Name: דגימת רקמת שומן תת-עורית אנושית באמצעות טכניקת שאיבת שומן קטנה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: למדו טכניקת ביופסיה תת-עורית לדגימת רקמת שומן אנושית סמוך לטבור. שיטה זו מאפשרת מחקר פיזיולוגי בטוח, כלכלי וכמעט ללא כאבים, עם אפשרות לדגימות מרובות באותו יום.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

למחברים אין מימון להצהיר.

הערה: ועדת המחקר הפולשני או הקליני של אוניברסיטת סטירלינג NHS אישרה את הליך הביופסיה המתואר להלן. כל המחקרים בהליך זה חייבים להיות מאושרים על ידי ועדת האתיקה העצמאית המתאימה. על לוקח הביופסיה להשלים הכשרה פורמלית בטכניקה המתוארת בהתאם לדרישות המוסד שלו. בדרך כלל, זה כרוך בהתבוננות בהדגמה של טכניקת ביופסיית רקמת השומן המתוארת על ידי רופא מוסמך, ולאחר מכן תרגול מפוקח. לאחר שהמתאמן ביצע 10 ביופסיות רקמת שומן בהתנדבות תחת פיקוח, הן ייבדקו על ידי רופא מוסמך כדי להבטיח ידע טוב ותרגול של ההליך. לאחר מכן, הרופא המוסמך מספק לאדם טופס בדיקה חתום.
1. הכנת חדר מעבדה
<ol><li>ודאו כי במעבדה יש חדר פרטי מתאים עם משטחים נקיים ולא נקבוביים הניתנים לניגוב ומיטה נקייה ונוחה (רצוי לא נקבובית) עליה יכול המשתתף לשכב בשכיבה. נקו את כל המשטחים הנדרשים להליך הביופסיה באמצעות תרסיס אתנול 70% ומגבות נייר נקיות. ספקו כריות או כריות נקיות כדי לתמוך במשתתף במידת הצורך.</li>
	<li>שמור פחי סילוק חדים מתאימים ושקיות פסולת ביו-האזרד בהישג יד מהאזור שבו מתבצעת הביופסיה ובהישג יד של האדם הלוקח את הביופסיה.</li>
	<li>הכינו את הציוד הדרוש להליך והכינו על עגלת רפואה כללית חדשה לפני שהמשתתף מגיע למעבדה (איור 1). לקבלת רשימה מלאה של חומרים מתכלים הנדרשים, עיין בטבלת החומרים.</li>
</ol>2. הכנת המשתתפים
<ol><li>יש לוודא שכל המשתתפים נותנים הסכמה מדעת בכתב לפני ביצוע ההליך בהתאם לפרוטוקולים הנדרשים על ידי ועדת האתיקה העצמאית של המוסד. בנוסף, בקשו מהמשתתפים למלא שאלון כתוב כדי לוודא שהם אינם אלרגיים לחומרים המשמשים בהליך (כלומר, ניקל, כרום, הרדמה מקומית, יוד, רכיכות ופלסטרים).</li>
	<li>אשר את זהות המשתתף. ודא שהמשתתף מבין את ההליך שיש לבצע ואת ההשפעות המשניות האפשריות, כולל שטפי דם, כאבים וזיהום (טבלה 1). לאסוף הסכמה בעל פה בנוסף להסכמה מדעת שהושגה בעבר בכתב.</li>
	<li>תאר למשתתף כיצד יבוצע ההליך, תוך שימת דגש על אופן מתן חומר ההרדמה והביופסיה עצמה. ודא שהמשתתף מרגיש בנוח עם ההמשך. הערה: הרדמה תת עורית מקומית תיצור תחושת עקצוץ, בדומה לעקיצת דבורה בעלת משך זמן קצר. משתתפים רבים מדווחים על מתן ההרדמה כחלק הכי לא נוח בטכניקה. לאחר שההרדמה נכנסה לתוקף, המשתתף צריך להרגיש לא יותר מתחושת משיכה קלה במהלך הביופסיה.</li>
	<li>ודא שלמשתתף אין אלרגיות להרדמה המקומית (במיוחד מסוג אמינו-אמיד, אם משתמשים בלידוקאין או דומה), מתכות מסוימות (ניקל וכרום) ורכיכות (אם משתמשים בתמיסות מבוססות יוד). בנוסף, ודא שהמשתתפים אינם נוטלים כל צורה של תרופות נוגדות קרישה.</li>
	<li>ספק למשתתף הזדמנות ללכת ולרוקן את שלפוחית השתן שלו במידת הצורך, כדי להבטיח שהוא לא יצטרך להפריע להליך או לחוות אי נוחות מיותרת בשלב 4.1.</li>
</ol>3. הליך ביופסיה - הנחיות ללוקח הביופסיה
<ol><li>לאחר שהמשתתף שוכב בתנוחת שכיבה, זהה את אתר הביופסיה כ 5-10 ס"מ לרוחב הטבור. הערה: אם המשתתף עובר מספר ביופסיות באותו יום, זהה אתרי ביופסיה בצדדים מנוגדים של הטבור עבור כל ביופסיה. זה יבטיח מרחק מקסימלי בין כל אתר ביופסיה.</li>
