Name: ניתוח ועיבוד מדגם להדמיה קורלטיבית של שסתום הריאות מורין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: למד פרוטוקול לניתוח מבני של שסתום הריאות מורין באמצעות הדמיה קורלטיבית של μCT ו-SBF-SEM. השיטה מאפשרת מיפוי מדויק של נתונים אולטרה-מבניים בהקשר אנטומי לחקר מחלות שסתומי לב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת, בין השאר, על ידי R01HL139796 ומענקי R01HL128847 ל- CKB ו- RO1DE028297 ו- CBET1608058 עבור DWM.

השימוש בבעלי חיים במחקר זה היה בהתאם לוועדת הטיפול בבעלי חיים של בית החולים לילדים בפריסה ארצית תחת פרוטוקול AR13-00030.
1. כריתת שסתום ריאות
<ol><li>תבודד אוטומטית את הכלים הדרושים עבור ניתוח העכבר. זה כולל מספריים עדינים, מלקחיים זעירים, מלחציים מיקרו וסקולריים, מלקחיים החלת מלחציים, מחזיקי מיקרונידל, מספריים קפיציים ומפסקים.</li>
	<li>התאקלם כל העכברים במשך מינימום של 2 שבועות לפני הניתוח. הסר C57BL/6 עכברים, בערך 1 שנה של גיל, מן הכלובים שלהם לשקול, ולאחר מכן להרדים עם קוקטייל קטמין / קסילאצין (3:1 קטמין:xylazine, 0.01 מ"ל לג גרם) מנת יתר.</li>
	<li>הנח את העכבר בתנוחת קליטת גדוש על מגש ואבטח את גפיו בקלטת. לאחר המאובטח, לבצע את בית החזה.<ol>
<li>לחשוף את הלב על ידי הסרת כל רקמת שומן עודף fascia.</li>
		<li>הסר את האטריום הימני ולפרף דרך החדר השמאלי עם תמיסת מלח בטמפרטורת החדר (0.9% NaCl). זלוף צריך לקחת כ 20 מ"ל מעל 30 s. התוצאה היא חימת העכבר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הסר את הלב כולו על ידי ניתוק הוועד הנבי מעולה, וונה קווה נחותה, עורק ריאות, ואבי העורקים. יש לנקוט בזהירות מיוחדת לעורק הריאות. חותכים כ 2 מ"מ מעל צומת פיתום עורקים, כמו זה ישמש צינור ללחץ.</li>
	<li>הסר את החדרים השמאליים והימנים כדי לחשוף תאים ללחץ אטמוספרי. ודא כי המבנה של גזע הריאות צריך להיות מושפע על ידי הסרת החדרים.</li>
</ol>2. קיבוע לחץ של שסתום ריאות
<ol><li>צינורות לחץ Anastomose עם עורק ריאות, משאירים מרחק של כ 1 מ"מ בין הצומת הסיני-צינורי לבין סוף הצינורות כדי להכיל תנועות גדולות של העלונים וגזע הריאות.</li>
	<li>העלו את המאגר ללחץ פיזיולוגי אנלוגי ומלאו אותו בתמיסת המלח. בדוק את מערכת הזרימה כדי לוודא שאין חסימות או בועות אוויר.</li>
	<li>חבר פקק שסתום ריאות anastomosed ולהבטיח זרימה נאותה דרך הצינורות (כלומר, אין בועות אוויר) על ידי החלפת דרכי היציאה. ברגע הזרימה מספקת, להעביר את התזרים שסתום ריאת anastomosed ולהבטיח לחץ של תא המטען ריאתי. זה מזוהה על ידי התנפצות תא המטען ריאתי.</li>
	<li>לאחר לחץ של גזע הריאות מאושר, לשלב בהדרגה פתרון קבוע ראשוני (1.25% גלוטרלדהיד, 1.0% paraformaldehyde ב 0.15 M cacodylate) עד תמיסת מלח מטוהר. זה נעשה על ידי הסרת חלק, כ -25% מקיבולת המאגר, של תמיסת מלח והחלפתו עם הקיבעון העיקרי. זהירות: יש לענוד את הקיבורים המשמשים (paraformaldehyde ו- glutaraldehyde) רעילים מאוד וציוד מגן אישי מתאים (PPE) כדי להבטיח את הבטיחות.</li>
	<li>מניחים גזה ספוגה הקיבעון על דגימת הרקמה כדי למנוע ייבוש.</li>
	<li>לנטרל את הקיבעון עבור 3 שעות, מילוי המאגר לפי הצורך כדי לשמור על לחץ מתמיד. לאורך כל הקיבעון, זה לא נדיר עבור שסתום הריאות להתכווץ בגלל הקיבעון הכימי. אם זה המקרה, כל הזמן לחדש את המאגר עם קיבעון ראשוני כדי לשמור על לחץ פיזיולוגי.</li>
	<li>לאחסן את שסתום הלב בפתרון הקיבויע ב 4 °C (5 °F) עד השימוש. דגימות אוחסנו עד שבוע ללא כל הבדל ניכר.</li>
</ol>3. כתמים והטבעה מדגם En גוש15,16
זהירות: ריאגנטים מכתימים המשמשים בסעיף זה (אשלגן ferrocyanide, אוסמיום tetroxide, thiocarbohydrazide, אספרטט עופרת, אורניל אצטט) הם רעילים מאוד ויש לטפל בהם בזהירות רבה. מומלץ להשתמש במכסה אדים ו- PPE מתאים.
<ol><li>כתמים<ol>
<li>לשטוף את דגימת שסתום הלב הקבוע במשך 5 דקות עם חיץ קקודילט 0.15 M קר. חזור על הכביסה פעמיים נוספות.</li>
		<li>לגמרי להטביע את שסתום הלב בתמיסה של 1.5% אשלגן ferrocyanide, 0.15 M קקודילאט, 2 mM סידן כלוריד, ו 2% osmium tetroxide, על קרח במשך 1 שעה.</li>
		<li>בזמן המדגם הוא דגירה, להכין פתרון thiocarbohydrazide (TCH) על ידי המסת 0.1 גרם של TCH ב 10 מ"ל של ddH2O. מניחים את הפתרון בתנור 60 °C ל 1 שעה. התעצבנו בעדינות מעת לעת כדי להבטיח ש-TCH יתמוסס לחלוטין. סנן את הפתרון באמצעות מסנן מזרק 0.22 מיקרומטר מיד לפני השימוש.</li>
		<li>לשטוף את הדגימות עם טמפרטורת החדר ddH2O על ידי הצבת אותם בצינור של ddH2O במשך 5 דקות מעט להתסיס אותו על ידי ניעור המיכל. חזור על תהליך זה שלוש פעמים.</li>
		<li>מניחים אותו בתמיסת TCH מסוננת למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. בצע את שלב הכביסה שלוש פעמים (5 דקות כל אחד) עם טמפרטורת החדר ddH2O כמתואר בשלב 3.1.4.</li>
		<li>לאחר סיום, מניחים את המדגם ב 2% osmium tetroxide במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. ואז לשטוף אותו שוב בסך הכל שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם טמפרטורת החדר ddH2O.</li>
		<li>לדגור את המדגם ב 1% אורניל אצטט לילה ב 4 °C (50 °F).</li>
		<li>במהלך תקופה זו, להפוך פתרון של 0.066 גרם של עופרת חנקתי ב 10 מ"ל של תמיסה ציר חומצה אספרטית. כוונן את ה- pH ל- 5.5 עם 1 N KOH. מניחים את התמיסה בתנור 60 מעלות צלזיוס כדי להמיס עופרת חנקתית.</li>
		<li>לאחר הדגירה הלילית, בצע את שלב הכביסה כמתואר בשלב 3.1.4. חזור שלוש פעמים. לאחר מכן, לדגור את רקמת שסתום הלב בתמיסת אספרטט עופרת בשלב 3.1.8 בתנור 60 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>התייבשות<ol>
<li>לשטוף את הרקמות במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר עם ddH2O. חזור שלוש פעמים.</li>
		<li>הכינו פתרונות חדשים של 20%, 50%, 70%, 90% ו-100% אתנול ב-ddH2O.</li>
		<li>כדי לייבש את רקמת שסתום הלב. בצע טיפולים הבאים של 20%, 50%, 70%, ו 90% אתנול על קרח במשך 5 דקות כל אחד. לאחר מכן בצע שני טיפולים הבאים של 100% אתנול על קרח במשך 5 דקות.</li>
