Name: מודל דגי זברה של גרורות נוירובלסטומה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: חקור מודל דגי זברה לגרורות נוירובלסטומה באמצעות שימוש ב-Danio rerio עם ביטוי יתר של MYCN ו-LMO1. שיטה זו מאפשרת הדמיה בזמן אמת של התפשטות גידולים ומספקת פלטפורמה לחקר מנגנוני גרורות ולסינון תרופות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי מענק R01 CA240323 (S.Z. ) מהמכון הלאומי לסרטן; מענק W81XWH-17-1-0498 (S.Z.) ממשרד ההגנה של ארצות הברית (DoD); פרס V Scholar מטעם קרן V לחקר הסרטן (S.Z.) ומענק פלטפורמה ממרכז מאיו לגילוי ביו-רפואי (S.Z.); ותומכים ממרכז מאיו קליניק לסרטן והמרכז לרפואה אישית (ש.ז.).

<ol><li>Veldman, M., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+developmental+model+organism+for+pediatric+research%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a developmental model organism for pediatric research.</a> Pediatric Research. 64, 470-476 (2008).</li>
<li>Feitsma, H., Cuppen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a cancer model.</a> Molecular Cancer Research. 6 (5), 694(2008).</li>
<li>Ethcin, J., Kanki, J. P., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods in Cell Biology. 105, 309-337 (2010).</li>
<li>Benjamin, D. C., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastasis+in+adult+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastasis in adult Zebrafish.</a> BMC Cancer. 17 (1), 660(2017).</li>
<li>Kim, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-derived+factors+driving+metastatic+plasticity+in+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-derived factors driving metastatic plasticity in melanoma.</a> Nature Communications. 8, 14343(2017).</li>
<li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+ALK+collaborates+with+MYCN+in+neuroblastoma+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Activated ALK collaborates with MYCN in neuroblastoma pathogenesis.</a> Cancer Cell. 21 (3), 362-373 (2012).</li>
<li>Maris, J. M., Hogarty, M. D., Bagatell, R., Cohn, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma.</a> Lancet. 369 (9579), London, England. 2106-2120 (2007).</li>
<li>Park, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Children%27s+oncology+group%27s+2013+blueprint+for+research%3A+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Blood+and+Cancer%22%5BJournal%5D)">Children's oncology group's 2013 blueprint for research: neuroblastoma.</a> Pediatric Blood and Cancer. 60 (6), 985-993 (2013).</li>
<li>Hoehner, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+developmental+model+of+neuroblastoma%3A+differentiating+stroma-poor+tumors%27+progress+along+an+extra-adrenal+chromaffin+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%3A+A+Journal+of+Technical+Methods+and+Pathology%22%5BJournal%5D)">A developmental model of neuroblastoma: differentiating stroma-poor tumors' progress along an extra-adrenal chromaffin lineage.</a> Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 75 (5), 659-675 (1996).</li>
<li>Tsubota, S., Kadomatsu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+initiation+mechanisms+of+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Origin and initiation mechanisms of neuroblastoma.</a> Cell and Tissue Research. 372 (2), 211-221 (2018).</li>
<li>Tolbert, V. P., Matthay, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma%3A+Clinical+and+biological+approach+to+risk+stratification+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma: Clinical and biological approach to risk stratification and treatment.</a> Cell and Tissue Research. 372 (2), 195-209 (2018).</li>
<li>Maris, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Recent advances in neuroblastoma.</a> New England Journal of Medicine. 362 (23), 2202-2211 (2010).</li>
<li>Zhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LMO1+Synergizes+with+MYCN+to+promote+neuroblastoma+initiation+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">LMO1 Synergizes with MYCN to promote neuroblastoma initiation and metastasis.</a> Cancer Cell. 32, 310-323 (2017).</li>
<li>Patton, E. E., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+art+and+design+of+genetic+screens%3A+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">The art and design of genetic screens: zebrafish.</a> Nature Reviews Genetics. 2 (12), 956-966 (2001).</li>
<li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+disease%3A+zebrafish+swim+into+view%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li>
<li>Tao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIN28B+regulates+transcription+and+potentiates+MYCN-induced+neuroblastoma+through+binding+to+ZNF143+at+target+gene+promotors%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">LIN28B regulates transcription and potentiates MYCN-induced neuroblastoma through binding to ZNF143 at target gene promotors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (28), 16516-16526 (2020).</li>
<li>Ung, C. Y., Guo, F., Zhang, X., Zhu, Z., Zhu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+zebrafish+transgenesis+for+functional+genomic+analysis+of+candidate+cooperative+genes+in+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mosaic zebrafish transgenesis for functional genomic analysis of candidate cooperative genes in tumor pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52567(2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+GAB2+in+neuroblastoma+pathogenesis+through+the+promotion+of+SHP2%2FMYCN+cooperation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Critical role for GAB2 in neuroblastoma pathogenesis through the promotion of SHP2/MYCN cooperation.</a> Cell Reports. 18 (12), 2932-2942 (2017).</li>
<li>Zimmerman, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MYC+drives+a+subset+of+high-risk+pediatric+neuroblastomas+and+is+activated+through+mechanisms+including+enhancer+hijacking+and+focal+enhancer+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">MYC drives a subset of high-risk pediatric neuroblastomas and is activated through mechanisms including enhancer hijacking and focal enhancer amplification.</a> Cancer Discovery. 8 (3), 320-335 (2018).</li>
