Name: יצירת כימרות במוח הקדמי של העופות להערכת התפתחות הפנים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: למד טכניקת השתלת רקמות לבחינת אינטראקציות בין המוח הקדמי הבסיסי לפנים בהתפתחות קרניו-פניאלית. השיטה מבודדת את המוח הבסיסי ומונעת זיהום מתאי צוואר עצבים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר שדווח בפרסום זה נתמך על ידי המכון הלאומי למחקר שיניים וקרניופציאליות של המכונים הלאומיים לבריאות תחת מספרי הפרסים R01DE019648, R01DE018234 ו- R01DE019638.

ברווז פקין לבן (Anas platyrhynchos), עוף לגהורן לבן (Gallus gallus) ושליו יפני (Cortunix coturnix japonica) מודגרים ב 37 ° C בתא לח עד שלב תואם ב HH7/817.
1. הכנת הרקמה התורמת
הערה: הכנת ריאגנטים וכלים וכיצד לפתוח ביצים למניפולציה ניסיוניתתוארה 6.
<ol><li>הכן מדיה DMEM עם אדום ניטרלי, פיפטה העברת זכוכית, ומחטי טונגסטן מושחזות.</li>
	<li>חשיפת עוברים (כפי שמוצגב-6).</li>
	<li>קצירת שתלי רקמה מהצד השמאלי של המוח הקדמי הבסיסי של עוברים בשלב 7/8. השתמש במחטי טונגסטן מחודדותמעוקלות 6 כדי לחתוך בעדינות חתיכה מהמוח הקדמי בגודל ~ 0.3 מ"מ אורך על 0.2 מ"מ רוחב, וודא שלא לכלול את האנדודרם הבסיסי על ידי החלקת המחט מתחת למוח הקדמי כך שהמחט מקבילה לציר הצינור העצבי.</li>
	<li>באמצעות פיפטת העברת הזכוכית, הרימו את השתל מהעובר התורם.</li>
	<li>העבר את השתל ל- DMEM המכיל אדום נייטרלי (0.01% ב- PBS, 23 ° C) למשך 2 דקות כדי להכתים אותו, ולאחר מכן הכנס את השתל המוכתם ל- DMEM שאינו מכיל אדום נייטרלי עד שיהיה מוכן לקליטה.</li>
</ol>2. הכנת המארח
<ol><li>לדגור על ביצים מופרות מעוף לגהורן לבן (Gallus gallus) ב 37 ° C בתא לח עד HH7/8 17.</li>
	<li>חשיפת עוברים (כפי שמוצגב-6).</li>
	<li>באמצעות מחטי טונגסטן מושחזות, הכן את אתר השתל על ידי חיתוך עדין, ולאחר מכן הסרת חתיכה של 0.3 מ"מ על 0.2 מ"מ של המוח הקדמי הבסיסי מצד שמאל כדי להתאים את השתל כפי שנעשה כדי לבודד את הרקמה התורמת.</li>
	<li>היזהר למנוע הפרעה מוגזמת של האנדודרם הבסיסי, אשר יהיה ניכר כמו גרגרי חלמון יתחילו לדלוף דרך כל קרע שנוצר. זה דורש תרגול ולא כל הניסיונות יצליחו.</li>
	<li>לאחר המעבר למארח6, מקם את השתל כדי להחליף את המוח הקדמי הבסיסי של המארח.</li>
	<li>מניחים סרט בחוזקה מעל החור ומחזירים את העובר לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך הזמן המתאים לניתוח.</li>
</ol>