		<li>מעבירים את הרקמה לאצטון קר כקרח למשך 10 דקות. לאחר מכן מניחים אצטון טרי בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הטבעה<ol>
<li>הפוך את תערובת שרף (ראה טבלה של חומרים) על פי מפרטי היצרן: 11.4 גרם של רכיב A, 10 גרם של רכיב B, 0.3 גרם של רכיב C, ו 0.05-0.1 גרם של רכיב D. בתחילה לערבב רכיבים A ו- B על ידי חימום כל אחד מהרכיבים ל 60 °C (70 °F) לפני הוספת רכיבים C ו- D. התערובת תהפוך לצבע ענבר עם הוספת רכיבים C ו- D. זה יהיה אחיד כאשר מעורבב כראוי.</li>
		<li>הפוך תערובות עם יחסי נפח של 25:75, 50:50, ו 75:25 שרף:אצטון. מערבבים היטב.</li>
		<li>מניחים רקמות בטיפולים הבאים של 25:75, 50:50, ו 75:25 שרף:תערובת אצטון במשך 2 שעות כל אחד בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>מניחים רקמות ב-100% שרף למשך הלילה בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>למחרת, מניחים רקמות ב-100% שרף טרי למשך 2 שעות בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>מעבירים את רקמות שסתום הלב לקפסולה משובצת, מחליפה שרף טרי של 100%, ומניחים בתנור של 60 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות לריפוי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בצע הדמיה מתאמת כפי שמוצג להלן.</li>
</ol>4. הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת
<ol><li>הר את בלוק דגימת השרף על מחזיק מדגם μCT עם דבק (דבק או סרט דו צדדי עובד טוב).</li>
	<li>מניחים את המחזיק בתא μCT ולתקן אותו על הבמה על ידי בורג הקולט כך שאין תנועה של המחזיק. תנועה לדוגמה במהלך הסריקה תקטין את איכות התמונה.</li>
	<li>פתח את ממשק המשתמש של μCT על-ידי לחיצה כפולה על הסמל. הוסף פרוייקט על-ידי בחירת הסימן + לצד פרוייקטים ומלא את השדות הדרושים.</li>
	<li>לאחר יצירתו, מצא את הפרוייקט שנוצר ובחר אותו על-ידי לחיצה עליו. פעולה זו תפתח עמודה שניה רכישות. בחר את + לצד רכישות ומלא את השדות הדרושים.</li>
	<li>סגור את דלתות התא ולחמש את המערכת על ידי לחיצה על כפתור החימוש בלוח הקדמי או μCT. חימום צילומי רנטגן מממשק המשתמש על ידי בחירת הכפתור המציין חימום. הערה: המערכת תכבה באופן אוטומטי את צילומי הרנטגן לאחר הליך חימום מוצלח. הפעל צילומי רנטגן על-ידי בחירת הלחצן.</li>
	<li>התאם את סיבוב הבמה כך שמרכז הסיבוב של המדגם לא סוטה ממרכז הצג (כלומר, המדגם נמצא בשדה הראייה עבור הסריקה כולה). עבור המערכת המשמשת לניסוי זה, הדבר כרוך בהתאמת שלב העניין (ROI) תחת הכרטיסיה הנפתחת כמפורט להלן.<ol>
<li>הגדר את התאמת שלב ההפרש על-ידי הגדרת זווית הסיבוב ל- 0° וסימון קצה המדגם. לאחר מכן המדגם מסובב ל- 180° וקצה המדגם מסומן שוב.</li>
		<li>התאם את מיקום ציר x שלב ROI כך שקצה המדגם יהיה בין שני הקצוות האלה. חזור על תהליך זה עבור זוויות סיבוב של 90° ו- 270° עבור מיקום ה- y.</li>
		<li>במקרה שבו סיבוב המדגם גורם לקצוות לצאת משדה הראייה, הקטן את ההגדלה של צרכי ה- μCT עד שקצוות המדגם גלויים בזוויות שנקבעו לעיל וניתן לבצע התאמת שלב ROI גסה.</li>
		<li>לאחר ההגדלה התחתונה, הזז את המדגם או את הגלאי כדי להגדיל את ההגדלה וניתן לכוונן את מיקומי ה- ROI. הערה: ייתכן שיהיה צורך לחזור על תהליך זה כדי להבטיח יישור. יישור נכון גורם לדוגמה המציגה תנועה אופקית מועטה עד ללא תנועה דרך כל זוויות הסיבוב לדוגמה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>התאם את ה- μCT לפרמטרים הרצויים לסריקה באמצעות תוכנת היצרן. פרמטרים אלה כוללים פוטנציאל צינור, זרם צינור, מרחק גלאי, מרחק מדגם, זמן חשיפה, מסלול, ואת מספר התחזיות (ראה טבלה S1 עבור הפרמטרים רכישת μCT המשמש במחקר זה). הערה: פרמטרי כיול, כגון שדות שקופים וסריקות שדה כהה, צריכים להישמר במפרט היצרן אלא אם צוין אחרת. לדוגמה, אם דגימה גדולה מדי והמערכת אינה יכולה להזיז את הדגימה מתצוגת השדה, יש להסיר את המדגם כדי לבצע סריקות ברורות של כיול שדה.</li>
	<li>לאחר הגדרת הפרמטרים, ניתן לראות קירוב של משך הסריקה על-ידי לחיצה על לחצן הערכת זמן. בחר בלחצן התחל כדי להתחיל בסריקה.</li>
	<li>לאחר השלמת הסריקה, ודא כי צילומי הרנטגן כבויים, לפתוח את הקולט, ולהסיר בזהירות את הדגימה מתא μCT.</li>
</ol>5. עיבוד לדוגמה ומתאם תמונה
<ol><li>בנייה מחדש של תחזיות μCT באמצעות אלגוריתם הקרנה אחורי מסונן עם התוכנה המסופקת על ידי היצרן (ראה טבלת חומרים).<ol>
<li>בחר בכרטיסיה סיור בחלק העליון של המסך. בחר את הכרטיסיה פרוייקט ורכישה. </li>
		<li>בחר את השייך לתבנית סיור עם הקרנה אחורית מסוננת. לחץ על לחצן התחל סיור. </li>
	</ol>
</li>
	<li>זהה ופולח את שסתום הריאות באמצעות תוכנת עיבוד תמונה. זה דורש ידע מוקדם של האנטומיה של שסתום הריאות17. בלחצים עורקיים גבוהים, העלונים coapt וחוסמים את לומן של שסתום הריאות.</li>
	<li>זהה את כיוון הניקוד ביחס לכיוון הסריקה ולדגימה. כוון מחדש את המדגם כך שכיוון הניתוק מיושר עם הציר הרצוי.</li>
	<li>זהה אזורים מעניינים עבור הדמיה ברזולוציה גבוהה. בניסוי זה נבחרו הבטן (האמצעית) של העלון והצומת העורקי-ואלבולרי.</li>
	<li>הסר את השרף העודף ודגם על ידי סכין גילוח או ליטש עבור חתיכות גדולות של חומר, או על ידי microtome עבור חתיכות עדינות יותר.</li>
	<li>פעם אחת במיקום של עניין, להשוות את הדגימה הפיזית עם פרוסות μCT וירטואלי כדי לאשר את המיקום. זה נעשה על ידי השוואת תכונות אנטומיות בחתך.</li>
</ol>6. בלוק סדרתי פנים סריקת מיקרוסקופיה אלקטרונים18
<ol><li>הפחת את חתך הרוחב של הדגימה כדי להכיל SBF-SEM, כ 2.0 x 1.5 x 1.8 מ"מ.</li>
	<li>הרכיבו את הדגימה הקצוצה על ספח האלומיניום SBF-SEM באמצעות אפוקסי.</li>
	<li>מצפים את בלוק הדגימה בזהב של 35 ננומטר. סובבו את הדגימה על הרציף כדי להחיל שכבה אחידה של ציפוי.</li>
	<li>פתחו את תא SBF-SEM והתאמו את גובה להב הסכין לגובה אוצנטרי מיקרוסקופי.</li>
	<li>הכנס את הדוגמה והחלק את ספח הדגימה.</li>
	<li>תמונה בתנאי ואקום נמוכים למניעת טעינה ועם גלאי backscatter (ראה טבלה S2 עבור פרמטרי רכישת SBF-SEM).</li>
	<li>תמונה ותפירת אזורים מרובים של עניין בהגדלות שונות באמצעות תוכנה אוטומטית(ראה טבלת חומרים ).</li>
</ol>

