Name: מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: למדו מידול גרורות מוח בעכברים באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים HER2-מוגברים. שיטה זו מחקה טוב יותר את שלבי הקולוניזיה של גרורות מוח בהשוואה לשיטות מסורתיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לכריסטין פ. ווגן, MS, ELS, מהמחלקה לאונקולוגיה של קרינה של MD Anderson על העריכה המדעית של כתב היד, ולקרול מ. ג'ונסטון מהמחלקה להיסטולוגיה כירורגית של MD Anderson על העזרה עם צביעת המטוקסילין ואאוזין. אנו מודים לליבת הרפואה והכירורגיה הווטרינרית ב- MD Anderson על תמיכתם במחקרים בבעלי חיים. עבודה זו נתמכה על ידי המענקים הבאים: Susan G. Komen Career Catalyst Research grant (CCR16377813 ל-BGD), מענק Research Scholar של האגודה האמריקאית לסרטן (RSG-19-126-01 ל-BGD), והתוכנית לחקר סרטן השד הנדירה והאגרסיבית של מדינת טקסס. נתמך גם בחלקו על ידי מענק תמיכה של מרכז הסרטן (ליבה) P30 CA016672 מהמכון הלאומי לסרטן, המכונים הלאומיים לבריאות, למרכז הסרטן MD Anderson באוניברסיטת טקסס.

