Name: חיסון תוך-כלי ואוסף חלב במחקרים על חיסון אימהי בארנבים הלבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 13 min
Description: למדו חיסון תוך-כלי ואוסף חלב בארנבים לבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus) למחקרי חיסון אימהי. שיטות אלו מאפשרות הערכת העברת נוגדנים ספציפיים לאנטיגן מאם לצאצרים דרך השליה והחלב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להכיר באגף משאבי בעלי חיים במעבדה באוניברסיטת דיוק ובצוות הבעלות שלהם על עזרתם וטיפול רב בבעלי החיים. בנוסף, המחברים רוצים להכיר את צוות PhotoPath בתוך המחלקה לפתולוגיה על עזרתם בחלקי השמע והווידאו של כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי קרנות מחקר לפי שיקול דעת ממעבדת Staats.

כל ההליכים אושרו ובוצעו בהתאם למדיניות IACUC של אוניברסיטת דיוק.
הערה: החומרים הדרושים מסופקים בטבלת החומרים.
1. הרדמה והרדמת ארנבות
<ol><li>להרדם את הארנב הנשי (בוגר מינית; כ 5-30 חודשים) על ידי מתן acepromazine תוך שרירית (IM) במינון של 1 מ"ג / קילוגרם. בהתאם לגודל של החיה, להשתמש במזרק 1 או 3 מ"ל עם מחט 25 G. השרירים Epaxial הם האתר המועדף של הזרקה תוך שרירית. הערה: Acepromazine יכול להינתן גם תת עורית, אבל IM הוא המועדף על ידי המעבדה, כפי שהוא פועל מהר יותר ומפחית את השכיחות של נגעים בעור.</li>
	<li>המתן 10-15 דקות כדי לאפשר לאצפרומזין להיכנס לתוקף.</li>
	<li>הנח את הארנב עם isoflurane על ידי הנחת חרוט האף מחובר על אפו של החיה. כוונן את מאדה עד 4% isoflurane בשילוב עם עד 4 ליטר / דקה חמצן. ארנבים יש סלידה גבוהה isoflurane, כך איפוק נאותה יש צורך בעת מיסוך החיה.</li>
	<li>לאחר הרדמה מלאה, כפי שהוערך על ידי פינה, דוושה, ו / או רפלקס palpebral, להחיל חומר סיכה עיניים על כל עין כדי למנוע ייבוש של העיניים כיב הקרנית הבאים.</li>
	<li>לפקח ללא הרף רפלקסים ונשימה במהלך הרדמה, ולהפחית את שיעור isoflurane ל 1-2% לאחר מישור נאותה של הרדמה כבר הגיע.</li>
</ol>2. חיסון תוך-אפי
<ol><li>הכינו פתרון חיסון לפני הטיפול בבעלי חיים.</li>
	<li>היכך את הארנב כמתואר לעיל.</li>
	<li>ברגע שחבר המעבדה מוכן לנהל את החיסון והארנב נמצא במישור הרדמה הולם, כבה את האירופלורן והחמצן והסר את חרוט האף.</li>
	<li>מניחים את הארנב בנסיכות הגב, ומפעילים את הצוואר והראש בזווית משוערת של 45 מעלות המאפשרת גישה קלה והדמיה של שני הנארס על ידי חבר המעבדה המנהל את החיסון.</li>
