Name: מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית באמצעות עירוי TNBS צינור המרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: למדו את פרוטוקול עירוי TNBS בצינור המרה ליצירת מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית. שיטה זו מאפשרת חקר כאב נוירופתי ופיברוזיס בבעלי חיים C57BL/6.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי המחלקה לענייני יוצאי צבא (VA-ORD BLR&D הצטיינות I01BX004536), והמכון הלאומי לבריאות מענקי # 1R01DK105183, DK120394, ו- DK118529 ל- HW. אנו מודים לד"ר הונגג'ו וו על שיתוף הניסיון הטכני.

כל ההליכים נערכו באישור ועדות הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדיים באוניברסיטה הרפואית של דרום קרוליינה ובמרכז הרפואי ראלף ה. ג'ונסון. C57BL / 6J עכברים זכרים בין 8-10 שבועות של גיל שימשו במחקר זה. עכברים שוכנו תחת מחזור כהה סטנדרטי של 12 אור/ 12 עם ליביטומקס עד למזון ומים.
1. הכנת פתרון TNBS להזרקה
<ol><li>הכן 10% אתנול ב 0.9% מלוחים. להמיס את המניה TNBS (ראה טבלה של חומרים) ב 10% אתנול לריכוז סופי של 7.5 מ"מ על ידי הוספת 7.5 μL של TNBS לתוך 1 מ"ל של 10% אתנול. זהירות: TNBS מהווה סכנה כימית. הכן את הפתרון בתוך מכסה המנוע של האדים והשתמש בציוד מגן אישי כגון כפפות, משקפי מגן וחלוק מעבדה כדי להימנע ממגע ישיר עם TNBS.</li>
	<li>לטעון 50 μL של 0.75% פתרון TNBS לתוך מזרק אינסולין עם מחט 31-מד. לטעון 50 μL של 10% אתנול מלוח לתוך מזרק באותו גודל כמו בקרת רכב. מניחים את המזרקים על הקרח ומגינים עליהם מפני אור עד הצורך.</li>
</ol>2. הכנת עכבר וניתוח
<ol><li>תגלח את השיער מאזור ניתוח הבטן.</li>
	<li>הזריקו מנה אחת מראש של המשפך (למשל, בופרנורפין 0.1 מ"ג/ק"ג i.p. ) לפני הניתוח.</li>
	<li>לגרום ולשמור על העכבר תחת הרדמה כללית עם 1.5-2% איזופלוראן ו 1 L / min של חמצן. אשר את ההשפלה על ידי צביטת בהונות והתבוננות בחיה מחוסר רפלקס.</li>
	<li>מניחים את העכבר על כרית כירורגית מחוממת במהלך הניתוח. החל משחה וטרינרית על כל עין כאשר העכבר נמצא תחת הרדמה.</li>
	<li>לחטא את האתר הכירורגי על ידי ניגוב האזור הכירורגי 3x עם 2% יוד, ואחריו 70% אלכוהול(שולחן החומרים).</li>
	<li>בצע לפרוסטומיה עם מספריים מיקרו כדי ליצור 0.5-1 ס"מ ירידה.</li>
	<li>לחשוף בעדינות את התריסריון ולאתר את צינור המרה המשותף באמצעות צמר גפן(שולחן החומרים).</li>
	<li>הנח קליפ מיקרו המו ישר(שולחן חומרים)מעל הצינור המשותף הפרוקסימלי כדי למנוע את זרימת TNBS או פתרונות רכב לתוך הכבד וכיס המרה (איור 1A,B).</li>
	<li>לחשוף בעדינות את התריסריון ולהכניס את המחט לתוך צינור הלבלב דרך הפפילה של ואטר.</li>