השיטה המתוארת כאן אושרה על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של מרכז הסרטן MD Anderson ועומדת בהנחיות המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. זרימת העבודה הסכמטית, עם כל השלבים הכלולים, מוצגת כאיור 1.
1. הכנת תאים
הערה: קו התאים MDA-IBC3 (ER-/PR-/HER2+), שנוצר במעבדה24 של ד"ר וודוורד, הומר ביציבות עם פלסמיד חלבון פלואורסצנטי ירוק לוציפראז (Luc-GFP).
<ol><li>תרבית תאים מותמרים במדיה F-12 של Ham בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS), 1 מיקרוגרם / מ"ל הידרוקורטיזון, 5 מיקרוגרם / מ"ל אינסולין, ו 1% אנטיביוטי-אנטימיטוטי.</li>
	<li>צלחת MDA-IBC3-Luc-GFP תאים ב 37 ° C ו 5% CO2 בבקבוק T-75 עד למפגש. שנה מדיה כל 3 ימים לפני שהתאים נפגשים מספיק כדי לעבור.</li>
	<li>קצור תאים על ידי הסרת מדיה, שטיפת כל בקבוק עם 10 מ"ל של 1x Dulbecco (כלומר, ללא סידן ומגנזיום) פוספט חוצץ מלוחים (DPBS), והוספת 2 מ"ל של 0.25% חומצה טריפסין-ethylenediaminetetraacetic (EDTA). יש לדגור במשך 3-5 דקות בטמפרטורה של 37°C עד שהתאים מתנתקים.</li>
	<li>הוסף 5 מ"ל של מדיה שלמה לבקבוק כדי לאסוף את התאים ולהעביר את כל התוכן לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל (מותאם לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל בהתאם למספר התאים הכולל הדרוש). צנטריפוגה ב 290 x גרם במשך 5 דקות לתאי כדור. הערה: המדיה המלאה היא מדיה F-12 של Ham בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS), 1 מיקרוגרם / מ"ל הידרוקורטיזון, 5 מיקרוגרם / מ"ל אינסולין, ו 1% אנטיביוטי-אנטימיטוטי.</li>
	<li>השליכו את הסופרנטנט. לאחר מכן לשטוף את התאים עם 10 מ"ל של 1x DPBS. צנטריפוגה ב 290 x גרם במשך 5 דקות כדי לגלול את התאים ולהשליך את supernatant בזהירות. להשעות מחדש את התאים עם 1 מ"ל של DPBS טרי 1x ולערבב היטב על ידי pipeting למעלה ולמטה.</li>
	<li>כדי ליצור תרחיפים חד-תאיים, סנן תאים דרך מסננות של תאים סטריליים בגודל 40 מיקרומטר.</li>
	<li>חשב צפיפות תאים באמצעות מונה תאים אוטומטי. הערה: כדי להפחית שגיאות בספירה, צור דילולי תאים שונים וספור אותם בנפרד, וחשב את הערך הממוצע כדי לקבוע את ריכוז התאים (מספר תאים/מ"ל).<ol><li>אסוף 2 μL של תרחיף תאים + 8 μL של DPBS 1x כדי לבצע דגימת דילול 1:5.</li>
		<li>אסוף 1 μL של תרחיף תאים + 9 μL של 1x DPBS כדי לבצע דגימת דילול 1:10.</li>
		<li>הוסף 10 μL של 0.4% כתם כחול טריפאן. מערבבים היטב את תערובת הדגימה על ידי פיטינג שלה למעלה ולמטה כמה פעמים.</li>
		<li>פיפט בעדינות 10 μL של הדגימה לתוך אזור טעינת הדגימה בצורת חצי ירח של שקופיות תא הספירה. ודא שאין בועות בפנים; המתן 30 שניות כדי לאפשר לתאים להתיישב בתא לפני הספירה.</li>
	</ol></li>
	<li>לדלל את התאים עם 1x DPBS לצפיפות של 5 x 105 או 1 x 106 תאים לכל 100 μL. העברת תרחיף התא לתוך צינורות מיקרוצנטריפוגות 1.7 מ"ל להזרקת ורידים זנב. מניחים תאים על קרח עד להזרקה כדי לשמור על כדאיות.</li>
</ol>2. הזרקת ורידים זנב
<ol><li>יש להשתמש בנקבות עכברי SCID/בז' אתימיות בנות 4 עד 6 שבועות.</li>
	<li>הכינו מזרק 30 גרם כדי לצייר 100 μL של השעיית התא. הסירו את כל בועות האוויר.</li>
	<li>הניחו את העכבר במתקן ריסון מכרסם (קוטר של כ-1 אינץ') כדי להקל על הזרקת ורידי הזנב ולמנוע פציעות כתוצאה מתנועה במהלך תהליך ההזרקה.</li>
	<li>השתמש רפידות כותנה אלכוהול (עשוי עם 70% אתנול) כדי לנגב בעדינות את זנב העכבר 3-4 פעמים להחזיק במשך 5-10 שניות כדי להפוך את וריד הזנב גלוי יותר.</li>
	<li>הכנס את המזרק לזנב העכבר בזווית של 15-30°. דחפו באיטיות את מתלה התא לתוך וריד הזנב.</li>
	<li>הסר את המזרק בעדינות והשתמש בכרית הצמר גפן כדי להחזיק את הזנב למשך מספר שניות כדי לעזור לעצור כל דימום.</li>
	<li>החזירו את העכברים לכלובים שלהם ובדקו אותם 2-4 שעות לאחר ההזרקה כדי לוודא שלא מתרחשות תופעות לוואי.</li>
</ol>3. הערכת עומס גרורות במוח
<ol><li>הכן פתרון D-luciferin מדולל. הערה: ריכוז המלאי הוא 47.6 מילימטר (15.15 מ"ג/מ"ל), והריכוז לשימוש הוא 1.515 מ"ג/מ"ל.<ol><li>הוסף 5 מ"ל של DPBS 1x לבקבוק D-luciferin.</li>
		<li>מניחים 2.5 מ"ל של התמיסה לתוך כל אחד משני צינורות חרוטי 50 מ"ל.</li>
		<li>הוסף עוד 5 מ"ל של DPBS 1x לבקבוק D-luciferin שוב כדי לשטוף אותו. שים 2.5 מ"ל לתוך כל 50 מ"ל צינור חרוט.</li>
		<li>הכניסו עוד 5 מ"ל של 1x DPBS לבקבוק ושטפו אותו שוב. חזור על תהליך השטיפה פעמיים.</li>
		<li>הוסף DPBS אחד לכל צינור 50 מ"ל לסך של 66 מ"ל (כ -33 מ"ל לכל צינור). צריך להיות בערך 33 מ"ל של הפתרון בכל צינור.</li>
		<li>מערבבים היטב את הצינורות ולאחר מכן משלבים את שניהם ליחידת סינון סטרילית (מסנן PES של 150 מ"ל 0.45 מיקרומטר).</li>
		<li>סנן את התמיסה ולאחר מכן aliquot את הפתרון מסונן לתוך microtubes ענבר סטרילי 1.7 מ"ל.</li>
	</ol></li>
	<li>איתור גרורות במוח על ידי הדמיית לוציפראז.<ol><li>הפשירו D-luciferin על ידי שמירה על קרח, ומערבולות לפני הזרקה לתוך העכברים.</li>
		<li>נקו את אזור ההזרקה עם רפידות כותנה אלכוהוליות והזריקו 100 מיקרוליטר D-לוציפרין לכל עכבר תוך צפקית באמצעות מזרק אינסולין 0.5 מ"ל, מזרק אחד לכל כלוב.</li>
		<li>לאחר 10 דקות, מרדימים את העכברים עם איזופלורן (2% O2-2.5% איזופלורן) למשך 5 דקות באמצעות וופורייזר וטרינרי המחובר לתא השראת בעלי חיים קטנים.</li>
		<li>הפעל את מערכת ההדמיה in vivo. בזמן שהעכברים מהכלוב הראשון נמצאים תחת הרדמה, הזריקו את D-luciferin לעכברים בכלוב הבא.</li>
		<li>הכניסו עכברים למכונת מערכת ההדמיה in vivo וקבלו תמונות גחון וגב. בחר זמן חשיפה של 2 דקות, ובתצוגת השדה בחר באפשרות E (כל הגוף). לחץ על Acquire. לאחר מכן, שמרו את התמונה (איור 2). הערה: אם התמונה מציגה רוויה של עוצמת האור, קצר את זמן החשיפה.</li>
	</ol></li>
	<li>איתור גרורות במוח על ידי הדמיית GFP.<ol><li>הכנת רקמת המוח.<ol><li>כ-8-10 שבועות לאחר הזרקת התאים או כאשר העכברים מתים עקב עומס גרורות במוח, יש להרדים את העכברים על ידי שאיפת מנת יתר של איזופלורן ואחריה פריקת צוואר הרחם, בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי IACUC.</li>
			<li>לאחר המתת חסד עם isoflurane ואחריו נקע צוואר הרחם, לרסס את העכברים עם פתרון אתנול 70% ולהסיר את הפרווה מאזור הראש והאוזניים עם מספריים. לאחר מכן, בצע חתך באזור צוואר הרחם של הצוואר (נזהר לא לערוף את ראשו של העכבר). חותכים את הגולגולת ומושכים אותה החוצה. לאחר מכן, בזהירות להסיר את המוח.</li>
			<li>הכניסו את המוחות שנאספו לקלטות רקמה.</li>
			<li>מעבירים את הקלטות למיכל עם DPBS 1x קר. הערה: אין לשמור דגימות מוח ב-DPBS אחד למשך יותר משעה אחת. אם רוצים לאסוף כמה דגימות מוח בו זמנית, הרדימו רק כמה עכברים בכל פעם (10 בכל סיבוב).</li>
		</ol></li>
		<li>הדמיה סטריאומיקרוסקופית.<ol><li>העבירו את כל המוח למכסה צלחת רקמה בקוטר 100 ס"מ.</li>
			<li>הפעילו את הסטריאומיקרוסקופ ואת אור העל-סגול, במיקום 3 עם עדשה 0.5x, כדי לאפשר הדמיה של המוח כולו כפי שמוצג באיור 3A (ריבוע אדום).</li>
			<li>לחץ על תצוגת Live (איור 3A, ריבוע ירוק).</li>
			<li>מקדו את הנוף בזמן שהמוח נמצא במצב הגחון.</li>
			<li>בחר GFP (אם התאים מסומנים בתווית GFP ) או TXRED (אם התאים מסומנים בתווית RFP) (איור 3A, ריבוע צהוב) בתוכנה, בחר את המסנן המתאים במיקרוסקופ וצלם תמונה. הערה: שמור על הגדרת מקור האור של SOLA על כ- 30%; אם ה- GFP בהיר מדי, צמצם עד לצפייה באות הנכון.</li>
			<li>מבלי להזיז את הדגימה, הדליקו את האור הבהיר ובחרו BF (איור 3A, ריבוע צהוב). צלמו תמונה.</li>
			<li>חזור על השלבים הקודמים עם המוח במצב גבי. הערה: בהתאם לגודל, אותו נגע גרורות מוחי חיובי GFP יכול להופיע הן במצב הגחון והן במצב גבי. במקרה כזה, הימנעו מכימות כפול של אותו נגע. שמור את התמונות עם סיומת TIFF (השומרת את כל המידע בקובץ התמונה).</li>
			<li>שמור את התמונות עם סיומת TIFF (השומרת את כל המידע בקובץ התמונה).</li>
			<li>חזור על שלבים עבור כל הדגימות.</li>
			<li>המר את תמונות TIFF ל- JPEG כך שניתן יהיה לפתוח את הקבצים עם כל מחשב שבו לא מותקנת התוכנה המשויכת (קובץ | ייבוא/ייצוא | להמיר קבצים).</li>
			<li>כדי למזג את התמונה הפלואורסצנטית עם תמונת השדה הבהיר, פתח את שתי התמונות ועבור אל קובץ | מיזוג ערוצים. בחר את הרכיבים המתאימים, ירוק עבור GFP ושדה בהיר עבור BF, ולחץ על אישור. שמור את התמונה הממוזגת.</li>
			<li>כדי לכמת את אזור הגידול במוח, השתמש בתמונה הפלואורסצנטית. בחר מידה | מדידה ידנית | אזור. בחרו בחירה אוטומטית (איור 3B, ריבוע ירוק), הזיזו את החץ לאזור GFP חיובי ולחצו ליצירת בחירה אוטומטית. לחץ שוב כדי לאשר את הבחירה ולאחר מכן כל המדידות יוצגו (איור 3B, ריבוע אדום). אם קיים יותר מאזור GFP חיובי אחד, חזור על ההליך.</li>
		</ol></li>
		<li>לאחר קבלת תמונות מוחיות, המשיכו לפרוטוקולים שגרתיים של קיבוע רקמות באמצעות פורמלין חוצץ ניטרלי 10%.<ol><li>לאחר תיקון המוח, המשך לחתך היסטולוגי סטנדרטי ואחריו צביעת המטוקסילין ואוזין כדי לאשר את נוכחותם של גרורות במוח וצביעה אימונוהיסטוכימית כדי לזהות סמנים נבחרים. הערה: אימונוציטוכימיה בוצעה במעבדת הליבה הפתולוגית במרכז הסרטן UT MD Anderson שיש לה פרוטוקול סטנדרטי לצביעה אימונוהיסטוכימית של סמנים ידועים.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Achrol, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Brain metastases.</a> Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 5(2019).</li>
