Name: דור של שווה ערך לעור אנושי בהרכבה עצמית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-12T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: למד ליצור דגמי עור אנושי מווסתים לחקר מחלות, הזדקנות ורפואה מותאמת אישית. הפרוטוקול מסביר מעבר בין טבילה לממשק אוויר-נוזל וניתוח נפחי תלת-ממדי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לד"רג'ים ריינוולד 59 ולד"ר אלן ה. ואן דן בוגארד20 על מתנתם הנדיבה של קווי תאים N/TERT. עבודה זו נתמכה על ידי איגוד הלב האמריקאי (19IPLOI34760636).

למחברים אין מה לחשוף.

פרוטוקול זה הוכיח שיטה פשוטה וחוזרת על עצמה ליצירת VHSEs וניתוח תלת מימדי שלהם. חשוב לציין, שיטה זו מסתמכת על כמה טכניקות מיוחדות או חתיכות ציוד, מה שהופך אותו נגיש עבור מגוון רחב של מעבדות. כמו כן, ניתן להחליף סוגי תאים בשינויים מוגבלים בפרוטוקול, המאפשרים לחוקרים להתאים פרוטוקול זה לצרכים הספציפיים שלהם.
ג'לת קולגן נכונה היא צעד מאתגר בביסוס תרבות העור. במיוחד בעת שימוש בהכנות גסות ללא טיהור, מזהמי עקבות יכולים להשפיע על תהליך הג'לציה. כדי להבטיח עקביות, יש לבצע קבוצות ניסויים עם אותו מלאי קולגן שישמש לייצור VHSE. כמו כן, הג'לציה צריכה להתרחש באופן אידיאלי ב- pH של 7-7.4, ומזהמי עקבות עשויים להזיז את ה- pH. לפני השימוש בכל מלאי קולגן, ג'ל תאי בפועל צריך להיעשות בריכוז הרצוי ואת ה- pH צריך להימדד לפני ג'ל. השלמת בדיקת איכות קולגן זו לפני תחילת זריעת רכיב עורי תזהה את הבעיות עם ג'לציה נכונה והומוגניות קולגן לפני הקמת ניסוי מלא. במקום לזרוע קולגן תאי ישירות על תוסף תרבות, זרעו קולגן על רצועת pH שמעריכה את כל סולם ה-pH ולאמת pH של 7-7.4. ג'לציה ניתן להעריך על ידי החלת טיפה של פתרון ג'ל קולגן על כיסוי או רקמה תרבות פלסטיק צלחת היטב (צלחת היטב מומלץ לדמות את הצדדים מוגבלים של הכנס תרבות). לאחר זמן הג'לציה, הקולגן צריך להיות מוצק, כלומר, זה לא צריך לזרום כאשר הצלחת מוטה. תחת מיקרוסקופיית ניגוד פאזה, הקולגן צריך להיראות הומוגני וברור. בועות מזדמנות של זריעת קולגן הן כתמים אמורפיים רגילים אך גדולים של קולגן אטום בתוך הג'ל הצלול מצביעות על בעיה-סבירה בשל ערבוב לא מספיק, pH שגוי, ו / או כישלון לשמור על קולגן מצונן במהלך ערבוב.
ייתכן שכמויות הזרמת התאים והמדיה מותאמות. בפרוטוקול לעיל, כמויות התאים שעברו אנקפסולציה עברו אופטימיזציה להוספת 12 באר ב- 7.5 x 104 פיברובלסטים ו- 7.5 x 105 תאי אנדותל ל- mL של קולגן עם 1.7 x 105 קרטינוציטים שנזרעו על גבי המבנה העורי. צפיפות התאים עברה אופטימיזציה לפרוטוקול VHSE זה בהתבסס על המחקרים הראשוניים והמחקר הקודם החוקר את ייצור רשת כלי הדם בתלת-ממד בריכוזי קולגן שונים48 ודור HSE22,80,81. במערכות דומות, צפיפות תאי האנדותל שפורסמה היא 1.0 x 106 תאים / מ"ל קולגן48; ריכוזי פיברובלסט לעתים קרובות נע בין 0.4 x 105 תאים / מ"ל של קולגן22,28,82 כדי 1 x 105 תאים / מ"ל של קולגן8,58,83,84,85; וריכוזי הקרטינוציט נעים בין 0.5 x 105 [תאים/ס"מ2]80 עד 1 x 105 [תאים/ס"מ2]8. צפיפות תאים יכולה להיות ממוטבת עבור תאים ספציפיים ושאלת מחקר. תרבויות תלת מימדיות עם תאים מתכווצים, כגון fibroblasts, יכול להתכווץ המוביל להפחתת הכדאיות ואובדן תרבות86,87. יש להשלים ניסויים ראשוניים כדי לבדוק התכווצות של התא העורי (אשר יכול להתרחש עם תאים עוריים יותר, תאים עוריים התכווצות יותר, תרבויות טבילה ארוכות יותר, או מטריצות רכות יותר) ולבדוק כיסוי פני השטח אפידרמיס. בנוסף, מספר הימים בשקיעה ואת קצב התחדדות התוכן בסרום יכול גם להיות מותאם אישית אם התכווצות עורית מוגזמת מתרחשת או שיעור שונה של כיסוי קרטינוציטים נדרש. לדוגמה, אם התכווצות הוא הבחין במהלך התקופה של שקיעה עורית או בעוד keratinocytes יוצרים monolayer פני השטח, נע מהר יותר דרך תהליך מתחדד בסרום והעלאת VHSEs ל ALI יכול לסייע במניעת התכווצות נוספת. באופן דומה, אם כיסוי keratinocyte אינו אידיאלי, שינוי מספר הימים כי VHSE הוא שקוע ללא סרום עשוי לעזור להגדיל את כיסוי monolayer אפידרמיס ולהפחית את ההתכווצות מאז סרום נשאר בחוץ. שינויים בצפיפויות התא או הצעות אחרות לעיל חייבים להיות ממוטבים עבור תרבויות ספציפיות ויעדי מחקר.
