Name: כתמים, הדמיה וניתוח של פטריות, בלוטות טעם של הרכבה מלאה, מקיפים וחיך (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: למד שיטת ניתוח whole-mount לבלוטות טעם בלשון עכברים, כולל פטריות, מקיפות וחיך. השיטה מאפשרת מדידה מדויקת של תאים ועצבוב לחקר מעגלים עצביים בטעם ומחלות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ל-Kavisca Kuruparanantha על תרומתה להכתמת רקמות והדמיה של בלוטות טעם מקיפות, ג'ניפר שו על הכתמתה והדמיה של פנימיות לפפילה, לקרן קייט לטיפול בבעלי חיים וגנוטיפינג, וללקון מא על הכתמת הרקמה שלה בבלוטות הטעם הרך.. פרויקט זה נתמך על ידי R21 DC014857 ו- R01 DC007176 ל- R.F.K ו- F31 DC017660 ל- L.O.

למחברים אין מה לחשוף.

התפתחות גישה לאיסוף והכתמה עקבית של בלוטות טעם שלמות משלושה אזורי טעם חלל הפה (פטריות, ברית מילה והחך) מספקת שיפורים משמעותיים לניתוח תאים ממחליפו טעם, מעקב אחר תאים משולבים חדשים, פנימיות ויחסים בין מבנים אלה. בנוסף, זה מקל על לוקליזציה של סמן נוירון משני פוטנציאלי הן בתוך או מחוץ לאוכלוסייה מתויגת50. זה רלוונטי במיוחד בהתחשב בכך papillae gustatory גם לקבל innervation סומטוסנסורי חזק52,53, אשר עשוי גם לתייג כמה נוירונים טעם. ניתן גם לדמיי...