<li>Nayak, L., Lee, E. Q., Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Oncology+Report%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of brain metastases.</a> Current Oncology Report. 14 (1), 48-54 (2012).</li>
<li>Lowery, F. J., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+metastasis%3A+Unique+challenges+and+open+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+Review+Cancer%22%5BJournal%5D)">Brain metastasis: Unique challenges and open opportunities.</a> Biochimica et Biophysica Acta Review Cancer. 1867 (1), 49-57 (2017).</li>
<li>Brufsky, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+metastases+in+patients+with+HER2-positive+metastatic+breast+cancer%3A+incidence%2C+treatment%2C+and+survival+in+patients+from+registHER%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Central nervous system metastases in patients with HER2-positive metastatic breast cancer: incidence, treatment, and survival in patients from registHER.</a> Clinical Cancer Research. 17 (14), 4834-4843 (2011).</li>
<li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolving+landscape+of+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">The evolving landscape of brain metastasis.</a> Trends in Cancer. 4 (3), 176-196 (2018).</li>
<li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459 (7249), 1005-1009 (2009).</li>
<li>Woditschka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+double-strand+break+repair+genes+and+oxidative+damage+in+brain+metastasis+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">DNA double-strand break repair genes and oxidative damage in brain metastasis of breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 106 (7), (2014).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorinostat+inhibits+brain+metastatic+colonization+in+a+model+of+triple-negative+breast+cancer+and+induces+DNA+double-strand+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Vorinostat inhibits brain metastatic colonization in a model of triple-negative breast cancer and induces DNA double-strand breaks.</a> Clinical Cancer Research. 15 (19), 6148-6157 (2009).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+upregulate+survival+genes+in+tumor+cells+and+induce+protection+from+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Astrocytes upregulate survival genes in tumor cells and induce protection from chemotherapy.</a> Neoplasia. 13 (3), 286-298 (2011).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SRC+family+kinases+as+novel+therapeutic+targets+to+treat+breast+cancer+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">SRC family kinases as novel therapeutic targets to treat breast cancer brain metastases.</a> Cancer Research. 73 (18), 5764-5774 (2013).</li>
<li>Valiente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serpins+promote+cancer+cell+survival+and+vascular+co-option+in+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Serpins promote cancer cell survival and vascular co-option in brain metastasis.</a> Cell. 156 (5), 1002-1016 (2014).</li>
<li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+lapatinib+on+the+outgrowth+of+metastatic+breast+cancer+cells+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Effect of lapatinib on the outgrowth of metastatic breast cancer cells to the brain.</a> Journal of the National Cancer Institute. 100 (15), 1092-1103 (2008).</li>
<li>Gril, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pazopanib+reveals+a+role+for+tumor+cell+B-Raf+in+the+prevention+of+HER2%2B+breast+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Pazopanib reveals a role for tumor cell B-Raf in the prevention of HER2+ breast cancer brain metastasis.</a> Clinical Cancer Research. 17 (1), 142-153 (2011).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+prevention+of+experimental+brain+metastases+of+breast+cancer+by+temozolomide+in+an+MGMT-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Profound prevention of experimental brain metastases of breast cancer by temozolomide in an MGMT-dependent manner.</a> Clinical Cancer Research. 20 (10), 2727-2739 (2014).</li>
<li>Priego, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+labels+a+subpopulation+of+reactive+astrocytes+required+for+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">STAT3 labels a subpopulation of reactive astrocytes required for brain metastasis.</a> Nature Medicine. 24 (7), 1024-1035 (2018).</li>
<li>Debeb, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-141-mediated+regulation+of+brain+metastasis+from+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">miR-141-mediated regulation of brain metastasis from breast cancer.</a> Journal of the National Cancer Institute. 108 (8), (2016).</li>
<li>Chang, S., Parker, S. L., Pham, T., Buzdar, A. U., Hursting, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival%3A+the+surveillance%2C+epidemiology%2C+and+end+results+program+of+the+National+Cancer+Institute%2C+1975-1992%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program of the National Cancer Institute, 1975-1992.</a> Cancer. 82 (12), 2366-2372 (1998).</li>
<li>Hance, K. W., Anderson, W. F., Devesa, S. S., Young, H. A., Levine, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+inflammatory+breast+carcinoma+incidence+and+survival%3A+the+surveillance%2C+epidemiology%2C+and+end+results+program+at+the+National+Cancer+Institute%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Trends in inflammatory breast carcinoma incidence and survival: the surveillance, epidemiology, and end results program at the National Cancer Institute.</a> Journal of National Cancer Institute. 97 (13), 966-975 (2005).</li>
<li>Dirix, L. Y., Van Dam, P., Prove, A., Vermeulen, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+breast+cancer%3A+Current+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Inflammatory breast cancer: Current understanding.</a> Current Opinion in Oncology. 18 (6), 563-571 (2006).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+of+distant+metastases+in+inflammatory+breast+cancer+-+A+large-cohort+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Pattern of distant metastases in inflammatory breast cancer - A large-cohort retrospective study.</a> Journal of Cancer. 11 (2), 292-300 (2020).</li>
<li>Uemura, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+CNS+metastases+and+survival+in+patients+with+inflammatory+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Development of CNS metastases and survival in patients with inflammatory breast cancer.</a> Cancer. 124 (11), 2299-2305 (2018).</li>
<li>Smith, D. L., Debeb, B. G., Thames, H. D., Woodward, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+modeling+of+micrometastatic+breast+cancer+radiation+dose+response%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology%2C+Biology%2C+Physics%22%5BJournal%5D)">Computational modeling of micrometastatic breast cancer radiation dose response.</a> International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 96 (1), 179-187 (2016).</li>
<li>Fukumura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-omic+molecular+profiling+reveals+potentially+targetable+abnormalities+shared+across+multiple+histologies+of+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Multi-omic molecular profiling reveals potentially targetable abnormalities shared across multiple histologies of brain metastasis.</a> Acta Neuropathol. , (2021).</li>
<li>Klopp, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+promote+mammosphere+formation+and+decrease+E-cadherin+in+normal+and+malignant+breast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells promote mammosphere formation and decrease E-cadherin in normal and malignant breast cells.</a> PLoS One. 5 (8), 12180(2010).</li>
<li>Villodre, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abstract+P3-01-10%3A+Ndrg1-egfr+axis+in+inflammatory+breast+cancer+tumorigenesis+and+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Abstract P3-01-10: Ndrg1-egfr axis in inflammatory breast cancer tumorigenesis and brain metastasis.</a> Cancer Research. 80 (4), 10(2020).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים.