	<li>לאחר המחט היא בתוך הצינור, למקם קליפ מיקרו המו מעוקל (שולחן החומרים) מעל התריסריון המקיף את המחט (איור 1A) כדי לאבטח את המחט במקום ולמנוע את הפתרון המוזרק מלהיכנס לתריסריון.</li>
	<li>בהדרגה להחדיר את הפתרון (TNBS או רכב) לתוך צינור הלבלב במהלך דקה אחת. הערה: TNBS צריך להיות חדור לאט על פני דקה אחת של זמן, וזה קל לשלוט על מהירות העירוי כאשר הלבלב הוא perfused עם מזרק אינסולין עם מחט 5/16 אינץ 'ו 31G. שמור על היד יציבה ככל האפשר כדי למנוע דקירה צינור המרה. אם TNBS מוזרק בהצלחה, צבע צהוב עשוי להיות גלוי בתוך הלבלב.</li>
	<li>לאחר עירוי, להסיר בזהירות את מהדק מיקרו ליד הכבד, ולאחר מכן להסיר את מהדק מיקרו מחזיק את המחט ואת התריסריון.</li>
	<li>החזירו בזהירות את התריסריון למיקומו המקורי.</li>
	<li>השאירו 0.5 מ"ל של תמיסת מלח סטרילית חמה (36-37 מעלות צלזיוס) בחלל הבטן לפני הסגירה, כדי לעזור לתריסריון לחזור למיקומו המקורי ולסייע בהתאוששות של פריסטלזיס.</li>
	<li>סגור את החתירה בשכבת השריר באמצעות תפר רציף עם תפר 5-0. סגור את העור באמצעות תפר מופרע עם תפר 4-0.</li>
	<li>מניחים את הכלוב המכיל עכברים על כרית חימום כדי לאפשר התאוששות מההרדמה.</li>
	<li>אשר כי העכברים חמים ומסוגלים תנועה ספונטנית לפני החזרתם לחדר ההחזקה.</li>
	<li>המשך לספק מכנס לשון (למשל, buprenorphine 0.1 מ"ג / קילוגרם i.p.) כל 12 שעות חום משלים עבור 48 שעות לאחר הניתוח.</li>
</ol>3. ניטור התנהגות העכבר
<ol><li>הסר תפרים ביום 7 לאחר הניתוח.</li>
	<li>נטר את בריאות העכבר ואת התנהגותו מדי יום במהלך השבוע הראשון לאחר הניתוח. צפה בסימני מצוקה כגון השמעה, תנוחת גב כפופה או ירידה בקטר. למדוד את משקל הגוף כל יומיים.</li>
	<li>השתמש פון פרי monofilaments (VFFs) כדי למדוד רגישות יתר מכנית בטן לפני, ו 2, 3 שבועות לאחר הניתוח כמתואר9,14.<ol>
<li>החל VFFs של כוחות מיושמים שונים בסדר עולה על אזור הבטן העליונה 10x כל 1-2 s. שקול את העלאת, נסיגה, או ליקוק הבטן (תגובת גמילה) כתגובה חיובית.</li>
		<li>החל גירוי חזק יותר אם לא נצפתה תגובה חיובית, וגירוי חלש יותר אם נצפתה תגובה חיובית. סף המשיכה הוא הכוח שבו העכבר מגיב 50% מהזמן.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. איסוף וניתוח היסתולוגי של רקמת הלבלב
<ol><li>להקריב את העכברים תחת הרדמה על ידי נקע צוואר הרחם, בזהירות לנתח את הלבלב מן המעי ואיברים אחרים.</li>
	<li>תקן את הלבלב ב 10% paraformaldehyde עבור 24 שעות, הטמעה פרפין, לחתוך קטעי רקמות של 5 מיקרומטר, ומניחים אותם על שקופיות זכוכית להכתמה.</li>
	<li>בצע המטוקסילין-אאוזין, והכתמת טריכרום של מאסון בשיטות סטנדרטיות כפי שדווח בעבר4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

