Name: מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: למדו שיטות ניתוח משופצות להשתלת איים תוך-הפטית בעכברים. שתי הטכניקות מונעות דימום וריד פורטל ומפחיתות תמותה ניתוחית, ומאפשרות מחקר מתקדם במחלות כבד וסרטן כבד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי המחלקה לענייני יוצאי צבא (VA-ORD BLR&D הצטיינות I01BX004536), והמכון הלאומי לבריאות מענקים # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, כדי HW. ברצוננו להודות לכם מר מייקל לי וגברת לינדזי סוואבי על עריכת השפה

כל ההליכים נערכו באישור הוועדות המוסדיות לטיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטה הרפואית של דרום קרוליינה ובמרכז הרפואי ראלף ה. ג'ונסון בצ'רלסטון.
1. אינדוקציה לסוכרת באמצעות סטרפטוזוטוצין (STZ)
<ol><li>הכנת עכברי נמען:<ol>
<li>לשקול את כל העכברים בנפרד.</li>
		<li>בדוק את רמות הגלוקוז בדם מדגימת דם וריד הזנב באמצעות glucometer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>קביעת מינון STZ לשלושה תרחישים שונים:<ol>
<li>עבור עכברים עם מחלת כבד שומני להזריק מנה אחת של STZ [40 מ"ג / קילוגרם / יום, הזרקה תוך אפריטונית (i.p.) במשך 5 ימים רצופים.</li>
		<li>עבור עכברי NOD-SCID להזריק 125 מ"ג/ק"ג של STZ, זריקה אחת, i.p. לאחר צום לילה.</li>
		<li>עבור C57BL / 6 עכברים להזריק 225 מ"ג / קילוגרם של STZ, זריקה אחת, כלומר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>חישובים עבור STZ (13.5 מ"ג / מ"ל): הערה: חישוב זה מיועד לחמישה עכברי C57BL/6 עם משקולות גוף של 30 גרם:<ol>
<li>סה"כ משקולות גוף: 5 עכברים x 30 גרם / עכבר = 150g</li>
		<li>STZ דרוש: 150 גרם x 225 מ"ג / 1000 גרם STZ = 33.75 מ"ג</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת STZ:<ol>
<li>לשקול את STZ בעקבות המינון מחושב מראש.</li>
		<li>מעבירים את אבקת ה-STZ השקולה לכוס של 10 מ"ל על הקרח.</li>
		<li>הוסף 3 מ"ל של פתרון נתרן ציטראט לכוס כדי להמיס את STZ.</li>
		<li>מערבבים היטב, מסננים עיקור דרך נקבובית של 0.22 מיקרומטר, ומשתמשים בתמיסת STZ תוך 10 דקות מההכנה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הזרקת STZ:<ol>
<li>טען את הכמות הרצויה של פתרון STZ (מספיק לעכבר אחד) למזרק 1 מ"ל.</li>
		<li>בצע הזרקה תוך-פריטונית ברביע הימני התחתון של בטן העכבר.</li>
		<li>שים לב לעכברים במשך 5 דקות לאחר ההזרקה ולבדוק אם יש סימנים של אי נוחות במהלך תקופה זו של זמן לפני לשים אותם בחזרה לכלובים.</li>
		<li>ניטור רמת הגלוקוז בדם מדגימת דם וריד הזנב באמצעות glucometer מדי יום לאחר הזרקת STZ. הערה: בניסוי זה, עכברים נחשבים לחולי סוכרת כאשר גלוקוז בדם שאינו בצום הוא > 350 מ"ג / ד"ל במשך יומיים רצופים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. הכנת איון
הערה: איים אנושיים היו מתורבתים במדיה CMRL-1066 בתוספת סרום בקר עוברי 10% (FBS), ו 1% פניצילין / סטרפטומיצין (P / S) בצפיפות של 10,000 מספר שווה ערך איון (IEQ) לכל צלחת תרבית תא 100 מ"מ99. איי העכבר היו מתורבתים ב- DMEM עם 10% FBS ו- 1% P / S עם אותה צפיפות13. זכר NOD-SCID ו C57BL / 7 עכברים בין 6-10 שבועות של גיל הושגו ממקורות מסחריים.
<ol><li>נתק איונים מתורבתים ממנת תרבית התא על ידי גירוד עדין.</li>
	<li>איסוף ידני של מספרים רצויים של איים (למשל, 300-350 איים) באמצעות מזרק 1cc ולשים אותם לתוך צינורות microcentrifuge סטריליים 1.5 מ"ל על קרח.</li>
	<li>לסובב את הצינור במשך 10 שניות באמצעות microcentrifuge.</li>
	<li>הסר את supernatant, משאיר קצת נוזל כדי למנוע לאבד את הכדור.</li>
	<li>Resuspend את הכדור ב 200 μL של HBSS עם 0.5% אלבומין סרום בקר (BSA).</li>
	<li>שאפו את האיים המחודשים למזרק אינסולין של 0.5 מ"ל.</li>