	<li>לטעון את פיפטה עם לא יותר מ 100 μL של פתרון החיסון, במהירות לנהל את הפתרון בכל נחיריים. פיפטה צריך להיות מוחזק בזווית משוערת 45 °, זווית לכיוון ההיבט המדיאלי של מעבר האף. הערה: מטרת החיסון היא לפתרון ליצור קשר עם קרום הרירית של nares, ולכן הטיפ לא צריך להיות ממוקם בתוך nares, כמו זה עלול לגרום שחיקה או גירוי של רקמות הרירית ועלול להשפיע על האימונוגניות של החיסון מנוהל באף. החיסון צריך להינתן במהירות ונעשה באותו אופן ב nare האחר.</li>
	<li>לאחר הממשל בשני מעברי האף, לשמור על הארנב ב recumbency הגב במשך 30 שניות כדי למזער את הדליפה של פתרון החיסון. הערה: המעבדה בדרך כלל לנהל לא יותר מ 100 μL לכל נחיריים בכל פעם. אם יש לתת נפח גדול יותר, עם סך מרבי של 500 μL, החיסון יכול להינתן ב 100 μL aliquots עם תקופת מנוחה של 30 שניות בין חיסונים, וממשלים נוספים של חיסון חוזרים, עם 30 שניות של מנוחה בין כל ממשל, עד נפח החיסון הכולל מועבר.</li>
	<li>לאחר החיסון, מניחים את הארנב על האוורור להחלמה ומנטרים מקרוב את החיה עד שהיא יכולה לשמור על שכיבה קשה.</li>
</ol>3. אוסף חלב
<ol><li>הנקה את הארנב המניק כמתואר לעיל.</li>
	<li>נקה את העור מעל וריד האוזן השולי עם ספוגית אלכוהול / לנגב.</li>
	<li>באמצעות מזרק 1 מ"ל ומחט 25 גרם, לנהל כ 1-2 IU של אוקסיטוצין דרך הווריד דרך וריד האוזן השולי כדי לגרום לחלב אכזבה. הערה: בשל הרפיה בשרירים חלקה, זה נפוץ עבור הארנב להשתין או לעשות את צרכיו לאחר הממשל של אוקסיטוצין.</li>
	<li>לאחר ניהול אוקסיטוצין, להפעיל לחץ על אתר ההזרקה עם חתיכת גזה.</li>
	<li>תוך שמירה על מסכת ההרדמה מעל אפו של הארנב, הנח את הארנב על אחוריו. הערה: אוסף חלב יכול להתבצע גם עם החיה ב recumbency לרוחב, אבל המעבדה מוצאת כי האוסף קל יותר כאשר הארנב הוא נשען על העכוז שלה עם עוזר מחזיק את הארנב זקוף עם מסכת הרדמה.</li>
	<li>פתח את הצינור הסטרילי כדי להתכונן לאיסוף חלב ולאתר את רקמת החלב ואת הפטמות הקשורות. הפטמות מוקפות בדרך כלל בפרווה רטובה מההנקה האחרונה, ורקמת החלב מוחשית בקלות כאשר היא מלאה בחלב.</li>
	<li>לתפוס את רקמת החלב הקשורים פטמה בין האגודל והאצבע ולהחיל עדין, עיסוי לחץ על רקמת הבלוטות לכיוון הפטמה. מניחים את צינור האיסוף מעל הפטמה כדי לאסוף את החלב המובע. הערה: זה יכול לפעמים לקחת כמה דקות עבור אוקסיטוצין להיות יעיל, ייצור החלב נראה להשתנות בין בלוטות החלב. אם ביטוי החלב אינו מוצלח, המתן מספר דקות או הסתובב לבלוטות החלב הנוספות. חלב מכל הפטמות ניתן לאסוף באותו בקבוקון. בדרך כלל, כמה מיליליטר של חלב ניתן לאסוף בקלות מן פלוני מניקה.</li>
	<li>לאחר איסוף החלב, לכבות את isoflurane וחמצן, ולאפשר את הארנב להתאושש תוך פיקוח הדוק עד החיה היא מסוגלת לשמור על שכיבה עצם החזה.</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