כדי ליצור ריבוד נכון של האפידרמיס במהלך תקופת ממשק נוזלי האוויר (ALI), זה קריטי כדי לבדוק באופן קבוע ולשמור על רמות הנוזלים בכל באר, כך ALI והידרציה מתאימה של כל מבנה נשמר לאורך כל אורך התרבות. יש לבדוק ולעקוב אחר רמות המדיה מדי יום עד שייווצרו רמות ALI עקביות. שכבת האפידרמיס צריכה להיראות hydrated, לא יבש, אבל לא צריך להיות בריכות של מדיה על המבנה. במהלך ALI, המבנה יפתח צבע לבן / צהוב אטום שהוא נורמלי. שכבת האפידרמיס תתפתח בצורה לא אחידה. בדרך כלל, VHSEs מוטים עקב זריעת קולגן או התכווצות עורית. זה גם נורמלי להתבונן חלק אפידרמיס גבוה יותר באמצע המבנה במבנים קטנים יותר (24 גודל טוב) היווצרות רכס סביב ההיקף של VHSE ב 12 גודל טוב. התכווצות המבנים13 עשויה לשנות תצורות טופוגרפיות אלה, ו/או שלא ניתן לצפות בהן כלל.
כתמים והדמיה של VHSEs מציג מניפולציה מכנית VHSEs. חשוב מאוד לתכנן ולהגביל את המניפולציה של כל תרבות. כאשר יש צורך במניפולציה, לשמור על תנועות עדינות בעת הסרת VHSEs מן הקרומים הכנס, בעת הוספת פתרונות כתמים או לשטוף למשטח הבנייה, וכאשר הסרת והחלפה VHSEs בבארות אחסון / הדמיה שלהם במהלך הכנת הדמיה. באופן ספציפי, השכבות apical של רכיב האפידרמיס עשוי להיות שביר נמצאים בסיכון של sloughing את שכבות אפידרמיס הבסיס. שכבות apical של האפידרמיס הם שבירים לעבור desquamation אפילו ברקמה מקומית4, אבל לניתוח מדויק של מבנה האפידרמיס חשוב למזער נזק או אובדן. אם שכבות אפידרמיס להרים את המבנה, הם יכולים להיות בתמונה בנפרד. השכבות הבסיסיות של האפידרמיס ככל הנראה עדיין מחוברות לדרמיס בעוד שחלקים מהשכבות האפיקליות עשויות להתנתק. להדמיה של האפידרמיס, כתם גרעיני מועיל בהתבוננות זו מאז גרעינים צפופים הוא מאפיין של שכבות נמוכות ובינוניות של האפידרמיס.
הדמיה Confocal של VHSE לאחר הקיבעון נדון בפרוטוקול, אבל אפשר גם לדמיין את VHSEs לאורך כל התרבות באמצעות טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית מבוססת זקוף (OCT)88,89,90,91,92,93. VHSE יציבים מספיק כדי לעמוד בהדמיה ללא דגירה או לחות למשך שעתיים לפחות ללא השפעות מורגשות. כמו OCT הוא תווית חינם ולא פולשני, ניתן לעקוב אחר עובי האפידרמיס במהלך התבגרות. סביר להניח שניתן יהיה להעסיק גם אופני הדמיה לא פולשניים אחרים.
הדמיה נפחית של המבנים העוריים והאפידרמליים המשולבים יכולה להיות מאתגרת עקב הנחתת לייזר עמוק יותר ב- VHSE. ניתן למתן זאת על ידי הדמיית המבנה בשני כיוונים, מהצד האפידרמלי (איור 1) ומהצד העורי (איור 2), המאפשר רזולוציה טובה של מבני כלי דם עוריים והאפידרמיס. בנוסף, ניתן לנקות את המדגם, המאפשר תמונות נפחיות של המבנה כולו עם הנחתה מינימלית. עם זאת, נעשה ניסיון למספר שיטות סליקה, אולם שיטת מתנול/מתיל סליצילאט המתוארת הניבה את התוצאות הטובות ביותר. חוקרים המעוניינים אופטימיזציה של שיטות סליקה אחרות מופנים כלפי ביקורות אלה49,61,62. במקרה של סליקה, מומלץ לדמות את הדגימה במלואה לפני הסליקה, שכן השיטה עלולה לגרום נזק לפלואורופורים ו/או למבנה. כמו כן, יש להשלים את ההדמיה בהקדם האפשרי לאחר הסליקה, שכן הפלואורסצנטיות עלולה לדעוך בתוך ימים.
עבור פשטות ונגישות, פרוטוקול זה השתמש בתערובות המדיה הפשוטות ביותר שנמצאו בספרותהקודמת 11,80. למרות שיש יתרונות רבים לשימוש בתערובות מדיה פשוטות, המגבלות של בחירה זו מוכרות גם כן. קבוצות אחרות חקרו את ההשפעות של רכיבי מדיה ספציפיים על בריאות האפידרמיס והדרמלית ומצאו כי תוספי מדיה אחרים94, כגון חומצות שומן / שומנים חופשיים חיצוניים, לשפר את הקרנית השכבה של האפידרמיס ולשפר את תפקוד מחסום העור. למרות הסמנים האימונופלואורסצנטיים שלנו מראים בידול וריבוד מתאימים באפידרמיס, בהתאם למחקרים המתבצעים, ייתכן שיהיה צורך באופטימיזציה נוספת של המדיה. יתר על כן, ניתוח מקיף של BM אפידרמיס לא נערך בעת הערכת VHSEs המוצגים כאן. השלמות של BM היא אינדיקציה חשובה של שווה ערך לעור; קבוצות שונות עשו מחקר על משך התרבות והשפעתה על סימוני BM95, כמו גם ניתוח של נוכחות פיברובלסט והשפעות גורם גדילה הוסיף על ביטוי BM14. חשוב לציין כי יש להעריך ולמטב ניתוח של רכיב BM בעת שימוש בפרוטוקול זה.
בפרוטוקול זה מתואר הליך עבור יצירת VHSE, המדגים תוצאות לאחר 8 שבועות ב ALI. תרבויות VHSE כבר מתורבת עד 12 שבועות ב ALI ללא שינוי מורגש או אובדן הכדאיות, וזה אפשרי כי הם עשויים להיות קיימא יותר. חשוב לציין, פרוטוקול זה ניתן להתאמה בקלות לסוגי תאים זמינים בדרך כלל, כפי שהוכח על ידי החלפת fibroblasts עורי עם FIBROBLasts ריאות IMR90. בהתאם לצורך של החוקר ולמשאבים הזמינים, ניתן להתאים את סוגי התאים והתמזגויות המדיה בתרבות, אם כי סוגי תאים שונים יותר עשויים לדרוש אופטימיזציה של מדיה. לסיכום, הליכים אלה נועדו לספק בהירות על התרבות של VHSEs לחקר ביולוגיה של העור ומחלות. כדי למקסם את הנגישות, הפרוטוקול פותח זה פשוט וחזק באמצעות ציוד משותף, קווי תאים, ריאגנטים כגישה יעילה מינימלית שניתן להתאים אישית עוד יותר לצרכים הספציפיים של מחקרים.