	<li>יש לשטוף ידיים עם סבון ומים חמים על פי הנחיות רפואיות סטנדרטיות4.</li>
	<li>הניחו את היריעה הסטרילית על העגלה או פינת העבודה הנקייה, תוך הקפדה לגעת רק בקצוות החיצוניים של הסדין.</li>
	<li>ללבוש כפפות כירורגיות סטריליות באמצעות טכניקה אספטית נכונה. בקש מהעוזר לפתוח את שאר הציוד באופן כזה שהוא ייפול על הסדין הסטרילי המוכן מבלי לגעת / לזהם את הציוד. ודא שהסייען מקפיד לא לגעת בפריטים בעת הסרת כלים מהעטיפות הסטריליות שלהם.</li>
	<li>הנחו את העוזר לפזר כמות קטנה של תמיסה מבוססת יוד על גזה סטרילית כלשהי (מבלי להרוות יתר על המידה את הגזה) על משטח העבודה.</li>
	<li>יש לעקר כ-5-10 ס"מ2 סביב אתר הביופסיה הנבחר באמצעות גזה סטרילית ותמיסה מבוססת יוד. ודא שהעור מנוקה בתנועה ספירלית הנעה החוצה מאתר הביופסיה המוצע. חזור על הליך ניקוי העור פעמיים. הסר עודפי נוזלים (למשל, נוזל מאזור סטרילי) על ידי ניגוב עם גזה סטרילית טרייה.</li>
	<li>יחד עם העוזר, לאשר בעל פה את התוכן של בקבוקון ההרדמה המקומית (2% לידוקאין בפרוטוקול זה) וכי זה בתוך תאריך התפוגה שלה. הנחו את העוזר להחזיק את הבקבוקון הפתוח הפוך ולשאוב 5 מ"ל של הרדמה מקומית לתוך מזרק, באמצעות מחט של 21 גרם. יש להשליך את המחט לפח החד, ולוודא שהמזרק נקי מבועות אוויר.</li>
	<li>החל מחט 26 גרם על המזרק לגרש כל בועות אוויר. בעדינות לצבוט את עור הבטן ואת רקמת השומן, להזיז אותו מן דופן הבטן. לאחר מכן, הכנס את המחט אופקית לתוך הרקמה התת עורית בזווית שאינה עולה על 10° ביחס לפני השטח של העור.<ol><li>למשוך את הבוכנה של מזרק עוד 0.5 מ"ל (כדי להבטיח שהמחט לא תהיה בכלי דם). אם הדם מופיע במזרק, לסגת ולהכניס מחדש את המחט בזווית אחרת.</li>
		<li>יש להרים שכבה בקוטר 2-4 מ"מ כדי להרדים את אזור ההחדרה.</li>
		<li>קדמו את המחט לתוך הרקמה התת-עורית ותנו ~1 מ"ל של לידוקאין בתבנית בצורת מניפה (איור 2), תוך הקפדה על משיכת הבוכנה בכל פעם לפני הזרקת חומר ההרדמה.</li>
		<li>הסר והשלך את מחט 26 G, מרח מחט של 21 G על המזרק, גרש את כל בועות האוויר, ונהל את ~ 4 מ"ל הנותרים של לידוקאין בתבנית בצורת מאוורר (איור 2), תוך הקפדה למשוך את הבוכנה בכל פעם לפני הזרקת חומר ההרדמה.</li>
	</ol></li>
	<li>יש להמתין כ-5 דקות עד שההרדמה המקומית תיכנס לתוקף. השתמש באזמל סטרילי כדי לדחוף בעדינות את אזור הביופסיה ל- i) לוודא שההרדמה המקומית נכנסה לתוקף ו- ii) לזהות את גבולות האזור המורדם. במידת הצורך, המתן דקה או שתיים נוספות ובצע הערכה מחדש.</li>
	<li>לאחר שביעות רצון מכך שההרדמה המקומית עובדת, צבטו בעדינות את העור ואת רקמת השומן (כמו בשלב 3.8) והשתמשו באזמל סטרילי כדי ליצור נקב קטן של 1-2 מ"מ בעור. הערה: זה רק צריך להיות גדול מספיק כדי להקל על הכניסה של מחט 14 גרם חייב להיות קטן מספיק כי אין צורך בתפר כדי לסגור אותו. זה נפוץ עבור כמה דימום להתרחש מנקודה זו ואילך, אשר ניתן לשלוט עם חתיכת גזה סטרילית.</li>