כל המחברים מצהירים שאין להם ניגוד אינטרסים.

עירוי צינור המרה של TNBS כדי לגרום דלקת לבלב כרונית הוא מאתגר מבחינה טכנית בעכברים, כמו עד 22.5% של עכברים יכולים למות בתוך 3-4 ימים של עירוי סמים10. כאן, דו"ח זה חידד את ההליך בהתבסס על מחקרים קודמים והפחית את תמותת העכברים המוקדמים ל -<10%. לדוגמה, נפח התרופה המוגבר (מ 35 μL ל 50μL) יכול להבטיח את התרופות להגיע כל הלבלב. שימוש במזרק אינסולין וגודל מחט קטן יותר (31G) מפחית את הנזק הפוטנציאלי לצינור הלבלב ואת דליפת המרה לתוך כיס המרה או הבטן, אשר ככל הנראה יגרום למוות עכבר בתוך הימים הראשונים לאחר...

דלקת לבלב כרונית (CP) היא מחלה דלקתית כרונית המאופיינת על ידי ניוון הלבלב, פיברוזיס, כאבי בטן, ובסופו של דבר אובדן של תפקודים אקסוקריניים ואנדוקרינים1. הטיפולים הרפואיים והכירורגיים הנוכחיים אינם מרפאים אך נעשים כדי להקל על הסימפטומים שהם תוצאה של המחלה: כאבי בטן עקשן, תפקוד אנדוקריני ואקסוקריני. לכן, טיפולים יעילים יותר נדרשים בדחיפות2. מודלים של בעלי חיים מספקים כלי חיוני לפיתוח הבנה טובה יותר של המחלה וחקירת טיפולים פוטנציאליים3. מודלים עכבר מרובים עבור CP פותחו, אשר cerulein ו / או מודלים אלכוהול נפוצים. Cerulein, אוליגופפטיד מגרה הפרשת הלבלב, הוכח לגרום להתרבות מודל CP הכולל ניוון הלבלב, פיברוזיס, בין היתר4. מודל נפוץ אחר משתמש זריקות סדרתיות של L-ארגנין, אשר מייצרת אי ספיקה אקסוקרינית דומה לזו שנצפו בחולים אנושיים5. CP יכול גם להיות מושרה על ידי קשירת צינור הלבלב מלאה או חלקית, כמו גם יתר לחץ דם צינור הלבלב6,7. למרות מגוון המודלים של בעלי חיים הזמינים עבור CP, אף אחד מהמודלים האלה למעשה משחזר את כאבי הבטן שחווים חולי CP8.
מחקרים קודמים הראו כי הזרקת לבלב מקומית של 2,4,6 - טריילרבנזן חומצה גופרתית (TNBS) משכפלת את הכאב המתמשך שחווים חולי CP9,10,11. עכברים שטופלו ב- TNBS הדגימו רגישות יתר בבטן והתנהגויות מוגברות הקשורות לכאב, כמו גם "רגישות יתר כללית" לגירויים כואבים, תופעה שנצפתה בחולי CP10. בנוסף לחיקוי מדויק של כאבי CP, מודל TNBS משכפל גם תכונות פתולוגיות אחרות של המצב האנושי כגון פיברוזיס, חדירת תאים מונונוקלאריים והחלפת תאי סינאר ברקמתשומן 10,12. עם זאת, עירוי TNBS באמצעות צינור המרה הוא הליך מאתגר מבחינה טכנית בעכברים שעלול לגרום למוות. למיטב ידיעתנו, אין פרוטוקול חזותי כדי להראות כיצד עירוי צינור המרה מבוצע. במאמר זה, אנו מדגימים את ההליך של עירוי אוורור מרה של TNBS כדי ליצור מודל עכבר CP. הליך זה יסייע לייצר מודלים בעלי ערך לבעלי חיים לחקר CP ומחלות לבלב אחרות וניתן להשתמש בו כדי להחדיר חומרים אחרים (למשל, וירוס, תאים) לתוך הלבלב13.

<table><tbody><tr><td>10% פורמלין ניטרלי חוצץ v/v</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול, סטרילי</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>מערכת הרדמה לבעלי חיים</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>בופרנורפין הידרוכלוריד, הזרקת</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה, 15 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, מוחלט (200 הוכחה), כיתה ביולוגיה מולקולרית פישר</td><td>סיינטיפיק</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו חיתוך עדינים במיוחד 4 אינץ' ישר חד</td><td>Roboz כירורגי חברת אינסטרומנט</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים Graefe 4 אינץ' קצה עדין במיוחד</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>כרית מחוממת</td><td>אמזון</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Hegar-Baumgartner 5.25 אינץ'</td><td>רובוז מכשירים כירורגיים ושות '</td><td>מזרק אינסולין RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>עם מחט 31 מד</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה ליוד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>פיראמל טיפול קריטי</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו קליפ מריחת מלקחיים 5.5 אינץ'</td><td>רובוז מכשירים כירורגיים ושות '</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו קליפ, ישר חזק מעוקל 1x6 מ"מ</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו קליפ, ישר, רוחב קליפ 0.75 מ"מ</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חומצה פיקרילסולפונית, TNBS, 1M ב-H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>תפר פוליפרופילן 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>תפר פוליפרופילן 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי, 0.9% תמיסה תוך ורידית</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>וילון כירורגי, סטרילי</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>קלטת רקמות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>חוטי פון פריי</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית באמצעות עירוי tnbs צינור המרה