העור האנושי מבצע פונקציות ביולוגיות חיוניות רבות כולל מתנהג כמו מחסום חיסוני / מכני, ויסות טמפרטורת הגוף, השתתפות החזקת מים ותפקידים חושיים1,2,3,4. מבחינה אנטומית, העור הוא האיבר הגדול ביותר בגוף האדם והוא מורכב משלוש שכבות עיקריות (אפידרמיס, דרמיס, hypodermis) ובעל מערכת מורכבת של סטרומה, כלי דם, הבלוטות, ורכיבי מערכת החיסון / מערכת העצבים בנוסף לתאי אפידרמיס. האפידרמיס עצמו מורכב מארבע שכבות של תאים המתחדשים ללא הרף כדי לשמור על תפקוד המחסום ומבנים אחרים של עור מקומי (כלומר, זיעה ובלוטות החלב, ציפורניים)3. פיזיולוגיה של העור חשובה בתפקוד מערכת החיסון, ריפוי פצעים, ביולוגיה של סרטן ותחומים אחרים, מה שמוביל חוקרים להשתמש במגוון רחב של מודלים, ממונוקולטורות במבחנה ועד מודלים של בעלי חיים in vivo. מודלים של בעלי חיים מציעים את היכולת לחקור את המורכבות המלאה של פיזיולוגיית העור, עם זאת, מודלים נפוצים של בעלי חיים כגון עכברים יש הבדלים פיזיולוגיים משמעותיים בהשוואה לבני אדם5. מגבלות אלה, והעלות המוגברת של מודלים של בעלי חיים, הובילו חוקרים רבים להתמקד בפיתוח מודלים במבחנה המשקפים באופן הדוק יותר את הפיזיולוגיה של העור האנושי1,6. מתוכם, אחד מסוגי המודלים הפשוטים יותר הוא המקבילה האפידרמלית האנושית (HEE; המכונה גם מודלים של עור בעובי למחצה) המורכבים רק מקרטינוציטים אפידרמליים במטריצה עורית תאית, אך לוכדים בידול אפידרמלי וריבוד שנראים בוויו. בהתבסס על זה, מודלים המכילים רכיבים עוריים ואפידרמליים (קרטינוציטים ופיברובלסטים) מכונים לעתים קרובות שווה ערך לעור אנושי (HSE), מודלים לעור בעובי מלא, או מבני עור organotypic (OSC). בקצרה, מודלים אלה נוצרים על ידי אנקפסולציות תאים עוריים בתוך מטריצות ג'ל ותאי אפידרמיס זריעה על גבי. לאחר מכן ניתן להשיג בידול וריבוד אפידרמיס באמצעות מדיה מיוחדת וחשיפה לאוויר7. שווה ערך לעור נוצרו לרוב באמצעות טכניקות הרכבה עצמית באמצעות ג'לים עוריים העשויים קולגן מסוג I (אחד של זנב עכברוש או מקור עור שור)1,8, אבל מודלים דומים שילבו רכיבי מטריצה אחרים כגון פיברין9,10, fibroblast נגזר11,12, קרום cadaveric דה epidermized13, 14,15,16, ג'לים זמינים מסחרית ואחרים1,12,13,17,18,19. נכון לעכשיו, ישנם שווה ערך לעור זמין מסחרית (כפי שנסקר בעבר1,2). עם זאת, אלה מפותחים בעיקר למטרות טיפוליות ולא ניתן להתאים אישית בקלות לשאלות מחקר ספציפיות.
HSEs יושמו במחקרים של ריפוי פצעים, השתלה, טוקסיקולוגיה, ומחלות עור / פיתוח11,12,13,16,8,20,21,22,23. למרות שתרבות תלת מימדית מדגמנת באופן מקיף יותר פונקציות של רקמה אנושית בהשוואה לתרביות דו-ממדיות24, הכללת סוגי תאים מגוונים המשקפים בצורה מדויקת יותר את אוכלוסיית ה- in vivo מאפשרת מחקרים של תיאום תאי התא ברקמות מורכבות24,25,26. רוב HSEs כוללים רק פיברובלסטים עוריים וקרטינוציטים אפידרמליים27, אם כי סביבת העור in vivo כוללת סוגי תאים רבים אחרים. מחקרים שנעשו לאחרונה החלו לכלול יותר אוכלוסיות תאים; אלה כוללים תאי אנדותל ב vasculature10,28,29,30,31,32,33,34, adipocytes ברקמה תת עורית35,36, רכיבי עצב19,21, תאי גזע27,37,38, תאים חיסוניים10,39,40,41,42, ומחלות אחרות / סרטן מודלים ספציפיים16,40,43,44,45,46,47. חשוב במיוחד בקרב אלה הוא כלי דם; בעוד כמה HSEs כוללים תאי כלי דם, בסך הכל הם עדיין חסרים אלמנטים נימי מקיף עם קישוריות על פני הדרמיס כולו10,29 , מורחבת יציבות במבחנה28, ואת צפיפות כלי מתאים. יתר על כן, מודלים HSE מוערכים בדרך כלל באמצעות סעיף היסטולוגי פוסט-תרבותי אשר מגביל ניתוח של המבנה התלת מימדי של HSEs. ניתוח תלת מימדי מאפשר הערכה נפחית של צפיפות כלי הדם48,49, כמו גם וריאציה אזורית של עובי אפידרמיס ובידול.
למרות HSEs הם אחד הדגמים organotypic הנפוצים ביותר, ישנם אתגרים טכניים רבים ביצירת מבנים אלה כולל זיהוי של מטריצה חוץ תאית מתאימה צפיפות תאים, מתכונים מדיה, נהלי ממשק נוזלי אוויר נאות, וניתוח שלאחר התרבות. יתר על כן, בעוד מודלים HEE ו- HSE פרסמו פרוטוקולים, פרוטוקול מפורט המשלב vasculature עורי הדמיה נפחית ולא ניתוח היסטולוגי אינו קיים. עבודה זו מציגה פרוטוקול נגיש לתרבות של שווה ערך לעור אנושי וסקולרי (VHSE) מקווי תאים מסחריים בעיקר. פרוטוקול זה נכתב כדי להיות להתאמה אישית בקלות, המאפשר התאמה ישירה קדימה לסוגי תאים שונים וצרכי מחקר שונים. לטובת נגישות, זמינות ועלות, השימוש במוצרים פשוטים ובטכניקות דור קיבל עדיפות על פני שימוש במוצרים מסחריים זמינים. כמו כן, מתוארות שיטות הדמיה וכימות נפחיות פשוטות המאפשרות להעריך את המבנה התלת מימדי של ה- VHSE. תרגום הליך זה לפרוטוקול חזק ונגיש מאפשר לחוקרים שאינם מומחים ליישם מודלים חשובים אלה ברפואה מותאמת אישית, הנדסת רקמות וסקולריות, פיתוח שתלים והערכת תרופות.