בלוטות הטעם הן אוספים של 50-100 תאי כינוי מיוחדים הקושרים תת-קבוצות של גירויים בעלי טעם כימי הנמצאים בחלל הפה. תאים טרנס-טרנסדוקציה טעם נחשבים בדרך כלל קיימים כמו סוגים1,2,3,4,5,6,7,8,9, בתחילה מבוסס על קריטריוני מיקרוסקופיה אלקטרונים שהיו מאוחר יותר בקורלציה עם סמנים מולקולריים. תאים מסוג II מבטאים פוספוליפאז C-beta 2 (PLCβ2)2 ואת קולטן חולף פוטנציאל cation ערוץ, חבר M subfamily 51 וכוללים תאים המתמרנים מתוק, מר, umami1,10. תאי סוג III מבטאים אנהידריז קרבוני 4 (Car4)11 וחלבון הקשור סינפטוזומלי 258 ומצביעים על תאים שמגיבים בעיקר לטעם חמוץ11. התאים המעבירים מליחות לא היו מתווים בבירור12,13,14, אך עשויים לכלול תאים מסוג I, סוג II וסוג III15,16,17,18,19. סביבת בלוטות הטעם מורכבת ודינמית, בהתחשב בכך שתאים ממחליפו טעם מתהפכות ברציפות לאורך כל הבגרות ומוחלפות באבות הבסיסיים3,20,21. תאים אלה מעבירי טעם מתחברים לסיבי עצב פסאודו-חד-קוטביים מהגרעיקים הגנניים והפטרוסאליים, המעבירים מידע טעם לגזע המוח. נוירונים אלה סווגו בעיקר על סמך סוג של מידע טעם שהם נושאים22,23 כי מידע על המורפולוגיה שלהם היה חמקמק עד לאחרונה24. תאים מסוג II מתקשרים עם סיבי עצב באמצעות חלבון אפנון הסידן הומאוסטזיס 1 ערוצי יונים25, ואילו תאים מסוג III מתקשרים באמצעות סינפסות קלאסיות8,26. אפיון נוסף של תאי בלוטות הטעם - כולל טרנסולציה של שושלות סוג התא, גורמים המשפיעים על הבידול שלהם, ואת המבנים של חיבור arbors הם כל תחומי החקירה הפעילה.
מחקרי בלוטות טעם הופרעו על ידי מספר אתגרים טכניים. הרקמות ההטרוגניות והצפופות המרכיבות את הלשון מפחיתות באופן משמעותי את חמידות הנוגדנים לאימונוהיסטוכימיה27,28,29. מכשולים אלה חייבו פרוטוקולי חלוקה המביאים לפיצול בלוטות הטעם על פני מקטעים, כך שהמדידות משוערות על סמך מקטעים מייצגים או מסתכמות על-פני מקטעים. בעבר, נעשה שימוש במקטעים דקים מייצגים כדי להעריך הן ערכי אמצעי אחסון והן את ספירת התאים של התמתן30. חתך סדרתי עבה יותר מאפשר הדמיה של כל מקטעי בלוטות הטעם וסיכום המדידות מכל סעיף31. חיתוך קטעים עבים כאלה ובחירת רק בלוטות טעם שלם הטיות דגימה לכיוון בלוטות טעם קטנות יותר32,33,34. הערכות פנימיות עצביות מבלוטות טעם חלקיות התבססו על ניתוחים של מספרי פיקסלים13,35, אם כימותו בכלל36,37,38. מדידות אלה מתעלמות לחלוטין מהמבנה ומספר הארבורים העצביים הבודדים, מכיוון שארבורים מפוצלים (ובדרך כלל מסומנים בצורה גרועה). לבסוף, למרות קילוף האפיתל מאפשר בלוטות טעם שלמות להיות מוכתם39,40, זה גם מסיר סיבי עצב בלוטות טעם ועלול לשבש את היחסים הרגילים בין תאים. לכן, חקירות של היחסים המבניים בתוך בלוטות הטעם הוגבלו בגלל הפרעה זו הנגרמת על ידי גישות מכתימות.
אוסף מבנה שלם מבטל את הצורך בסעיפים מייצגים ומאפשר קביעת מדידות בעלות ערך מוחלט של אמצעי אחסון, ספירת תאים ומורפולוגיות מבנה41. גישה זו גם מגבירה את הדיוק, מגבילה הטיה ומפחיתה את השונות הטכנית. אלמנט אחרון זה חשוב מכיוון שבלוטות הטעם מראות שונות ביולוגית ניכרת הן בתוך34,42 והן על פני אזורים43,44, וניתוחים שלם של בלוטות הטעם מאפשרים להשוות מספרי תאים מוחלטים בין תנאי שליטה וניסיוניים. יתר על כן, היכולת לאסוף בלוטות טעם שלמות מאפשרת ניתוח של היחסים הפיזיים בין תאים שונים transducing וסיבי העצב הקשורים שלהם. מכיוון שתאים מעבירי טעם עשויים לתקשר זה עם זה45 ולתקשר עם סיבי עצב46, יחסים אלה חשובים לתפקוד תקין. לפיכך, תנאי אובדן תפקוד לא יכול להיות עקב אובדן תאים, אלא שינויים ביחסי תאים. כאן יש שיטה לאיסוף בלוטות טעם שלמות כדי להשיג את היתרונות של מדידות מוחלטות עבור ניתוחי נפח זיקוק עבור בלוטות הטעם שלהם ואת innervations שלהם, ספירות תאי טעם וצורות, ועל להקל על ניתוחים של מערכות יחסים בין תאים transducing ומורפולוגיות עצב-arbor. שתי זרימות עבודה מוצגות גם במורד הזרם של שיטת הרכבה מלאה חדשנית זו להכנת רקמות: 1) לניתוח נפח בלוטות הטעם ו- innervation מוחלט ו -2) לתיוג גנטי של תאים דלילה של נוירוני טעם (עם תת-קבוצות של תאים ממחלימים בטעם המסומנים) וניתוחים הבאים של מורפולוגיה של ארבור עצב הטעם, מספר סוגי תאי הטעם וצורותיהם, ושימוש בתוכנת ניתוח תמונה כדי לנתח את היחסים הפיזיים בין תאים transducing ואלה בין transducing תאים וארבור העצבים שלהם. יחד, זרימות עבודה אלה מספקות גישה חדשנית להכנת רקמות ולניתחים של בלוטות טעם שלמות והמורפולוגיה המלאה של הארבורים הפנימיים שלהם.