<li>Koach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+MYCN+oncogenic+signaling+through+the+MYCN-PA2G4+binding+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Drugging MYCN oncogenic signaling through the MYCN-PA2G4 binding interface.</a> Cancer Research. 79 (21), 5652-5667 (2019).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203 (3), 253-310 (1995).</li>
<li>DuBois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+sites+in+stage+IV+and+IVS+neuroblastoma+correlate+with+age%2C+tumor+biology%2C+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pediatric+hematology%2Foncology%22%5BJournal%5D)">Metastatic sites in stage IV and IVS neuroblastoma correlate with age, tumor biology, and survival.</a> Journal of pediatric hematology/oncology. 21 (3), 181-189 (1999).</li>
<li>Wattrus, S. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+safe+harbor%3A+The+hematopoietic+stem+cell+niche+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Stem cell safe harbor: The hematopoietic stem cell niche in zebrafish.</a> Blood Advances. 2 (21), 3063-3069 (2018).</li>
<li>Menke, A. L., Spitsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P., Woutersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+anatomy+and+histology+of+the+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Normal anatomy and histology of the adult zebrafish.</a> Toxicologic Pathology. 39 (5), 759-775 (2011).</li>
<li>Renshaw, S. A., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+450+million+years+in+the+making%3A+Zebrafish+and+vertebrate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+and+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">A model 450 million years in the making: Zebrafish and vertebrate immunity.</a> Disease Models and Mechanisms. 5 (1), 38-47 (2012).</li>
<li>Junqueira, L. C., Cossermelli, W., Brentani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+staining+of+collagens+type+I%2C+II+and+III+by+Sirius+Red+and+polarization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Archivum+histologicum+Japonicum+%28Nihon+Soshikigaku+Kiroku%29%22%5BJournal%5D)">Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy.</a> Archivum histologicum Japonicum (Nihon Soshikigaku Kiroku). 41 (3), 267-274 (1978).</li>
<li>Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirius+red+F3BA+as+a+stain+for+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Sirius red F3BA as a stain for connective tissue.</a> Archives of Pathology. 78, 69-72 (1964).</li>
<li>Ignatius, M. S., Hayes, M., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+cancer+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of cancer in zebrafish.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 219-237 (2016).</li>
<li>Howe, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li>
<li>Fazio, M., Ablain, J., Chuan, Y., Langenau, D. M., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+patient+avatars+in+cancer+biology+and+precision+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Zebrafish patient avatars in cancer biology and precision cancer therapy.</a> Nature Reviews Cancer. 20 (5), 263-273 (2020).</li>
<li>Yoganantharjah, P., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Use+of+the+zebrafish+model+to+aid+in+drug+discovery+and+target+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The Use of the zebrafish model to aid in drug discovery and target validation.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 17 (18), 2041-2055 (2018).</li>
<li>Ignatius, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+tumor-propagating+cells%2C+regional+tumor+heterogeneity%2C+and+dynamic+cell+movements+in+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of tumor-propagating cells, regional tumor heterogeneity, and dynamic cell movements in embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 21 (5), 680-693 (2012).</li>
<li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li>
<li>Ahmed, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+with+orbital+metastasis%3A+ophthalmic+presentation+and+role+of+ophthalmologists%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma with orbital metastasis: ophthalmic presentation and role of ophthalmologists.</a> Eye. 20 (4), London, England. 466-470 (2006).</li>
<li>Papaioannou, G., McHugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+in+childhood%3A+review+and+radiological+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Imaging+Society%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma in childhood: review and radiological findings.</a> Cancer Imaging Society. 5 (1), 116-127 (2005).</li>
<li>Langenau, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-injection+strategies+to+modify+radiation+sensitivity+and+tumor+initiation+in+transgenic+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Co-injection strategies to modify radiation sensitivity and tumor initiation in transgenic Zebrafish.</a> Oncogene. 27 (30), 4242-4248 (2008).</li>
<li>Amores, A., et al. Zebrafish hox clusters and vertebrate genome evolution. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmores%2C+A+%22Science%22">Science</a>. 282 (5394), New York, N.Y. 1711-1714 (1998).</li>
<li>Postlethwait, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+genome+evolution+and+the+zebrafish+gene+map%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Vertebrate genome evolution and the zebrafish gene map.</a> Nature Genetics. 18 (4), 345-349 (1998).</li>
<li>Opazo, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-genome+duplication+and+the+functional+diversification+of+teleost+fish+hemoglobins%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Whole-genome duplication and the functional diversification of teleost fish hemoglobins.</a> Molecular Biology and Evolution. 30 (1), 140-153 (2013).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