<table><tbody><tr><td>1 N NaOH</td><td>Fisher Chemical</td><td>S318-100</td> <td>(מדולל ממלאי מעבדה)</td></tr> <tr><td>4% Paraformaldehyde</td><td>ACROS Organics</td><td>#41678-5000, Lot # B0143461</td><td>מורכב באמצעות Paraformaldehyde מוצק ב-PBS, pH מותאם ל-6.9</td></tr><tr><td>מלקחיים חיטוי</td><td>Fine Science Tools</td><td>#11295-00</td><td>Dumont #5 מלקחיים</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher bioreagents</td><td>Cat # BP510-250, Lot # 190231</td><td>רנאז, דנאז, קו תאים נטול פרוטאז</td></tr><tr><td>, אנדותל: תא אנדותל מיקרו-וסקולרי (HMEC1)</td><td>ATCC</td><td>CRL-3243</td><td>SV40 תא אנדותל מיקרו-וסקולרי אימורטלרי. שימו לב שנעשה שימוש ב-750,000 תאים/מ"ל של קולגן.</td></tr><tr><td>קו תאים, פיברובלסטים: פיברובלסטים אנושיים עוריים,</td><td>ATCC</td><td>PCS-201-012</td><td>תאי עור ראשוניים למבוגרים. שימו לב שנעשה שימוש ב-75,000 תאים/מ"ל קולגן.</td></tr><tr><td>קו תאים, פיברובלסטים: פירברובלסטים ריאתיים אנושיים (IMR90)</td> <td>ATCC</td><td>CCL-186</td><td>תאים עובריים ראשוניים. שימו לב שנעשה שימוש ב-75,000 תאים/מ"ל קולגן.</td></tr><tr><td>קו תאים, קרטינוציטים: N/TERT-1</td><td></td><td></td><td>אימורטליזציה באמצעות ביטוי hTERT. N/TERT-1 נוצר באמצעות וקטור רטרו-ויראלי המעניק עמידות להיגרומיצין. קו תאים שהוקם על ידי דיקסון ואחרים 2000. ניתן להחליף ב-ATCC PCS-200-010 או PCS-200-011. שימו לב שנעשה שימוש ב-170,000 תאים לכל מבנה; יש להשתמש בתאי N/TERT1 מצלחות שהן 30% מתכנסות - שתי צלחות תרבית רקמה 30% 90 מ"מ נותנות די והותר תאים. המחברים מודים לד"ר ג'ים ריינוולד ולד"ר אלן ה. ואן דן בוגארד על תרומתם הנדיבה של קווי תאי N/TERT.</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>תרמו מדעית; Sorvall Legend X1R</td><td></td> <td>(ציוד מעבדה סטנדרטי)</td></tr><tr><td>תוכנה חישובית</td><td>MATLAB</td><td>MATLAB 2020a</td><td>MathWorks, Natick, MA.</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>Leica TCS SPEII קונפוקלי</td><td></td><td>סריקת לייזר קונפוקלית. ניתן להחליף בקונפוקלים אחרים או במיקרוסקופ דה-קונבולוציה.</td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית (22 x 22)</td> <td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-545F</td><td>0.13-0.17 מ"מ מס' 1 עובי</td></tr><tr><td>ציאנואקרילט דבק סופר או גריז סיליקון</td><td>דבק מאסטרים</td><td>#THI0102</td><td>דבק מאסטרים, עבה, דבק מיידי, ציאנואקרילט; דבק סופר מועדף</td></tr><tr><td>DMEM מדיה</td><td>בסיס קורנינג; Mediatech, Inc</td><td>REF # 10-013-CM; אצווה # 26119007</td><td>DMEM, 1X (השינוי של Dulbecco במדיום הנשר) עם 4.5 גרם/ליטר גלוקוז, L-גלוטמין ונתרן פירובט</td></tr><tr><td>DMEM/F-12 50/50</td><td>קורנינג; Mediatech, Inc</td><td>REF # 10-090-CV; פריט # 21119006</td><td>DMEM/F-12 50/50, 1X (המוד של דולבקו. של תערובת F12 50/50 של Eagle's Medium/Ham's) עם L-גלוטמין</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Decon Labs</td><td>#V1101</td> <td>(ריאגנט מעבדה סטנדרטי)</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>פישר מדעי</td><td>חתול # FB12999102, לוט # AE29451050</td><td>סרום בקר עוברי בדרגת מחקר, טריפל 0.1 אום סטרילי מסנן</td></tr><tr><td>מלקחיים קצה עדין</td><td>כלים מדעיים עדינים</td> <td>#11295-00</td><td>Dumont #5 מלקחיים</td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמיס אנושי (EGF)</td><td>Peprotech</td><td>Cat # AF-100-15-1MG, לוט # 0318AFC05 D0218</td><td>מורכב ב-0.1% BSA ב-PBS</td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>אלפא Easar</td><td>לוט # 5002F2A</td><td>מורכב מאינסולין DMSO</td></tr><tr><td>(אנושי)</td><td>Peprotech</td><td>Lot # 9352621</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ניגודיות אור/פאזה הפוך</td><td>VWR</td><td>76317-470</td> <td>(ציוד מעבדה סטנדרטי)</td></tr><tr><td>איזופרוטרנול</td><td>אלפא אזר</td><td>#AAJ6178806</td><td>DL-איזופרוטרנול הידרוכלוריד, 98%</td></tr> <tr><td>קרטינוציטים-SFM (1x) בסיס מדיה</td><td>Gibco; Life Technologies Corporation</td><td>REF #: 10724-011; לוט # 2085518</td><td>Keratinocyte-SFM (1X); ללא סרום</td></tr><tr><td>חומצה L-אסקורבית</td><td>בינונית פישר כימית</td><td>חתול # A61-100, אצווה # 181977, CAS # 50-81-7</td><td>גבישי. ניתן לרכוש חומצה L-אסקורבית גם כמלח</td></tr><tr><td>L-גלוטמין (מוצק)</td> <td>פישר ביוריאגנטים</td><td>CAT # BP379-100, LOT # 172183, CAS # 56-85-9</td><td>L-גלוטמין, גבישים לבנים או אבקה גבישית</td></tr><tr><td>MCDB 131 בסיס מדיה</td><td>Gen Depot</td><td>CM034-050, לוט # 03062021</td><td>MCDB 131 בסיס בינוני, ללא L-גלוטמין, אגרופי מתכת מסוננים</td></tr><tr><td>סטריליים</td><td>Sona Enterprises (SE)</td><td>791LP, 12 יחידות</td><td>סט אגרוף עור חלול, פלדת פחמן גבוהה, קשיות: 48HRC; (גדלים שונים כולל): 1/8 אינץ', 5/32 אינץ', 3/16 אינץ', 7/32 אינץ', 1/4 אינץ', 9/32 אינץ', 5/16 אינץ', 3/4 אינץ', 7/16 אינץ', 1/2 אינץ', 5/8:, 3/4 אינץ'. סט אגרוף זה מועיל, אבל סכין x-acto יכולה לעבוד גם כן. גודל אגרוף המתכת שעובד היטב עבור 12 באר transwell VHSE הוא 3/8 אינץ' או 1/2 אינץ'.