	<li>ראשית, להחיל מחט 14 גרם על מזרק 5 או 10 מ"ל. לאחר מכן, תוך צביטה עדינה של העור ורקמת השומן, מחדירים בהדרגה את המחט דרך הנקב לתוך רקמת השומן בערך במרכז האזור המרדים ובזווית שאינה עולה על 10° ביחס לפני העור. הערה: עבור כל המקרים של התקדמות מחט בשלב 3.11, יש לשמור על זווית מזרק של לא יותר מ-10°.<ol><li>החל יניקה על ידי משיכת הבוכנה בערך 2.5 מ"ל סימן. קח את הביופסיה על ידי הזזת המחט בתנועה מהירה אחורה וקדימה כדי לפרוס שברי רקמת שומן. לאחר כ -30 שניות, סובבו את המחט והמזרק דרך 90° וחזרו על הליך זה כדי לשבור את שברי רקמת השומן, אשר לאחר מכן שואפים לתוך המזרק על ידי היניקה. הערה: ניתן להשתמש בגדלים אחרים של מזרק. חיוני שהחוקר יבחר גודל מזרק המאפשר גם אחיזה טובה במזרק וגם שמירה נוחה על נסיגת הבוכנה לצורך תחזוקת הוואקום. קיימים מזרקי נעילה המתחזקים את הוואקום, מה שיכול לשפר את השליטה במחט ולהפחית את הקושי הנתפס עבור לוקח הביופסיה 5.</li>
		<li>לאחר כ 45-60 שניות של שלב 3.11.1, להסיר את המחט ולרוקן את תוכן המזרק על שכבת גזה המכסה סירת שקילה. ודא כי לומן של המחט פונה כלפי מטה כדי למנוע התזת דם פוטנציאלית.</li>
		<li>חזור על שלבים 3.11.1 ו- 3.11.2 למשך 3 פעמים לכל היותר. בדוק שהמשתתף מרוצה להמשיך לפני כל חזרה על ההליך לעיל.</li>
		<li>בעת ביצוע שלבים 3.11.1 ו- 3.11.2, הנחו את העוזר לעבד ולהכין את הדגימות לניתוח/אחסון (ראה סעיף 5).</li>
	</ol></li>
</ol>4. הליך לאחר ביופסיה
<ol><li>לאחר שהתקבלה דגימה משביעת רצון (כלומר, ~ 200 מ"ג) של רקמת שומן, הנח 1-2 שכבות של גזה סטרילית מעל פצע הניקוב, ולאחר מכן הנח חבילת קרח על אלה, והפעל לחץ מוצק במשך כ -10 דקות כדי לגרום למוסטזיס.</li>
	<li>כאשר מתרחשת המוסטזיס, נגבו כל תמיסה על בסיס יוד / דם מיובש עם גזה סטרילית, ומרחו על האתר חבישת פצע דבק עם פד סופג. בדקו שהמשתתף מרגיש טוב וספקו הוראות בעל פה ובכתב על הטיפול באתר הביופסיה.<ol><li>הדגישו כי המשתתפים צפויים להפגין שטפי דם בימים הקרובים. הודע להם שזה עשוי להיות משמעותי, אם כי זה ממוזער על ידי חבילת הקרח בשלב 4.1 וייפתר ללא השפעות מתמשכות.</li>
		<li>מומלץ כי במידה והמשתתפים חשים אי נוחות/כאב לאחר שחומר ההרדמה נשחק, עליהם ליטול משככי כאבים כגון אקמול בהתאם להוראות על החפיסה, אך להימנע מנטילת משככי כאבים שיש בהם פעילות נוגדת קרישה (למשל, איבופרופן או אספירין).</li>
		<li>הסבירו כי נפיחות, אדמומיות או פריקה מאתר הביופסיה הם אינדיקציות לזיהום. במקרה הלא סביר שבו מופיעים סימנים או תסמינים אלה, הנחו את המשתתף לפנות בדחיפות לקבלת ייעוץ רפואי מרופא או מיחידת תאונות וחירום מקומית. יש ליידע את המשתתף כי אם הוא פונה לייעוץ רפואי, עליו גם להודיע על כך לצוות המחקר. הערה: כצוות מחקר, לא לוקח הביופסיה ולא העוזר יכולים לספק ייעוץ או טיפול רפואי; עם זאת, חשוב שצוות המחקר יהיה מודע ויתעד את כל המקרים של סיבוכים כתוצאה מהליך הביופסיה.</li>
		<li>מומלץ למשתתפים להימנע משחייה או מפעילות מאומצת מדי במשך 48 שעות עד לסגירת אתר החתך.</li>
	</ol></li>
	<li>יש לפנות את כל החדים המשומשים והחומרים המזוהמים לחדים ייעודיים ו/או למיכלי פסולת קליניים.</li>
	<li>נקו את כל המשטחים המשמשים בהליך הביופסיה באמצעות תרסיס אתנול 70% ומגבות נייר נקיות. יש להניח פריטי מצעים חד פעמיים ולא חד פעמיים בשקיות קליניות מתאימות לסילוק או לניקוי, בהתאמה.</li>
</ol>5. עיבוד מדגם - הוראות לעוזר
<ol><li>השתמשו בפינצטה סטרילית וב-0.9% מלח כדי לשטוף את דגימת רקמת השומן כדי להסיר מזהמים נראים לעין (כלומר, דם, כלי דם). לאחר מכן, שקלו את דגימות רקמת השומן באמצעות קשקשים דיגיטליים. פצלו את הרקמה לחתיכות בגודל מתאים לניתוח במורד הזרם והכניסו אותן לצינורות אחסון מתאימים באמצעות פינצטה סטרילית. לטבול את הצינורות המכילים ביופסיות רקמת השומן בחנקן נוזלי ב -190 °C כדי להקפיא הבזק עד שהדגימות מאוחסנות ב -80 °C. הערה: על המסייע להשלים את עיבוד הדגימה במהירות האפשרית, בדרך כלל תוך 3 דקות משאיפת הדגימה, כדי למזער את הפגיעה הפוטנציאלית בדגימה.</li>