<table><tbody><tr><td>2,2,2-טריברומו-אתנול</td><td>ACROS Organics</td><td></td> AC421430100-2-מתילבוטן <td></td></tr><tr><td></td><td>ACROS</td><td></td> 126470025-AffiniPure <td></td></tr><tr><td>Fab Fragment חמור נגד ארנב IgG</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>711-007-003</td><td>15.5&mu; L/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>712-605-150</td><td>(1:500)</td></tr> <tr><td>תוכנת AutoQuant X3</td>&<td>nbsp; מדיה קיברנטיקה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים קהים כלים</td><td>מדעיים עדינים &nbsp;</td><td>FST 91100-12</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT&trade; בנוסף ערכת ריבוי תאים של EdU</td><td>בדיקות מולקולריות</td><td>C10637</td><td>עקוב אחר הוראות הערכה&nbsp;</td></tr><tr><td>Coverglass</td><td>Marienfeld</td><td>107242</td><td></td></tr><tr><td>Cytokeratin-8</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה (DSHB), (RRID: AB_531826)&nbsp;</td><td>Troma1 supernatant</td> <td>(1:50, חנות ב-4&deg; ג)</td></tr> <tr><td>מספריים לדיסקציה (גס)</td> <td>Roboz</td><td>RS-5619</td><td></td></tr><tr><td>מספריים לדיסקציה (עדין)</td> <td>Moria</td><td>MC19B</td><td></td></tr><tr><td>חמור נגד ארנב IgG (H + L) נוגדן משני נספג מאוד, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A21206</td> <td>(1:500)</td></tr> <tr><td>חמור נגד ארנב, Alexa Fluor&reg; 555</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A31572</td> <td>(1:500)</td></tr><tr><td>DyLight &trade; 405 AffiniPure Fab Fragment בקר נגד עזים IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>805-477-008</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות זכוכית</td><td>פישר סיינטיפיק (Superfrost Plus Miscroscope Slides)</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>עז נגד Car4</td><td>R& D מערכות&nbsp;</td><td>AF2414</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>אימריס&nbsp;</td><td>ביטפליין&nbsp;</td>תוכנה <td></td><td>לניתוח תמונות מבוססת פיקסלים</td></tr><tr><td>Neurolucida 360 + Explorer</td><td>MBF Biosciences</td><td>תוכנה לניתוח תמונות מבוססות וקטור תלת מימד סרום</td><td></td></tr><tr><td>חמור רגיל</td><td>ג'קסון מחקר חיסוני</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>סרום ארנב רגיל&nbsp;</td><td>Equitech-Bio, Inc</td><td>SR30</td><td></td></tr><tr><td>Olympus FV1000</td><td></td> <td>(לייזר רב-ארגון עם אורכי גל 458, 488, 515 ולייזרים נוספים של HeNe הפולטים 543 ו-633)</td><td></td></tr> <tr><td>Paraformaldehyde</td><td>EMD</td><td>PX0055-3</td><td>4% ב-0.1M PB</td></tr><tr><td>ארנב אנטי-dsRed</td><td>Living Colors DsRed Polyclonal Antibody; Clontech Clontech Laboratories, Inc. (632496)</td><td>632496</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>ארנב נגד PLC ובטא; 2&nbsp;</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>Cat# sc-206</td> <td>(1:500)</td></tr> <tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי</td><td>נטול מים פישר מדעי</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט מונו-בסיסי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP330-500</td><td></td></tr><tr><td>טרט-אמיל אלכוהול</td><td>אולדריץ' כימיקלים חברה</td><td>8.06193</td><td></td></tr><tr><td>תבניות רקמות</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>70180</td><td></td></tr><tr><td>רקמות-טק&רג; &nbsp;O.C.T. תרכובת</td><td>סאקורה</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>BIO-RAD</td> <td>#161-0407</td><td></td></tr><tr><td>Zenon&trade; אלקסה פלואור&סחר; ערכת תיוג IgG של ארנב 555</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Z25305</td><td>עקוב אחר הוראות הערכה&nbsp;</td></tr></tbody></table>