	<li>מניחים את המזרק בתנוחה זקופה. תן לאיים לשקוע למשך דקה אחת.</li>
	<li>לדחוף את המזרק כדי להסיר את כל הבועות, משאיר על 100-150 μL של נוזל המכיל איים.</li>
	<li>מניחים את ראש המזרק למטה ומקישים בעדינות על צד המזרק כדי לאפשר לאיים להפיץ באופן שווה את כל הנוזל. האיים מוכנים כעת להזרקה.</li>
</ol>3. השתלת איון
<ol><li>לגרום ולשמור על העכבר תחת הרדמה כללית עם 2% איזופלוריין. בדוק את חוסר רפלקסים דוושה כדי להבטיח הרדמה נכונה של החיה.</li>
	<li>גילוח והסר את הפרווה באזור הבטן של העכבר.</li>
	<li>לנהל מנה טרום ניתוחית אחת של Buprenorphine (0.1 מ"ג / קילוגרם i.p.p.).</li>
	<li>לחטא את האזור הניתוחי עם שלושה מגבונים לסירוגין של 2% יוד ו 75% אלכוהול.</li>
	<li>בצע לפרוסטומיה עם מספריים מיקרו כדי ליצור חתך 1-1.5 ס"מ.</li>
	<li>פתח את חלל הצפק עם מפסק. עקוב אחר שיטה A או שיטה ב' כמפורט להלן.</li>
</ol>4. שיטה A: (להפסיק לדמם עם קצף ג'ל, איור 1A)14,15,16
<ol><li>הכנת עכבר<ol>
<li>מניחים גזה סטרילית סביב החתך.</li>
		<li>בעדינות לשלוף את המעי באמצעות מלקחיים ולשמור אותו על הגזה.</li>
		<li>זהה את וריד הפורטל לפי מיקומו וחשוף אותו היטב.</li>
		<li>לכסות את המעי עם גזה רטובה מלוחה חמה במהלך כל הניתוח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנס את מחט מזרק האינסולין שנטענה מראש דרך וריד הפורטל ליד התריסריון (איור 1B). לשם כך, החזק את המחט עם החור (משופע) פונה כלפי מטה ומקם את זווית משטח הפתיחה במקביל לקיר וריד הפורטל לפני חדירה דרך הקיר.<ol>
<li>משוך את הבוכנה כדי לצייר קצת דם (20-50 μL) לתוך המזרק כדי לערבב את האיים הראשון.</li>
		<li>החדירו את האיים לווריד השער באיטיות תוך משיכה חוזרת ודחיפת הצלילה.</li>
		<li>מניחים חתיכת קצף ג'ל (כ 0.5 ס"מ x 0.5 ס"מ בגודל) כדי לכסות את אתר ההזרקה.</li>
		<li>לחץ על קצף הג'ל כלפי מטה עם קצה כותנה תוך כדי משיכת המחט מווריד הפורטל.</li>
		<li>ממשיכים ללחוץ על הג'ל במשך כ -2 דקות כדי לאשר שאין דימום פעיל.</li>
		<li>מגלגלים את קצה הכותנה מעל ומחוץ לקצף הג'ל כדי לוודא שקצף הג'ל מכסה היטב את וריד הפורטל.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. שיטה ב': (להפסיק לדמם עם כרית שומן, איור 1C)17
<ol><li>לחשוף את וריד הפורטל ביסודיות.<ol>
<li>השתמש בשני קצות כותנה כדי להחזיק את וריד הפורטל החשוף משני הצדדים השמאליים והימניים.</li>
		<li>זהה את כרית רקמת השומן בין התריסריון לווריד הפורטל.</li>
		<li>יש לחדור דרך כרית השומן לפני החדרת המחט לווריד הפורטל (איור 1D).</li>
		<li>להחדיר את האיים, בעקבות ההליך הדומה שתואר לעיל בחלקים 4.2.1 ו 4.2.2 של שיטה A.</li>
		<li>מוציאים את המחט תוך כדי לחיצה על השומן עם קצה כותנה.</li>
		<li>ממשיכים ללחוץ על כרית השומן במשך 1 דקות לאחר הסרת המחט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר אישור כי אין דימום מווריד הפורטל, להחזיר בעדינות את המעי לחלל הצפק במיקומו המקורי.</li>
	<li>יש להשאיר 0.5 מ"ל של תמיסת מלח חמה (36-37 מעלות צלזיוס) בחלל הבטן לפני הסגירה. הערה: תמיסת מלח חמה מקלה על תנועת המעי לאחר הניתוח והתאוששות ומונעת נמק המעי.</li>
	<li>סגור את שכבת השריר עם תפר 5-0.</li>
	<li>סגור את שכבת העור עם תפר 4-0.</li>
	<li>מניחים את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום עד התאושש לחלוטין מהרדמה.</li>
	<li>המשך לספק משכך כאבים (למשל, buprenorphine 0.1 מ"ג / קילוגרם i.p.) כל 12 שעות וחום משלים עבור 48 שעות לאחר הניתוח. הערה: הליך ההשתלה באי לוקח בערך 15-20 דקות כדי להשלים.</li>
</ol>6. כתמי H&E וצילום של חלק כבד שלם
<ol><li>זלוף כבד<ol>
<li>שים את העכבר תחת הרדמה כמתואר לעיל בחלק 3.1.</li>
		<li>בזהירות לחשוף את וריד הפורטל ולחתוך את הווריד התחתון.</li>