<ol><li>Azari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+the+cost-effectiveness+of+heart+valve+replacement+with+a+mechanical+versus+biological+prosthesis+in+patients+with+heart+valvular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Failure+Reviews%22%5BJournal%5D)">A systematic review of the cost-effectiveness of heart valve replacement with a mechanical versus biological prosthesis in patients with heart valvular disease.</a> Heart Failure Reviews. 25 (3), 495-503 (2020).</li>
<li>Ng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2-dependent+pathogenesis+of+mitral+valve+prolapse+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">TGF-β-dependent pathogenesis of mitral valve prolapse in a mouse model of Marfan syndrome.</a> Journal of Clinical Investigation. 114 (11), 1586-1592 (2004).</li>
<li>Cheek, J. D., Wirrig, E. E., Alfieri, C. M., James, J. F., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+activation+of+valvulogenic%2C+chondrogenic%2C+and+osteogenic+pathways+in+mouse+models+of+myxomatous+and+calcific+aortic+valve+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Differential activation of valvulogenic, chondrogenic, and osteogenic pathways in mouse models of myxomatous and calcific aortic valve disease.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 52 (3), 689-700 (2012).</li>
<li>Jiménez-Altayó, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stenosis+coexists+with+compromised+%CE%B11-adrenergic+contractions+in+the+ascending+aorta+of+a+mouse+model+of+Williams-Beuren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Stenosis coexists with compromised α1-adrenergic contractions in the ascending aorta of a mouse model of Williams-Beuren syndrome.</a> Scientific Reports. 10 (1), 889(2020).</li>
<li>Thacoor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitral+valve+prolapse+and+Marfan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Congenital+Heart+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitral valve prolapse and Marfan syndrome.</a> Congenital Heart Disease. 12 (4), 430-434 (2017).</li>
<li>McAnulty, P., Dayan, A., Ganderup, N. -C., Hastings, K., Dawson, H. A Comparative Assessment of the Pig, Mouse and Human Genomes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcAnulty%2C+P+%22The+Minipig+in+Biomedical+Research%22">The Minipig in Biomedical Research</a>. , CRC Press. (2011).</li>
<li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Review of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li>
<li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+remodeling+and+organization+in+developing+and+diseased+aortic+valves%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix remodeling and organization in developing and diseased aortic valves.</a> Circulation Research. 98 (11), 1431-1438 (2006).</li>
<li>Sacks, M. S., Merryman, W. D., Schmidt, D. E., David Merryman, D. W., Schmidt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+biomechanics+of+heart+valve+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">On the biomechanics of heart valve function.</a> Journal of Biomechanics. 42 (12), 1804-1824 (2009).</li>
<li>Sacks, M. S., Yoganathan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+function%3A+a+biomechanical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B-Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Heart valve function: a biomechanical perspective.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 362 (1484), 1369-1391 (2007).</li>
<li>Morales, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+scouting+for+transmission+electron+microscopy+of+human+tissue+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Micro-CT scouting for transmission electron microscopy of human tissue specimens.</a> Journal of Microscopy. 263 (1), 113-117 (2016).</li>
<li>Sacks, M. S., Smith, D. B., Hiester, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aortic+valve+microstructure%3A+Effects+of+transvalvular+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">The aortic valve microstructure: Effects of transvalvular pressure.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 41 (1), 131-141 (1998).</li>
<li>Ayoub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+biomechanics+and+underlying+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve biomechanics and underlying mechanobiology.</a> Comprehensive Physiology. 6 (4), 1743-1780 (2016).</li>
<li>Stella, J. A., Liao, J., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+biaxial+mechanical+behavior+of+the+aortic+heart+valve+leaflet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Time-dependent biaxial mechanical behavior of the aortic heart valve leaflet.</a> Journal of Biomechanics. 40 (14), 3169-3177 (2007).</li>
<li>Korn, E. D., Weisman, R. A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((loss+of+lipids+during+preparation+of+amoebae+for+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29%2FLipids+and+Lipid+Metabolism%22%5BJournal%5D)">loss of lipids during preparation of amoebae for electron microscopy.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/Lipids and Lipid Metabolism. 116 (2), 309-316 (1966).</li>
<li>Tapia, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-contrast+en+bloc+staining+of+neuronal+tissue+for+field+emission+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">High-contrast en bloc staining of neuronal tissue for field emission scanning electron microscopy.</a> Nature Protocols. 7 (2), 193-206 (2012).</li>
<li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+heart+valve+structure+and+function%3A+Echocardiographic+and+morphometric+analyses+from+the+fetus+through+the+aged+adult%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mouse heart valve structure and function: Echocardiographic and morphometric analyses from the fetus through the aged adult.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 294 (6), 2480-2488 (2008).</li>
<li>Denk, W., Horstmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+block-face+scanning+electron+microscopy+to+reconstruct+three-dimensional+tissue+nanostructure%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+Biology%22%5BJournal%5D)">Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure.</a> Plos Biology. 2 (11), 1900-1909 (2004).</li>
<li>Lincoln, J., Florer, J. B., Deutsch, G. H., Wenstrup, R. J., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ColVa1+and+ColXIa1+are+required+for+myocardial+morphogenesis+and+heart+valve+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">ColVa1 and ColXIa1 are required for myocardial morphogenesis and heart valve development.</a> Developmental Dynamics. 235 (12), 3295-3305 (2006).</li>
<li>Hamatani, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+investigation+of+congenital+bicuspid+aortic+valve+stenosis%2C+compared+with+atherosclerotic+tricuspid+aortic+valve+stenosis+and+congenital+bicuspid+aortic+valve+regurgitation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pathological investigation of congenital bicuspid aortic valve stenosis, compared with atherosclerotic tricuspid aortic valve stenosis and congenital bicuspid aortic valve regurgitation.</a> PLoS One. 11 (8), (2016).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הסרת החדרים משרתת שתי מטרות. ראשית, חשיפת צד החדר ללחץ האטמוספרי, ובכך רק צריך להפעיל לחץ transvalvular מהצד העורקי של שסתום הריאות כדי לסגור, ושנית, מתן בסיס יציב כדי למנוע פיתול של גזע הריאות. במהלך לחץ, תא המטען הריאתי נפסק באופן רדיאלי ונחות, מה שהופך אותו נוטה פיתול, גרימת קריסה של תא המטען הריאתי. טעינה מראש של שסתום הריאות עם תמיסת מלח מציעה בדיקת איכות נוספת כדי להבטיח כי לחץ הוא מספיק ואם יש דליפות במערכת. הפעולה של הקיבעון העיקרי היא מהירה, בסדר של כמה שניות, וללא preloading הידרוסטטי עם תמיסת מלח, שסתום הריאות...