הפרוטוקול כולל מספר שלבים קריטיים. תאים צריכים להישמר על קרח לא יותר משעה אחת כדי לשמור על כדאיות. יש להשתמש ברפידות כותנה אלכוהוליות כדי לנגב את זנבות העכברים לפני ההזרקה, תוך הקפדה לא לנגב חזק מדי או לעתים קרובות מדי כדי למנוע פגיעה בעור הזנב. ודא שאין בועות אוויר בתרחיף התא, כדי למנוע מעכברים למות מאמבולי כלי דם. שמור על זווית הזרקה של 45° או פחות כדי למנוע פירסינג בכלי הדם בזנבות והכנס לפחות 1/3 מהמחט לווריד הזנב כדי להבטיח הזרקה מוצלחת של כל התאים. ניתן להתאים את הנפח הכולל של התאים המוזרקים בהתאם למשקל העכברים, אך ...

גרורות במוח הן סיבוך שכיח וקטלני של ממאירויות מערכתיות. רוב גרורות המוח מקורן בגידולים ראשוניים של הריאה, השד או העור, אשר ביחד מהווים 67-80% מהמקרים 1,2. ההערכות לגבי היארעות גרורות במוח נעות בין 100,000 ל-240,000 מקרים, ומספרים אלה עשויים להיות מוערכים בחסר מכיוון שנתיחה לאחר המוות נדירה עבור חולים שמתו מסרטן גרורתי3. לחולים עם גרורות במוח יש פרוגנוזה גרועה יותר והישרדות כללית נמוכה יותר ביחס לחולים ללא גרורות במוח4. אפשרויות הטיפול הנוכחיות בגרורות במוח הן פליאטיביות ברובן ואינן מצליחות לשפר את תוצאות ההישרדות עבור רוב החולים5. לפיכך, גרורות במוח נותרו אתגר, והצורך נותר דחוף כדי להבין טוב יותר את המנגנונים של התקדמות גרורות במוח כדי לפתח טיפולים יעילים יותר.
השימוש במודלים ניסיוניים סיפק תובנות חשובות לגבי מנגנונים ספציפיים של התקדמות גרורתית של סרטן השד למוח ואיפשר להעריך את יעילותן של גישות טיפוליות שונות 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16 . עם זאת, מעט מאוד מודלים יכולים לשחזר באופן מדויק ומלא את המורכבות של התפתחות גרורות במוח. מספר מודלים ניסיוניים in vivo נוצרו באמצעות חיסון תאים סרטניים לעכברים על ידי נתיבי מתן שונים, כולל אורתוטופיים, וריד זנב, תוך לבבי, עורקי תוך קרוטיד וזריקות תוך מוחיות. לכל טכניקה יתרונות וחסרונות, כפי שנסקר במקום אחר3. עם זאת, אף אחד מהמודלים האלה של עכברים לא יכול לשכפל באופן מלא את ההתקדמות הקלינית של גרורות במוח.
גרורות במוח שכיחות במיוחד בחולות עם סרטן שד דלקתי (IBC), גרסה נדירה אך אגרסיבית של סרטן שד ראשוני. IBC מהווה 1% עד 4% ממקרי סרטן השד, אך הוא אחראי ל -10% לא פרופורציונליים ממקרי המוות הקשורים לסרטן השד בארצות הברית17,18. IBC ידוע לשלוח גרורות במהירות; ואכן, לשליש מחולי IBC יש גרורות מרוחקות בזמן האבחנה19,20. ספציפית לגרורות במוח, חולים עם IBC יש שכיחות גבוהה יותר של גרורות במוח מאשר חולים עם IBC שאינו IBC21. לאחרונה, הדגמנו כי קו התאים MDA-IBC3, הנגזר מנוזל ההיתוך הפלאורלי הממאיר של חולה עם ER-/PR-/HER2+ IBC המשחזר מאפייני IBC בקסנוגרפטים של עכברים, הוא בעל נטייה מוגברת לפתח גרורות במוח ולא גרורות ריאה בעכברים כאשר מוזרק על ידי וריד הזנב, מה שהופך את קו התאים הזה למודל טוב לחקר התפתחות גרורות במוח16.
במאמר זה נתאר את ההליכים ליצירת גרורות במוח באמצעות הזרקת תאי MDA-IBC3 לווריד הזנב ולהערכת העומס הגרורתי באמצעות מיקרוסקופ סטריאופלואורסצנטי והדמיית לוציפראז. שיטה זו שימשה לגילוי מתווכים מרכזיים של גרורות סרטן השד למוח ולבדיקת היעילות של התערבויות טיפוליות 16,22,23. החיסרון של טכניקה זו הוא שהיא אינה משחזרת את כל השלבים בתהליך הגרורתי במוח. עם זאת, יתרונותיו העיקריים כוללים חוסן ויכולת שחזור, מעורבות של הביולוגיה הרלוונטית של גרורות של intravasation, חציית הריאות ו extravasation לתוך המוח, ואת הפשטות היחסית שלה במונחים של טכניקה.