דגי זברה משמשים בדרך כלל במחקר בעשורים האחרונים, במיוחד בחקר הסרטן, מסיבות ברורות, כגון קלות התחזוקה שלו, רבייה חזקה, ויתרונות ברורים להדמיית vivo1,28. מודל דגי הזברה יכול להיות מניפולציה בקלות עוברית בשל ההפריה החיצונית שלהם והתפתחות, אשר משלים היטב אורגניזמים מודל יונקים, כגון חולדות ועכברים, למחקרים גנטיים בקנה מידה גדול1,2,3. יתר על כן, לגנום דגי הזברה יש דמ...

דגי זברה כבר בשימוש נרחב ויושם על מספר תחומי מחקר, במיוחד בסרטן. מודל זה מספק יתרונות רבים - כגון הרבייה החזקה שלו, תחזוקה חסכונית, והדמיה רב-תכליתית של גידול גידול וגרורות - כל אלה הופכים את דגי הזברה לכלי רב עוצמה לחקור ולחקור את הבסיסים התאיים והמולקולריים של גידולים וגרורות. טכניקות חדשות למיפוי גנום בקנה מידה גדול, טרנסגנזה, ביטוי יתר של גנים או נוקאאוט, השתלת תאים ומסכים כימיים הגדילו מאוד את כוחו של דג הזברה מודל1. במהלך השנים האחרונות, קווי דגי זברה רבים פותחו כדי לחקור גידולים וגרורות של מגוון סוגי סרטן אנושיים, כולל אך לא מוגבל ללוקמיה, מלנומה, rhabdomyosarcoma, קרצינומה hepatocellular2,3,4,5. בנוסף, מודל דג הזברה הראשון של נוירובלסטומה (NB) נוצר על ידי ביטוי יתר MYCN, אונקוגן, במערכת העצבים הסימפתטית ההיקפית (PSNS) תחת שליטה של מקדם דופמין-בטא-הידרוקסילאז (dβh). עם מודל זה, הוכח עוד כי ALK מופעל יכול להתמזג עם MYCN כדי להאיץ את הופעת הגידול ולהגדיל את החדירות הגידול ב vivo6.
NB נגזר מן השושלת הסימפתודואדרנלית של תאי הסמל העצבי, והוא סרטן גרורתי מאוד אצל ילדים7. הוא אחראי ל -10% ממקרי המוות הקשורים לסרטן ילדים8. גרורות נרחבות באבחון, NB יכול להיות מוצג קלינית כגידולים שמקורם בעיקר לאורך השרשרת של הגרעינים האוהדים ואת המדולה יותרת הכליה של PSNS9,10. הגברה MYCN קשורה בדרך כלל עם תוצאות גרועות בחולי NB11,12. יתר על כן, LMO1 זוהה כגן רגישות NB קריטי במקרים בסיכון גבוה13,14. מחקרים מצאו כי דו-אופן הפעולה מהונדס של MYCN ו- LMO1 ב- PSNS של מודל דגי הזברה לא רק מקדם התחלה מוקדמת יותר של NB, אלא גם גורם גרורות נרחבות לרקמות ולאיברים הדומים לאתרים הנפוצים בחולים עם NB13 בסיכון גבוה. לאחרונה, פנוטיפ גרורתי נוסף של NB נצפתה גם במודל חדש יותר של דגי זברה של NB, שבו הן MYCN ו- Lin28B, קידוד חלבון מחייב RNA, מתבטאים יתר על המידה תחת שליטה של מקדם dβh16.