למרות שלא תואר בפרוטוקול לעיל, רבייה מוצלחת של הארנבים נחוצה למודל אימהי זה ולאפשר איסוף חלב. ארנבים גדלים בקלות על ידי כיסוי חי במסגרת מחקר. מומלץ כי אכן יועבר לכלוב של הדולר לרבייה, כמו גם יכול להיות טריטוריאלי ואגרסיבי אם נשמר בכלוב שלהם עם הכסף. אם הנקבות אינן פתוחות לאחר 15 דקות (כפי שצוין על ידי ריצה משם נושך, או קול), האילה צריכה להיות ממוקמת בחזרה לתוך הכלוב שלה. ישנם מספר קטעי וידאו אינפורמטיביים הדרכות על הרבייה ארנב שניתן לראות באינטרנט29, אבל לאחר הרבייה, הזכר בדרך כלל ליפול על ועשוי ל...

מחקרים על חיסון אימהי והעברת נוגדנים הם לא יסולא בפז מסיבות רבות, שכן זהו המסלול הראשוני של העברת חסינות והגנה עוקבת מפני פתוגנים ומחלות אצל תינוקות ותינוקות. חיסון אימהי יש פוטנציאל להשפיע באופן חיובי הן על בריאות האם והן על בריאות התינוק / ילד ברמה הגלובלית על ידי הפחתת תחלואה ותמותה הקשורים פתוגנים מסוימים בתקופה פגיעה זו1. המטרה העיקרית של אסטרטגיה זו היא להגדיל את רמות הנוגדנים האימהיים הספציפיים במהלך ההריון. נוגדנים אלה יכולים להיות מועברים לאחר מכן לתינוק ולתינוק ברמות מספיקות כדי להגן מפניזיהומיםעד שמערכת החיסון שלהם בוגרת מספיק כדי להגיב כראוי לאתגרים 1,2,3. עבודה קודמת הוכיחה כי טיטרים נוגדנים גבוהים יותר בלידה קשורים להגנה מלאה או להתפרצות מאוחרת ולחומרה מופחתת של מחלות זיהומיות רבות ושונות בתינוק, כולל טטנוס, שעלת, וירוס סינסיטיאלי נשימתי (RSV), שפעת וזיהומים סטרפטוקוקליים קבוצתיים1,2,3.
אצל בני אדם, נוגדנים אימהיים מועברים באופן פסיבי על פני השליה ומועברים גם דרך חלב אם באמצעות הנקה. עבודה קודמת הוכיחה כי רמות IgA ספציפיות ל- HIV בחלב אם אנושי מאמהות נגועות בנגיף היו קשורות להעברה מופחתת לאחר הלידה של הנגיף, מה שמרמז על תפקיד מגן לחלב אם נגד HIV IgA4. מחקרים אצל פרימטים לא אנושיים הראו כי חיסון נגד HIV יכול לגרום לתגובה נוגדנית משמעותית בחלב אם, ולמרות שתגובות IgG בסרום דומה נגרמו בעקבות חיסון מערכתי לעומת ריר, חיסון הרירית גרם לתגובת IgA גבוהה משמעותית בחלב5,6.
זיהוי מודל בעלי חיים מתאים מבחינה תרגומית למחקרים אלה צריך לקחת בחשבון את סוג השליה ואת המנגנונים של העברת נוגדנים פסיביים, כמו גם את העברת נוגדנים באמצעות חלב אם. ישנם שלושה סוגים עיקריים של שליה ביונקים המבוססים על סוגי הרקמות והשכבות בממשק המאטרנו-עוברי, כולל המוכוריאל (פרימטים, מכרסמים וארנבות), אנדותליוצ'וריאלי (טורפים) ואפיתליוצ'וריאלי (סוסים, חזירים ומהרהרים). השליה המוכוריאלית היא הסוג הפולשני ביותר, המאפשר תקשורת ישירה בין אספקת הדם האימהית לבין המקהלה, או קרום העובר החיצוני ביותר. בהתבסס על מספר שכבות trophoblast, ישנן מספר וריאציות של שליה המוכוריאלית, כולל השליה המומונוצ'וריאלית שנמצאה בפרימטים, השליה המודיקוריאלית בארנבים, והשליה המוטריכוריאלית שנצפתה בחולדות ועכברים7. מגע ישיר זה בין אספקת הדם האימהי לבין chorion מאפשר העברה פסיבית של נוגדנים על פני השליה במהלך ההריון. IgG הוא סוג הנוגדנים היחיד שחוצה באופן משמעותי את השליה האנושית8, ואילו IgA הוא המעמד השולט של איג שנמצא בחלב אם אנושי9. מבין המודלים הרלוונטיים מדעית, רק פרימטים (כולל בני אדם), ארנבות ושפני ניסיונות מעבירים את IgG ברחם ו- IgA בחלב10,11. לכן, מודל הארנב משלב גורמים דומים לאלה בבני אדם השולטים העברה transplacental של IgG והעברה הנקה של IgA.
בנוסף לשמש מודל יוצא דופן עבור חסינות אימהית ופיתוח חיסון, קווי דמיון בין הארנב חללי האף האנושי להפוך אותם מודל מתאים לחיסון תוך-אנלתי. נפח חלל האף הארנב דומה יותר לבני אדם מאשר מודלים מכרסמים המבוססים על מסת גוף יחסית12. בנוסף, Casteleyn et al. 12 הוכיח כי רקמת הלימפה הקשורים לאף (NALT) הוא נפחי יותר בארנב לעומת מכרסמים. ה- NALT ממוקם בעיקר בהיבט הגחוני והגחוני של בשר האף הגחוני ובהיבט לרוחב ודורסולטרלי של בשר האף-אופרינגאלי בארנבים, ואילו במכרסמים, רקמת הלימפה נוכחת רק לאורך ההיבט הגחוני של בשר האףהאף 12. בארנבים, המבנה והמיקום של לימפוציטים תוך-אפיתאליים ולאמינה פרופריה, כמו גם זקיקי הלימפה המבודדים, דומים לבני אדם12.
יתרונות נוספים של שימוש בארנב כמודל לחסינות אימהית ורירית כוללים את פוריותם הגבוהה ותקופת ההיריון הקצרה יחסית. כלי דם אורקולריים גדולים מאפשרים גישה קלה יחסית לכמויות גדולות של דם לאוספים סדרתיים. ניתן לאסוף מגוון דגימות ריר לתגובת נוגדנים ספציפית לאנטיגן, כולל חלב אם13 (בעת הנקה), הפרשות ריר או שטיפות (למשל, אוראלי14,15,16, שטיפת ברונכולבולר13,17,18,19,נרתיק 20,21,22), וצואה20,23,24,25. דגימות חלב ניתן לאסוף בקלות במהלך ההנקה כדי להעריך את נוכחותם של תגובות נוגדנים ספציפיות לאנטיגן. אמנם לא בשפע כמו עבור בני אדם ועכברים, מגוון רחב של ריאגנטים ניסיוניים זמינים עבור מחקרים ספציפיים ארנב מבחנים. במאמר זה נתאר ונדגים חיסון תוך-אפי ואוסף חלב בארנבים לבנים בניו זילנד(Oryctolagus cuniculus).