שסתום הריאות (PV) משמש כדי להבטיח זרימת דם חד כיוונית בין החדר הימני לעורק הריאות. מומים שסתום ריאות קשורים עם מספר צורות של מחלת לב מולדת. הטיפול הנוכחי למחלת שסתום לב מולדת (HVD) הוא תיקון valvular או החלפת שסתום, אשר יכול לדרוש ניתוחים פולשניים מרובים לאורך חייו של המטופל1. זה כבר מקובל כי הפונקציה של שסתום הלב נגזר מהמבנה שלה, המכונה לעתים קרובות את המבנה-פונקציה בקורלציה. ליתר דיוק, המאפיינים הגיאומטריים והביומכניים של הלב מכתיבים את תפקידו. המאפיינים המכניים, בתורם, נקבעים על ידי הרכב וארגון של ECM. על ידי פיתוח שיטה לקביעת המאפיינים הביומכניים של שסתומי לב מורינה, מודלים בעלי חיים מהונדסים יכולים לשמש כדי לחקור את התפקיד של ECM על תפקוד שסתום הלב תפקוד לקוי2,3,4,5.
מודל בעלי החיים המוריני נחשב זה מכבר לסטנדרט למחקרים מולקולריים מכיוון שמודלים מהונדסים זמינים יותר בעכברים בהשוואה למינים אחרים. מודלים מהונדסים מורין לספק פלטפורמה רב-תכליתית לחקר מחלות הקשורות שסתום לב6. עם זאת, המומחיות הכירורגית ודרישות המכשור לאפיון הן הגיאומטריה והן ארגון ECM היוו משוכה משמעותית בהתקדמות מחקר HVD. נתונים Hstological בספרות מספק תמונה לתוך תוכן מטריצה חוץ תאית שסתום לב מורין, אבל רק בצורה של תמונות 2D, ואינם מסוגלים לתאר את הארכיטקטורה 3D שלה7,8. בנוסף, שסתום הלב הוא הן מרחבי והן זמני הטרוגניים, מה שמקשה להסיק מסקנות על פני ניסויים לגבי ארגון ECM אם הדגימה וההתאמה אינם קבועים. שיטות אפיון תלת-ממדיות קונבנציונליות, כגון MRI או אקו-קרדיוגרפיה תלת-ממדית, אינן מספקות את הפתרון הדרוש לפתרון רכיבי ECM9,10.
עבודה זו מפרטת זרימת עבודה מתאם לחלוטין שבו הטרוגניות הטמפורלית עקב מחזור הלב טופלה על ידי תיקון הקונפורמציה של PV מורין עם לחץ טרנסוולבולרי הידרוסטטי. ההטרוגניות המרחבית נשלטה דווקא על ידי דגימת אזורי עניין ורישום ערכות נתונים מאופני הדמיה שונים, במיוחד μCT ומיקרוסקופיית פנים בלוק סדרתית סורקת מיקרוסקופיית אלקטרונים, על פני סולמות אורך שונים. שיטה זו של סקאוטינג עם μCT להנחיית דגימה במורד הזרם הוצעה בעבר, אך מכיוון ששסתום הריאות מציג וריאציה זמנית, היה צורך ברמת שליטה נוספת ברמה הניתוחית11.
במחקרים המתארים ביומכניקה של שסתום לב מוריני הם דלילים, ובמקום זאת, מסתמכים על מודלים חישוביים כאשר הם מתארים את התנהגות העיוות. זה בעל חשיבות קריטית כי נתונים חוץ תאיים מקומיים על סולם אורך ננומטר להיות קשורים הגיאומטריה ואת המיקום של שסתום הלב. זה, בתורו, מספק לכימות, מופה מרחבי הפצות של חלבוני ECM תורמים מכנית, אשר ניתן להשתמש בהם כדי לחזק את המודלים הקיימים שסתום הלב הביומכני12,13,14.