הגישה הטרנסגנית היציבה בדגי זברה משמשת לעתים קרובות כדי לחקור אם ביטוי יתר של גן עניין יכול לתרום להתפתחות נורמלית ומחלות pathogenesis14,15. טכניקה זו שימשה בהצלחה כדי להדגים את החשיבות של גנים מרובים ומסלולים לגידול NB6,16,17,18,19,20. מאמר זה יציג כיצד קו הדגים הטרנסגני שמבטא יתר על המידה הן את MYCN והן את LMO1 ב- PSNS נוצר וכיצד הוכח כי שיתוף הפעולה של שני האונקוגנים האלה מאיץ את הופעת הגידול של NB וגרורות13. ראשית, הקו הטרנסגני המבטא יתר על המידה EGFP-MYCN תחת שליטה של מקדם dβh (קו MYCN ייעודי) פותח על ידי הזרקת dβh-EGFP-MYCN לבנות לשלב תא אחד של עוברי AB מסוג בר (WT), כפי שתואר בעבר 6,17. קו מהונדסי נפרד המבטא יתר על המידה את LMO1 ב- PSNS (קו LMO1 ייעודי) פותח על ידי חפיפה בין שני מבני DNA, dβh-LMO1 ו- dβh-mCherry, לעוברי WT בשלב תא אחד13. בעבר הוכח כי ניתן לחפוף למבני דנ"א כפולים חופפים לגנום הדגים; לכן, LMO1 ו mCherry הם coexpressed בתאי PSNS של בעלי חיים מהונדסים. ברגע שהעוברים המוזרקים F0 הגיעו לבגרות מינית, הם אז היו מחוץ לחצות עם דגי WT לזיהוי של דגים חיוביים עם שילוב של טרנסג'נים. בקצרה, צאצאי F1 נבדקו לראשונה על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטית לביטוי mCherry בתאי PSNS. שילוב נבטים של LMO1 בדגים mCherry-חיובי אושרה עוד יותר על ידי PCR גנומי ורצף. לאחר זיהוי מוצלח של כל קו מהונדס, הצאצאים של דג הטרוזיגוס MYCN ו- LMO1 מהונדסים היו שזורים כדי ליצור קו דגים מורכב המבטא הן את MYCN והן את LMO1 (המכונה MYCN; קו LMO1). MYCN נושא גידול; דגי LMO1 היו במעקב על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטית דו-שבועית לראיות לגידולים גרורתיים באזורים המרוחקים לאתר הראשי, אזור בלוטת יותרת הכליה הבין-יותרת הכליה (IRG, שווה ערך לדגי זברה של בלוטת יותרת הכליה האנושית)13. כדי לאשר את גרורות של גידולים MYCN; דגי LMO1, ניתוחים היסטולוגיים ואימונוהיסטוכימיים יושמו.