</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>פישר כימיקל</td><td>CAS # 67-56-1</td> <td>(לא חובה). לניקוי שלב התייבשות.</td></tr><tr><td>מתיל סליצילאט</td><td>פישר כימיקל</td><td>O3695-500; פריט # 164535; CAS # 119-36-8</td> <td>(לא חובה). לפינוי.</td></tr><tr><td>מיקרו-צינורות, 1.7 מ"ל</td><td>Genesee Scientific Corporation; אולימפוס פלסטיק חתול</td><td># 24-282; לוט # 19467</td><td>1.7 מ"ל מיקרו-צינורות, שקופות; עמיד בפני רתיחה, פוליפרופולן, מאושר Rnase, Dnase, DNA, מעכב PCR ו-PBS נטול אנדוטוקסין</td></tr><tr>, <td>מוצרי מחקר ביולוגי APEX</td><td>10x בדרגת תרבית או חיטוי</td><td>Cat # 20-134, Lot # 202237</td><td>PBS Buffer, אריזה יבשה פי 10; הוסף את תכולת האריזה למיכל והוסף מים לליטר 1 כדי לייצר מרוכז פי 10.</td></tr><tr><td>PBS, 1x דרגת תרבית, (-) סידן, (-) מגנזיום</td><td>Genesee Scientific Corporation</td><td>Ref # 25-508; פריט # 07171015</td><td></td></tr><tr><td>PBS, 1x</td><td>מוצרי מחקר ביולוגי APEX</td> שאינם בדרגת תרבות <td>Cat # 20-134, Lot # 202237</td><td>PBS Buffer, 10x אריזה יבשה; הוסף את תכולת האריזה למיכל והוסף מים לליטר 1 כדי לייצר מרוכז פי 10. יש לדלל ל-1x במים.&nbsp;</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>גיבקו; Life Technologies Corporation</td><td>Ref # 15140-122, Lot # 2199839</td><td>Pen Strep (10,000 יחידות/מ"ל פניצילין; 10,000 ug/mL Streptomycin)</td></tr><tr><td>צלחת פטרי, זכוכית,</td><td>קורנינג</td> קטן <td>PYREX 316060</td> <td>(אופציונלי). כדי לשמש כמיכל פינוי</td></tr><tr><td>צלחות פטרי, 100 מ"מ</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td>לשימוש ליצירת PDMS.</td></tr><tr><td>פולידימתילסילוקסן (PDMS)</td><td>Dow Corning</td><td>GMID 02065622, אצווה # H04719H035</td><td>Sylgard 184 בסיס אלסטומר סיליקון, דאו קורנינג, מידלנד, מישיגן)</td></tr><tr><td></td><td>Dow Corning</td><td>GMID 02065622, אצווה # H047JC4003</td><td>DOWSIL 184, חומר ריפוי אלסטומר סיליקון</td></tr><td colspan="4">הערה: PDMS נמכר בדרך כלל כערכה הכוללת גם את רכיבי הבסיס וגם את רכיבי חומר הריפוי.<tr></td></tr><tr><td>פיפטות תזוזה חיובית (1000 ו-250 uL)</td><td>Gilson</td><td>1000 uL: HM05136, M1000. 250 uL: T12269L</td><td>קיבולת פיפטה M1000 (100-1000 uL); קיבולת פיפטה M250 עד 250 uL</td></tr><tr><td>קצות/בוכנות תזוזה חיובית (1000 ו-250 uL)</td><td>Gilson</td><td>1000 uL: CAT # F148180, BATCH # B01292902S; 250 uL: CAT # F148114, BATCH # B05549718S</td><td>נימים ובוכנות מעוקרים</td></tr><tr><td>כף</td><td></td><td></td> עגולה <td>(אופציונלי; ציוד מעבדה סטנדרטי) למניפולציה של VHSEs לפני הדמיה</td></tr><tr><td>תוספים למדיה</td> <td>Keratinocyte-SFMגיבקו; Life Technologies Corporation</td><td>Ref # 37000-015, Lot # 2154180</td><td>מכיל EGF Human Recombinant (Cat # 10450-013), תמצית יותרת המוח של בקר (Cat # 13028-014)</td></tr> <tr><td>תוספות צלחת תרבית רקמות, גודל 12 בארות, 3 ומיקרו; m גודל נקבוביות</td><td>קורנינג; Costar</td><td>REF # 3462 - ברור; לוט # 14919057</td><td>Transwell; תוספות בקוטר 12 מ"מ, גודל נקבוביות 3.0 אום, תרבית רקמות מטופלת, קרום פוליאסטר, לוחות פוליסטירן,&nbsp;</td></tr><tr><td>צלחות תרבית רקמות, 12 בגודל</td><td>גריינר ביו-וואן; חתול CellStar</td><td># 665 180; לוט # E18103QT</td><td>צלחת תרבית תאים 12 באר; סטרילי, עם מכסה; המוצרים סטריליים, ללא דנאז, רנאז, DNA אנושי ופירוגנים הניתנים לזיהוי. תוכן</td></tr><tr><td>צלחות תרבית רקמות לא ציטוטוקסיות, 60.8 ס"מ ^ 2 אזור גידול</td><td>Genesee Scientific Corporation</td><td>Cat # 25-202; פריט מספר: 191218-177B</td><td>כלי תרבית רקמות; מטופל, שטח גידול 60.8 ס"מ^2; סטרילי, Dnase, Rnase, ללא פירוגן; פוליסטירן בתולי</td></tr><tr><td>Triton x 100</td><td>Ricca Chemical Company</td><td>Cat # 8698.5-16, Lot # 4708R34</td><td>חומר הרטבה</td></tr><tr><td>טריפסין 0.25%</td> <td>קורנינג; Mediatech, Inc</td><td>Ref # 25-053-CI</td><td>0.25% טריפסין, 2.21 מ"מ EDTA, 1x [-] נתרן ביקרבונט</td></tr><tr><td>סוג 1 קולגן מבודד מזנב עכברוש</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>56054-1</td><td>Sprauge-Dawley ניתן לרכוש קפוא מ-Pel-Freez או מספקים אחרים. ניתן לבודד קולגן מגידי הזנב. הפניות לפרוטוקול בידוד [Cross et al., 2010; Rajan et al., 2007; Bornstein, 1958] . לחלופין, ניתן לרכוש קולגן זנב עכברוש בריכוז גבוה מספקים כולל קורנינג (מספר קטלוגי: 354249)</td></tr> <tr><td>תא ואקום, ספסל</td><td>Bel-Art</td><td>F42010-0000</td> <td>(ציוד מעבדה סטנדרטי)</td></tr> <tr><td>סכין דיוק כף יד</td><td>X-Acto</td><td>X3311</td> <td>(סכין X-Acto אופציונלי אם נרכש אגרופי פלדה)</td></tr></tbody></table>

