שימוש בציפוי בסיס ובמיניסקופ מעוגן מראש עם עדשה אובייקטיבית למחקר חולף בסידן בעכברים

מיניסקופ זה יכול להפחית את בעיית ההתכווצות עם צמנט דנטלי במהלך הליך לוחית הבסיס ולהגדיל את שיעור ההצלחה של הקלטות מיניסקופ של אותות פלואורסצנטיים בשתי תצורות אורך. אם לא ניתן להבחין במעבר הפלואורסצנטי במהלך ציפוי הבסיס, בדוק את ביטוי מחוון הסידן ואת המיקום של עדשת ממסר על פרוסת המוח. התחל עם הרכבת המחט הפנימית של קטטר תוך ורידי 20 מד בקוטר של מילימטר אחד על הזרוע הסטריאוטקסית.

מורידים את הצנתר לתוך אמוני תירס 1 הגחוני לאזור המטרה. לאחר מכן, הורידו את מחט המיקרו-הזרקה במהירות של 100 עד 200 מיקרומטר לדקה לתוך הקרנו הגחוני אמוניס 1, והזרימו 200 ננוליטר של הווקטור הנגיפי לאזור המטרה במהירות של 25 ננוליטר לדקה. לאחר מתן אפשרות לנגיף להתפזר במשך 10 דקות, למשוך את מחט microinjection במהירות של 100 עד 200 מיקרומטר לדקה.

לאחר חיטוי עדשת הממסר, יש להשרות את העדשה במי מלח קרים ללא פירוגן עד להשתלה. באמצעות מהדק מיקרו בולדוג עם צינורות כיווץ חום, החזיקו את עדשת הממסר והניחו אותה על גבי אזור המטרה במהירות של 100 עד 200 מיקרומטר לדקה. לאחר מכן, לייצב את העדשה עם מלט שיניים.

כדי להגדיר מיניסקופ, הדקו את עדשת המטרה בתחתית והרכיבו את לוח הבסיס על המיניסקוף. עטפו 10 סנטימטרים של סרט פרפין סביב החלק החיצוני של לוח הבסיס. בעזרת חימר דבק רב פעמי, החזיקו את המיניסקופ עם בדיקת הזרוע הסטריאוטקסית.

יישרו את עדשת האובייקטיבי על גבי עדשת הממסר עם רווח קטן ככל האפשר בין העדשות. השתמש במלט דנטלי כדי להבטיח את מיקום לוח הבסיס, כך שהמלט נוגע רק בסרט הפרפין. כאשר המלט הדנטלי התייבש, הסירו את סרט הפרפין, את לוחית הבסיס ואת המיניסקופ, תוך שמירה על בסיס הצמנט הדנטלי חלול.

אטמו את עדשת הממסר בגומי סיליקון יצוקה וכסו את גומי הסיליקון בשכבה דקה של מלט דנטלי. נתקו את העכבר מהמכשירים הסטריאוטקסיים והכניסו את העכבר לתא התאוששות. לציפוי בסיס, חתכו בזהירות את השכבה הדקה של גג הבטון הדנטלי עם מגלגל עצם והסירו את גומי הסיליקון.

נקו את פני השטח של עדשת הממסר עם 75% אלכוהול. הדקו את בורג הסט לצד לוח הבסיס כדי לקבע אותו לתחתית המיניסקוף. כוונן את שקופית המיקוד כך שתהיה במרחק של כ- 2.7 עד 3 מילימטרים מהמארז הראשי.

בסיום ההגדרה, חבר את המיניסקופ ללוח איסוף הנתונים וחבר את המיניסקופ ליציאת USB 3.0 במחשב. הפעל את תוכנת רכישת הנתונים שפותחה על ידי צוות UCLA. התאם את החשיפה ל- 255, את הרווח ל- 64x ואת נורית העירור ל- 5% כדי לחבר את המיניסקופ לתוכנת איסוף הנתונים, לחץ על כפתור החיבור וצפה בשידור החי של תוכנת איסוף הנתונים בהתחשב בשולי עדשת הממסר כציון דרך.

לאחר מציאת עדשת הממסר, ישר את עדשת המיניסקופ האובייקטיבית לעדשת הממסר ביד. התאמת הזוויות והמרחקים השונים של המיניסקופ, התחל לחפש את אותות הפלואורסצנטיות. החזקת המיניסקופ במיקום האופטימלי, הזזת הזרוע הסטריאוטקסית לכיוון המיני סקופ והצמדת המיניסקופ לזרוע הסטריאוטקסית באמצעות חימר דבק רב פעמי.

חפש את התצוגה הטובה ביותר על-ידי כוונון קל של זרועות X, Y ו- Z. התאם את הזווית בין פני השטח של עדשת האובייקט לבין עדשת הממסר על ידי סיבוב מוט האוזן, מוט השיניים או חימר דבק לשימוש חוזר על ציר Z. ביטוי נגיפי והשתלת עדשה מוצלחים כאשר לפחות תא אחד החליף פלואורסצנטיות חולפת במהלך ציפוי הבסיס.

קבע את לוח הבסיס בחוזקה עם הכמות הקטנה ביותר האפשרית של מלט דנטלי תוך ניטור אזור העניין כדי להבטיח שהמיקום האופטימלי אינו משתנה. במחקר המייצג, ההליך של ציפוי בסיס דמה הוכיח יתרון מכיוון שהוא הביא לשינוי קטן יותר במיקום לוחית הבסיס מאשר ההליך המקורי. תזוזת לוח הבסיס הושפעה גם מגובה המלט הדנטלי.

לוחית הבסיס שהייתה מעוגנת 0.5 ס"מ מעל הגולגולת זזה משמעותית פחות מלוחית הבסיס שהייתה קבועה סנטימטר אחד מעל הגולגולת. בדוגמה להדמיה מוצלחת במהלך הליך ציפוי הבסיס הבחינו בעוברים פלואורסצנטיים יחד עם כלי דם בחיה המורדמת. חולפים פלואורסצנטיים נצפו חמישה ימים לאחר הבסיס, גם כאשר העכבר התנהג בחופשיות בכלוב הביתי שלו עם שינוי קל בלבד בתנוחה.

לאחר מכן בוצעה הדמיית סידן של עכברים. במקרים אחדים התרחשו בעיות במהלך הליך ציפוי הבסיס, כגון היעדר דבר מלבד רקע אחיד או נראות של שולי תאים לבנים. ללא ארעיות פלואורסצנטית.

חשוב לקבע את לוח הבסיס בחוזקה על אזור המטרה עם כמות קטנה ככל האפשר של מלט דנטלי. בעזרת טכניקת צפחה, חוקרים יכולים לצפות לאורך זמן בפעילות העצבית על פני זה. עם הרישיון המתאים, הליך זה יכול גם לחול על התבוננות ברשת העצבית בשדה הראייה.