<table><tbody><tr><td><חיסון תוך>-אף</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr>מכונת <tr><td>הרדמה/וופורייזר</td><td>ציוד וטרינרי</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>מחט היפודרמית (25 גרם)</td><td>Terumo</td><td>07-806-7584</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן (בקבוק 250 מ"ל)</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-893-1389</td><td>2-4%</td></tr> <tr><td>מזרק נעילת לואר (1 מ"ל)</td><td>אייר-טייט</td><td>07-892-7410</td><td></td></tr><tr><td>חיסון רירי</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>חיסון ניסיוני</td></tr><tr><td>חרוט</td><td>אף McCulloch Medical</td><td>07891-1097</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה</td><td>VWR</td><td>53503-290</td><td></td></tr><tr><td>Pipettor</td><td>VWR</td><td>89079-962</td><td></td></tr><tr><td>PromAce (Acepromazine maleate)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>07-893-5734</td><td>1 מ"ג/ק"ג IM</td></tr><tr><td>Puralube סטרילי משחת עיניים</td><td>Dechra</td><td>07-888-2572</td><td></td></tr><tr><td><אוסף חלב חזק>חזק</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>הכנה לאלכוהול 2 שכבות</td><td>Covidien</td><td>07-839-8871</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמה/וופורייזר</td><td>ציוד וטרינרי</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>מחטים היפודרמיות (25 גרם)</td><td>Terumo</td><td>07-806-7584</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן (בקבוק 250 מ"ל)</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-893-1389</td><td>מזרק 2-4%</td></tr> <tr><td>Luer Lock (1 מ"ל)</td><td>Air-Tite</td><td>07-892-7410</td><td></td></tr><tr><td>ספוג לא ארוג (4x4)</td><td>Covidien</td><td>07-891-5815</td><td></td></tr><tr><td>Nose Cone</td><td>McCulloch Medical</td><td>07891-1097</td><td></td></tr><tr><td>PromAce (Acepromazine Maleate)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>07-893-5734</td><td>1 מ"ג/ק"ג IM</td></tr><tr><td>Puralube סטרילי משחת עיניים</td><td>Dechra</td><td>07-888-2572</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקון חרוטי סטרילי (15 מ"ל)</td><td>בז</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr></tbody></table>

חיסון תוך-כלי ואוסף חלב במחקרים על חיסון אימהי בארנבים הלבנים של ניו זילנד (oryctolagus cuniculus)

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

בשל קווי דמיון בין שליה והעברת נוגדנים עם בני אדם, ארנבות הן מודל מצוין של חיסון אימהי. יתרונות נוספים של מודל מחקר זה הם קלות הרבייה ואיסוף המדגמים, תקופת הריון קצרה יחסית וגדלי פסולת גדולים. נתיבי חיסון שהוערכו בדרך כלל כוללים תת עורית, תוך שרירית, תוך-עורית ותוך עורית. איסוף מדגם לא בסיסי לגילוי כרונולוגי של התגובות האימונולוגיות לחיסונים אלה כולל איסוף דם, הן מסכרים והן מערכות, וחלב מההנקה כן. במאמר זה, נדגים טכניקות המעבדה שלנו השתמשה במחקרים של חיסון אימהי בארנבים לבנים ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus), כולל חיסון תוך-כלי ואוסף חלב.

באיור 1מתוארת סקירה כללית של עיצוב טיפוסי של מחקר חיסון תוך-אפי אימהי , המשלב את החיסונים, הרבייה, ההצתה, ההנקה והעברת הנוגדנים. למרות שלא הודגם, יש לאסוף דם לפני החיסון הראשוני למדידות בסיסיות ולאורך שאר המחקר במרווחי זמן קבועים. דם מתקבל בקלות דרך עורק האוזן המרכזית עם סם מתון וסוכן משכך כאבים מקומי (למשל, לידוקאין 2.5% ופרילוקאין 2.5% קרם). נוכחות של רמות IgG ספציפיות לאנטיגן ניתן למדוד בדגימות אלה. ארנבות מחוסנות דרך המסלול התוך-אנליאתי, כפי שמתואר בפרוטוקול ומודגם בסרטון. בהתאם למחקר, ה...