</ol>

<ol><li>Beynen, A. C., Katan, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+sampling+and+long-term+storage+of+subcutaneous+adipose-tissue+biopsies+for+determination+of+fatty+acid+composition%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Rapid sampling and long-term storage of subcutaneous adipose-tissue biopsies for determination of fatty acid composition.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 42 (2), 317-322 (1985).</li>
<li>Moran, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diabetes+family+history+and+exercise+training+on+the+expression+of+adiponectin+and+leptin+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Effects of diabetes family history and exercise training on the expression of adiponectin and leptin and their receptors.</a> Metabolism. 60 (2), 206-214 (2011).</li>
<li>Jialal, I., Devaraj, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+adipose+tissue+biology+in+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hormone+Molecular+Biology+and+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous adipose tissue biology in metabolic syndrome.</a> Hormone Molecular Biology and Clinical Investigation. 33 (1), (2018).</li>
<li>WHO Guidelines on hand hygiene in health care: a summary. World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/gpsc/5may/tools/who_guidelines-handhygiene_summary.pdf">https://www.who.int/gpsc/5may/tools/who_guidelines-handhygiene_summary.pdf</a> (2009).</li>
<li>Kettwich, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+device+technologies+for+subcutaneous+fat+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">New device technologies for subcutaneous fat biopsy.</a> Amyloid. 19 (2), 66-73 (2012).</li>
<li>Preston, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+technique%3A+evidence-based+approach+for+patient+safety%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nursing%22%5BJournal%5D)">Aseptic technique: evidence-based approach for patient safety.</a> British Journal of Nursing. 14 (10), 540-546 (2005).</li>
<li>Handiyani, H., Meily Kurniawidjaja, L., Irawaty, D., Damayanti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effective+needle+stick+injury+prevention+strategies+for+nursing+students+in+the+clinical+settings%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Enfermeria+Clinica%22%5BJournal%5D)">The effective needle stick injury prevention strategies for nursing students in the clinical settings: a literature review.</a> Enfermeria Clinica. 28, Suppl 1 167-171 (2018).</li>
<li>Raggio, B. S., Barton, B. M., Kandil, E., Friedlander, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+continued+preoperative+aspirin+use+and+bleeding+complications+in+patients+undergoing+thyroid+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Otolaryngology-Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Association of continued preoperative aspirin use and bleeding complications in patients undergoing thyroid surgery.</a> JAMA Otolaryngology-Head & Neck Surgery. 144, 335(2018).</li>