<ol><li>Waddington, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+Mechanics+of+Chicken+and+Duck+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Developmental Mechanics of Chicken and Duck Embryos.</a> Nature. 125, 924-925 (1930).</li>
<li>Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+neural+crest+in+patterning+of+avian+cranial+skeletal%2C+connective%2C+and+muscle+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The role of the neural crest in patterning of avian cranial skeletal, connective, and muscle tissues.</a> Developmental Biology. 96 (1), 144-165 (1983).</li>
<li>Borue, X., Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+and+aberrant+craniofacial+myogenesis+by+grafted+trunk+somitic+and+segmental+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Normal and aberrant craniofacial myogenesis by grafted trunk somitic and segmental plate mesoderm.</a> Development. 131 (16), 3967-3980 (2004).</li>
<li>Teillet, M. A., Ziller, C., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quail-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Quail-chick chimeras.</a> Methods in Molecular Biology. 461, 337-350 (2008).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zone+of+frontonasal+ectoderm+regulates+patterning+and+growth+in+the+face%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face.</a> Development. 130 (9), 1749-1758 (2003).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+signaling+properties+of+ectodermal+epithelia+during+craniofacial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessing signaling properties of ectodermal epithelia during craniofacial development.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), (2011).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+organization+of+the+frontonasal+ectodermal+zone+in+birds+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals.</a> Developmental Biology. 325 (1), 200-210 (2009).</li>
<li>Griffin, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf8+dosage+determines+midfacial+integration+and+polarity+within+the+nasal+and+optic+capsules%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fgf8 dosage determines midfacial integration and polarity within the nasal and optic capsules.</a> Developmental Biology. 374 (1), 185-197 (2013).</li>
<li>Schneider, R. A., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+and+molecular+origins+of+beak+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The cellular and molecular origins of beak morphology.</a> Science. 299 (5606), 565-568 (2003).</li>
<li>Tucker, A. S., Lumsden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cells+provide+species-specific+patterning+information+in+the+developing+branchial+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Neural crest cells provide species-specific patterning information in the developing branchial skeleton.</a> Evolution & Development. 6 (1), 32-40 (2004).</li>
<li>Fish, J. L., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+species-specific+contributions+to+craniofacial+development+using+quail-duck+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessing species-specific contributions to craniofacial development using quail-duck chimeras.</a> Journal of Visualized Experiments. (87), (2014).</li>
<li>Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+and+the+origin+of+species-specific+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Neural crest and the origin of species-specific pattern.</a> Genesis. 56 (6-7), 23219(2018).</li>
<li>Sohal, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reciprocal+forebrain+transplantation+on+motility+and+hatching+in+chick+and+duck+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of reciprocal forebrain transplantation on motility and hatching in chick and duck embryos.</a> Brain Research. 113 (1), 35-43 (1976).</li>
<li>Chen, C. C., Balaban, E., Jarvis, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+avian+brain+chimeras+reveal+that+large+brain+size+differences+are+influenced+by+cell-interdependent+processes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Interspecies avian brain chimeras reveal that large brain size differences are influenced by cell-interdependent processes.</a> PLoS One. 7 (7), 42477(2012).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cells+pattern+the+surface+cephalic+ectoderm+during+FEZ+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Neural crest cells pattern the surface cephalic ectoderm during FEZ formation.</a> Developmental Dynamics. 241 (4), 732-740 (2012).</li>
<li>Hu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signals+from+the+brain+induce+variation+in+avian+facial+shape%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Signals from the brain induce variation in avian facial shape.</a> Developmental Dynamics. 244 (9), 1133-1143 (2015).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Xu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlations+Between+the+Morphology+of+Sonic+Hedgehog+Expression+Domains+and+Embryonic+Craniofacial+Shape%5BTitle%5D)+AND+%22Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Correlations Between the Morphology of Sonic Hedgehog Expression Domains and Embryonic Craniofacial Shape.</a> Evolutionary Biology. 42 (3), 379-386 (2015).</li>
<li>Eames, B. F., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genesis+of+cartilage+size+and+shape+during+development+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The genesis of cartilage size and shape during development and evolution.</a> Development. 135 (23), 3947-3958 (2008).</li>
<li>Merrill, A. E., Eames, B. F., Weston, S. J., Heath, T., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchyme-dependent+BMP+signaling+directs+the+timing+of+mandibular+osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mesenchyme-dependent BMP signaling directs the timing of mandibular osteogenesis.</a> Development. 135 (7), 1223-1234 (2008).</li>
</ol>

לכל המחברים אין מה לחשוף.