		<li>באופן ידני perfuse הכבד באמצעות 20 מ"ל של 10% paraformaldehyde דרך וריד הפורטל במשך כ 5 דקות, באמצעות מזרק 20 מ"ל עם מחט 25G18. הערה: זלוף הכבד יכול להסיר דם מרקמת הכבד ולשפר את קיבוע הכבד מבלי להפריע להשתלות האי.</li>
		<li>לנתח את הכבד כולו perfused מאיברים אחרים.</li>
		<li>תקן את רקמת הכבד המופקרת ב 10% paraformaldehyde במשך 24 שעות.</li>
		<li>הטמע את הרקמה בפרפין.</li>
		<li>חותכים מקטעי רקמות בעובי 5 מיקרומטר כל אחד ומניחים אותם על מגלשת זכוכית להכתמה.</li>
		<li>בצע הכתמת H&E, אינסולין, פיברין ופולימורפונוקלאר נויטרופיל (PMN) בשיטות סטנדרטיות15,16.</li>
		<li>סרוק את כל החלק של הכבד תחת מיקרוסקופ.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+state+of+the+art+of+islet+transplantation+and+cell+therapy+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Diabetology%22%5BJournal%5D)">The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes.</a> Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).</li>
<li>Ballinger, W. F., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+intact+pancreatic+islets+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of intact pancreatic islets in rats.</a> Surgery. 72 (2), 175-186 (1972).</li>
<li>Wright, J. R., Hauptfeld, V., Lacy, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Ia+antigen+expression+on+murine+islet+parenchymal+cells+does+not+diminish+islet+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Induction of Ia antigen expression on murine islet parenchymal cells does not diminish islet allograft survival.</a> American Journal of Pathology. 134 (2), 237-242 (1989).</li>
<li>Toyofuku, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+T-cells+participate+in+rejection+of+islet+allografts+in+the+liver+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Natural killer T-cells participate in rejection of islet allografts in the liver of mice.</a> Diabetes. 55 (1), 34-39 (2006).</li>
<li>Goss, J. A., Nakafusa, Y., Finke, E. H., Flye, M. W., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+islet+xenografts+in+a+concordant+rat-to-mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to islet xenografts in a concordant rat-to-mouse model.</a> Diabetes. 43 (1), 16-23 (1994).</li>
<li>Hara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+studying+intrahepatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A mouse model for studying intrahepatic islet transplantation.</a> Transplantation. 78 (4), 615-618 (2004).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-1+antitrypsin+enhances+islet+engraftment+by+suppression+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Alpha-1 antitrypsin enhances islet engraftment by suppression of instant blood-mediated inflammatory reaction.</a> Diabetes. 66 (4), 970-980 (2017).</li>
<li>Gou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-1+antitrypsin+suppresses+macrophage+activation+and+promotes+islet+graft+survival+after+intrahepatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Alpha-1 antitrypsin suppresses macrophage activation and promotes islet graft survival after intrahepatic islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. , (2020).</li>