דור של שווה ערך לעור אנושי בהרכבה עצמית

Generation of Self-assembled Vascularized Human Skin Equivalents

שווה ערך לעור אנושי (HSEs) הם מבנים מהונדסים רקמות המודל רכיבים אפידרמיס עורי של העור האנושי. מודלים אלה שימשו לחקר התפתחות העור, ריפוי פצעים וטכניקות השתלה. HSEs רבים ממשיכים להיות חסרי כלי דם ומנותחים בנוסף באמצעות סעיף היסטולוגי פוסט-תרבותי המגביל הערכה נפחית של המבנה. מוצג כאן הוא פרוטוקול פשוט ניצול חומרים נגישים כדי ליצור שווה ערך לעור אנושי vascularized (VHSE); מתוארים עוד יותר הם טכניקות הדמיה וכימות נפחיות של מבנים אלה. בקצרה, VHSEs בנויים 12 מוסיף תרבות גם שבו תאים עוריים ואפידרמיס הם זרע לתוך סוג קולגן זנב חולדה אני ג'ל. התא העורי מורכב מתאי פיברובלסט ואנדותל המפוזרים בכל ג'ל הקולגן. תא האפידרמיס מורכב מקרטינוציטים (תאי אפיתל בעור) המבדילים בממשק הנוזלי-אוויר. חשוב לציין, שיטות אלה ניתנות להתאמה אישית בהתבסס על הצרכים של החוקר, עם תוצאות המדגימות ייצור VHSE עם שני סוגי תאים פיברובלסטים שונים: פיברובלסטים עוריים אנושיים (hDF) ופיברובלסטים ריאות אנושיים (IMR90s). VHSEs פותחו, צולמו באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית, ונותחו באופן נפחי באמצעות תוכנה חישובית בנקודות זמן של 4 ו-8 שבועות. מתואר תהליך ממוטב לתיקון, כתם, תמונה ו- VHSEs ברורים לבדיקה נפחית. טכניקות מקיפות אלה של מודל, הדמיה וניתוח ניתנות להתאמה אישית בקלות לצרכי המחקר הספציפיים של מעבדות בודדות עם או בלי ניסיון קודם של HSE.

מטרת פרוטוקול זה היא לתאר את הדור ואת הניתוח הנפחי של שווה ערך לעור אנושי וסקולרי באמצעות טכניקות נגישות ופשוטות לתרבות ארוכת טווח. ככל האפשר, הרציונל לצעדים מתואר כדי לאפשר לחוקרים את היכולת להתאים אישית בהתבסס על צרכי המחקר שלהם.

Human skin equivalents (HSEs) are tissue engineered constructs that model epidermal and dermal components of human skin. These models have been used to ...

