הקלטה אלקטרוקורטיקוגרפית של אזורי קליפת המוח מניפולציה באמצעות וירוס הקשור אדנו מיקוד Cofilin בעכברים

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לזהות את התפקיד של מטרות מולקולריות בודדות ספציפיות ברגולציה של פעילות אלקטרוקורטיקוגרפית במהלך מצבי Vigilin שונים. בין היתרונות של שימוש בווירוס הקשור לאדנו הוא היכולת למקד במדויק אזור מוח נתון וסוג תא מסוים. מדגים את הפרוטוקול יהיה ז'וליאן דופור-ג'רווייס, עמית מחקר מהצוות שלי.

לאחר אישור חוסר תגובה לרפלקס צביטת בוהן בעכבר מרדים בן 12 שבועות, השתמש בגוזם שיער כדי לגלח את השיער מהחלק האחורי של האוזניים לקדמת הראש בין העיניים. הוסף טיפה נדיבה של משחה עיניים לכל עין כדי למנוע התייבשות ולהשתמש בסורגי האוזניים כדי לתקן בזהירות את ראש העכבר על מנגנון סטריאוטקסי. מוציאים בעדינות את הלשון מהפה כדי למנוע חנק.

תקן את האף של העכבר למנגנון והשתמש 70% אתנול כדי לחטא את העור החשוף על הראש. מחזיק את העור עם מלקחיים Graefe בסדר גמור, להשתמש במספריים רקמה כדי לחתוך את העור מבסיס האוזניים לרמת העיניים ומניחים שני מלחציים כירורגיים בכל צד של החתך כדי למתוח את העור ולחשוף את הגולגולת. הימנעות תפרי מוח, להשתמש קצה מספריים כדי לגרד את פני הגולגולת כדי להסיר את periosteum וליצור פסים חופפים בשני כיוונים או יותר.

השתמש 70% אתנול כדי להסיר את שברי העצם ולחטא את הגולגולת. עם צינורית שהוכנה בעבר קבועה לזרוע הסטריאוטקסית, זהה את המיקום של bregma ו lambda ולשים לב הקואורדינטות סטריאוטקסיות של כל אחד. השתמש בזרוע סטריאוטקסית ובעט כדי לסמן את המיקום של הצינורית על הגולגולת 1.5 מילימטרים לרוחב ימינה לקו האמצע ו 1.5 מילימטרים קהור ברגמה.

באמצעות מקדחה 0.7 מילימטר, בזהירות לנקב את הגולגולת במיקום המסומן בניצב המנוטרל אל פני הגולגולת מיושר עם הציר האנכי לשטוף את הגולגולת עם קצה כותנה סטרילי ספוג בתמיסת יוד 10%betadine povidone, ולאחר מכן לסגת הבוכנה של מזרק 10 microliter על ידי microliter אחד לטעון את הצינורית עם בועת אוויר microliter אחד. לאחר מכן, מערבבים את תערובת AAV של עניין עם צינורות איטיים ולהוסיף 1.7 microliters של התערובת לצלחת פטרי סטרילית. השתמש מזרק זה לטעון 1.5 microliters של הפתרון לתוך הצינורית ולסמן את המיקום של בועת האוויר על צינור PE50 מחובר.

יישור אנכי של הצינורית עם החור בגולגולת כך שהקבלן מגיע לקצה העליון של העצם ומסמן את קואורדינטת Z של משטח הגולגולת. הורידו לאט את הצינורית עד שהקצה יגיע ל-1.5 מילימטרים מתחת לפני הגולגולת ושכבה חמש של קליפת המוח המוטורית והתחלו את משאבת המזרק בקצב זרימה של 0.025 מיקרו-דקה כדי לספק מיקרוליטר אחד של AAV במשך 40 דקות. השתמש בועת האוויר בצינור כדי לעקוב אחר ההזרקה, ביצוע כל התאמות לפי הצורך.