<li>Cartwright, I. J., Pockley, A. G., Galloway, J. H., Greaves, M., Preston, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+dietary+omega-3+polyunsaturated+fatty+acids+on+erythrocyte+membrane+phospholipids%2C+erythrocyte+deformability+and+blood+viscosity+in+healthy+volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The effects of dietary omega-3 polyunsaturated fatty acids on erythrocyte membrane phospholipids, erythrocyte deformability and blood viscosity in healthy volunteers.</a> Atherosclerosis. 55 (3), 267-281 (1985).</li>
<li>Hemmrich, K., Denecke, B., Paul, N. E., Hoffmeister, D., Pallua, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+isolation+from+adipose+tissue%3A+an+optimized+procedure+for+high+RNA+yield+and+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">RNA isolation from adipose tissue: an optimized procedure for high RNA yield and integrity.</a> Laboratory Medicine. 41 (2), 104-106 (2010).</li>
<li>Chachopoulos, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+subcutaneous+abdominal+adipose+tissue+biopsy+via+a+non-diathermy+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A technique for subcutaneous abdominal adipose tissue biopsy via a non-diathermy method.</a> Journal of Visual Experiments: JoVE. (127), e55593(2017).</li>
<li>Civelek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+human+adipose+microRNA+expression+and+its+consequences+for+metabolic+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of human adipose microRNA expression and its consequences for metabolic traits.</a> Human Molecular Genetics. 22 (15), 3023-3037 (2013).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+influences+adipose+tissue+responses+to+exercise+in+overweight+men%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Feeding influences adipose tissue responses to exercise in overweight men.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 313 (1), 84-93 (2017).</li>
<li>Mendham, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+training+results+in+depot-specific+adaptations+to+adipose+tissue+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Exercise training results in depot-specific adaptations to adipose tissue mitochondrial function.</a> Scientific Reports. 10 (1), 3785(2020).</li>
<li>Carswell, K. A., Lee, M. J., Fried, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+isolated+human+adipocytes+and+isolated+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Culture of isolated human adipocytes and isolated adipose tissue.</a> Methods in Molecular Biology. 806, 203-214 (2012).</li>