הפרטים המפורטים בפרוטוקול זה, מתייחסים לדור שווה ערך לעור אנושי, שלעתים קרובות מאתגר מבחינה טכנית. אלמנטים חדשים של פרוטוקול שווה ערך לעור אנושי, כגון כלי דם והדמיה נפחית כלולים. הטכניקה מאפשרת בנייה פשוטה של מודל עור התואם באופן הדוק יותר רקמת in-vivo לחקר מחלות, הזדקנות ורפואה מותאמת אישית.החלק המאתגר ביותר בפרוטוקול זה הוא מעבר בין שקיעה לממשק נוזלי-אוויר. סביר להניח שיידרשו מספר ניסויים כדי למטב את רמות התזמון והמדיה לקבלת תוצאות עקביות. כדי להתחיל, להוסיף 516 מיקרוליטרים של מדיה לצינור קר כתרים, ומיד להוסיף 375 microliters של קולגן קר באמצעות פיפטה 1000-microliter תזוזה חיובית.הסר את קצה פיפטה ריק ולעבור פיפטה 250 מיקרוליטר חיובית מוכן לערבב. מערבבים במהירות, אך בעדינות כדי למנוע היווצרות בועה עודפת. שמירה על הקצה בתמיסה, לערבב באופן אחיד מעמדות שונות של הצינור עד הפתרון הוא של צבע הומוגני, אשר בדרך כלל לוקח בערך חמישה מחזורי פיפטה או 10 שניות.מיד לפזר 125 microliters של קולגן תאי על הממברנה של 12-טוב תרבות להוסיף. כדי להבטיח כיסוי אחיד, הטה את הצלחת והשתמש בקצה פיפטה כדי לצבוע את הממברנה על ידי הפצה עדינה של קולגן מסביב. מיד להעביר את צלחת 12 באר לחממה 37 מעלות צלזיוס תרבות התא לתת לו ג'ל לפחות 20 דקות.לאחר תקופת הג'לציה, מוציאים מהחממה את צלחת ה-12 באר של קולגן תאי. הסר את הצינור 1.7 מיליליטר מכוסה מקרח רטוב, ולאחר מכן להסיר את קולגן מלאי מקירור ומניחים אותו על קרח רטוב עם המכסה פתוח. מוסיפים 516 מיקרוליטרים של השעיית תאים מקוררים לצינור הקר.השתמש פיפטה 1000-microliter באופן מיידי פיפטה 375 microliters של פתרון קולגן קר ישירות לתוך הפתרון בתוך הצינור כתרים. לגרש את כל הקולגן מן פיפטה לתוך הצינור ולזרוק את קצה פיפטה תזוזה חיובית. מיד לעבור פיפטה 250-microliter ולערבב את פתרון קולגן פעם מעורב, להעביר 250 microliters של פתרון קולגן הסלולר על תמיכות קולגן תאיים 12-באר להוסיף תרבות, ולאחר מכן להעביר את צלחת 12-well לחממה תרבית תאים 37 מעלות צלזיוס.לאחר זמן ג'ל של 30 דקות, להטות בעדינות את הצלחת כדי להעריך את הג'לציה ולוודא כי הקולגן התגבש. הוסף 500 מיקרוליטרים ו- 1000 מיקרוליטרים של מדיית תערובת לתא העליון ולתא התחתון של הכנס, בהתאמה. ודאו שג'ל הקולגן שקוע, והוסיפו עוד מדיה במידת הצורך.מניחים את צלחת הבאר באינקובטור תרבות התא עבור דגירה לילה. ביום שקיעה שבע, להשתמש פיפטה ידנית כדי לאסוף ולהשליך מדיה מן התא התחתון העליון של כל מבנה היטב. כדי לאסוף מדיה תקועה ישירות מתחת לקרום חדיר, למקם את קצה פיפטה מתחת לקרום, לדפוק את הכנס מחוץ למקום באופן זמני.הוסף מיליליטר אחד של העור האנושי שווה ערך או מדיה HSE בתוספת 5%FPS לתא התחתון של כל באר ו 200 microliters של השעיית תאים לתא העליון של כל באר. זרעו את הקרטינוציטים ישירות על משטח המבנה העורי ואפשרו להם להסתפק במשך שעתיים באינקובטור. שעתיים לאחר זריעת keratinocytes, בזהירות להוסיף 300 microliters של מדיה HSE, בתוספת 5%FPS לתא העליון של כל מבנה היטב.לאחר טעינת המדיה, הנח את המבנה בחזרה לאינקובטור. באמצעות פיפטה ידנית, הרם כל מבנה לממשק נוזלי האוויר שלו, או ALI, על-ידי הסרת פסולת מדיה מהתא העליון בלבד. נסו להתקרב ככל האפשר לשכבת האפידרמיס מבלי לגעת בה או לפגוע בה.להטות את הצלחות מעט בזוויות שונות כדי לאסוף את המדיה, ולאחר מכן להוסיף כשני מיליליטר של מים סטריליים לבארות שמסביב בצלחת כדי לשמור על לחות עקבית. בדוק את הצלחת כמה שעות מאוחר יותר כדי לוודא את keratinocytes הם עדיין ב ALI. הסר מדיה כלשהי בתא העליון, תוך מעקב אחר כמות המדיה המוסרת מכל באר.שכבות האפידרמיס צריך להיראות hydrated, לא יבש, אבל לא צריך להיות מדיה במאגר על גבי המבנה. כדי להכין את המבנה עבור כתמים immunofluorescent, להפוך להוסיף במהופך ומניחים אותו על הבאר שלה על צלחת היטב. לייצב את הכנס ביד אחת תוך שימוש במלקחיים עדינים או סכין מדויקת כדי לחתוך כמחצית מהיקף הממברנה.חותכים קרוב ככל האפשר לדיור הפלסטיק. באמצעות מלקחיים קצה עדין, לתפוס את הקצה של דש קרום לחתוך בעדינות לקלף את הממברנה הנקבובית את הכנס, כמו גם את מבנה VHSE. אם המבנה נתקע בצד התא, השתמש במלקחיים העדינים או בסקופולה קטנה כדי להעביר אותו לבאר.לאחר VHSE הוא בבאר, להשליך את כל החלקים הנותרים של קרום הכנס ולשמור את התרבות להוסיף דיור בכל באר להחזיק את VHSEs במצב שקוע במהלך הכתמה. יומיים לפני ההדמיה, הכינו פוליאדימיאתילסילוקסן או PDMS. מניחים כל כלי ערבוב נקי על איזון שקילה ו tare את קנה המידה.הוסף את הבסיס ולאחר מכן הוסף את ההצלבה. מערבבים את הפתרון במרץ במשך ארבע דקות לפחות, ויוצרים בועות קטנות. לאחר ערבוב מספיק, יוצקים את PDMS לתוך צלחת פטרי 90 או 100 מילימטר.דגה את ה-PDMS בתא ואקום עד שכל הבועות ייעלמו וה-PDMS יהיה ברור. שחררו את הוואקום באיטיות והסירו את ה-PDMS. מניחים את המנה לתוך תנור לרפא לילה ב 50 עד 60 מעלות צלזיוס, לוודא כי המנה יושבת שטוחה עבור PDMS לרפא באופן שווה.יום אחד לפני ההדמיה, השתמש באגרוף פלדה או בסכין דיוק כף יד כדי להכות או לחתוך באר עגולה מגיליון PDMS, בערך באותו גודל כמו מבנה VHSE. חותכים תיקון מרובע סביב הבאר המעגלית כדי ליצור באר PDMS אחת. באמצעות כיסוי זכוכית להחליק בגודל דומה כמו PDMS גם להוסיף דבק ציאנואקרילאט למשטח התחתון של PDMS למרוח באופן שווה עם קצה פיפטה חד פעמי.מרכז את הזכוכית ולחץ עליה היטב על ה- PDMS תוך השארת חלון זכוכית שקוף בתוך העיגול המנוקב. תן את הדבק להתייבש לילה לפני השימוש. אפיון האפידרמיס והדרמיס מראה סמנים אימונופלואורסצנטיים מתאימים לעור האדם במבני VHSE.ציטוקרטין 10 הוא סמן קרטינוציט דיפרנציאציה מוקדם שבדרך כלל מסמן את כל שכבות suprabasal המקבילות לעור. Involucrin ו filaggrin הם סמני בידול מאוחרים קרטינוציטים ולסמן את השכבות העליונות ביותר suprabasal המקבילות לעור. ניקוי VHSE מותר הדמיה פשוטה בהגדרה אחת וביטל את הצורך לכוון מחדש את המבנה כדי לדמיין את הדרמיס ואפידרמיס בנפרד.תמונות נפחיות מאפשרות ליצור עיבודים תלת-ממדיים למיפוי כלי דם בכל מבנה. ערימות תמונות נטענו לתוכנה חישובית ואלגוריתם מותאם אישית שימש לעיבוד וכימות תלת-ממדיים. השלד קבע את המרכז הסופי של כל כלי מסומן קולגן IV ואת הנתונים וכתוצאה מכך שימש לחישוב קוטר כלי הדם, כמו גם שבר כלי הדם.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אפיון כגון ניתוח מחסום, סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים, פרופילי שומנים ואחרים כדי להבין כיצד כלי הדם משפיעים באופן ספציפי על התבגרות אפידרמיס ויציבות. פרוטוקול זה מאפשר מחקרים רלוונטיים לרקמות וסוגי תאים במודל עור שעבר כלי דם. היא מתאימה במיוחד למחקר ברפואה מזדקנת ומותאם אישית.