<li>Contreras, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+preserves+functional+islet+mass+after+intraportal+transplantation%3A+A+novel+link+between+endothelial+cell+activation%2C+thrombosis%2C+inflammation%2C+and+islet+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: A novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death.</a> Diabetes. 53 (11), 2804-2814 (2004).</li>
<li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> Lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li>
<li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrahepatic+islet+transplant+in+the+mouse%3A+functional+and+morphological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Intrahepatic islet transplant in the mouse: functional and morphological characterization.</a> Cell Transplantation. 17 (12), 1361-1370 (2008).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+treatment+with+carbon+monoxide+can+yield+islet+allograft+survival+and+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Donor treatment with carbon monoxide can yield islet allograft survival and tolerance.</a> Diabetes. 54 (5), 1400-1406 (2005).</li>
<li>Desai, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+liver+histopathology+on+islet+cell+engraftment+in+the+model+mimicking+autologous+islet+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Effect of liver histopathology on islet cell engraftment in the model mimicking autologous islet cell transplantation.</a> Islets. 9 (6), 140-149 (2017).</li>
<li>Cui, W., Angsana, J., Wen, J., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+formulations+of+thrombomodulin+increase+engraftment+after+intraportal+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Liposomal formulations of thrombomodulin increase engraftment after intraportal islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 19 (11), 1359-1367 (2010).</li>
<li>Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombomodulin+improves+early+outcomes+after+intraportal+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Thrombomodulin improves early outcomes after intraportal islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 9 (6), 1308-1316 (2009).</li>
<li>Proto, C., Grasso, G., Fassio, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatoparenchymal+clearance+of+indocyanine+green+in+infectious+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Giornale+di+Malattie+Infettive+e+Parassitarie%22%5BJournal%5D)">Hepatoparenchymal clearance of indocyanine green in infectious hepatitis.</a> Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. 20 (9), 845-851 (1968).</li>
<li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+hepatocytes+and+sinusoidal+endothelial+cells+from+mouse+liver+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Purification of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells from mouse liver perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56993(2018).</li>
<li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraportal+transplantation+of+pancreatic+islets+in+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559(2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+mesenchymal+stem+cell+and+islet+cotransplantation%3A+Safety+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Autologous mesenchymal stem cell and islet cotransplantation: Safety and efficacy.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (1), 11-19 (2018).</li>
</ol>