<table><tbody><tr><td><תרבית תאים חזקה></חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1000 ומיקרו; L קצה פיפטה מסונן</td><td>Genesee Scientific</td><td>23430</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפטות סרולוגיות</td><td>Genesee Scientific</td><td>12-112</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה-אנטי-מיקוטיקה&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>15240062</td><td>צינורות</td></tr> <tr><td>צנטריפוגה 1% 15 מ"ל בתפזורת</td><td>Genesee Scientific</td><td>28103&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp; 500 מ"ל Hams F-12 בינוני [+] L-גלוטמין</td><td>GIBICO Inc. ארה"ב</td><td>MT10080CV</td><td></td></tr><tr><td>Countess II מונה תאים אוטומטי (Invitrogen)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMQAX1000</td><td></td></tr><tr><td>1x DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf centufuge 5810R</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>GIBICO Inc. ארה"ב</td><td>16000044</td><td>10%</td></tr><tr><td>Fisherbrand &nbsp; מסנני תאים סטריליים (40 &mu; m)</td> <td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>22-363-547</td><td></td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H0888</td><td>1 ומיקרו; גרם/מ"ל</td></tr><tr><td>אינסולין&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>12585014</td><td>5 ומיקרו; גרם/מ"ל</td></tr><tr><td>Invitrogen&nbsp; שקופיות תא ספירת תאים של רוזנת</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>C10228&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>קווי תאים MDA-IBC3</td> מרכז <td></td><td>הסרטן MD Anderson</td><td>שנוצר על ידי המעבדה של ד"ר וודוורד24</td></tr><tr><td>Luciferase&ndash; חלבון פלואורסצנטי ירוק (Luc&ndash; GFP) מערכת פלסמיד</td><td>Biosciences</td><td>BLIV713PA-1</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-צינורות שקופים סטריליים 1.7 מ"ל</td><td>Genesee Scientific</td><td>24282S</td><td></td></tr><tr><td>Olympus 10 &micro; L להגיע לקצה מחסום, כריכה נמוכה, מתלה, סטרילי</td><td>Genesee Scientific</td><td>23-401C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>צלוחיות שטופלו ב-TC (T75), 250 מ"ל, Vent</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-209</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain (0.4%) לשימוש עם Countess Automated Cell Counter</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%), פנול אדום</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200114</td><td></td></tr><tr><td><הזרקת וריד זנב חזק></חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C.B-17 / IcrHsd-Prkdc scid Lyst bg-J - SCID / בז</td>' <td>Envigo</td><td>SCID / עכברי</td><td></td></tr><tr><td>בז' BD מזרק אינסולין עם מחט BD אולטרה עדינה 0.5 מ"ל 30Gx1/2 אינץ' (12.7 מ"מ)</td> <td>BD</td><td>328466</td><td></td></tr><tr><td>Plas Labs &nbsp; מרסן מכרסמים בסגנון ברום</td><td>Plas Labs 551BSRR</td><td>01-288-32A</td><td>הזמנה מ-Thermo Fisher Scientific</td></tr><tr><td>Volu Solספק שותף גיוון אתנול 95% SDA (190 הוכחה)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50420872</td><td>70% משומש</td></tr><tr><td><חזק>הדמיה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD&nbsp; מינון&nbsp; U-100 מזרקי אינסולין</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>יחידות מסנן PES חד פעמיות 0.45 ומיקרו; m</td><td>Fisherbrand</td><td></td><td>FB12566501 מערכת סינון לעיקור D-luciferin</td></tr><tr><td>D-Luciferin Biosynth</td><td></td><td>L8220-1g</td><td>ריכוז מלאי = 47.6 מ"מ (15.15 מ"ג/מ"ל); ריכוז שימוש = 1.515 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>1.7 מ"ל מיקרו-צינור ענבר</td><td>Genesee Scientific</td><td>24-282AM</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson Veterinary</td><td>NDC-14043-704-06</td><td>חומר הרדמה נוזלי לשימוש במכשיר אידוי הרדמה</td></tr><tr><td>IVIS 200&nbsp;</td>מכונת <td>PerkinElmer</td><td></td><td>להדמיית לוציפראז, הדמיה של עד 5 עכברים בו זמנית, עם מכונת הרדמה</td></tr><tr><td>מיכלי פלסטיק עם מכסים&nbsp;</td><td>פישרברנד</td><td>02-544-127</td><td></td></tr><tr><td>קלטות טישו</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>1000957</td><td></td></tr><tr><td>Webcol הכנת אלכוהול&nbsp;</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td></td></tr> <tr><td><חזק>הדמיית סטריאומיקרוסקופ חזקה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ AZ100&nbsp;</td><td>ניקון</td><td>דגם AZ-STGE</td><td>תוכנה NIS-ELEMENT</td></tr><tr><td>פורמלין 10%</td> <td>פישר כימיקל</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>TC כלים מטופלים 100x20 מ"מ</td><td>Genesee Scientific</td><td>25202</td><td></td></tr></tbody></table>

מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

התפשטות גרורתית למוח היא ביטוי שכיח והרסני של סוגים רבים של סרטן. בארצות הברית לבדה, כ-200,000 חולים מאובחנים עם גרורות במוח מדי שנה. הושגה התקדמות משמעותית בשיפור תוצאות ההישרדות של חולות עם סרטן שד ראשוני וממאירויות סיסטמיות; עם זאת, הפרוגנוזה העגומה עבור חולים עם גרורות קליניות במוח מדגישה את הצורך הדחוף לפתח סוכנים טיפוליים חדשניים ואסטרטגיות נגד מחלה קטלנית זו. היעדר מודלים ניסיוניים מתאימים היה אחד המכשולים העיקריים המעכבים את התקדמות ההבנה שלנו של גרורות מוחיות, ביולוגיה וטיפול. במאמר זה אנו מתארים מודל עכברי של גרורות במוח שנוצרו באמצעות הזרקת וריד זנב של קו תאים אנדוגני מוגבר HER2 שמקורו בסרטן שד דלקתי (IBC), צורה נדירה ואגרסיבית של סרטן השד. התאים סומנו בלוציפראז גחלילית ובחלבון פלואורסצנטי ירוק כדי לנטר גרורות במוח, וכומתו עומס גרורתי על ידי דימות ביולומינסצנטי, סטריאומיקרוסקופיה פלואורסצנטית והערכה היסטולוגית. עכברים מפתחים גרורות במוח באופן יציב ועקבי, מה שמאפשר חקירה של מתווכים מרכזיים בתהליך הגרורתי ופיתוח בדיקות פרה-קליניות של אסטרטגיות טיפול חדשות.