<table><tbody><tr><td>25% glutaraldehyde (aq)</td><td>EMS</td><td>16210</td><td>רכיב קיבוע עיקרי</td></tr><tr><td>0.9% הזרקת נתרן כלורי</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל BD</td><td></td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>200 הוכחה אתנול</td><td>EMS</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>22G מחט</td><td>BD</td><td>305156</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 3 מ"ל</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>עצירה תלת כיוונית</td><td>Smiths Medical ASD, Inc.</td><td></td><td></td>MX5311L</tr><tr><td>4% אוסמיום טטרוקסיד</td><td>EMS</td><td>19150</td><td>רכיב צביעה</td></tr><tr><td>4% פרפורמלדהיד (aq)</td><td>EMS</td><td>157-4-100</td><td>רכיב קיבוע עיקרי</td></tr><tr><td>המוסטט נספג</td><td>Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>אצטון</td><td>EMS</td><td>10012</td><td></td></tr><tr><td>תפר מונופילמנט פוליאמיד שחור, 10-0</td><td>AROSurgical instruments Corporation</td><td></td><td></td>TI38402</tr><tr><td>תפר מונופילמנט פוליאמיד שחור, 6-0</td><td>AROמכשירים אורגיים תאגיד</td><td>SN-1956</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 עכברים</td><td>מעבדות ג'קסון</td><td>664</td><td>כ-1 יו</td></tr><tr><td>סידן כלורי</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>10043-52-4</td><td></td></tr><tr><td>מהדק מריחת מלקחיים</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים של קצה כותנה</td><td>פישר מדעי</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 מלקחיים</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 מלקחיים עדינים</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Durcupan ACM שרף</td><td>EMS</td><td>14040</td><td>להטמעת</td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Heliscan microCT</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>Micro-CT</td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד הזרקת</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>L-aspartic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>56-84-8</td><td>רכיב מכתים</td></tr><tr><td>עופרת חנקתית</td><td>EMS</td><td>17900</td><td>רכיב צביעה</td></tr><tr><td>גלאי פיזור אחורי ואקום נמוך</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>VSDBS</td><td>SEM גלאי פיזור אחורי</td></tr><tr><td>מיקרו-אדסון</td><td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>מסנן Millex-GP, 0.22 אום, PES 33 מ"מ, </td><td>EMD Millipore</td> לא סטרילי <td>SLGP033NS</td><td></td></tr><tr><td>שירים לא ארוגים</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן hexacyanoferrate (II) trihydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>14459-95-1</td><td>רכיב צביעה</td></tr><tr><td>אשלגן הידרוקסיד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1310-58-3</td><td></td></tr><tr><td>קו מוניטור לחץ</td><td>Smiths Medical ASD, Inc.</td><td>תמיסת מלח MX562</td><td></td></tr><tr><td>(סטרילית 0.9% נתרן כלורי)</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>גודל 3 קפסולת BEEM</td><td>EMS</td><td>69910-01</td><td>מיכל הטבעה</td></tr><tr><td>נתרן קקודילאט טריהידראט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>6131-99-3</td><td>מחזירי סוליברי מאגר</td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>ציפוי מקרטע, פחמן וקרן אלקטרונית</td><td>Leica</td><td>EM ACE600</td><td>ציפוי זהב</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td> <td>EMS</td><td>21900</td><td>רכיב מכתים</td></tr><tr><td>מחזיק מחט/מלקחיים Tish</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>גוזם</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td>אורניל אצטט</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>רכיב צביעה</td></tr><tr><td>Volumescope סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>VOLUMESCOPESEM</td><td>סריקת פנים בלוק סדרתי מיקרוסקופ אלקטרונים</td></tr><tr><td>תמיסה סטרילית קסילזין</td><td>Akorn Inc.</td><td>נאדה # 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