כל המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד אינטרסים.

במחקר זה הוכחו שני הליכים משופרים שיכולים למנוע דימום ועשויים להפחית את תמותת העכבר במהלך IIT של העכבר. מחקר זה מאפשר לחוקרים לדמיין את מודל השתלת האיים הייחודי בחקר התגובה הדלקתית המתווכת בדם מיידי לאחר ההשתלה. מודל IIT הוא מודל ייחודי לחקר הישרדות תאי איון ופגיעות איסכמיות בכבד בתגובה להשתלת איון19. כאן, חידדנו את ההליך בהתבסס על מחקרים קודמים והפחתנו את התמותה המוקדמת של עכבר שנגרם מסיבוכים. שתי השיטה A14,15,16<sup class="xre...

השתלת איים תוך-ספורטיביים (IIT) דרך וריד הפורטל היא השיטה הנפוצה ביותר להשתלת איון אנושית בהגדרות קליניות. מודל IIT העכבר מציע הזדמנות נהדרת ללמוד השתלת איון ולבדוק גישות התערבות מבטיחות שיכולות לשפר את היעילות של השתלת איון1. IIT תואר לראשונה בשנות השבעים ושימש מספר קבוצות 1,2,3,4,5. זה חזר לפופולריות לאחר פריצת הדרך בהשתלת האי האנושי בשנת 20006,7. עם זאת, רוב מחקרי השתלת האיון השתמשו בקפסולת הכליה כאתר מועדף להשתלת אי ניסיוני בשל הצלחתו הקלה. להיפך, IIT מאתגר יותר מבחינה טכנית ומשמש פחות למחקרי השתלת איון8,9. שלא כמו IIT, עם זאת, איונים המושתלים תחת כמוסת הכליה אינם סובלים מהתגובה הדלקתית המתווכת בדם המיידית המאופיינת בפקקת, דלקת ואיסכמיה של רקמת הכבד, ולכן יש להם תפקוד טוב יותר מאשר איים המושתלים בכבד. מודל קפסולה הכליה, אם כן, לא יכול לחקות באופן מלא את הלחצים נתקלים על ידי איים בהשתלת אי האדם10,11,12.
אחד הסיבוכים העיקריים של IIT בעכברים הוא דימום מאתר ההזרקה לאחר ההשתלה, אשר יכול לגרום 10-30% של תמותה בקרב זני עכבר שונים12. במאמר זה פותחו שתי גישות מעודנות כדי לעצור את הדימום במהירות ובבטחה רבה יותר וכדי להפחית את תמותת העכברים לאחר IIT. הדגמה חזותית של פרטים מעודנים אלה תסייע לחוקרים לזהות את הצעדים העיקריים של הליך מאתגר מבחינה טכנית זה. בנוסף, המיקום של שתלי האי בכבד של המטופל נקבע על ידי בדיקה היסטולוגית של המטוקסילין ואאוזין (H&E) רקמת כבד מוכתמת (סעיף שלם) הנושאת איים מושתלים.

<table><tbody><tr><td>10% פורמלין ניטרלי חוצץ v/v</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל עם מחט</td><td></td><td>AHS AH01T</td><td></td></tr><tr><td>20 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>301031</td><td></td></tr><tr><td>25G x 5/8 אינץ' מחטים היפודרמיות</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול, סטרילי</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>הרדמה לבעלי חיים מערכת</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>בופרנורפין הידרוכלוריד, הזרקת</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה, 15 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>CMRL-1066</td><td>קורנינג</td><td>15110CV</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>קורנינג</td><td>10013CV</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, מוחלט (200 הוכחה), כיתה ביולוגיה מולקולרית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td></td><td></td>BP2818500</tr><tr><td>מספריים מיקרו ניתוח עדינים במיוחד 4 "ישר חד</td><td>Roboz מכשיר כירורגי ושות'.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>קורנינג</td><td>35011CV</td><td></td></tr><tr><td>FreeStyle&nbsp; מד סוכר</td><td>Abbott</td><td>Lite</td><td></td></tr><tr><td>FreeStyle רצועות בדיקת גלוקוז בדם</td><td>Abbott</td><td>Lite</td><td></td></tr><tr><td>Gelfoam (ספוג ג'לטין נספג, USP)</td><td>Pharmacia & Upjohn Company</td><td>34201</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים Graefe 4 אינץ' קצה עדין במיוחד</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>כרית מחוממת</td><td>אמזון</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Hegar-Baumgartner 5.25 אינץ'</td><td>רובוז מכשירים כירורגיים ושות '</td><td>מזרק אינסולין RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>עם מחט 27 מד</td><td>BD</td><td>879588</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה ליוד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>פיראמל טיפול קריטי</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין (P/S)</td> <td>HyClone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>תפר פוליפרופילן 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>תפר פוליפרופילן 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי, 0.9% תמיסה תוך ורידית</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>סטרפטוזוצין (STZ)</td><td>Sigma</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>וילון כירורגי, סטרילי</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>קלטת רקמות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-272416</td><td></td></tr></tbody></table>

מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

למרות שהכבד מתקבל כיום כאתר ההשתלה העיקרי עבור איים אנושיים בהגדרות קליניות, איים מושתלים תחת קפסולת הכליה ברוב מחקרי השתלת האי הפרה-קליני מכרסמים. מודל זה נפוץ כי השתלת אי תוך-הפסטי מורין היא מאתגרת מבחינה טכנית, ואחוז גבוה של עכברים יכול למות מסיבוכים כירורגיים, במיוחד דימום מאתר ההזרקה לאחר ההשתלה. במחקר זה, שני נהלים שיכולים למזער את השכיחות של דימום וריד פורטל לאחר עירוי מוצגים. השיטה הראשונה מיישמת ספוג ג'לטין hemostatic נספג לאתר ההזרקה, והשיטה השנייה כוללת חדירה מחט הזרקת האי דרך רקמת השומן תחילה ולאחר מכן לתוך וריד הפורטל באמצעות רקמת השומן כמחסום פיזי כדי לעצור את הדימום. שתי השיטות יכולות למנוע ביעילות מוות של עכברים כתוצאה מדימום. כל החלק הכבד מראה הפצת איון וראיות של פקקת איון לאחר ההשתלה, תכונה אופיינית להשתלת איים תוך-הפגפיים, הוצגו. פרוטוקולים משופרים אלה לחדד את הליכי השתלת האי התוך-הפגטי ועשויים לסייע למעבדות להקים את ההליך לחקר ההישרדות והתפקוד של האיים בהגדרות פרה-קליניות.