עם הרציונל שתאים מסומנים מאפשרים ניטור והדמיה של גרורות במוח במודלים פרה-קליניים של עכברים, תייגנו תאי MDA-IBC3 עם Luc ועם GFP כדי לנטר גרורות במוח ולכמת את העומס הגרורתי באמצעות הדמיה ביולומינסנטית וסטריאומיקרוסקופיה פלואורסצנטית. הזרקת תאי MDA-IBC3 המסומנים לוורידי הזנב של עכברי SCID/בז' מדוכאי חיסון הביאה לאחוזים גבוהים של עכברים לפתח גרורות במוח (כלומר, 66.7% עד 100%)16,23,25. נגעים גרורתיים במוח יכולים להתגלות כבר 8 שבועות ...

אנו מתארים מודל עכבר xenograft של גרורות במוח של סרטן השד שנוצרו באמצעות הזרקת ורידים בזנב של קו תאי סרטן שד דלקתי מוגבר אנדוגניים HER2.

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

השתמשנו בשיטת וריד הזנב כדי ליצור גרורות במוח במודלים של עכברים באמצעות שורות תאים שמקורן בחולות עם סרטן שד דלקתי, או IBC, צורה אגרסיבית מאוד של סרטן שד ראשוני. יצירת גרורות במוח במודלים של עכברים כוללת בדרך כלל זריקות עורקי תוך לבביות או תוך קרוטידיות. עם זאת, שיטת וריד הזנב מציעה יתרון על פני טכניקות אלה מכיוון שהיא מחקה טוב יותר את השלבים של התיישבות גרורות במוח, והיא פשוטה יחסית לביצוע.הרופאים שיאודינג הו ואמילי וילודר, שניהם מדריכים במעבדה שלי, ידגימו את ההליך. כדי לזהות גרורות במוח על ידי הדמיית GFP שמונה עד 10 שבועות לאחר הזרקת תאי גידול, יש לחטא את העכבר באתנול 70% ולהסיר את הפרווה מהראש ומהאוזניים. חותכים את אזור צוואר הרחם של הצוואר.הבלו והסר את הגולגולת כדי לאפשר למוח להיקצר. הכניסו את המוח לקלטת טישו והכניסו את הקלטת למיכל של DPBS קרים למשך לא יותר משעה. עבור הדמיה על ידי מיקרוסקופ סטריאו, להעביר את המוח לתוך מכסה צלחת רקמה 100 ס"מ תחת מיקרוסקופ סטריאו מצויד באור UV ובחר את המטרה 0.5x כדי לאפשר הדמיה של המוח כולו.לחץ על תצוגה חיה ומקד את התצוגה בזמן שהמוח נמצא במצב הגחון. בחר את המסנן המתאים בתוכנה ובמיקרוסקופ לסמן הפלואורסצנטי בתאים, וצלם תמונה. מבלי להזיז את הדגימה, עבור להדמיית brightfield ובחר במסנן brightfield.צלמו תמונה. לאחר מכן דמיינו את המוח במצב הגבי כפי שהודגם קודם לכן. כדי לנתח את כל תמונות המוח, המר תחילה את קבצי התמונה מ- TIFF ל- JPEG כך שניתן יהיה לפתוח אותם עם כל מחשב שאין לו את התוכנה המשויכת.לאחר מכן, פתח זוג תמונות בהירות ופלורסנט ובחר קובץ ומיזוג ערוצים. בחר את הרכיבים המתאימים, לחץ על אישור ושמור את התמונה הממוזגת. לכימות אזור הגידול במוח בתמונה הפלואורסצנטית, בחרו בחירה אוטומטית.הזיזו את החץ לאזור המיקום של GFP ולחצו ליצירת בחירה אוטומטית. לאחר מכן לחצו שוב כדי לאשר את הבחירה. כל המדידות יוצגו.אם ניתן להבחין ביותר מאזור חיובי GFP אחד, חזור על המדידה עם האזור הבא. נגעים גרורתיים במוח יכולים להתגלות כבר שמונה שבועות לאחר ההזרקה על ידי הדמיית לוציפראז ומיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאופוני. לאחר ההדמיה, חלקים מהגרורות במוח יכולים להיות קבועים פורמלין ומעובדים עבור צביעת hematoxylin ו eosin כדי לאמת את נוכחותם של נגעים גרורות במוח, ועבור צביעה immunohistochemical כדי לזהות סמנים חלבוניים ספציפיים של עניין.כאשר מנסים פרוטוקול זה, חשוב לשמור על כדאיות התא על ידי שמירה על התאים על קרח לא יותר משעה, ולמנוע בועות אוויר בתרחיף התא כדי למנוע היווצרות אמבולי ותמותת עכברים. לאחר הזרקת ורידים בזנב, אנו עוקבים אחר גידול גרורות במוח והתקדמות באמצעות הדמיית לוציפראז. לאחר המתת חסד, מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאופוני והיסטולוגיה אישרו נגעים גרורות.

modeling-brain-metastasis-via-tail-vein-injection-inflammatory-breast

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מתאר טכניקה של הזרקת תאים סרטניים מסומנים באמצעות הזרקת ורידים בזנב למודל עכבר. אנו עוקבים גם אחר היווצרות גרורות וגדילה של סרטן השד באמצעות הדמיית בעלי חיים חיים בזמן אמת in vivo.