<table><tbody><tr><td>ערכת וקטור 3,3'-דיאמינובנזידין (DAB)</td><td>וקטור</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>פישר סיינטיפיק / אקרוס אורגני</td><td>64-19-7</td><td></td></tr><tr><td>אגרוז GP2</td><td>המערב התיכון מדעי</td><td>009012-36-6</td><td></td></tr><tr><td>אנטי טירוזין הידרוקסילאז (TH) נוגדן</td><td>Pel-Freez</td><td>P40101</td><td></td></tr><tr><td>ערכת חסימת אבידין / ביוטין</td><td>וקטור</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>BOND Intense R Detection</td><td>Leica Biosystems</td><td>DS9263</td><td></td></tr><tr><td>BOND מדלל נוגדנים ראשוני</td><td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td><td>AR9352</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר BOND-MAX IHC</td><td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td><td></td><td>מערכת צביעת IHC אוטומטית לחלוטין</td></tr><tr><td>CH211-270H11 שיבוט BAC</td><td>מרכז משאבים BACPAC (BRFC)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ מורכב מצויד במצלמת DP71</td><td>Olympus</td><td>AX70</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL (מדיום הרכבה מבוסס קסילן)</td> <td>Richard-Allan Scientific</td><td>8312-4</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>מוכן לשימוש (אין צורך בהכנה)</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>קרולינה</td><td>86-1263</td><td></td></tr><tr><td>הרחב תבנית ארוכה מערכת PCR</td><td>Roche Applied Science, IN</td><td>11681834001</td><td></td></tr><tr><td>Gateway BP Clonase II תערובת אנזים</td><td>Invitrogen, CA</td><td>11789-020</td><td></td></tr><tr><td>Gateway LR Clonase II תערובת אנזימים</td><td>Invitrogen, CA</td><td>11791-100</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן משני נגד Rb עז (ביוטינילאט)</td><td>Dako</td><td>E0432</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת המטוקסילין, Harris Modified</td><td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td><td>HHS-32-1L</td><td></td></tr><tr><td>HRP Avidin D</td><td>Vector</td><td>A-2004</td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>Aqua Solutions</td><td>4360-1L</td><td></td></tr><tr><td>מי חמצן, 3%</td> <td>Fisher Scientific</td><td>H324-500</td><td></td></tr><tr><td>אנזים SceI</td><td>ניו אינגלנד Biolabs, MA</td><td>R0694L</td><td></td></tr><tr><td>Kanamycin sulfate</td><td>Teknova, Inc.</td><td>K2150</td><td></td></tr><tr><td>קימברלי-קלארק מקצועי Kimtech Science Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>34133</td><td></td></tr><tr><td>ליתיום קרבונט</td><td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Microtome לחיתוך</td><td>Leica Biosystems</td><td>RM2255</td><td></td></tr><tr><td>One Shot TOP10 Chemical Skillnt&nbsp;E. coli</td><td>Invitrogen</td><td>C404006</td><td></td></tr><tr><td>p3E-polyA</td><td>&nbsp;ד"ר צ'י-בין צ'יין, אוניברסיטת יוטה</td><td>N/A</td><td>מתנה נדיבה (נא לעיין בדף האינטרנט http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page כדי להשיג חומר, אשר מופץ בחופשיות כמתואר.)</td></tr><tr><td>Parafin wax</td><td>Surgipath Paraplast</td><td>39603002</td><td>Parrafin to parafin</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11313</td><td></td></tr><tr><td>pDEST vector (וקטור יעד שונה המכיל אתרי זיהוי I-SceI)</td><td>ד"ר C. Grabher, המכון הטכנולוגי של קרלסרוהה, קרלסרוהה, גרמניה</td><td>N/A</td><td>מתנה נדיבה</td></tr><tr><td>pDONR 221 וקטור תורם שער</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12536-017</td><td></td></tr><tr><td>pDONRP4-P1R וקטור תורם</td><td>&nbsp;ד"ר צ'י-בין צ'יין, אוניברסיטת יוטה</td><td>N/A</td><td>מתנה נדיבה</td></tr><tr><td>פנול אדום, 0.5%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>&nbsp; P0290</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), ערכת כתמים אדומים 10X</td><td>BioRad</td><td>1610780</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirrius</td><td>Polysciences</td><td>24901-250</td><td></td></tr><tr><td>pME-mCherry</td><td>Addgene</td><td>26028</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K, רקומביננטי, PCR דרגת</td><td>Roche</td><td>21712520</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin MiniPrep Kit</td><td>Qiagen</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>RDO מסיר אבדן מהיר</td><td>Apex Enginerring</td><td>RDO04</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אזיד (NaN3)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>26628-22-8</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו</td><td>Leica</td><td>MZ10F</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאוסקופי מצויד במצלמת ראייה דיגיטלית DS-U1 להדמיה</td><td>Nikon</td><td>SMZ-1500</td><td></td></tr><tr><td>Taq DNA Polymerase</td><td>New England Biolabs, MA</td><td>M0273L</td><td></td></tr><tr><td>רקמה-טק VIP&reg; &nbsp; 6 מעבד חדירת ואקום AI</td><td>Sakura</td><td>N/A</td><td>דגם #: VIP-6-A1</td></tr><tr><td>Tricaine-S</td><td>Western Chemical Incorporated</td><td>20513</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>X3P1GAL</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל דגי זברה של גרורות נוירובלסטומה

Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis

דגי זברה התפתחו כמודל חשוב לבעלי חיים לחקר מחלות אנושיות, במיוחד סרטן. יחד עם טכנולוגיות עריכת הטרנסגניות והגנום החזקות המיושמות במודלים של דגי זברה, קלות התחזוקה, הפרודוקטיביות בתפוקה גבוהה והדמיה חיה רבת עוצמה הופכים את דג הזברה למערכת מודל בעלת ערך לחקר גרורות ובסיסים תאיים ומולקולריים העומדים בבסיס תהליך זה ב- vivo. הדגם הראשון של דגי זברה נוירובלסטומה (NB) של גרורות פותח על ידי ביטוי יתר של שני אונקוגנים, MYCN ו - LMO1, תחת שליטה של מקדם הדופמין-בטא-הידרוקסילאז (dβh). MYCN ו- LMO1 המחושבים יתר על המידה הובילו להשהיה מופחתת ולחדירה מוגברת של נוירובלסטומגנסיס, כמו גם גרורות רחוקות מואצות של תאים סרטניים. מודל חדש זה חוזר על תכונות מרכזיות רבות של NB גרורתי אנושי, כולל מעורבות של שינויים גנטיים רלוונטיים מבחינה קלינית וגרורות; התפתחות טבעית וספונטנית של גרורות ב vivo; ואתרים שמורים של גרורות. לכן, למודל דגי הזברה יש יתרונות ייחודיים לנתח את התהליך המורכב של גרורות הגידול ב- vivo.