ביצענו השתלות איים סינגניים וקסנוגניים דרך וריד הפורטל. פונקציית השתלת האיון נצפתה באופן תלוי במינון בשני המודלים להשתלת איון. במודל השתלת האי הסינגניים באמצעות עכברי C57BL/6, השתלה של 250 איים הובילה לנורמוגליקמיה חולפת לפני שהעכברים חזרו להיפרגליקמיה. עכברים שקיבלו 500 איים הגיעו והחזיקו נורמוגליקמיה מעבר ל-30 יום לאחר ההשתלה (איור 2A). עכברים בשתי הקבוצות הראו משקל גוף מוגבר (איור 2B).
באופן דומה, באיים האנושיים למודל השתלת עכבר NO...

כאן אנו מציגים הליכים כירורגיים מעודנים על ביצוע מוצלח של השתלת איים תוך-ספורטיביים, הליך כירורגי רלוונטי מבחינה קלינית אך מאתגר מבחינה טכנית, בעכברים.

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

כבד הוא אתר עיקרי להשתלה בסביבה הקלינית של האי האנושי. השתלת איים תוך-הפטנטיים של העכבר היא מאתגרת מבחינה טכנית, ואחוז גבוה של עכברים עלול למות מסיבוכים כירורגיים, במיוחד דימום. במחקר זה, שתי השיטות שהראנו שתיהן יכולות למנוע ביעילות מוות של עכברים כתוצאה מדימום.השיטה שלנו יכולה להיות מיושמת למחקר בסרטן הכבד ומחלות כבד אחרות על ידי מתן אפשרות הזרקה של תאים סרטניים, תאי גזע mesenchymal, hepatocyte ישירות לכבד. בתור התחלה, לנתק תרבות אי אנושית עם שריטות עדינות. השתמש מזרק 1 ס"מ מעוקב לקטוף 300 עד 350 איים לתוך צינורות מיקרו-צנטריפוגה סטריליים 1.5 מיליליטר על קרח.כאשר כל האיים כבר הרים, צנטריפוגות הצינורות במשך 10 שניות כדי לשקם את התאים. להשליך את כל אבל נפח קטן של supernatant כדי למנוע אובדן גלולה ו resuspend האיים ב 200 microliters HBSS המכיל 5%BSA. טען את האיים resuspended לתוך מזרק אינסולין 5 מיליליטר ולהפוך את מחט מזרק בסופו של דבר במשך 1 דקה כדי לתת את האיים להתיישב על הבוכנה.לדכא את הבוכנה כדי להסיר את כל הבועות, שמירה על כ 100 עד 150 מיקרוליטרים של פתרון במזרק ולהפוך את המזרק עם הקשה עדינה כדי להפיץ באופן שווה את האיים. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס דוושה, להחיל משחה על העיניים כדי למנוע ייבוש. לגלח את הבטן של העכבר מרדים כדי להסיר את הפרווה ולחטא את האזור הניתוחי עם שלושה מגבונים לסירוגין של 2% יוד ו 75% אלכוהול.לאחר מכן, לעשות חתך 1 עד 1.5 ס"מ בבטן ולפתוח את חלל הצפק. מניחים חתיכת גזה סטרילית סביב החתך ולהשתמש מלקחיים או קצות כותנה כדי להעביר בעדינות את המעי על הגזה. לאחר מכן לכסות את המעי עם חתיכת גזה ספוגה מלוחים ולחשוף את וריד הפורטל.כדי לעצור דימום המושרה בהעברת האי באמצעות קצף ג'ל, החזק את המחט עם השיפוע הפונה כלפי מטה ומקם את קצה המחט עם פתח מקביל לקיר וריד הפורטל לפני החדרת המחט לווריד הפורטל. הסר את הבוכנה כדי למשוך 20 עד 50 מיקרוליטרים של דם לתוך המזרק כדי לערבב עם האיים לפני החדרת האיים לתוך וריד הפורטל תוך כדי דיכאון חוזר ונשנה ונסיגה הבוכנה. כאשר כל האיים נמסרו, מניחים כ 5 על 5 ס"מ של קצף ג'ל מעל אתר ההזרקה.