כתמים, הדמיה וניתוח של פטריות, בלוטות טעם של הרכבה מלאה, מקיפים וחיך

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

בלוטות טעם הן אוספים של תאים ממחלים טעם המתמחים לזהות תת קבוצות של גירויים כימיים בחלל הפה. תאים אלה transducing לתקשר עם סיבי עצב הנושאים את המידע הזה למוח. מכיוון שתאים מעבירי טעם מתים ללא הרף ומוחלפים לאורך כל הבגרות, סביבת בלוטות הטעם מורכבת ודינמית, ודורשת ניתוחים מפורטים של סוגי התאים שלה, מיקומם וכל מערכת היחסים הפיזית ביניהם. ניתוחים מפורטים הוגבלו על ידי הטרוגניות וצפיפות רקמת לשון שהפחיתו באופן משמעותי את חמיכות הנוגדנים. מכשולים אלה דורשים פרוטוקולי חתך שגורמים לפיצול בלוטות הטעם על-פני מקטעים כך שהמדידות משוערות בלבד, וקשרי תאים הולכים לאיבוד. כדי להתגבר על אתגרים אלה, השיטות המתוארות בזאת כוללות איסוף, הדמיה וניתוח בלוטות טעם שלמות וארבורים סופניים בודדים משלושה אזורי טעם: פפילה פטרייתית, פפילות היקפיות והחך. איסוף בלוטות טעם שלמות מפחית הטיה ושונות טכנית וניתן להשתמש בו כדי לדווח על מספרים מוחלטים עבור תכונות כולל נפח בלוטות טעם, פנימיות בלוטות טעם כוללת, ספירת תאים transducing, ואת המורפולוגיה של arbors מסוף בודדים. כדי להדגים את היתרונות של שיטה זו, מאמר זה מספק השוואות של בלוטות טעם וכרכים פנימיים בין פטריות ולהקיף בלוטות טעם באמצעות סמן טעם כללי תווית לכל סיבי הטעם. זרימת עבודה לשימוש בתיוג גנטי של תאים דלילים של נוירוני טעם (עם תת-קבוצות מסומנות של תאים ממחלים טעם) מסופקת גם כן. זרימת עבודה זו מנתחת את המבנים של ארבורים בודדים של עצב הטעם, מספרי סוג התאים ואת היחסים הפיזיים בין תאים באמצעות תוכנת ניתוח תמונה. יחד, זרימות עבודה אלה מספקות גישה חדשנית להכנת רקמות וניתוח של בלוטות הטעם המלאות והמורפולוגיה המלאה של הארבורים הפנימיים שלהם.

הכתמת האפיתל הלינגואלי בנוגדנים ל- dsRed ו- keratin-8 (סמן בלוטות טעם כללי) שכותרתו הן בלוטות טעם שלמות והן כל הטעם הפנימי ב- Phox2b-Cre:עכברי tdTomato50,51 (איור 3A). הדמיית בלוטות הטעם האלה מהנקבוביות לבסיסים שלהן נתנה את התמונות המישוריות x-y ברזולוציה הגבוהה ביותר(איור 3A,B). פונקציית קווי המתאר של תוכנית ההדמיה המבוססת על פיקסלים שימשה כדי להתוות את הפריפריה של בלוטות הטעם בכל מקטע ...

מאמר זה מתאר שיטות להכנת רקמות, כתמים וניתוח של פטריות שלמות, בלוטות טעם וחך המניבות בעקביות בלוטות טעם שלמות ושלמות (כולל סיבי העצבים המעוררים אותן) ושומרות על היחסים בין מבנים בתוך בלוטות הטעם לבין הפפילה שמסביב.