מאמר זה מתאר ומדגים את ניהול החיסונים התוך-אנלתיים ואת איסוף החלב מארנבים מניקים (Oryctolagus cuniculus) כאמצעי להערכת חסינות הרירית במודל מתאים מבחינה תרגומית של חיסון אימהי.

חיסון תוך-כלי ואוסף חלב במחקרים על חיסון אימהי בארנבים הלבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

מחקרים על חיסון אימהי והעברת נוגדנים הם לא יסולא בפז מסיבות רבות שכן זהו המסלול הראשוני של העברת חסינות והגנה עוקבת מפני פתוגנים ומחלות אצל תינוקות ותינוקות. בשל קווי דמיון בין שליה והעברת נוגדנים עם בני אדם, ארנבות הן מודל מצוין של חיסון אימהי. במאמר וידאו זה אנו מדגימים טכניקות המעבדה שלנו השתמשה במחקרים של חיסון אימהי בניו זילנד ארנבים לבנים, כולל חיסון תוך-אפי ואוסף חלב.תחילה נתאר ציר זמן לדוגמה וסדרת אירועים למחקר חיסון אימהי רירי בארנבים הלבנים של ניו זילנד. ארנבות מחוסנות דרך המסלול התוך-אנליאתי, כפי שמודגם בסרטון זה. בהתאם למחקר, החיסון עשוי לדרוש דחיפה או ייתכן שיהיה צורך לתת דרך מסלול נוסף, כגון חיסון תוך שרירי.למרות שלא תואר, יש לאסוף דם לפני החיסון הראשוני למדידות בסיסיות, ולאורך שארית המחקר במרווחי זמן קבועים. דם מתקבל בקלות על ידי עורק האוזן המרכזית עם סם מתון וסוכן משכך כאבים מקומי. נוכחות של רמות IgG ספציפיות לאנטיגן ניתן למדוד בדגימות אלה.ארנבים הם גידלו אז. אנו מעדיפים לרכוש מגדלים מוכחים מספקים לשימוש כדי להבטיח שיעור הריון גבוה יותר עבור מחקרים אלה. בהתאם לציר הזמן של החיסון, ארנבים עשויים לקבל חיסונים נוספים במהלך ההריון.IgG ספציפי לאנטיגן מועבר באופן טרנס-פלסנטי לערכות. בערך 30 עד 32 ימים לאחר הרבייה בהריון עושה להצית. אנו ממליצים להגביל את הטיפול בערכות בימים הראשונים כדי למזער את הדחייה מהערכות.דגימות דם ניתן לאסוף מן הערכות כדי להעריך את רמות אנטיגן ספציפי IgG שהועברו transplacentally. ניתן לאסוף דם ממספר קטן של ערכות בזמן הלידה או בסמוך לו כדי להעריך את רמות הנוגדנים הספציפיות לאנטיגן מוקדם. בנוסף למגוון רחב של חומרים מזינים, ערכות מקבלות IgA ספציפי אנטיגן מן האלנה מניקה בזמן הנקה.ערכות ננזפות בדרך כלל בגיל ארבעה עד שמונה שבועות. לפני היתוך חלב ניתן לאסוף בקלות מן הנקה עושה כפי שהוכח בסרטון זה. דגימות החלב שנאספו מעובדות לאחר מכן לגילוי IgA ספציפי אנטיגן.בהתאם למחקר, חיסונים דחיפה יכול להינתן ערכות ודגימות דם סדרתי ניתן לאסוף מן הערכות בגיל צעיר מאוד באמצעות הווריד saphenous לרוחב. כעת נדגים חיסון תוך-אפי ואיסוף חלב בארנבים הלבנים של ניו זילנד.פרוטוקול. כל ההליכים אושרו ובוצעו בהתאם למדיניות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דיוק.חיסון תוך-אפי. חומרים הדרושים:Acepromazine, מזרק ומחט, חומר סיכה עיניים, Isoflurane, חרוט האף, פיפטה, וטיפים פיפטה, חיסון ריר. הכינו את פתרון החיסון לפני הטיפול בבעלי חיים.