השיטה המתוארת מאפשרת לבחון את יחסי הגומלין בין המוח הקדמי הבסיסי לבין האקטודרם הסמוך. גישה זו שונה משיטות השתלת מוח קדמי קודמות, מכיוון שרקמת התורם הייתה מוגבלת למוח הקדמי הגחוני. זה מבטל השתלה של תאי הפסגה העצבית, אשר הוכחו להשתתף בדפוס מורפולוגיית הפנים 9,10. לפיכך, הגבלת השתל למוח הקדמי הבסיסי הייתה חיונית להערכת תוצאות הניסוי המתוכננות.
במחקר הקודם שהשתמש בהשתלות מוח קדמי13,14 נוכחותה של רקמה חוץ-עצבית לא הפ...

רוב המחקר העכשווי בביולוגיה התפתחותית מתמקד בתפקידם של גנים בעיצוב עוברים. יש כלים טובים לבחון מנגנונים התפתחותיים מנקודת מבט גנטית. עם זאת, עוברים מורכבים ועוברים מורפוגנזה בתגובה לאינטראקציות בין רקמות. מערכת העופות היא כלי קלאסי המשמש להערכת מגוון אינטראקציות הרקמות המווסתות את ההתפתחות מהסיבות הבאות: האמבריולוגיה מובנת היטב, העוברים נגישים בקלות, הכלים לניתוח מערכות העופות מפותחים והעוברים זולים.
מערכת השתלות העופות נמצאת בשימוש נרחב למעקב אחר שושלות ולהערכת אינטראקציות רקמות במהלך ההתפתחות במשך כמעט מאה שנה 1,2,3,4. מערכת זו שימשה לחקר מרכז איתות, Frontonasal Ectodermal Zone (FEZ), המווסת מורפוגנזה של הלסת העליונה5, ופורסם סרטון המתאר טכניקה זו בעבר6. בנוסף לגוזל שליו, מינים אחרים שימשו גם לייצור כימרות לניתוח אינטראקציות בין רקמות. לדוגמה, העכבר FEZ הושתל מעכברים פראיים מסוג7 ועכברים מוטנטיים8, ואחרים השתמשו במערכות ברווז, שליו ואפרוחים כדי להעריך את התפקיד של סמל עצבי בעיצוב שלד הפנים 9,10,11,12.
בעבודה זו הוערך תפקידו של המוח הקדמי בוויסות דפוס ביטוי הגנים ב-FEZ על ידי השתלת המוח הקדמי הגחוני באופן הדדי בין עוברי שליו, ברווז ואפרוחים, מאחר שנדרש אות מהמוח הקדמי כדי לגרום לביטוי קיפוד סוניק ב-FEZ. השתלות מוח קדמי אינן ייחודיות בתחום. השתלות אלה שימשו להערכת התפתחות תנועתיות בעוברי שליו וברווז13, אם כי בניסויים אלה הושתלו גם רקמות שתרמו לנגזרות לא עצביות. בעבודות אחרות, מעגלי שמיעה בציפורים הוערכו על ידי השתלת מוח קדמי14, אך השתלות אלה הכילו תאי פסגה עצביים משוערים, התורמים לצורת הפנים 9,10 ומשתתפים בוויסות הבעת SHH ב- FEZ 15. לפיכך, פותחה מערכת להשתלת המוח הקדמי הגחוני בלבד ממין אחד של ציפור למשנהו לפני סגירת הצינור העצבי כדי להעריך את תפקיד המוח בצורת פנים 16 (איור 1A,B). שיטה זו הייתה נטולת זיהום עצבי של השתל. במאמר זה מודגמת השיטה ומתוארות התוצאות הצפויות, ונדונים האתגרים הניצבים בפנינו.