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

זרימת עבודה זו של ניתוח וניתוח הרכבה שלמה מספקת גישה חדשנית לניתוח המורפולוגיה המלאה של ארבורים עצביים של טעם אישי, העברת מספרים מסוג תאים ויחסים פיזיים בין תאים. איסוף האפיתל הלשון כולו מאפשר לנו למדוד את המספר המוחלט של תאים ואת נפח הפנימיות בתוך כל בלוטות הטעם. גישה זו מדויקת יותר מהערכות של מבנה התא בהתבסס על דגימה מקטעים, מה שמפחית את השונות הטכנית.זוהי גם השיטה הראשונה המספקת ניתוח מפורט של תאי בלוטות הטעם ביחס ל- innervation שלהם. שיטה זו יכולה לשפר את החקירות של המעגלים הפוטנציאליים בתוך בלוטות הטעם, כמו גם תהליכי מחלה וכימותרפיה המשבשים את תפקוד הטעם הרגיל. ברוב המקרים הללו, לא ברור איזה מבנה או מערכת יחסים משובשים, ולכן שמירה על כל הגורמים הללו ללא פגע מאפשרת את כל הניתוחים בתוך הכנה אחת.הטעות הנפוצה ביותר היא לנסות להימנע מפגיעה באפיתל על ידי לא לנתח קרוב מספיק לחלק התחתון של האפיתל. זה הכרחי להסיר כמה שיותר רקמה הבסיסית ככל האפשר לפני הקפאת הרקמה בתבנית הרקמה. חשוב גם לוודא האפיתל שוכב שטוח בתחתית תבנית הרקמה.התחל על ידי הפשרה ושטיפה של הלשון במאגר פוספט טוחן 0.1. לאחר מכן מניחים 1/2 מהלשון הזעירה המכילה את הפפילה הפטרייתית על מגלשת זכוכית מתחת למיקרוסקופ ניתוח. השתמש במלקחיים קהים ומספריים כדי להסיר את השריר ולהחזיק את הרקמה פתוחה כמו האפיתל הלינגואל מעוקל, הבטחת כיוון שטוח של רקמה על ידי שמירה על הלהבים של מספריים ניתוח גס במקביל לאפיתל.להשליך את האפיתל הגחוני לא קרטין של הלשון כפי שהוא אינו מכיל בלוטות טעם. לאחר מכן להשתמש מספריים ביתוש עדין עבור ניתוח קרוב יותר לחלק התחתון של האפיתל קרטין. השתמש במלקחיים קהים כדי להניח חתיכת אפיתל לתוך תבנית רקמה ולהבטיח כי הוא שוכב שטוח.לאחר מכן להוסיף טיפה של תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית, או OCT, לרקמה. מניחים את תבנית הרקמה על בסיס מתכת מקורר בעבר מתחת לטווח הניתוח, ולאחר מכן להמשיך להקיש על הרקמה בקלילות עם המלקחיים עד OCT קפא, להבטיח כי הרקמה קופאת שטוח ככל האפשר. לאחר OCT קפא, במהירות להוסיף OCT נוסף ומניחים את התבנית בכיסת של 2-מתילבוטן מקורר עד קפוא.הר את עובש OCT על cryostat לחתוך אותו לתוך 20 מקטעים מיקרון. לאסוף כל קטע ולהציג אותו תחת מיקרוסקופ האור כדי להעריך את קרבתו לבסיס האפיתל. לאחר שהרקמה מגולחת מהיד תחתון האפיתל, מפשירים את האפיתל ושוטפים אותו פעמיים ב-0.1 PB טוחן על שייקר.חותכים את החיך הקשה לצומת החיך הרך והקשה, ואז מפרידים את החיך הרך מהרקמה הבסיסית, מוודאים שכל שברי העצם הנותרים נחתכים ומוציאים שרירים ורקמת חיבור נוספים. החזק את החיך עם מלקחיים קהים ולהסיר את הבלוטות הנותרות לאבד רקמת חיבור על ידי גירוד בעדינות אותם עם סכין גילוח. בלוטות טעם שלם וכל פנימיות בלוטות הטעם בעכברים Phox2b-Cre TdTomato תויגו על ידי הכתמת האפיתל הלשון בנוגדנים ל- DsRed ו- keratin שמונה.נפח בלוטות הטעם נמדד ולא גילה קשרים בין נפחי בלוטות הטעם וכרכים פנימיים בפטריות או באזורי מדידת ההיקף. הממשל של מינון נמוך של טמוקסיפן בעכברים TrkB CreER TdTomato גורם רקומבינציה גנים ותיוג של מספר קטן של נוירונים. בלוטות טעם של הר שלם מוכתמות בסמני תאים מתמרנים בטעם, אנהידראז קרבוני ארבע ופוספוליפאז C בטא 2 מוצג כאן.בלוטות טעם זו יש שני arbors מסוף שכותרתו, אשר מוצגים עם בלוטות הטעם הוסר לאחר שחזור הסיבים. שימוש בתוכנת הדמיה מבוססת פיקסלים של תאים כדי לקבוע את הקרבה הקרובה ביותר בין סיבי עצב לתאי העברת טעם גילה שמתוך 19 תאים ממחליפים טעם, הארבור של המסוף הכחול היה בטווח של 200 ננומטר מהאנוהירז הקרבוני הכחול הבהיר ארבעה פלוס תאים. הארבור הסופי הקשור למעקב הירוק מוצג במגנטה והוא נמצא בטווח של 200 ננומטרים הן של האנהידריז הקרבוני הכחול הבהיר והן מהכחול הכהה ארבעה תאים פלוס.קרטין הר שלם שמונה ו 5-אתניל-2'deoxyuridine או EdU כתמים של בלוטות טעם פטריות גילה כי תאים מתויגים EdU היו נוכחים בתוך ומחוץ לבלוטות הטעם. המגנטה והגרעין הסגול נצפים מחוץ לקרטין שמונה פלוס גבול בלוטות הטעם. התאים הצהובים, הצהבהבים והכחולים היו בתוך בלוטות הטעם.כאשר מנסים פרוטוקול זה, ניתוח הרקמה וצעדי הקפאה הם מכריעים. שיטות ניתוח רקמות אלה יכולות להיות ואחריו כתמים עבור מגוון של תאים ומבנים כדי לנתח את היחסים הן בתוך בלוטות הטעם והן מחוץ לבלוטות הטעם, אבל בתוך הפפילה. זהו הניתוח הראשון של arbors טעם שלם בתוך בלוטות הטעם, כמו גם את היחסים שלהם עם תאים transducing טעם.שמירה והכתמת חלק מהאלמנטים הללו בהכנה אחת מרחיבות את אפשרויות הניתוח ומעדנות את המדידות האפשריות.