כאשר כל נפח הנגיף נמסר, להשאיר את הצינורית במקום במשך חמש דקות כדי להבטיח דיפוזיה מספקת כדי למנוע זרימה אחורית לפני לאט ובזהירות הרמת הזרוע הסטריאוטקסית כדי להסיר את הצינורית מקליפת המוח. להשתלת אלקטרודה, השתמש במלקחי קלי ישרים כדי להברג לאט אלקטרוקורטיקוגרפי אחד עם חוט זהב ישר לתוך הציר האנכי של החור שבו הוזרק AAV, משאיר לפחות 2.5 מילימטרים של בורג מחוץ לגולגולת כדי למזער את הנזק לדורה וקליפת המוח. השתמש בעט כדי לסמן את המיקום של אלקטרודה הפניה 2.6 מילימטרים לרוחב ימינה לקו האמצע ו 0.7 מילימטרים אחוריים ברגמה ואת המיקום של אלקטרוקרדיוגרפיה אחורית ב 1.5 מילימטר רוחבי ימינה לקו האמצע ו 1.5 מילימטרים הקדמיים למבדה ואת המיקום של שלושה ברגי תחזוקה על האונה השמאלית ללא קואורדינטות ספציפיות, אבל רחוק ככל האפשר אחד מהשני ומהאלקטרודוקורטוגרפיות.

השתמש במקדחה כדי לנקב בזהירות את הגולגולת בניצב למשטח הגולגולת במיקומים המסומנים של האלקטרודות והברגים האחרים ולשטוף את הגולגולת המנוקבת עם תמיסת יוד פוידון 10%. לחסום את החורים עם חתיכות קטנות מגולגלות של ניגוב משימה עדין לפני התקנת הברגים כדי למנוע דימום וזיהום ולהשתמש מלקחיים קלי ישרים כדי להכניס את הברגים לתוך חורי המקדחה באותה זווית כי החורים היו מנוקבים. מניחים כמה טיפות קטנות של מלט דנטלי במרכז החלל דמוי הטבעת בתוך הברגים ומשתמשים במלקחי Graefe עדינים במיוחד כדי להרים את העור מעל שרירי הצוואר.

באמצעות דומונט מספר חמש מלקחיים, להחזיק את הגפיים המעוקלות של אלקטרומיאוגרפיה אחת ולהכניס אותו בערך אחד עד שני מילימטרים לתוך השרירים. מניחים את הצד המעוקל ואת נקודת הקיפול של האלקטרודה לתוך המלט הדנטלי ומכניסים את האלקטרו-מיוגרפיה השנייה באותו אופן. לאחר כיסוי העיניים של החיה, להחיל אור במשך שלוש עד חמש דקות כדי לחזק את המלט ולהשתמש במלט דנטלי נוסף כדי לכסות את הבסיס של אלקטרודות אלקטרוקורטיקוגרפיות ברגי עוגן כדי ליצור קווי המתאר בצורת כתר.

לאחר החלת שלוש עד חמש דקות נוספות של אור, למלא את מרכז מונטאז עם מלט אקרילי ולהסיר את מלחציים כירורגיים. השתמש בתפר מונופילמנט סינטטי נספג כדי לסגור את העור בחלק הקדמי והחלק האחורי של המונטאז ', כך שהגולגולת לא תיחשף והשתמש במלקחיים מעוקלים כדי להחזיק את המחבר מעל המונטאז 'כדי ליישר בזהירות את חוטי הזהב של האלקטרודות עם סיכות המחבר, ואז הלחים במהירות כל גפיים אלקטרודה לפין מחבר תואם אחד. לאחר הסרת העכבר מהמסגרת, לכסות את הרווח הריק בין המחבר ואת הראש עם מלט אקריליק.

ואחרי השקילה, מניחים את העכבר בכלוב נקי עם מכסה שאינו קשור על משטח חום. שבועיים לאחר הניתוח, חברו את העכברים לכבלים הקלטה ולפחות שבוע לאחר מכן הקליטו את האותות האלקטרו-קורטיקוגרפיים והאלקטרומיוגרפיים במשך 24 שעות או יותר. זיהום מוצלח מאושר על ידי מכתים HA של הנוירונים בתוך קליפת המוח המוטורית המקיפה את אתר ההזרקה, המציין את נוכחותו של cofilin S3D HA. כתמים משותפים עם סמן הנוירון המרגש CaMKII Alpha מצביעים על cofilin ברור S3D HA ו CaMKII אלפא ביטוי משותף תחת הגדלה גבוהה.

יומן הרישום שינה ספקטרום כוח יחסי עבור ערנות, שנת גל איטית ושינה פרדוקסלית מראים הבדלים ספציפיים למצב בפעילות ספקטרלית תחת אי-פעילות cofilin. השילוב של הקלטה אלקטרוקורטיקוגרפית ומניפולציה בתיווך AAV של מטרות מולקולריות מדויקות חל גם על אזורי מוח מרובים ועל תת-תחומים אחרים במדעי המוח כגון מחקר על אפילפסיה או זיכרון בנוסף לשינה.