השתמש בקצה כותנה כדי ללחוץ על קצף הג'ל למטה בעת הסרת המחט מווריד הפורטל. החזק את הג'ל במקום במשך כ 2 דקות, מגלגל את קצף הג'ל כדי לוודא שהוא מכסה את וריד הפורטל. לאחר הדימום נעצר, בעדינות להחזיר את המעי לחלל הצפק בתנוחה המקורית ולהזריק 500 מיקרוליטרים של מלוחים חמים לתוך חלל הבטן.השתמשו בתפרים כדי לסגור את שכבות השרירים והעור. לאחר מכן מניחים את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום עם ניטור עד התאוששות מלאה מהרדמה, מתן משככי כאבים כל 12 שעות וחום במשך 48 שעות. כדי לעצור דימום המושרה בהעברת האי באמצעות כרית שומן, לאחר חשיפת וריד הפורטל כפי שהודגם, השתמש בשני קצות כותנה כדי להחזיק את הווריד החשוף בצד שמאל ובצד ימין ולאתר את כרית רקמת השומן בין התריסריון לווריד הפורטל.לחדור את כרית השומן עם קצה המחט לפני הכניסה לתוך וריד הפורטל. החדירו את האיים לווריד השער כפי שהוכח. כאשר כל האיים נמסרו, לחץ על רקמת השומן עם קצה כותנה במשך כ 1 דקה תוך הסרת המחט מן הווריד.לאחר מכן להחזיר את המעי לחלל הבטן ולבצע את שאר ההליכים טיפול posturgical כפי שהוכח. ההשפעות של השתלת האיון תלויות במינון, כמו גליקמיה נורמלית הוא ציין 30 ימים לאחר השתלת האי הסינגנית כאשר 500 איים מועברים, אבל רק נורמוגליקמיה חולפת הוא ציין כאשר 250 איים מועברים, עם העכברים חוזרים היפרגליקמיה על ידי 10 ימים לאחר ההשתלה. משקל גוף מוגבר נצפתה בשתי הקבוצות ותגובות זהות שנצפו כאשר איים אנושיים מושתלים בעכברים NOD-SCID סוכרתיים, עם נורמוגליקמיה נצפתה כאשר מספר גבוה יותר של שווה ערך לאי מושתלים אך לא מספרים קטנים יותר.רוב העכברים שיש להם דימום לאחר ההעברה למות לאחר הניתוח, בעוד העכברים ללא דימום לשרוד. ב 28 ימים לאחר ההשתלה, כתמי אינסולין חושפים התפלגות אחידה של האי האנושי בכל הכבד, בעיקר קרוב לכלי הדם. בנוסף לאינסולין, פיברין וסינון תאים פולימורפונוקלארי נצפים גם בתוך האיים האנושיים המושתלים.השתלת איים תוך-הפטיים תיצור חור גדול בווריד הפורטל שעלול לגרום לדימום. שימוש בשני ההליכים המשופרים שלנו יכול למנוע דימום ולהפחית את התמותה לאחר השתלת איון. מודל השתלת האי הפנימי יכול לחקות השתלת איון אנושי קלינית.ההליכים המעודנים שלנו יכולים להוביל לשיעורי הישרדות גבוהים יותר עבור נמענים, המאפשרים מחקר נוסף של תפקוד האי לאחר ההשתלה.

minimizing-post-infusion-portal-vein-bleeding-during-intrahepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מתאר הליך כירורגי להעברת תאי גידול בחלב לכבד המורין באמצעות הזרקת ורידים פורטליים. מודל זה מאפשר לחקור שלבים מאוחרים של גרורות בכבד.

הזרקת ורידים פורטליים: שיטה לחקר גרורות סרטניות לכבד

בסרטון זה, אנו מתארים הליך להחדיר תאי איון הלבלב לתוך וריד פורטל הכבד, ואחריו יישום של קצף ג'ל כדי למנוע בהצלחה דימום. דימום לאחר ניתוח הוא גורם שכיח לתמותה גבוהה במהלך השתלת איון.