whole-mount-staining-visualization-analysis-fungiform-circumvallate

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הידע של המנגנונים המולקולריים שבבסיס התמרה התעורר אצלם נהנתה לאחרונה התקדמות משמעותית, בעיקר בשל שימוש במודלים של בעלי חיים. עם זאת, מגוון רחב של רגישות וספציפיות טעם בקרב היונקים מחקרים צווי ברקמות אנושיות. אנו מתארים טכניקה ביופסיה כדי לאסוף טעם תאים חיים מ גבשושיות על הלשון האנושית.

שיטת איסוף Fungiform (טעם) ואדומות מן הלשון האדם

המטרה היא לפתח פרוטוקול לשחזור לבידוד ושמירה לטווח ארוך של תרבויות אנושיות הטעם תאים fungiform גבשושיות. תאים מאדם fungiform גבשושיות מתקבל על ידי ביופסיה נשמרו בהצלחה במשך יותר משמונה קטעים (12 חודשים) בתרבות ללא אובדן הכדאיות.

בידוד והתרבות של האדם בחוש הטעם תאים Fungiform גבשושיות

מקור: Fowler, B. E., et al. הדמיית סידן in vivo של תגובות נוירונים גנגליון גנגליון של עכבר לגירוי טעם. J. Vis. Exp. (2021) סרטון זה מדגים פרוטוקול להעברת טעמים לגנגליון הגניקולט שנחשף בניתוח בעכבר מורדם ושימוש בפלואורסצנטיות GCaMP עם מיקרוסקופיה אפיפלואורסצנטית כדי להמחיש תגובות עצביות בזמן אמת, ומסייע למחקרים על עיבוד אותות טעם היקפי.

