חיץ HEPES בתוספת אלבומין סרום אנושי טיפה סמוכה 30 מיקרוליטר של פתרון שיווי משקל על צלחת פטרי. השתמש pipette חשפנית למקם את oocytes בטיפה הראשונה וליצור גשר של בינוני עד 30 טיפה מיקרוליטר של פתרון שיווי משקל כדי להשיג עלייה הדרגתית בריכוז של cryoprotectants. לאחר שלוש דקות, להוסיף טיפה שנייה 30 microliter של פתרון שיווי משקל לצלחת ולהשתמש pipette כדי ליצור גשר בינוני בין טיפות הפתרון.בעוד ביוציטים הם שיווי משקל, להוסיף טיפה אחת 30 microliter של פתרון שיווי משקל עבור כל מכשיר קריו לשמש על הצלחת. לאחר שלוש דקות, להעביר את oocytes לתוך פתרון שיווי משקל טהור במשך שש עד תשע דקות כדי לאפשר את oocytes לחזור לגודל הראשוני שלהם. כאשר הביציות התאוששו, להכין צלחת IVF באר מרכזית המכילה מיליליטר אחד של פתרון vitrification.מעבירים את היוציטים לצלחת במדיום קטן ככל האפשר ומעבירים אותם בזהירות כדי להסיר כל פתרון שיווי משקל עודף. כ-10 שניות לפני סיום הדגירה, הניחו מכשיר קריו המסומן במידע של המטופל מתחת למיקרוסקופ והתכוו את המיקוד בקצה מכשיר ההקפאה. מניחים את הביציות על מכשיר ההקפאה ליד הקצה בכמות המינימלית של פתרון vitrification ולהזיז את פיפטת החשפנית מן הביצית כדי להסיר כל פתרון vitrification עודף, משאיר את הביציות מכוסה בשכבה דקה של בינוני.במהירות לצלול את מכשיר ההקפאה לתוך חנקן נוזלי במהירות לנער את המכשיר כדי להסיר את כל בועות אוויר מפני השטח שלה. מחזיק את מכסה המגן של מכשיר ההקפאה עם פינצטה, למלא את המכסה עם חנקן נוזלי לפני החדרת המכשיר לתוך המכסה תוך שמירה על רצועות פרופילן בחנקן נוזלי. לאחר מכן לאחסן את מכשיר ההקפאה ב visotube שכותרתו עם המידע של המטופל ולעדכן את גיליון המעבדה.להתחממות ביציות, הפוך בקפידה כל מקטורינה של הפשרה, דילול ופתרון כביסה מחומם לטמפרטורת החדר, והוסיפו מיליליטר אחד של פתרון הפשרה לבאר המרכזית של צלחת פטרי לפחות שעה אחת דגירה ב 37 מעלות צלזיוס. תייג את כל אספקת הפלסטיק עם שמו ותעודת הזהות של המטופל וסוג הפתרון, ובקש מעד לאשר את פרטי המטופל במכשיר ההקפאה. כדי שכל מכשיר יתחמם, הוסיפו 200 מיקרוליטרים של תמיסת דילול לבאר הראשונה של צלחת שש בארות והוסיפו נפח שווה של תמיסת כביסה לבאר השנייה והשלישית של הצלחת.הוסף PBS לאזור בצד החיצוני של הבארות כדי למנוע אידוי פתרון. מניחים את צלחת פתרון ההפשרה מתחת למיקרוסקופ הסטריאו ומתאימה את המיקוד למרכז המנה. יש לסובב בזהירות כדי להסיר את מכסה המגן של מכשיר קריו תוך שמירה על רצועות פרופילן בחנקן נוזלי ולהעביר את מכשיר ההקפאה מן החנקן הנוזלי לתוך פתרון הפשרה מהר ככל האפשר כדי למנוע את הסיכון של devitrification.לאחר דקה אחת, התמקד בקצה מכשיר ההקפאה כדי לאתר את היוציטים ובסופו של דבר להשתמש בצינור חשפנית כדי לשחרר בעדינות את היוציטים מהמכשיר. השתמש פיפטה חשפנית בקוטר 170 מיקרון כדי להעביר את oocytes ונפח קטן של פתרון הפשרה לתוך פתרון דילול בבאר הראשונה של צלחת שש היטב. לאחר שלוש דקות, להעביר את oocytes לתוך הבאר הראשונה של פתרון כביסה במשך חמש דקות.בסוף הדגירה, להעביר את oocytes לבאר השנייה של פתרון כביסה ודגור ב 37 מעלות צלזיוס במשך דקה אחת לפני העברת oocytes לתוך נפח מתאים של מדיום תרבות הפריה IVF pre-equilibrated במשך שעה אחת ועדכון גיליון המעבדה. במשך תקופה של 12 שנה, 285 נשים עברו לפחות אחזור ביציות אחד שנובע את ההבשלה של כל קבוצת הביצים הבוגרות שנאספו. רוב הנשים האלה עברו אחזור אחד.35 עברו אחזורים מרובים. הסיבות לאחזור הביצית להתחדשות ביצים אופיינו בדרך כלל כרפואה מלבד סרטן, סרטן, לא רפואי ואחרים. חולים עם סיבה רפואית לvitrification ביצים וחולים שעברו שימור פוריות בגלל סרטן היו צעירים יותר והראו ספירת זקיקים אנטרלי גבוה יותר מאשר חולים עם סיבות לא רפואיות או אחרות.עם זאת, מכיוון ששיעורי ההבשלה הממוצעים היו מעט נמוכים יותר בסיבות הרפואיות, מספר היוציטים שהובטחו בממוצע היה דומה בין הקבוצות. כמחצית מהחולים עם סיבות רפואיות שאינן סרטן, ורוב החולים עם סיבות אחרות להתחדשות ביצים חזרו למעשה להתחממות. לעומת זאת, מעט מאוד חולים אשר עברו שימור פוריות לסרטן או מסיבות לא רפואיות השתמשו הביציות שלהם עבור הפריה חוץ גופית.למרות ההבדלים בזמן שחלפו בין vitrification והתחממות, שיעור ההישרדות של הביציות היה דומה בין קבוצות המטופל, המאשר את היעילות והבטיחות של vitrification הביצית והתחממות פרוטוקולים. יתר על כן, שיעור ההישרדות היה בלתי תלוי בחוויה של מפעיל ההתחדשות וההתחממות. הצעדים המכריעים ביותר שעשויים להשפיע על עקביות התוצאות הם אלה הקשורים להתחממות.לכן, חשוב מאוד לשלוט בזהירות בנפח ובטמפרטורה של פתרונות ההפשרה. הקפאה של רקמת השחלות האסטרטגיה היחידה שנמצאת כרגע תחת חקירה כאופציה עבור חולים לפני גיל ההתבגרות. למרות הבטחה, גישה זו יש מגבלה חשובה אשר הגבילה את היישום שלה.