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

דלקת לבלב כרונית (CP) היא מחלה מורכבת הכוללת דלקת לבלב ופיברוזיס, ניוון בלוטות, כאבי בטן ותסמינים אחרים. מספר מודלים מכרסמים פותחו כדי לחקור CP, אשר צינור המרה 2,4,6 -טריניטרובנזן חומצה גופרתית (TNBS) מודל עירוי משכפל את התכונות של כאב נוירופתי לראות CP. עם זאת, עירוי סמים צינור המרה בעכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית. פרוטוקול זה מדגים את ההליך של עירוי TNBS צינור המרה עבור הדור של מודל עכבר CP. TNBS היה חדורה לתוך הלבלב דרך האמפולה של ואטר בתריסריון. פרוטוקול זה מיטב את נפח התרופה, טכניקות כירורגיות וטיפול בסמים במהלך ההליך. עכברים שטופלו ב-TNBS הראו תכונות של CP כפי שמשתקפות על ידי הפחתות במשקל הגוף והלבלב, שינויים בהתנהגויות הקשורות לכאב, ומורפולוגיה לבלב חריגה. עם שיפורים אלה, התמותה הקשורה הזרקת TNBS היה מינימלי. הליך זה הוא לא רק קריטי ביצירת מודלים מחלת הלבלב, אלא הוא גם שימושי במשלוח תרופות הלבלב המקומי.

הליכי עירוי צינור המרה היו אופטימיזציה כדי להפחית את תמותת העכבר הקשורים להליך זה10. TNBS ניתן לראשונה בנפח כולל של 35 μL או 50 μL. הזרקת TNBS בנפח של 50 μL יכול להגיע הלבלב כולו ולעורר פנוטיפ מחלה הומוגנית יותר (איור 1B). בנוסף, הזרקת TNBS באמצעות מזרק אינסולין עם מחט 31G יכול לשלוט טוב יותר על מהירות עירוי ביחס מזרקים רגילים וגדלי מחט. TNBS מוכן טרי מאוחסן על קרח בשימוש בתוך שעה אחת של הכנת סמים גם הניב תוצאה טובה יותר בהשוואה TNBS מוכן יותר משעה אחת. עם שיפורים אלה...

דלקת לבלב כרונית (CP) היא מחלה המאופיינת בדלקת ופיברוזיס של הלבלב, הקשורים לעתים קרובות עם כאבי בטן עקשניים. מאמר זה מתמקד בשיפור הטכניקה ליצירת מודל עכבר של CP באמצעות עירוי צינור המרה עם 2,4,6 -טרינדרובנזן חומצה גופרתית (TNBS).

מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית באמצעות עירוי TNBS צינור המרה