כדי לקבוע אם LMO1 מתמזג עם MYCN כדי להשפיע על פתוגנזה NB, מבנים מהונדסים המניעים ביטוי של LMO1 (dβh:LMO1 ו dβh:mCherry) או MYCN (dβh:EGFP-MYCN) בתאי PSNS בשליטה של מקדם dβh הוזרקו לעוברים של דגי זברה13. כפי שמודגם באיור 1A, לאחר פיתוח קווים מהונדסים יציבים ואימות הגנוטיפים שלהם, דגי הטרוזיגוס MYCN ו-LMO1 התערבבו זה בזה. הצאצאים שלהם היו ממוינים עבור MYCN (EGFP +) או ...

מאמר זה מציג את השיטה של פיתוח, אפיון ומעקב בזמן אמת של גרורות הגידול במודל דגי הזברה של נוירובלסטומה, במיוחד בקו דגי הזברה הטרנסגניים עם ביטוי יתר של MYCN ו- LMO1, המפתח גרורות באופן ספונטני.

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing ...

שיטות אלה שימשו לפיתוח מודל דג הזברה הראשון של גרורות נוירובלסטומה. וכדי להוכיח כי מודל זה יכול לשחזר בנאמנות תכונות רבות של גרורות לראות בחולים עם סיכון גבוה של נוירובלסטומה. היתרון העיקרי של מודל דגי זברה גרורתי זה הוא הדמיית vivo בזמן אמת של הפצת הגידול כדי להבין טוב יותר מתי, ואולי איך גרורות מתרחשות.טכניקה זו אינה ספציפית לנוירובלסטומה. זה יכול להיות מיושם על מודלים של דגי זברה של סוגים שונים של סרטן כל עוד התאים הגידוליים ניתן לזהות ולעקוב אחר המוביל למגוון של אפשרויות. בתור התחלה, לפתח קו דגים מהונדס הטרוזיגוסי שמבטא יתר על המידה הן את MYCN והן את LMO1 על ידי הכלאת קווים מהונדסים MYCN ו- LMO1.ביום אחד לאחר ההפריה, השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאוסקופי כדי למיין את הצאצא של outcross עבור ביטוי EGFP, אשר מציג כנקודות חיוביות EGFP. לאחר המיון, בודדו עוברים מוקרנים לתוך מנות פטרי נפרדות ותייגו מנות כחיוביות MYCN או MYCN שליליות. דמיין ומיין עוברים של שתי הקבוצות עבור ביטוי LMO1 שלושה עד ארבעה ימים לאחר ההפריה.חפש כתמי פלואורסצנטיות אדומים הן בגנגליון צוואר הרחם העליון והן בתאים העצביים הדופאמין שאינם PSNS במיוחד במדולה אובלונגטה של המוח האחורי. בצע את ההקרנה לפני העוברים להגיע חמישה ימים לאחר ההפריה. לאחר מכן בודדו דגים ממוינים לארבע קבוצות של גנוטיפים שונים ותייגו כ-MYCN בלב

zebrafish-model-of-neuroblastoma-metastasis

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מתאר שיטת מיקרו-הזרקה להעברת תאי סרטן השד לחלל הפריביטלין של עוברי דגי זברה טרנסגניים. לאחר הדגירה, אנו מדמיינים את העובר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות בפלישה של תאים סרטניים, הפצתם וגרורות.

zPDX-אנליזה של פולשניות: חקירת התנהגות פולשנית של תאי סרטן גרורתיים בעוברי זברה Xenografts

דרך מהירה למסך למכפילים מלנומה תוך שימוש במודל גידול כבני מקום דג זברה מוצגת. הוא מנצל את וקטור miniCoopR המאפשר ביטוי של גנים מלנומה מועמד במלנוציטים. שיטה להשיג עקומות מלנומה ללא הישרדות, assay פלישה, פרוטוקול למכתים נוגדן של מלנוציטים קנה המידה וassay השתלה מלנומה מתוארת.