generation-of-self-assembled-vascularized-human-skin-equivalents

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול המפורט ליצירת שחזורי עור אורגנוטיפיים תלת-ממדיים במבחנה לחקר התקדמות המלנומה. מודל עור זה מחקה הן את הארכיטקטורה והן את המורכבות הרב-תאית של איברים in vivo.

יצירת שחזורי עור מלא אורגנוטיפיים: הליך לביסוס מודל עור תלת ממדי באמצעות דגימות עור אנושיות

כלי דם הוא מפתח לגישות בהנדסת רקמות מוצלחת. לכן, טכנולוגיות אמינות נדרשות כדי להעריך את ההתפתחות של רשתות כלי דם ברקמות מבנים. כאן אנו מציגים שיטה פשוטה, יעיל וחסכונית כדי לחזות ולכמת כלי דם בגוף חי.

עור מלא פגמים דגם להערכת כלי דם של Biomaterials<em&gt; בVivo</em

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר שתלי כלי רקמה מהונדסת, כי הם פונקציונליים להשתלה לעכברים על ידי זריעה כפולה תאי גזע pluripotent מושרה באופן חלקי (PiPSC) - נגזר תאי שריר חלק וPiPSC - תאי האנדותל נגזרו על bioreactor פיגום כלי decellularized.

דור והארכת כלי רקמות מהונדסות במודל עכבר

המטרה של פרוטוקול זה היא לבנות עור תלת מימדי בעובי מלא, הדומה לעור טבעי. עם מכשיר פציעה אוטומטי שנבנה במיוחד, ניתן ליצור פצעים מדויקים וניתנים לשחזור תחת שמירה על סטריליות.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

מטרת מאמר זה היא לספק פרוטוקול מקיף ומפורט כיצד ליצור עור אורגנוטיפי אנושי מהונדס גנטית מקרטינוציטים אפידרמליים ודרמיס אנושי נטול חיוניות.

דור של תרבויות עור Organotypic מהונדסות גנטי שימוש חסר חיוניות עור אדם

אנו מציעים פרוטוקול זה מראה כיצד להבדיל keratinocytes נגזר תאי גזע pluripotent המושרה ו fibroblasts וליצור תא צורב של העור תלת-ממד באמצעות אלה keratinocytes ו fibroblasts. פרוטוקול זה מכיל צעד נוסף של יצירת מודל humanized עכברים. הטכניקה המובאת כאן תשפר את המחקר דרמטולוגית.

דור של תא צורב עור תלת-ממד של כבל דם-derived המושרה בתאי גזע Pluripotent

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה לטיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי מחדש באופן ניתן לשחזור וחזק. בנוסף, הוא מאפיין את הקשר המבני-פונקציה של מודל מחסום האפידרמיס. התגובות הביולוגיות של האפידרמיס האנושי המחודש על גירויים proinflammatory מוצגים גם.

טיפוח אפידרמיס אנושי תלת מימדי משוחזר בקנה מידה גדול

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת מודל עור תלת מימדי פשוט ובלתי מופרע באמצעות פלטפורמה מיקרופלואידית מיקרו-מכונות. גישת זרימה מקבילה מאפשרת תצהיר במקום של תא עורי לזרוע של תאי אפיתל על גבי, כל נשלט על ידי משאבות מזרק.

יצירת דגם תלת מימדי תלת מימדי של עור על שבב בפלטפורמה מיקרופלואידית מיקרו-מכונות

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של כלי דם המארגנים את עצמם מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים ומושרים פלוריפוטנטים. רשתות כלי דם אלה מציגות רשת אנדותל נרחבת ומחוברת המוקפת בפריציטים, אקטין שריר חלק וקרום מרתף רציף.

יצירת אורגנואידים של כלי דם אנושיים מתאי גזע פלוריפוטנטיים

כאן, אנו מציגים הליכים זולים ופשוטים להצגת מודלים שונים של עור תלת ממדי למחקר שגרתי במעבדה לתרביות תאים. חוקרים יכולים ליצור מודלים המותאמים לצרכיהם מבלי להסתמך על מודלים זמינים מסחרית.

בניית מודלים לעור עבור יישומים רבים - החל ממונוקולטורה דו-ממדית (2D) ועד רב-תרבותיות תלת-ממדית (3D)

פרוטוקול זה מתאר שיטה לייצור אורגנואידים בעור המכילים זקיקי שיער מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם באמצעות מערכת תרבית ממשק אוויר-נוזל מישורית רלוונטית מבחינה פיזיולוגית כדי לשכפל את הארכיטקטורה והתפקוד של העור.

יצירת אורגנואידים מעור מישוריים נושאי שיער שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים באמצעות מערכת תרבית ממשק אוויר-נוזל

למד ליצור דגמי עור אנושי מווסתים לחקר מחלות, הזדקנות ורפואה מותאמת אישית. הפרוטוקול מסביר מעבר בין טבילה לממשק אוויר-נוזל וניתוח נפחי תלת-ממדי.

דור של שווה ערך לעור אנושי בהרכבה עצמית

גלה סרטונים נוספים