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

דלקת לבלב כרונית היא מחלה מורכבת הכוללת דלקת בלבלב, פיברוזיס, כאבי בטן ותסמינים אחרים. צינור המרה TNBS מודל עירוי משכפל את הכאב הנוירופתי שנצפו בחולי דלקת לבלב כרונית. זה צינור המרה TNBS פרוטוקול עירוי כבר אופטימיזציה כדי לגרום לדור של מודל דלקת לבלב כרונית בעכברים.כמו היתוך סמים צינור המרה בעכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית, ההדמיה שלה יהיה מועיל לחוקרים חדשים לשיטה. לפני ושבועיים ושלושה שבועות לאחר הניתוח, השתמש פון פריי monofilaments להחיל רמות שונות של כוח בסדר עולה לאזור הבטן העליונה של שמונה עד 10 שבועות, C57 שחור שישה עכבר, 10 פעמים במשך אחד עד שתי שניות לכל יישום. שקול להעלות נסיגה או ליקוק של הבטן כתגובה חיובית.לאחר מכן, לטעון מזרק אינסולין מצויד מחט 31 מד עם 50 microliters של פתרון TNBS מוכן טרי. טען מזרק שני עם 50 מיקרוליטרים של 10 אחוז אתנול בתמיסת מלח כשליטת רכב והנח את שני המזרקים על קרח המוגנים מפני אור. לאחר אישור חוסר תגובה לרפלקס הדוושה, הסר את השיער מאזור הבטן של העכבר המרדים על ידי גילוח או החלת קרם להסרת שיער ומניחים את העכבר על כרית כירורגית מחוממת תחת מיקרוסקופ מנתח.החל משחה וטרינרית על כל עין, ולחטא את האתר הכירורגי עם שלושה יוד שני אחוזים רצופים ושלושה מגבוני אתנול 70 אחוז להשתמש מספריים מיקרו לעשות חתך 0.5 עד סנטימטר אחד בתנועה רציפה אחת ולהשתמש צמר גפן כדי לחשוף בעדינות את התריסריון ולאתר את צינור המרה המשותף. כדי למנוע את זרימת הטיפול אל הכבד וכיס המרה, השתמש במיקרוסקופ כדי למקם המוקליף מיקרו ישר מעל הצינור המשותף הפרוקסימלי, ולהכניס את המחט של מזרק טעון TNBS דרך הפפילה של vater לתוך צינור הלבלב. השתמש בהמוקליפת מיקרו מעוקלת כדי לאבטח את המחט, ולהחדיר את הפתרון לתוך צינור הלבלב במהלך דקה אחת.כאשר כל הפתרון נמסר, הסר בזהירות את מלחצי המיקרו ואשר כי התריסריון חזר למיקומו המקורי. לפני סגירת חלל הבטן, להוסיף 500 microliters של 36 עד 37 מעלות צלזיוס מלוחים סטריליים כדי לעזור התריסריון לחזור למקומו המקורי ולסייע בהתאוששות של פרייסטלסיס. השתמש תפר רציף עם תפר חמש-O כדי לסגור את החתירה בשכבת השריר, ולסגור את העור באמצעות תפר מופרע עם תפר ארבע O.לאחר מכן מניחים את העכבר בכלוב התאוששות על כרית חימום עם ניטור עד לחזרה מלאה. נטר את בריאות העכבר ואת התנהגותו מדי יום במהלך השבוע הראשון לאחר הניתוח לסימני מצוקה, כגון השמעה, תנוחת גב כפופה או להפחית את הקטר ולמדוד את משקל הגוף כל יומיים. כפי שנצפה, הזרקה של 50 microliters של דיו כפי שהדגים תוצאות חדירה של הלבלב כולו, המאפשר אינדוקציה של פנוטיפ מחלה הומוגנית יותר.בניתוח מייצג זה, בשלושת הימים הראשונים לאחר הניתוח, העכברים בקבוצת הביקורת איבדו כשישה אחוזים ממשקל גופם המקורי לפני שהחלימו בהדרגה וצברו מעל 100% ממשקל גופם המקורי ביום 21. לעומת זאת, עכברים שקיבלו TNBS איבדו כ -15 אחוז ממשקל גופם המקורי בחמשת הימים הראשונים לאחר הניתוח וחזרו קצת פחות מ -100 אחוז ממשקל גופם המקורי ביום 21. בהשוואה לעכברי בקרה, בעלי החיים שהוזרקו ל- TNBS הראו רגישות יתר מכנית מוגברת בבטן במהלך השבוע השני והשלישי לאחר הניתוח.הגודל והמשקל לכל משקל גוף של הלבלב, צומצמו באופן משמעותי בעכברים TNBS לעומת לבלב שנקטף מבעלי חיים שליטה, דבר המצביע על ניוון לבלב מסומן בבעלי חיים שטופלו TNBS בקנה אחד עם הממצאים בבני אדם עם דלקת לבלב כרונית חמורה וארוכת טווח. ניתוח היסתולוגי של מקטעי רקמת הלבלב מעכברים שטופלו באתנול שליטה הראה מורפולוגיה נורמלית בעוד מקטעי רקמות מעכברים שטופלו ב- TNBS הציגו מימוש ריקני עם אובדן מסיבי של תאי סינאר שהוחלפו על ידי חדירת תאי שומן ופיברוזיס. מניעת TNBS מוזרק מלהיכנס שלפוחית השתן גל המעי חשוב כמו TNBS יש השפעות מזיקות רקמות.במהלך עירוי, לשמור על היד יציבה ככל האפשר כדי למנוע ניקוב-משחק כי צינור המרה. בנוסף לגרימת התפתחות דלקת הלבלב הכרונית, זה צינור המרה עירוי אמנות עכברים יכול לשמש להתפתחות של מודלים אחרים מחלת הלבלב. מודל זה של עכבר דלקת הלבלב הכרונית TNBS יכול לשמש כדי לחקור הן את הפתוגנזה ואת הטיפול בדלקת לבלב כרונית, כמו גם מחלות לבלב אחרות.

a-mouse-model-for-chronic-pancreatitis-via-bile-duct-tnbs-infusion

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מתאר את ההליך ליצירת מודל עכבר עם דלקת לבלב חריפה באמצעות עירוי לבלב של נתרן טאורוכולט. מודל זה מסייע ללמוד שינויים פתופיזיולוגיים המושרים על ידי נתרן taurocholate בלבלב.