מודל מורין להשתלת איילט: שיטה כירורגית להחדיר איי לבלב בווריד הפורטל ומניעת דימום לאחר הניתוח

כלים המשמשים להמחשת התחדשות כלי הדם דורשים שיטות לניגוד עצי כלי הדם. סרט זה הדגים טכניקת הזרקה עדינה המשמשת להשגת ניגודיות אופטימלית של עצי כלי הדם וממחיש את היתרונות הפוטנציאליים הנובעים מניתוח מפורט של הדגימה המתקבלת באמצעות μCT וחתכים סדרתיים היסטולוגיים.

ויזואליזציה של התחדשות כלי דם Parenchymal לאחר 70% חלקיות כריתה בעכברים נורמליים

פרוטוקול זה מדגים בידוד איים Murine וזרע על פיגום decellularized. איים נתמך פיגומים הושתלו לתוך כרית שומן האפידידימלי של streptozotocin (STZ), המושרה עכברים סוכרתית. איים שרדו באתר ההשתלות והפכו את מצב ההיפרגליקמיה.

פיגום נתמך השתלת איים בשומן השומן האפידידימלי של עכברים סוכרתית

שיטה השתלת עם פגיעה של איים ב עכבר הוא הציג. איים מבודדים מעורבבים עם הידרוג, התערובת ימוקם לתיק עם פגיעה של עכבר סוכרתית. לאחר מכן, הסוכר מנוטר, מבוצע ניתוח חיסונית-פתולוגיה.

שיטת השתלת איון כדי Omentum העכבר

השתלת הלבלב איון היא דרך להשיג normoglycemia על סוכרת מסוג 1. מאמר זה מתמקד בטכניקה השתלת מהנתיב intraportal כדי לשמור על רמות גלוקוז נורמלי בעכברים סוכרתיים.

השתלת intraportal של לנגרהנס במודל עכבר

בפרוטוקול זה, שיטה של מורטין איון בידוד והשתלת לתוך רקמת השומן הלבן התת עורית מתוארת. האיים המבודדים של מורנה ממורג מושתלים לתוך המטופל מורין באמצעות קרום מרתף הידרוג'ל. רמת הגלוקוז בדם של המטופלים מנוטרים, ו ניתוח היסטולוגיה של שתלי איון מבוצע.

השתלת מודל שומן לבן תת-עורית (ISWAT) מדגם ההשתלה של איויין מורנה

מטרת הפרוטוקול היא לעקוב באופן רציף אחר הדינמיקה של תהליך הלבלב האנושי ועל הפונדקאי התורם לעומת תאי התורם. זה מושגת על ידי השתלת איונים אנושיים לתוך התא הקדמי של העין (ACE) של NOD. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-נמען העכבר ואחריו הדמיה חוזרת של 2 פוטין.

אורכי בהדמיית Vivo וכמת של השתלת אי הלבלב האנושי ותורם תאים מארחים בתא העין הקדמית

הפרוטוקול מתאר שיטה פשוטה לכריתת כבד עכבר שלם למחקרים מטבוליים באמצעות זלוף ורידים פורטלי.

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

פינוי אינסולין בכבד הוא קריטי לוויסות הומאוסטזיס של גלוקוז. מאמר זה מתאר הליך זלוף כבד ידידותי למשתמש להערכה ישירה של קצב פינוי האינסולין בכבד באתרו בעכברים.

הערכת פינוי אינסולין בעכברים באמצעות זלוף כבד באתרו

כאן, אנו מספקים פרטים על ביצוע הפרשת אינסולין מגורה גלוקוז (GSIS) באמצעות זלוף דרך כלי הדם של העכברים עם לבלב שלם כטכניקה נוספת להערכת תפקוד הלבלב האנדוקריני עם הפחתת מבלבלים אפשריים.

הפרשת אינסולין מגורה על ידי גלוקוז באמצעות זלוף דרך כלי הדם של העכברים עם לבלב שלם

למדו שיטות ניתוח משופצות להשתלת איים תוך-הפטית בעכברים. שתי הטכניקות מונעות דימום וריד פורטל ומפחיתות תמותה ניתוחית, ומאפשרות מחקר מתקדם במחלות כבד וסרטן כבד.

מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים

גלה סרטונים נוספים