ארנבים מסוממים עם Acepromazine מיליגרם אחד לקילוגרם תוך שרירית, ומרדים עם Isoflurane באמצעות חרוט האף. לאחר הרדמה מלאה כפי שהוערך על ידי רפלקס עפעפיים, חומר סיכה עיניים מתווסף לכל עין כדי למנוע ייבוש של העיניים וכיב הקרנית הבאים. ברגע שחבר המעבדה מוכן לנהל את החיסון והארנב נמצא במישור הרדמה הולם, כבה את האירופלורן והחמצן והסר את חרוט האף.מניחים את הארנב בנסיכות הגב ומפעילים את הצוואר והראש בזווית משוערת של 45 מעלות המאפשרת גישה קלה והדמיה של שני האמה על ידי חבר המעבדה המנהל את החיסון. לטעון את פיפטה עם לא יותר מ 100 microliters של פתרון החיסון במהירות לנהל את הפתרון נחיר אחד ולחזור על ההליך עבור הנחיריים השני. הפיפט צריך להיות מוחזק בזווית משוערת של 45 מעלות.זווית לכיוון ההיבט המדיאלי של מעבר האף. מטרת החיסון היא שהפתרון הוא ליצור קשר עם הקרומים הריריים של הנארס. אז הטיפ לא צריך להיות ממוקם בתוך nares כמו זה עלול לגרום שחיקה או גירוי של רקמות הרירית ועלול להשפיע על האימונוגניות של החיסון מנוהל באף.החיסון צריך להינתן במהירות ונעשה באותו אופן בנחיריים האחרים. לאחר הממשל בשני מעברי האף, הארנב נשמר בנסיכות הגב למשך 30 שניות כדי למזער את הדליפה של פתרון החיסון. המעבדה בדרך כלל תנהל לא יותר מ -100 מיקרוליטר לכל נחיריים בכל פעם.אם נפח גדול יותר הוא להינתן עם נפח כולל מרבי של 500 microliters, החיסון יכול להינתן 100 aliquots microliter עם תקופת מנוחה של 30 שניות בין חיסונים. וממשלים נוספים של חיסון חוזרים על עצמם עם 30 שניות של מנוחה בין כל ממשל עד לנפח החיסון הכולל מועבר. לאחר החיסון, מניחים את הארנב על האוורור להחלמה ומנטרים מקרוב את החיה עד שהיא מסוגלת לשמור על שכיבה קשה.במקרים מסוימים, ניסוח החיסון לא יכול להיות מועבר לחלוטין לחלל האף וחלק של ניסוח החיסון עשוי להישאר בחלק החיצוני של nares. במקרה זה, מכיוון שלא ברור מהו הנפח המדויק של החיסון שהועבר כראוי לחלל האף, אל תמליץ על שכפול מחדש של חומר חיסון נוסף שכן זה יוסיף משתנה לא מוגדר לניסוי. חשוב להשתמש בטכניקת אספקת חיסונים המספקת אספקה מלאה ועקבית של ניסוח החיסון לנארס.אוסף חלב. חומרים הדרושים:Acepromazine, מזרקים ומחטים, אלכוהול ספוגית, גזה, חומר סיכה עיניים, Isoflurane, חרוט האף, אוקסיטוצין, בקבוקון אוסף. ארנבים מסוממים עם Acepromazine מיליגרם אחד לקילוגרם תוך שרירית, ומרדים עם Isoflurane באמצעות חרוט האף.לאחר הרדמה מלאה כפי שהוערך על ידי רפלקס עפעפיים, חומר סיכה עיניים מוחל על כל עין כדי למנוע ייבוש של העיניים ואת כיב הקרנית הבאים. נקה את העור מעל וריד האוזן השולי עם ספוגית האלכוהול. באמצעות מזרק מיל אחד ומחט 25 מד, לנהל בערך אחת עד שתי יחידות בינלאומיות של אוקסיטוצין דרך הווריד על ידי וריד האוזן השולי כדי לגרום חלב לאכזב.בשל הרפיה בשרירים חלקה, זה נפוץ עבור הארנב להשתין או לעשות את צרכיו לאחר הממשל של אוקסיטוצין. לאחר ניהול אוקסיטוצין, להפעיל לחץ על אתר ההזרקה עם חתיכת גזה כדי לספק עצירת דימום. תוך שמירה על מסכת ההרדמה או חרוט האף מעל אפו של הארנב, הנח את הארנב על מגוריו האחוריים.