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>TEK</td><td>TEKZR114</td><td></td></tr><tr><td>35x10 מ"מ צלחת פטרי</td><td>Falcon</td><td>1008</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermofisher</td><td>מחזיק</td> מחט 11965084 <td></td></tr><tr><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>סיגמא</td><td>אדום ניטרלי</td><td>553-24-2</td><td></td></tr><tr><td>מס' 5 מלקחיים דומונט</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>פסטר Pipets</td><td>Thermofisher</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>QCPN נוגדנים</td><td>לימודי התפתחות בנק היברידומה, אוניברסיטת איווה, איווה, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>מחט טונגסטן</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>26000</td><td></td></tr></tbody></table>

יצירת כימרות במוח הקדמי של העופות להערכת התפתחות הפנים

Creating Avian Forebrain Chimeras to Assess Facial Development

עובר העופות שימש כמערכת מודל במשך יותר ממאה שנה והוביל להבנה בסיסית של התפתחות בעלי חוליות. אחת מנקודות החוזק של מערכת מודל זו היא שניתן להעריך ישירות את ההשפעה של רקמות ואינטראקציה ביניהן בעוברים כימריים. הראינו בעבר כי אותות מהמוח הקדמי תורמים למורפוגנזה של הפנים על ידי ויסות צורת תחום הביטוי של קיפוד סוניק (SHH) באזור האקטודרמלי הקדמי (FEZ). במאמר זה מתוארת השיטה ליצירת כימרות במוח הקדמי ולספק המחשות לתוצאות ניסויים אלה.

הערכת כימריזם וזיהום השתלות על מנת להעריך את הכימרות, יש להתייחס למידת הכימריזם והזיהום של השתל עם סוגי תאים אחרים. יצירת כימרות על ידי השתלת רקמות שליו בעוברי אפרוחים מאפשרת ניתוח מסוג זה. באמצעות נוגדן QCPN ניתן להמחיש תאי שליו ולהבדיל בינם לבין הרקמות המארחות (איור 1, C,D). במקרה זה, רק רקמות שמקורן במוח הקדמי הגחוני הוכתמו בנוגדן המציין שהשתל לא היה מזוהם בסוגי תאים אחרים כולל סמל עצבי. ניתן להעריך את מידת הכימריזם מסעיפים אל...

מאמר זה מתאר טכניקת השתלת רקמות שנועדה לבחון את תכונות האיתות והדפוס של המוח הקדמי הבסיסי במהלך התפתחות הגולגולת.

The avian embryo has been used as a model system for more than a century and has led to fundamental understanding of vertebrate development. One of the ...