ניתוח ועיבוד מדגם להדמיה קורלטיבית של שסתום הריאות מורין

Surgery and Sample Processing for Correlative Imaging of the Murine Pulmonary Valve

הגורמים הבסיסיים למחלות הקשורות לשסתום הלב (HVD) הם חמקמקים. מודלים של בעלי חיים מורינים מספקים כלי מצוין לחקר HVD, עם זאת, המומחיות הכירורגית והאינסמנטלית הנדרשת לכימות מדויק של המבנה והארגון על פני קשקשים באורך רב עיכבו את התקדמותו. עבודה זו מספקת תיאור מפורט של ניתוח מורין, כתמי גוש, עיבוד מדגם, והליכי הדמיה מתאם לתיאור שסתום הלב בקשקשים באורך שונה. לחץ טרנס-וואולי הידרוסטטי שימש לשליטה בהטרוגניות הטמפורלית על ידי תיקון כימי של קונפורמציה שסתום הלב. טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (μCT) שימשה לאישור הגיאומטריה של שסתום הלב ולספק התייחסות לעיבוד מדגם במורד הזרם הדרוש למיקרוסקופיית אלקטרונים סורקת פנים של בלוק טורי (SBF-SEM). תמונות SEM טוריות ברזולוציה גבוהה של המטריצה החוץ-תאית (ECM) צולמו ושוחזרו כדי לספק ייצוג תלת-ממדי מקומי של הארגון שלה. שיטות הדמיה μCT ו- SBF-SEM היו אז בקורלציה כדי להתגבר על השונות המרחבית על פני שסתום הריאות. למרות העבודה המוצגת היא אך ורק על שסתום הריאות, מתודולוגיה זו יכולה להיות מאומצת לתיאור הארגון ההיררכי במערכות ביולוגיות והיא מרכזית עבור האפיון המבני על פני קשקשים באורך מרובה.

אנסטומוזיס של עורק הריאות לצינורות לחצה מוצג באיור 1A. בעקבות הפעלת לחץ הידרוסטטי, תא המטען הריאתי מתנודה באופן רדיאלי(איור 1B)המציין כי עלוני שסתום הריאות נמצאים בתצורה סגורה. התאמה שסתום ריאות אושרה על ידי μCT. במקרה זה, העלונים היו coapt (סגור) ואת annulus היה מעגלי(איור 2A). איור 2B,C מראה דרגות שונות של לחץ שסתום ריאתי לקוי על ידי קיבעון (איור 2B)או קר...

כאן, אנו מתארים זרימת עבודה מתאם עבור כריתה, לחץ, קיבעון, והדמיה של שסתום הריאות מורין כדי לקבוע את הקונפורמציה ברוטו ומבני מטריצה חוץ תאיים מקומיים.

The underlying causes of heart valve related-disease (HVD) are elusive. Murine animal models provide an excellent tool for studying HVD, however, the ...