הזרקת ורידים בזנב: שיטה למתן תאים סרטניים למחקרים גרורתיים במודל עכבר

מקור: Lim, M., et al. מידול גרורות במוח על ידי הזרקת עורק הצוואר הפנימי של תאים סרטניים. J. Vis. Exp. (2022)בסרטון זה, עכבר מורדם עובר הליך כירורגי שבו מוזרקים תאים סרטניים לעורק הצוואר המשותף (CCA) כדי להקל על העברה ממוקדת למוח. ההליך כולל תפירה מדויקת ומניפולציה של עורקי הצוואר כדי לכוון את התאים המוזרקים לעבר עורק הצוואר הפנימי (ICA), ולקדם היווצרות גידול במוח לאורך זמן.

מידול גרורות של גידולי מוח באמצעות הזרקת תאים סרטניים בעורק הצוואר הפנימי

מודל שד סרטן מוח גרורות עכבר הוא הקים עם הזרקת intracardiac אולטרסאונד מונחה הדמיה של תאי MDA-MB231/Br-GFP. התפתחות של גרורות תוך גולגולתי multifocal כבר במעקב אורכים באמצעות רזולוציה גבוהה 9.4 T-MRI.

הזרקת intracardiac מונחה ההדמיה אולטראסאונד לפתח מודל עכבר של שד גרורות סרטן מוח ואחריו האורכי MRI

כתב יד זה מספק את ההליך המפורט של הזרקת עורק תוך כסל (IIA), טכניקה להעברת תאים סרטניים במיוחד לרקמות הגפיים האחוריות כולל עצמות כדי ליצור גרורות ניסיוניות בעצמות. למרות שהוקם בתחילה עם מודלים של גידולי שד, ניתן להרחיב פרוטוקול זה בקלות לסוגי סרטן אחרים.

הזרקת עורק Intra-כסל עבור דוגמנות יעילה וסלקטיבי של מיקרוסקופיים עצם גרור

גרורות ממלאת תפקיד משמעותי באלימות הסרטן, ומהווה כ-90% ממקרי המוות.  אנו מדווחים על פרוטוקול למודל מלנומה גרורתית בעכברים השימושי לקביעת יעילותם של חומרים טיפוליים כנגד תופעה קלינית זו.

הזרקה של תאים syngeneic Murine מלנומה מנת לקבוע את פוטנציאל גרורתי שלהם בתוך הריאות

פותח הליך כירורגי להעברת תאי גידול חלב לכבד העכברים באמצעות הזרקת וריד פורטלי. מודל זה מאפשר לחקור שלבים מאוחרים של גרורות בכבד במארח בעל יכולת חיסונית מלאה, כולל אקסטרוואזציה של תאי גידול, זריעה, הישרדות וצמיחה גרורתית בכבד.

מודל הזרקת Portal Vein לחקר גרור בכבד של סרטן השד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתיל תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב פשוטה, פחות פולשנית, אחיזה נוחה בדרך, והוא מודל סרטן השד זה העכבר orthotopic עם סביבה נאותה כרית שומן החלב יכול לשמש כדי לחקור היבטים שונים של סרטן.

הזרקת Orthotopic של תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב עכברים

הגישה המתוארת משלבת הזנב הנסיוני גרורות מוסר עם הדמיה vivo live בעלי חיים כדי לאפשר ניטור בזמן אמת של גרורות סרטן השד היווצרות וצמיחה בנוסף לקוונפיקציה של מספר גרורות וגודל בריאות.

שימוש משולב של הזנב וריד גרורה Assays ובזמן אמת ב Vivo הדמיה כדי לכמת מושבת סרטן השד ונטל בריאות

הזרקה תוך ורידי של תאים סרטניים משמשת לעתים קרובות במחקר גרורות, אבל נטל הגידול גרורתי יכול להיות קשה לנתח. כאן, אנו מדגימים מודל הזרקת וריד זנב של גרורות וכוללים גישה חדשנית לניתוח נטל גידול הריאות גרורתי שנוצר.

ניתוח פתולוגי של גרורות ריאות בעקבות הזרקת וריד זנב לרוחב של תאים סרטניים

מידול גרורות מוח תוך גולגולתי מסובך על ידי חוסר יכולת לפקח על גודל הגידול ותגובה לטיפול בשיטות מדויקות ובזמן. המתודולוגיה שהוצגה זוגות הזרקת גידול תוך גולגולתי עם ניתוח הדמיית תהודה מגנטית, אשר בשילוב, מטפח זריקות מדויקות ועקביות, ניטור משופר של בעלי חיים, ומדידות מדויקות של נפח הגידול.

מידול גרורות מוח באמצעות הזרקה תוך גולגולתית והדמיית תהודה מגנטית

גרורות במוח הן גורם לתחלואה קשה ולתמותה בחולי סרטן. רוב המודלים של עכברי גרורות במוח מסובכים על ידי גרורות מערכתיות מבלבלות ניתוח של תמותה ותוצאות התערבות טיפולית. מוצג כאן פרוטוקול להזרקת קרוטיד פנימית של תאים סרטניים המייצר גידולים תוך גולגולתיים עקביים עם גידולים סיסטמיים מינימליים.

מידול גרורות במוח על ידי הזרקת עורק הצוואר הפנימי של תאים סרטניים

למדו מידול גרורות מוח בעכברים באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים HER2-מוגברים. שיטה זו מחקה טוב יותר את שלבי הקולוניזיה של גרורות מוח בהשוואה לשיטות מסורתיות.

מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

גלה סרטונים נוספים