כהערת שוליים, אוסף חלב יכול להתבצע גם עם החיה בנסיכה לרוחב, אבל המעבדה מגלה כי האוסף קל יותר כאשר הארנב הוא נשען על זה עכוז עם עוזר מחזיק את הארנב זקוף עם מסכת הרדמה. פתח את הצינור הסטרילי כדי להתכונן לאיסוף חלב ולאתר את רקמת החלב ואת הפטמות הקשורות. ארנבים בדרך כלל יש ארבעה עד חמישה זוגות של בלוטות החלב.הפטמות מוקפות בדרך כלל בפרווה רטובה מההנקה האחרונה ורקמת החלב מוחשית בקלות כאשר היא מלאה בחלב. לתפוס את רקמת החלב הקשורים פטמה בין האגודל והאצבע ולהחיל לחץ עיסוי עדין על רקמת הבלוטות לכיוון הפטמה. מניחים את צינור האיסוף מעל הפטמה כדי לאסוף את החלב המובע.זה יכול לפעמים לקחת כמה דקות עבור אוקסיטוצין להיות יעיל, ייצור החלב נראה להשתנות בין בלוטות החלב. אם ביטוי החלב אינו מוצלח, המתן מספר דקות או הסתובב בבלוטת החלב הנוספת. חלב מכל הפטמות ניתן לאסוף באותו נתעב.בדרך כלל כמה מיליליטר של חלב ניתן לאסוף בקלות מן פלוני מניקה. לאחר איסוף נפח החלב הרצוי, כבו את איזופלוראן והחמצן והוציאו את חרוט האף מהארנב, ואפשרו לארנב להתאושש תוך פיקוח הדוק עד שהחיה תוכל לשמור על שכיבה קשה. תוצאות מייצגות.איור 1. עבור מחקרים אימהיים, קביעת הריון מוקדם ככל האפשר הוא מועיל כדי לאשר כי האיילה לא צריך להיות bred מחדש. אפשרויות לגילוי הריון כוללות מישוש, אולטרסאונד, רדיוגרפים, עלייה במשקל, וטכניקות מולקולריות כגון מדידות של גורמי גדילה אינסולין ופרוגסטרון.רמות פרוגסטרון נאותה נחוצות לשמירה על ההריון בארנבים. לכן מספר מחקרים גם העריכו את רמות הפרוגסטרון בארנבים בהריון והפגינו רמות גבוהות יחסית לארנבים שאינם בהריון, במיוחד במהלך אורגנוגנזה סביב אמצע ההריון. כפי שמוצג באיור הראשון, רמות פרוגסטרון גבוהות ניתן לזהות ארנבות בהריון לעומת ארנבים שאינם בהריון גם לאחר הזדווגות על ידי דולר אושרו עבור כל עושה.רמות פרוגסטרון בסרום נמדדו באמצעות בדיקת chemiluminescent אוטומטית. איור 2. אנטיגן ספציפי IgG שהועבר transplacentally במהלך ההריון ניתן למדוד בסרום של ערכות על ידי אליסה.ניתן לאסוף דם ממספר קטן של ערכות בזמן הלידה או בסמוך לו כדי להעריך את רמות הנוגדנים הספציפיות לאנטיגן מוקדם. איסוף דם סדרתי הוא מבחינה טכנית הרבה יותר קל כמו ערכות גיל ולהגדיל את גודל. כפי שמתואר באיור 2, ניתן למדוד את רמות הסרום של IgG ספציפי לאנטיגן בערכות ולהשוות אותן לרמות האימהיות.רמות IgG המועברות באופן אימהי גבוהות יותר בלידה ויורדות עם הזמן. איור שלוש. חלב ארנב יכול להיאסף כפי שמוצג בסרטון זה, ומעובד כדי למדוד את רמות הנוגדנים הספציפיות לאנטיגן על ידי אליסה.כפי שמוצג בנתון זה, IgA מהווה חלק משמעותי מכלל הנוגדנים בחלב אם הזמינים להעברה פסיבית לערכות. שתי רמות IgA ו- IgG גבוהות משמעותית מ- IgM.Summary. מאמר וידאו זה מתאר ומדגים את הממשל של חיסונים תוך-אפיים ואת איסוף החלב מארנבים מניקים כאמצעי להערכת חסינות הרירית במודל מתאים לתרגום של חיסון אימהי.מתואר הוא תמונת סיכום עבור עיצוב מחקר חיסון תוך-חיסוני אימהי טיפוסי המשלב את החיסונים, הרבייה, ההצתה, ההנקה והעברת הנוגדנים.