שיטה זו מאפשרת לחוקרים להעריך אינטראקציות רקמות בין המוח הקדמי הבסיסי לבין הפנים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מבודדת את המוח הקדמי הבסיסי להערכה ומונעת זיהום עם תאי פסגה עצבית, אשר יבלבל את הניתוח. החלק הקשה בטכניקה זו הוא הסרת המוח הקדמי מהפונדקאי והחלפתו ברקמת התורם.מי שתדגים את ההליך תהיה דיאן הו, מדענית מחקר ממעבדתו של ד"ר ראלף מרקוצ'יו. כדי להתחיל, להכין מדיה DMEM עם אדום ניטרלי, פיפטה העברת זכוכית, טונגסטן מושחז. בעזרת מזרק 10 מיליליטר ומחט 18 מד, מוציאים 0.5 מיליליטר אלבומין מהקצה המחודד של קליפת הביצה.צור חור קטן על גבי הקליפה באמצעות נקודת מספריים. לאחר מכן מניחים חתיכת סרט מעל החור וחותכים פתח עגול כדי לחשוף את העובר. מכתימים את העובר באדום נייטרלי.קצור שתלי רקמה מהצד השמאלי של המוח הקדמי הבסיסי של שלב שבע או שמונה עוברים. השתמש מחטי טונגסטן מחודדות מעוקלות כדי לחתוך בעדינות חתיכה של המוח הקדמי. כדי לא לכלול את האנדודרם הבסיסי, החליקו את המחט מתחת למוח הקדמי ובמקביל לציר הצינור העצבי.הרימו את השתל מהעובר התורם באמצעות פיפטת העברת הזכוכית, והעבירו אותו ל- DMEM המכיל אדום נייטרלי למשך שתי דקות כדי להכתים אותו. לאחר מכן הניחו את השתל המוכתם ב-DMEM שאינו מכיל אדום נייטרלי עד שהוא מוכן לקליטה. דוגרים על ביצים מופרות מתרנגולת לגהורן לבנה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בתא לח עד לשלב המבורגר-המילטון בשלב שבע עד שמונה.לחשוף עוברים כפי שהודגם בעבר. באמצעות מחטי טונגסטן מושחזות, הכינו את אתר השתל על ידי חיתוך ולאחר מכן הסרה של חתיכה בגודל 0.3 על 0.2 מילימטר של המוח הקדמי הבסיסי כדי להתאים לשתל. הימנע הפרעה מוגזמת של האנדודרם הבסיסי, אשר יהיה ניכר כמו גרגרי חלמון יתחילו לדלוף דרך כל קרע שנוצר.לאחר העברת השתל לפונדקאי, מקם את השתל כך שיחליף את המוח הקדמי הבזאלי של המארח. מניחים נייר דבק בחוזקה מעל החור, ומחזירים את העוברים לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס עד שהם מוכנים לניתוח. בתחילה, כימרות נוצרו על ידי השתלת רקמות שליו לעוברי אפרוחים.באמצעות נוגדן QCPN, תאי שליו הודגמו ונבדלו מהרקמות המארחות. מערכת אפרוח השליו אישרה כי כל השתל מורכב רק מרקמה עצבית ולא היה מזוהם עם סוגי תאים אחרים. השתלת רקמת שליו בעוברי ברווזים הובילה לעיוות חמור של כימרות עקב מוח שליו המתפתח מהר יותר.לכן, בוצעה השתלת רקמות ברווז בעוברי תרנגולות. הכימרות המתקבלות כתוצאה מכך מצביעות על כך שהמוח משתתף בוויסות המורפולוגיה. הכלאה של הר שלם C2 שימשה להערכת ביטוי קיפוד סוניק בכימרות.בדומה למורפולוגיה, ביטוי הקיפוד הסוניק בצד הברווז של הכימרה נראה דומה יותר לברווז. הכנת האתר המארח דורשת תרגול. מספר גדול של עוברים אינם שורדים, ולכן יצירת מספר גדול של כימרות יכולה לעזור להבטיח דגימות נאותות לניתוח.שיטה זו אפשרה להעריך כיצד אותות מהמוח מעצבים את תחום הביטוי של קיפוד סוניק באזור האקטודרמלי הקדמי.

creating-avian-forebrain-chimeras-to-assess-facial-development

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מאמר זה מתאר השתלת רקמות טכניקה שנועדה לבדוק את איתות ותכונות של דפוסים האאקטודרם משטח cephalic במהלך הפיתוח craniofacial.

הערכת נכסים איתות של Ectodermal epithelia במהלך פיתוח Craniofacial

הגישה לניתוח הגירה גורלו הסופי של העופות לפסגה תאים עצביים שליו, חומוס עוברים chimeric מתואר. שיטה זו היא טכניקה פשוטה וישירה לאיתור תאים עצביים לפסגה במהלך הגירה והבחנה שקשה אחרת להבחין בתוך העובר גוזל unmanipulated.