fertility-preservation-through-oocyte-vitrification-clinical

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

MicroSecure Vitrification פותחה כמערכת התקני ויטריפיקציה סגורה אספטית לא מסחרית התואמת לשיטות הייצור והטיפול ברקמות של ה-FDA. עקב הוצאת קשיות עובר סתומות הידרופוביות מהתעשייה, הליך הזיגוג שונה כך שיכלול אטם פנימי לפני פקק הכותנה הפנימי הסטנדרטי.

Vitrification MicroSecure השתנה: כספת, פשוט מאוד נוהל Cryopreservation אפקטיבי עבור blastocysts אנוש

כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור אמצעי האחסון המינימלי של ויטריפיקציה של חתולים בלתי בוגרים עם מדיה מתוצרת מעבדה על תמיכות מסחריות. הוא מכסה כל צעד מ oocyte בידוד מ vivo גונדות לשעבר כדי ויטריפיקציה והתחממות.

כמות מינימלית של ויטריפיקציה של חתולים לא בוגרים

אנו מציגים פרטים של נהלי מעבדה להפעלה במבחנה ללא סמים (IVA) של זקיקי השחלות לחולים עם תפקוד לקוי של השחלות חמורות. שיטה זו יכולה להגדיל את מספר ביציות לאחזור לכל hyperstimulation השחלות לטובת שימור פוריות עבור חולים אלה.

שימור פוריות בחולים עם תפקוד לקוי של השחלות חמורות

הפרוטוקול נועד לספק שיטה סטנדרטית לרטט של ביציות כבשים בוגרות וצעירות. הוא כולל את כל השלבים מהכנת אמצעי ההבשלה במבחנה לתרבות שלאחר ההתחממות. אוציטים עוברים רטט בשלב MII באמצעות Cryotop כדי להבטיח את עוצמת הקול החיונית המינימלית.

ויטריפיקציה של אין ויטרו התבגר אוציטס שנאספו מן השחלות למבוגרים טרום-פוברטל בכבשים

מוצג פרוטוקול לוויטריפיקציה של רקמת השחלה, כשיטת שימור הקפאה חלופית להקפאה איטית הנפוצה.

ויטריפיקציה של רקמת קליפת המוח השחלתית להשגת מצב זגוגי של צבירה

פרוטוקול זה מתאר שיטות סטנדרטיות לבידוד ועיבוד נוזל זקיקים, תאים סומטיים וביציות לא בשלות מהליכי הפריה חוץ גופית, המאפשרים ניתוחים מולקולריים ותאיים באיכות גבוהה. גישות אלו תומכות במחקר תרגומי על פוריות, הזדקנות רבייה ותפקוד לקוי של השחלות באמצעות חומרים המושלכים בדרך כלל בטיפול קליני.

אוסף נוזל זקיקי אנושי, תאים סומטיים של זקיקים וביציות לא בשלות מאנשים העוברים הפריה חוץ גופית

פרוטוקול זה משמש להערכת משתני הליכה מרחביים וזמניים של חולים נוירולוגיים/אורטופדיים ואנשים מבוגרים באמצעות מערכת תאים פוטו-תאים מבוססת רצפה שהוצגה לאחרונה.

הערכה קלינית של פרמטרי ההליכה Spatiotemporal בחולים ומבוגרים

אנו מתארים שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד אנושיים בטמפרטורת subnormothermic (21 מעלות צלזיוס).

אדם תפקודי כבד שימור ושחזור על ידי אמצעי Subnormothermic מכונת זלוף

כאן נתאר את הטכניקה של ברוק אינדוקציה. פרוטוקול זה גם מסביר את ברוק עיבוד כדי לבצע ספירה מבדלת תא וכדי לאסוף sputum supernatant תאים עבור ניתוח נוסף.

מתודולוגיה Sputum אינדוקציה ועיבוד מעבדה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביצוע intracapsular רוטרי-קאט שגרת (IRCP), ששונה לפרוסקופיה intracapsular myomectomy לקידום שימור פוריות.

מבוא מההליכים רוטרי-קאט Intracapsular (IRCP): A שונו נהלים Hysteromyomectomy בקידום שימור פוריות

למד את פרוטוקולי הוויטריפיקציה והחימום של אוציטים לשימור פוריות. שיטה זו מספקת תוצאות קליניות עקביות ומאפשרת להתגבר על מגבלות אתיות הקשורות בהקפאת עוברים.

שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

גלה סרטונים נוספים