הקרנה למכפילים מלנומה תוך שימוש במודל גידול כבני מקום דג זברה

מטרת מחקר זה היא להדגים כיצד ניתן להשתמש באסטרטגיית טרנסגנזה של פסיפס בדגי זברה כדי להעריך במהירות וביעילות את התרומות היחסיות של אונקוגנים מרובים בהתחלת הגידול והתקדמותו in vivo.

פסיפס דג הזברה Transgenesis לניתוח הגנום פונקציונלי של גנים שיתופיים מועמד בפתוגנזה גידול

בשיטה זו משתמשת עוברי דג זברה כדי לבדוק ביעילות את יכולת פולשני כלי הדם של תאים סרטניים. תאים סרטניים פלורסנט מוזרקים לתוך שק סינוס או חלמון precardiac של עוברים בפיתוח. פלישת תאים סרטניים כלי דם extravasation נבחנת באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי של אזור הזנב 24 כדי 96 שעות מאוחר יותר.

בדיקת היכולת פולשנית דם של תאים סרטניים דג הזברה (<em&gt; Danio rerio</em&gt;)

כאן, אנו מתארים דגמים דג הזברה xenograft באמצעות שני אתרים הזרקה שונים, כלומר, חלל צינור perivitelline של קיביה, כדי לחקור את התנהגות פולשנית ולהעריך את הפוטנציאל intravasation ו extravasation של תאי סרטן שד אנושיים, בהתאמה.

התנהגות פולשנית של תאים סרטניים בשד אדם עוברי הזברה

השתלת תאי סרטן היא כלי חשוב לזיהוי מנגנוני סרטן ותגובות טיפוליות. הטכניקות הנוכחיות תלויים בבעלי חיים חסרי יכולת. כאן, אנו מתארים שיטה להשתלת תאים דג הזברה תאים לתוך עוברי המוסמכת-המוסמכת לניתוח לטווח ארוך של התנהגות התא הגידול בתגובות סמים vivo .

השתלת דג הזברה גידולים מוחיים במוח לתוך מארחים המוסמכת החיסונית עבור מחקר לטווח ארוך של התנהגות תאים סרטניים והתגובה לסמים

כאן, אנו מספקים פרוטוקול צעד אחר צעד, עם טיפים ליצירת קסנוגרפטים והנחיות לניתוח התנהגות הגידול, חיסוניות של כל ההר, וכימות הדמיה confocal.

דור של זברה דג זחל קסנוגרפטים וניתוח התנהגות הגידול

אנו מדווחים על טכניקה המאפשרת הדמיה חיה של דינמיקה של מיקרוטובולים בתאי גליובלסטומה (GBM) הפולשים לרקמת מוח של בעלי חוליות. צימוד ההזרקה האורתוטופית של תאי GBM המתויגים באופן פלואורסצנטי למוח שקוף של דגי זברה עם הדמיה תוך-חיונית ברזולוציה גבוהה מאפשר מדידה של דינמיקת השלד הציטוסקולרי במהלך פלישת סרטן באתרו .

הדמיה חיה של דינמיקת מיקרוטובולים בתאי גליובלסטומה הפולשים למוח דג הזברה

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת קסנו בחלמון של עוברי דגי זברה שקופים המותאם בשיטת היערכות פשוטה ומהירה. ניתוחים לאחר הזרקה כוללים הישרדות והערכת נטל המחלה של תאים מושתלים על ידי ציטומטריית זרימה.

שיטה פשוטה, מהירה ויעילה לניתוח השתלת גידול בעוברים שקופים של דגי זברה

כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

חקור מודל דגי זברה לגרורות נוירובלסטומה באמצעות שימוש ב-Danio rerio עם ביטוי יתר של MYCN ו-LMO1. שיטה זו מאפשרת הדמיה בזמן אמת של התפשטות גידולים ומספקת פלטפורמה לחקר מנגנוני גרורות ולסינון תרופות.

מודל דגי זברה של גרורות נוירובלסטומה

גלה סרטונים נוספים