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

פרוטוקול להפרדה של אקטודרם וmesenchyme פן עובר מתואר. אנו משתמשים Dispase השני לטיפול בעוברים שלמים ראשון, לנתח בליטות פן שלמות, ואז להפריד אקטודרם וmesenchyme הפנים.

הפרדת אקטודרם עכבר העוברי פן וmesenchyme

טכניקה להשתלה "אקסטרים Anterior דומיין" רקמות פנים בין Xenopus laevis עובר כבר מפותחת. רקמה ניתן להעביר מהרקע ביטוי גנים אחת לאחרת, ומאפשרת הלימוד של דרישות מקומיות לפיתוח craniofacial ולאיתות אינטראקציות בין אזורי פנים.

השתלת פנים ב<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; עוברים

confocal הדמיה זמן לשגות היא טכניקה רבת עוצמה שימושית לאפיון התפתחות עוברית. כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה ולאפיין המורפוגנזה craniofacial בסוג פראי, כמו גם PDGFRA, smad5, וSMO עוברים שעברו מוטציה.

ניתוח Craniofacial המורפוגנזה בדג הזברה שימוש 4D מיקרוסקופיה confocal

מאמר זה מתאר שיטה ליצירת עוברי chimeric שנועדו לבחון את תרומתם מינים ספציפיים של רכס עצבי ו / או רקמות אחרות לפיתוח craniofacial.

הערכת תרומות מינים ספציפיות כדי Craniofacial פיתוח באמצעות מפלצות שליו-ברווז

כאן אנו מדווחים על תיוג כפול של תאי ציצה עצביים וכלי דם באמצעות השתלת צינור עצביGFP אפרוחים בשילוב עם הזרקת DiI תוך וסקולרית. טכניקה ניסיונית זו מאפשרת לנו לדמיין וללמוד בו זמנית את ההתפתחות של מערכת העצבים (האנטרית) הנגזרת מ- NCC ומערכת כלי הדם, במהלך אורגנוגנזה.

תיוג כפול של תאי ציצה עצבית וכלי דם בתוך עוברי עוף באמצעות שתל צינור עצביGFP אפרוח והזרקת צבע DiI Carbocyanine

ארגון תא של עצמות craniofacial כבר שיערו ארוך אבל אף פעם לא דמיין ישירות. תיוג תא Multi-רפאים ובשידור חי vivo   הדמיה מאפשרת הדמיה של התנהגות הדינמית של תאים בלסת תחתונה דג הזברה. כאן, אנו פירוט הפרוטוקול לתמרן Zebrabow דג מהונדס וישירות להתבונן עיבור תא ושינויים מורפולוגיים של כונדרוציטים בסחוס של מקל.

ויזואליזציה של הכונדרוציטים עיבור וכיוונית למניעת הפצת נשק באמצעות ניתוח תא משובט Zebrabow בסחוס של העוברית מקל

מאמר זה מספק שיטה לבודד טהור עובריים רקמות מעוברים שליו ועוף שניתן לשלבם לטופס ex-vivo האיברים chimeric.

בידוד של רקמות עובריים ועל היווצרות האיברים Chimeric שליו-עוף לפי הדוגמה בלוטת התימוס

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקולים לשלושה סוגים של תרביות צמחי עור עובריים של עופות שניתן להשתמש בהם כדי לבחון אינטראקציות בין רקמות, סרט צילום בהילוך מהיר של הדמיה 4D (3D plus time), הפרעה גלובלית או מקומית של תפקוד מולקולרי ואפיון ביולוגיה של מערכות.

שימוש בעציצים מעור העופות לחקר תבניות רקמות ואורגנוגנזה

למד טכניקת השתלת רקמות לבחינת אינטראקציות בין המוח הקדמי הבסיסי לפנים בהתפתחות קרניו-פניאלית. השיטה מבודדת את המוח הבסיסי ומונעת זיהום מתאי צוואר עצבים.

יצירת כימרות במוח הקדמי של העופות להערכת התפתחות הפנים

גלה סרטונים נוספים