הדמיה in vivo של תגובות נוירונים של גנגליון גניקולאט באמצעות מיקרוסקופיה אפיפלואורסצנטית

אוראלי chemoreception של חומצות שומן והשיתוף עם העדפות מזון תזונה ושומן עשוי לאפשר זיהוי של מנגנונים מעורבים בהתפתחות של השמנת יתר ולמה שינויים תזונתיים עלולים להיות קשים עבור אנשים רבים.

מדידה אוראלי חומצת שומן ספים, תפיסת שומן, שומן מזון טעם, וצפיפות אדומות בבני אדם

כאן אנו מציגים פרוטוקול למדידת צפיפות papilla fungiform מתמונות דיגיטליות. שיטה זו בונה תעדוף ומדדים אובייקטיביים אופייניים לעבודת תיאורים המקורית על גבשושיות fungiform ידי מילר &amp; רידי (1990).

דנבר גבשושיות פרוטוקול לניתוח אובייקטיבי של Fungiform גבשושיות

אנו מציגים שלוש שיטות חדשות כדי ללמוד קידוד gustatory . בעזרת חיית מחמד פשוטה, המנדוקה סוקה ( Manduca ) , אנו מתארים פרוטוקול לנתיחה, השימוש tetrodes תאיים להקליט את הפעילות של נוירונים קולטן רב גוסטורי, ומערכת לאספקת ומעקב פולסים תזמון מדויק של טעימות.

שיטות חדשות לחקר קידוד גוסטוריאלי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול הדמיה חיה של היתוך חיך העכבר העכבר באמצעות מיקרוסקופיה confocal. פרוטוקול זה ניתן להשתמש בשילוב עם מגוון רחב של שורות העכבר כתב פלואורסצנטי, עם מעכבי נתיב עבור תובנה מכניסטית. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם עבור הדמיה חיה במערכות התפתחותיות אחרות.

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

כאן אנו מציגים כיצד לחשוף את גנגליון geniculate של עכבר מעבדה חי, מרדים וכיצד להשתמש הדמיית סידן כדי למדוד את התגובות של הרכבים של נוירונים אלה לטעום גירויים, המאפשר ניסויים מרובים עם ממריצים שונים. זה מאפשר השוואות מעמיקות של אילו נוירונים מגיבים לאו תיוהמים.

In vivo סידן הדמיה של עכבר גניציה גנגליון נוירון תגובות לגירויים טעם

המאמר מציג את מכשיר μTongue (microfluidics-on-a-tongue) להדמיית תאי טעם פונקציונליים ב- vivo על ידי שילוב מיקרופלואידיקה בחלון הדמיה תוך-וינטלי על הלשון.

μTongue: פלטפורמת הדמיה פונקציונלית מבוססת מיקרופלואידיקה עבור הלשון ב- Vivo

גישת הדמיית סידן מאפשרת להקליט תגובות הנגרמות על ידי טעם במוחם של זבובים ערים בזמן שתמיסה מוחלת על התווית. תגובות טעם ראשוניות ב-Drosophila melanogaster משמשות כדוגמה, אך ניתן להתאים פרוטוקול זה לחקר נוירונים במורד הזרם או מינים אחרים.

ב Vivo הדמיית סידן של תגובות עצביות הנגרמות על ידי טעם בדרוזופילה בוגרת

למד שיטת ניתוח whole-mount לבלוטות טעם בלשון עכברים, כולל פטריות, מקיפות וחיך. השיטה מאפשרת מדידה מדויקת של תאים ועצבוב לחקר מעגלים עצביים בטעם ומחלות.

כתמים, הדמיה וניתוח של פטריות, בלוטות טעם של הרכבה מלאה, מקיפים וחיך

גלה סרטונים נוספים