intranasal-immunization-milk-collection-studies-maternal-immunization

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

בסרטון זה אנו מתארים טכניקה של מתן פתרון מעניין לתוך צינור החלב של ארנב ומאשרים את המסירה על ידי הדמיה אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה של סוכני ניגוד.

הזרקת ארנב intraductal: משלוח מקומי של פתרון עניין לתוך בלוטת החלב ארנב

בסרטון זה, אנו מראים הליך לגרימת מחלת עין יבשה חסרת מים במודל ארנב על ידי הזרקת החלק המישושי של בלוטת הדמעות העליונה עם Concanavalin A. מודל זה שימושי עבור בדיקות פרמקוקינטיות והפצה ביולוגית של תרופות לטיפול במחלת עין יבשה.

ביצוע הזרקה לחלק המישוש של בלוטת הדמעות העליונה: טכניקה לגרימת מחלת עין יבשה במודל ארנב

בסרטון זה, אנו מדגימים את החיסון של Concanavalin A, מיטוגן לימפוציטים, לתוך בלוטת הדמעות הנחותה של עין ארנב כדי לגרום למחלת עין יבשה. תמונות אולטרסאונד או סונוגרמה משמשות כדי להנחות את המיקום המדויק של אתר ההזרקה וגם כדי לאשר את הצלחת החיסון.

Concanavalin מונחה אולטרסאונד זריקה לתוך בלוטת הדמעות התחתונה: טכניקה לחסן בלוטת דמעות נחותה עם Concanavalin A כדי לגרום למחלת עין יבשה במודל ארנב

ההתפתחות אחרונות בכלי מיקוד גן הופכת את הייצור של נוקאאוט ארנבים (KO) אפשרי. בעבודה הנוכחית, יצרו חמש ארנבות אפוליפופרוטאין (Apo) C-III KO באמצעות nucleases אבץ אצבע (ZFN). עבודה זו הראתה כי ZFN הוא שיטה יעילה ביותר כדי לייצר ארנבות KO.

ייצור של ארנבים נוק אפוליפופרוטאין C-III באמצעות nucleases אצבע האבץ

איסוף חלב ממודלים של בעלי חיים מקל על כיווני מחקר שונים: הבנת חסינות פסיבית, זיהוי פתוגנים האחראים להעברה אנכית, ובאמצעות שימוש בעכברים טרנסגניים, אפילו ייצור מסחרי של חלבונים המצויים בחלב אם. כאן אנו מדגימים שיטה פשוטה לאיסוף חלב בעכברים ובאייל המונטג'אק של ריבס.

שיטות איסוף חלב לעכברים וריבס &#39;Muntjac צביים

יש חוסר ידע כללי על אופן פעולת החיסונים. כאן אנו מציעים שימוש משולב בגנטיקה הפוכה ועכברים כימריים של מח עצם כדי לקבל תובנה לגבי התגובות החיסוניות המוקדמות של המארח לחיסונים עם דגש מיוחד על תאים דנדריטיים וחסינות תאי T.

Intranasal המינהל של החיסונים שפעת רקומביננטי במודלי כימרי עכבר ללמוד חסינות רירית

כאן, אנו מתארים טכניקה לאספקה מקומית של ריאגנטים לבלוטת החלב של הארנב באמצעות זריקה תוך-צינורית. בנוסף, אנו מתארים פרוטוקול להדמיה ואישור מסירה על ידי הדמיית אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה של חומרי ניגוד.

משלוח Intraductal אל ארנב חלב בלוט

למרות ארנבים האירופית הם זן חברתית, מבחינה חברתית דיור אותם יכול להיות מאתגר. לכן, חייבת להיות הבנה מעמיקה של התנהגויות ומבנים חברתיים מעבדה שוכנו זוג ארנבים. כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לזהות זיווג שיטות, ההיררכיה מינים טיפוסי הממסד התנהגויות והתנהגויות המחייב התערבות מתאימה.

שיטות של זיווג ותחזוקה זוג של ניו זילנד הלבן ארנבים (Oryctolagus Cuniculus) ויה Ethogram התנהגותית, ניטור, והתערבויות

שיטה לייצור מחשבים בודדת בנוגדנים אלפקות, כולל חיסון, איסוף דם, בידוד תאי B והבחירה מתואר.

חיסונים של האלפקות (לאמה pacos) עם חלבונים אנטיגניים וייצור נוגדנים תחום יחיד אנטיגן ספציפי

כאן אנו מציגים פרוטוקול אלגנטי ויוו הערכה של חיסון היעילות ומנחה תגובות מערכת החיסון. פרוטוקול זה ניתן להתאים מודלים חיסון ללמוד ויראלי, חיידקי, או טפילים פתוגנים.

הערכה של פתוגן-פונדקאי תגובות והיעילות החיסון בעכברים

פרוטוקול זה מתאר טכניקת ניהול הריון והאכלה לארנבים שהועברו בעוברים והונדסו גנטית, שמטרתה להפחית את תמותת הארנבים שזה עתה נולדו ולשפר את יעילות ההכנה של ארנבים שעברו עריכה גנטית.

ניהול הריון והנקה לארנבות שהועברו בעוברים והונדסו גנטית

למדו חיסון תוך-כלי ואוסף חלב בארנבים לבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus) למחקרי חיסון אימהי. שיטות אלו מאפשרות הערכת העברת נוגדנים ספציפיים לאנטיגן מאם לצאצרים דרך השליה והחלב.

חיסון תוך-כלי ואוסף חלב במחקרים על חיסון אימהי בארנבים הלבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus)

גלה סרטונים נוספים