מערכת הדמיה מתכווננת בחדות גבוהה למחקרים התנהגותיים של מבוגרים Drosophila

בשל גודלו המביך, קשה לדמיין את דרוזופילה. שיטה זו מדגימה הדמיה של ההתנהגות והמורפולוגיה של זבובים באמצעות מיקרוסקופ סטריאו. פרוטוקול זה יכול לשמש הן למחקר מדעי והן להוראה.

הדגמת ההליך תהיה Ms.Li טונג וגברת וונג יוג'יה, בוגרי תואר ראשון שעושים הכשרה מחקרית בהנחייתי. כדי להתחיל, להפוך תא תצפית התנהגות זבוב, או FBOC, באמצעות פקק בקבוק פלסטיק שקוף של כ 17 על 22 מילימטרים או על ידי חיתוך קטע של 17 מילימטרים מן הקצה העבה של קצה פיפטה חמישה מיליליטר. יוצקים 1%אגר לתוך FBOC כדי להתאים את העומק שלו.

אם מזון צריך להיות ממוקם FBOC, לשפוך את אגר כדי לקבל עומק של 12 מילימטרים. אם מזון לא צריך להיות ממוקם FBOC, לשפוך את אגר לעומק של חמישה מילימטרים כדי לעקוב אחר מקום הימצאם של זבובי פירות בקלות רבה יותר. אם משתמשים בקצה פיפטה להכנת FBOC, מניחים את קטע הטיפים של פיפטה בצלחת פטרי 35 או 60 מ"מ.

יוצקים את הג'ל 1%אגר לתוך צלחת פטרי לעובי של כחמישה מילימטר ולחכות אגר להתמצק ולאטום את החלק התחתון של FBOC. לאחר מכן יוצקים את ג'ל אגר לתוך FBOC לעובי הרצוי. הפוך בסיס FBOC על ידי משעמם חור עמוק 10 מ"מ במרכז של חתיכת גיליון קצף אתילאמין עם אותו קוטר כמו FBOC.

הכנס את FBOC לתוך החור. הפוך מזון זבוב במידת הצורך עם שמרים בינוני, דיאטה מלאכותית, או סוכרוז טהור או גלוקוז, בהתאם למטרת התצפית. כדי לקבוע חזותית אם זבובים ניזונים, להוסיף צבעי מזון למזון לריכוז סופי של 12.5 מיליגרם לכל 100 מיליליטר.

יוצקים את האוכל המוכן לצלחת פטרי לגובה של שמונה מילימטרים. לאחר התגבשות, מניחים מזון על מלבני מצויר על נייר וחותכים את המזון בהתאם ומניחים אותו על פיסת פלסטיק וחותכים לפירמידה מרובעת או פירמידת פרוסטם מרובעת כדי לאפשר הקלטה של התנהגות זבוב מזוויות שונות כשהזבובים נוחתים על המזון. חותכים חתיכת פלסטיק ומשתמשים בפינצטה כדי למקם את הפלסטיק והמזון במרכז ה- FBOC.

יוצקים 1%ג'ל אגר לתוך בקבוק ריק ונקי לעובי של 1-2 ס"מ ומניחים אותו בטמפרטורת החדר במשך 1-2 שעות. מעבירים זבובים לבקבוק ומניחים אותו ב-25 מעלות צלזיוס למשך 36 שעות או יותר. מצננים ומנטרלים את הזבובים בקרח כתוש, למיין אותם על חבילת קרח ולהעביר אותם ל- FBOC כפי שתואר בעבר.

לאחר העברת הזבובים ל- FBOC, לכסות אותו עם 30-40 מילימטרים של UV או מסנן ברור עבור המצלמה כדי ליצור קומפלקס FBOC. מקם את קומפלקס FBOC מתחת למיקרוסקופ הסטריאו לתצפית. להאיר את FBOC.

הר מיני נורות וידאו LED כדי להבהב תציעי הרכבה חם ולהניח את האורות בצד שמאל וימין של FBOC. הפעל את האורות והגדר את טמפרטורת הצבע ל- 5, 000 עד 5, 600 קלווין ואת הבהירות ל- 100%הפעל את נורות הווידאו LED והתאם את מיקרוסקופ זום הסטריאו עד שניתן יהיה לראות בבירור את קצה ה- FBOC בעין בלתי. העבר את ה- FBOC למרכז שדה הראייה.

חבר את המלחציים של מתאם המצלמה הדיגיטלית של הטלסקופ האוניברסלי לעין של מיקרוסקופ הסטריאו. לאחר מכן חבר מצלמה דיגיטלית קומפקטית למתאם באופן מאובטח על-ידי סיבוב לסירוגין של בורג הרכבה של המצלמה ובורג תיקון המצלמה. הפעל את המצלמה הדיגיטלית וסובב את ידיות כוונון עדין אופקיות/אנכיות עד שקצה ה- FBOC יופיע בבירור במרכז שדה הראייה המעגלי הבהיר במסך ה- LCD של המצלמה.

סובב את חיוג המצב למצב אוטומטי בעדיפות צמצם. לחץ על מצב מיקוד בבורר הרב-בורר, בחר תקריב מאקרו ולאחר מכן לחץ על לחצן אישור. הזז את מתג הזום מקצה הזווית הרחבה לקצה הטלפוטו והגדל את גודל התצוגה לתמונה המעגלית עד שהחלק המרכזי שלו ימלא את מסך ה- LCD המלא.

לחץ על לחצן הקלטת הסרט והתחל להקליט את אופן הפעולה של הזבוב. סובב את ידית המיקוד של המיקרוסקופ עד שהזבובים ב- FBOC גלויים בבירור. בחר את התנהגות הזבוב של עניין עבור התבוננות או הקלטת וידאו.

סובב את ידית הזום כדי להגדיל ולהקטין כדי להשיג את ההגדלה הרצויה לתצפית או הקלטת וידאו. התמונה הייצוגית שצולמה דרך מסנן UV ברורה וחדה, דומה מאוד לתמונה שצולמה כאשר מקטורינת התרבות אינה מכוסה. איכות התמונה שצולמה דרך צלחת הפטרי ירודה מאוד ומטושטשת חלקית.

תמונה שצולמה מהקלטת הווידאו המציגה את פרטי כל חלק בגופו של הזבוב מוצגת כאן. מכיוון שהמצלמה מחוברת למיקרוסקופ סטריאו זום, קל מאוד לצלם מתצלומי תקריב פנורמיים באמצעות מערכת הזום. באמצעות פרוטוקול זה, ניתן לצפות בהתנהגות הזבוב ולתעד עבור זוויות צפייה מרובות.

לדוגמה, הזבוב הנשי משפשף כל הזמן את ovipositor עם רגליה האחוריות במהלך תהליך הטלת ביצים. פרט זה של התנהגות הטלת ביצים לא ניתן לראות בבירור מהצד. באמצעות שיטה פשוטה וחסכונית זו, אנו יכולים לקחת פנורמי או תקריב של ההתנהגות והמורפולוגיה של זבובים ולקבל וידאו באיכות טובה או תמונה.