מודל דלקת לבלב מרה חריפה: שיטה ליצירת מודל עכבר של דלקת לבלב חריפה באמצעות עירוי צינור הלבלב

מודלים של בעלי חיים לדלקת לבלב חריפה חמורה מאפשרים לחקור שינויים פתופיציולוגיים בשלב הראשוני, ומאפשרים התבוננות בהתפתחות של אירועים דלקתיים. כאן אנו מספקים פרוטוקול עבור אינדוקציה של דלקת לבלב מרה חריפה חמורה על ידי עירוי מדרדר של נתרן taurocholate לתוך צינור הלבלב של עכברי C57BL/6 מרדים.

נתרן Taurocholate המושרה חמור דלקת לבלב חריפה ב C57BL/6 עכברים

מודל עכבר של דלקת לבלב חריפה חמורה מתואר כאן. ההליך המוצג כאן הוא מהיר מאוד, פשוט ונגיש, ובכך עשוי לאפשר את חקר המנגנונים המולקולריים והתערבויות טיפוליות שונות בדלקת הלבלב החריפה בצורה נוחה.

הקמת מודל דלקת לבלב חריפה חמורה עכבר באמצעות הזרקה מדרדרת של נתרן Taurocholate לתוך צינור ביליופנקראטי

הקמנו מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד, המספק מודל חייתי מתאים למחקר המכניסטי של אפיברוזיס כבד המושרה על ידי וירוסים של אטרזיה מרה (BA) ופלטפורמה לטיפולי BA עתידיים.

מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד לחקר אטרזיה של המרה

מתן תרופות תוך צפקיות הוא גישה לא פולשנית בטוחה ויעילה לגרימת פגיעה בלבלב. מחקר זה השווה חמישה פרוטוקולים שונים של הזרקה תוך צפקית בעכברים כדי לגרום לדרגות שונות של פגיעה בלבלב וקבע מודל של פגיעה חמורה בלבלב כדי לחקור את השינויים הפתולוגיים ואת אסטרטגיות הטיפול בדלקת לבלב חריפה חמורה (SAP).

הכנת מודל עכברים של דלקת לבלב חריפה חמורה באמצעות שילוב של Caerulein ו Lipopolysaccharide הזרקה intraperitoneal

הפרוטוקול הנוכחי מתאר גישה חדשה למידול דלקת לבלב חסימתית כרונית, הכוללת הדמיה של צינור הלבלב ואלקטרו-קואגולציה של צינור הלבלב כדי לגרום לחסימת צינור הלבלב.

מודל חסימתי של דלקת לבלב כרונית שהוקם באמצעות אלקטרו-קואגולציה

פרוטוקול עבור cannulation של בלוטת הרוק עכבר submandibular דרך צינור של וורטון מתואר. לצורך ניסוי זה, הפתרון כחול trypan משמש הצבעים כדי להדגים כיצד טכניקה זו יעילה מספק חליטות לתוך בלוטת ממוקד, ולהציע את האמינות של הגישה החדשה הזו כמו טיפול פוטנציאלי סמים / תא קליניות לגבי רגנרצית של בלוטות הרוק.

Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון

שיטה של ​​הדמיה וכימות המבנה 3-הממדי של וריד עכבר כבד פורטל או צינור מרת intrahepatic מתוארת. טכניקת יציקת שרף זה יכול להיות מיושם גם למערכות ductal או כלי דם אחרות...

יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-Dimensional

פרוטוקול לחליטות כרוניות של גלוקוז וIntralipid בחולדות מתואר. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעה של עודף חומרי מזון על תפקוד איברים ופרמטרים פיסיולוגיים.

דגם של עירוי מזין כרוני בחולדה

לחץ תוך עיני מוגבר כרוני הנגרם באמצעות טיפול לייזר של meshwork trabecular בעיני עכבר. לחץ התוך עיני (IOP) הוא גבוה למשך מספר חודשים לאחר טיפול לייזר. הירידה של חדות ראייה ורגישות לקונטרסט של חיות ניסוי מנוטרת באמצעות בדיקת optomotor.

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

למדו את פרוטוקול עירוי TNBS בצינור המרה ליצירת מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית. שיטה זו מאפשרת חקר כאב נוירופתי ופיברוזיס בבעלי חיים C57BL/6.

מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית באמצעות עירוי TNBS צינור המרה

גלה סרטונים נוספים