פרוטוקול זה הוא משמעותי כי הוא נועד לענות על שאלות על תפקוד המבנה בקורלציה של שסתום הריאות מורין, וזה בדרך כלל מסובך בגלל ההטרוגניות הטבועה שלה. הקיבעון המבוקר והדמיה המתאם שימשו ללכידת המבנה בקשקשים באורך מרובה. לאחר מכן ניתן למפות תמונות מקומיות ברזולוציה גבוהה בחזרה למיקום האנטומי המדויק על שסתום הריאות.מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר טאי יי, מנהל מיקרוכירורגיה במרכז לרפואה רגנרטיבית בבית החולים הלאומי לילדים. התחל על ידי עיבוד אוטומטי של הכלים הדרושים לניתוח העכבר, כולל מספריים עדינים, מיקרו-כוחס, מלחציים מיקרו-וסקולריים, מלקחיים להחלת מלקחיים, מחזיקי מיקרונידל, מספריים קפיציים ומפסקים. לאחר המתת חסד עכבר C57BL/6 מבוגר, מניחים אותו בתנוחת התאוששות געש על מגש, מאבטחים את גפיו בקלטת ומבצעים את בית החזה.לחשוף את הלב על ידי הסרת כל עודף רקמת שומן fascia, ולאחר מכן להסיר את האטריום הימני ולפרוק את החדר השמאלי עם תמיסת מלח בטמפרטורת החדר. הסר את הלב כולו על ידי ניתוק הווריד העליון, וריד קאווה נחות, עורק ריאות, ואבי העורקים, ולחתוך כשני מילימטרים מעל צומת פיתום, אשר ישמש צינור ללחץ. הסר את החדרים השמאליים והימנים כדי לחשוף את התאים ללחץ אטמוספרי, להבטיח כי מבנה תא המטען הריאתי אינו מושפע על ידי הסרת החדרים.צינורות לחץ Anastomose עם עורק הריאות, משאיר במרחק של כמילימטר בין הצומת sinotubular לבין סוף הצינורות כדי להכיל תנועות גדולות של העלונים ואת גזע הריאות. העלו את המאגר ללחץ פיזיולוגי אנלוגי ומלאו אותו בתמיסת המלח. בדוק את מערכת הזרימה כדי לוודא שאין חסימות או בועות אוויר.חבר פקק שסתום ריאות anastomosed ולהבטיח זרימה נאותה דרך הצינורות על ידי החלפת דרכי היציאה. ברגע שהזרימה מספיקה, החליפו את הזרימה לשסתום הריאות המנומס והבטיחו לחץ על גזע הריאות שזוהה על ידי התנפחת תא המטען. לאחר אישור לחץ של תא המטען הריאתי, לשלב בהדרגה פתרון קיבוץ ראשוני עד 25% של קיבולת המאגר של תמיסת מלח מטוהר.מניחים גזה ספוגה הקיבעון על דגימת הרקמה כדי למנוע ייבוש. לנטרל את הקיבעון במשך שלוש שעות, מילוי המאגר כדי לשמור על לחץ מתמיד. לאחר זלוף, לאחסן את שסתום הלב בתמיסה הקיבועית בארבע מעלות צלזיוס עד לשימוש עד שבוע.להכתמה, לשטוף את דגימת שסתום הלב הקבוע שלוש פעמים עם חיץ קקודילאט טוחנת קר 0.15 במשך חמש דקות לחלוטין להטביע את שסתום הלב בתמיסה של 1.5 אשלגן ferrocyanide, 0.15 קקודילאט טוחנת, שני מילימולרי סידן כלוריד, ו 2% osmium tetroxide על קרח במשך שעה אחת. לשטוף את הדגימות עם טמפרטורת החדר מים מזוקקים כפולים על ידי הצבת אותם בצינור במשך חמש דקות עם עצבנות קלה. לאחר שלוש שטיפות נוספות, מניחים את המדגם בתמיסת thiocarbohydrazide מסוננת בטמפרטורת החדר.לאחר 20 דקות, לשטוף את המדגם שלוש פעמים עם מים כפי שהוכח קודם לכן. לאחר מכן, מניחים את המדגם ב 2% osmium tetroxide בטמפרטורת החדר. לאחר 30 דקות, לשטוף אותו עם מים שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחד ודגורת המדגם ב 1%אורניל אצטט לילה בארבע מעלות צלזיוס.בינתיים, להכין פתרון של עופרת חנקתית. למחרת, לבצע את שלב הכביסה שלוש פעמים כפי שהוכח קודם לכן, ולאחר מכן לדגור על רקמת שסתום הלב בתמיסת אספרטט עופרת ב 60 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. לשטוף את הדגימות שלוש פעמים נוספות, ולאחר מכן לבצע טיפול התייבשות סדרתי על רקמות שסתום הלב עם מוכן טרי 20, 50, 70, ו 90%אתנול על קרח במשך חמש דקות כל אחד, ואחריו שני טיפולים הבאים עם 100%אתנול.לאחר התייבשות, להזיז את הרקמות כדי אצטון קר קרח, ולאחר מכן למקם אותו אצטון טרי בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. עבור הטבעה, להפוך את תערובת שרף על פי מפרטי היצרן. מניחים רקמות בטיפולים הבאים של 25 עד 75, 50 עד 50 ו 75 עד 25 שרף לתערובת אצטון במשך שעתיים כל אחד.לבסוף, מניחים את הרקמות ב-100% שרף בן לילה. למחרת, מניחים רקמות ב-100% שרף טרי. לאחר שעתיים, מעבירים את הרקמות לקפסולה הטמעה, מוסיפים שרף טרי 100% ומניחים אותו בתנור 60 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות לריפוי.עורק הריאות המופק לפני ואחרי היישום של לחץ הידרוסטטי מוצג כאן. תא המטען הריאתי נפוח באופן רדיאלי ומציין כי עלוני שסתום הריאות נמצאים בתצורה סגורה. טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת אישרה את אישור שסתום הריאות.העלונים היו סגורים והאנולוס היה מעגלי בעוד דרגות שונות של לחץ שסתום ריאתי לקוי על ידי קיבוע או קריסת עורקים נצפו. עוצמת הקול של מיקרו CT בעיבוד חתך רוחב וירטואלי הייתה מתואמת עם תמונות אופטיות כדי לאשר את כיוון החתך והמיקום. תמונות SBF SEM ברזולוציה גבוהה צולמו באזור מקומי בתוך עלון כאשר בלוק הדגימה היה במיקום הרצוי ובכיוון.תמונות מתואמות בין עוצמת הקול של מיקרו CT שמעבדות פרוסה וירטואלית, רזולוציה נמוכה ותמונות SBF SEM ברזולוציה גבוהה מוצגות כאן. בייצוג תלת-ממדי של אזור מקוטע של שסתום הריאות, ניתן לזהות רכיבים חוץ תאיים כמו תאי אנדותל, תאים ביניים valvular וסיבים חוץ תאיים. בעת ניסיון פרוטוקול זה, זכור כי ביצוע לחצים הוא קריטי ויבטיח את התשואה להיות גבוהה ככל האפשר.

surgery-sample-processing-for-correlative-imaging-murine-pulmonary

Research

JoVE Journal

Engineering

הנדסה

תדירות גבוהה אולטרסאונד דופלר היא טכנולוגיה חדשנית להערכת תפקוד שריר הלב באזור. עבודה זו מציגה את העדות הראשונה הוכחת הישימות של פלטפורמה זו הדמיה תכליתי עבור למדוד את חוזרות ונשנות של מתח שריר הלב, dp / dt, ו regurgitation צניפי בלב אדום (IR) איסכמיה reperfused Murine.

בתדירות גבוהה ברזולוציה גבוהה אקו: העדות הראשונה על מדוד לא פולשני חוזרות ונשנות של הזנים Contractility שריר הלב, ו regurgitation צניפי בלב איסכמיה reperfused Murine

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך לבידוד וקיבוע כימי של ערך הריאתי של העכבר בקונפורמציה סגורה באמצעות לחץ זילוח.

קיבוע לחץ של מסתם ריאתי מורין מבודד: הליך לבידוד ותיקון כימי של המסתם הריאתי של העכבר בקונפורמציה סגורה

תפקוד לקוי של חדר ממני (RV) הוא קריטי בפתוגנזה של מחלות לב וכלי דם, אך מתודולוגיות מוגבלות זמינות להערכתו. ההתקדמות שחלה באחרונה בתחום ההדמיה אולטרה סאונד מספקת אפשרות פולשני ומדויקת עבור מחקר RV אורך. בזאת, אנו פירוט שיטת אקו צעד אחר צעד תוך שימוש במודל עכברי של עומס יתר לחץ RV.

הערכה של מבנה הנכון חדרית ותפקוד בעכבר הדגם של תעוקת עורק ריאה על ידי Transthoracic אקו

על מנת להבין את המנגנונים התאיים ומולקולריים שבבסיס neotissue היווצרות והתפתחות היצרות במסתמי לב רקמה מהונדסת, מודל עכברי של השתלת שסתום לב heterotopic פותח. שסתום לב ריאה הושתל לנמען באמצעות טכניקת השתלת לב heterotopic.

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

פרוטוקול זה מספק תיאור מפורט של הגישה האקו-קרדיוגרפית לפנוטיפ מקיף של תפקוד הלב ומסתמי הלב בעכברים.

גישות פרוטוקולים אקו לאפיון פנוטיפי מקיף של מסתמית מחלות לב בעכברים

כאן, אנו מספקים גישה שימושית לחקר המנגנון של כשל המוח הימני. גישה נוחה יותר ויעילה יותר לכווץ עורק הריאתי מוקמת באמצעות כלים כירורגיים שנעשו. בנוסף, מסופקים שיטות להערכת איכות הגישה הזאת באמצעות האקו-לב והצנתור.

אינדוקציה של כישלון חדרית הנכון על ידי מכווץ עורק ריאתי והערכה של תפקוד המוח הימני בעכברים

מודל מכרסם של הלב השמאלי נפח העומס של צניפי אי-ספיקת הוא דיווח. צניפי אי-ספיקת של חומרת מבוקרת נגרמת על ידי קידום מחט של ממדים מוגדרים לתוך העלון הקדמי של שסתום צניפי, בלב פועם, עם הדרכה אולטרסאונד.

תמונה מונחית Transapical צניפי העלון נקב מודל של נפח מבוקרת עומס יתר מ צניפי אי-ספיקת בעכברוש

מוצג כאן פרוטוקול לשימור התכווצות כלי הדם של רקמת הריאה המורינית PCLS, וכתוצאה מכך תמונה תלת ממדית מתוחכמת של כלי הדם הריאתי ודרכי הנשימה, אשר ניתן לשמר עד 10 ימים כי הוא רגיש הליכים רבים.

פרוסות ריאות חתוכות מדויקות ככלי יעיל למבנה כלי הריאות Ex vivo ולמחקרי התכווצות

פרוטוקול זה מדגים בידוד מונחה מיקרוסקופיה וצביעה אימונופלואורסצנטית של ורידים ריאתיים מורינים. אנו מכינים דגימות רקמה המכילות את אטריום שמאל, ורידים ריאתיים, ואת הריאות המתאימות ומכתימים אותם עבור טרופונין T לב ו Connexin 43.

מיקרודיסקציה וצביעה אימונופלואורסצנטית של שרוולי שריר הלב בוורידי ריאה מורין

אנו מתארים מודל מוריני של עומס יתר על לחץ החדר הימני המושרה על ידי רצועות גזע ריאתי. פרוטוקולים מפורטים לאינטובציה, ניתוח ופנוטיפ על ידי אקוקרדיוגרפיה כלולים במאמר. מכשירים בהתאמה אישית משמשים לאינטובציה וניתוח, המאפשרים שכפול מהיר וזול של הדגם.

מודל מורין של היפרטרופיה של חדר ימין הנגרמת על ידי עומס יתר וכישלון על ידי רצועות גזע ריאתי

למד פרוטוקול לניתוח מבני של שסתום הריאות מורין באמצעות הדמיה קורלטיבית של μCT ו-SBF-SEM. השיטה מאפשרת מיפוי מדויק של נתונים אולטרה-מבניים בהקשר אנטומי לחקר מחלות שסתומי לב.

ניתוח ועיבוד מדגם להדמיה קורלטיבית של שסתום הריאות מורין

גלה סרטונים נוספים