<li>Arner, P., Andersson, D. P., Backdahl, J., Dahlman, I., Ryden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+gain+and+impaired+glucose+metabolism+in+women+are+predicted+by+inefficient+subcutaneous+fat+cell+lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Weight gain and impaired glucose metabolism in women are predicted by inefficient subcutaneous fat cell lipolysis.</a> Cell Metabolism. 28 (1), 45-54 (2018).</li>
<li>Mutter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+frozen+and+RNALater+solid+tissue+storage+methods+for+use+in+RNA+expression+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+genomics%22%5BJournal%5D)">Comparison of frozen and RNALater solid tissue storage methods for use in RNA expression microarrays.</a> BMC genomics. 5, 88(2004).</li>
<li>Coleman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+fat+grafting%3A+more+than+a+permanent+filler%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Structural fat grafting: more than a permanent filler.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118, Suppl 3 108-120 (2018).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

הפרוטוקול המתואר והווידאו המשויך אליו מספקים סקירה שלב אחר שלב של טכניקת שאיבת שומן זעירה לקבלת דגימות רקמת שומן תת עורית מאזור הבטן. קבוצת מחקר זו ביצעה בסך הכל 124 ביופסיות במשך 19 חודשים ללא תופעות לוואי בקרב המשתתפים. ההליך בטוח וקשור לסיכון מינימלי למשתתפים או לצוות הביופסיה, בתנאי שאמצעי הבטיחות המתוארים מתבצעים. טכניקה אספטית (כולל פתיחה וחלוקה של ציוד סטרילי מבלי לזהם אותם, הלבשה/הסרה מתאימה של כפפות סטריליות, היגיינת ידיים כללית) חייבת להישמר בכל עת על ידי החוקרים המבצעים את ההליך (כדי למזער את הסיכון לזיהום למש...

רקמת השומן יכולה לספק מידע שימושי על תפקוד חילוף החומרים של בני אדם. רקמת השומן התת עורית האנושית נגישה בקלות. טכניקה למיצוי רקמת שומן תת עורית תוארה לראשונה באמצע שנות ה -801; מאז, הפרוטוקול הראשוני שופר כדי להגדיל את התשואה ולשפר את הסבילות של משתתפי המחקר. רקמת שומן תת עורית ניתן לקבל מאתרים רבים, בדרך כלל מן glutei1 ואזור הבטן2. דגימות מהאחרונים עשויות להיות רצויות יותר מכיוון שהן מספקות מידע בעל ערך רב יותר בהקשרים הקשורים למחלות מטבוליות3.
ביופסיית רקמת שומן תת עורית בשיטת מיני-שאיבת שומן יכולה להתבצע בבטחה וביעילות במסגרת לא קלינית. לאחר הכשרה מתאימה על ידי רופא מוסמך ושימוש בטכניקה אספטית קפדנית, חוקרים יכולים לבצע ביופסיות אלה באופן שגרתי עם סיכון מינימלי הן למשתתפים והן לחוקרים. צוות הביופסיה חייב להיות מורכב משני אנשים לפחות: האדם שיבצע את הביופסיה ועוזר.
על האחראי על הביופסיה מוטלת המשימה לאשר את זהות המשתתף, לבדוק שהמשתתף יכול לעבור את ההליך בבטחה (ראה שלבי פרוטוקול 2.1-2.4 להלן), לוודא שהמשתתף מרגיש בנוח לאורך כל ההליך, להבטיח שמירה על טכניקה סטרילית לאורך כל ההליך, לבצע את ההליך ולספק למשתתף נהלים בעל פה ובכתב לאחר הטיפול. תפקידו של העוזר הוא לטפל ולעבד במהירות את רקמת השומן המתקבלת לצורך ניתוח ו/או אחסון מאוחרים יותר. העוזר גם עוזר בכך שהוא "הידיים הלא סטריליות" ומבטיח שהמשתתף יהיה רגוע לאורך כל ההליך. מטרת הסרטון והמאמר הזה היא לתאר את הליך הביופסיה שלב אחר שלב כדי להשיג בבטחה רקמת שומן תת עורית מאזור הבטן.

<table><tbody><tr><td>פריט: 14 גרם מחט 14 גרם x 3 1/8 אינץ' 210 מ"מ x 80 מ"מ</td><td>B בראון</td><td>4665473</td><td>לכל ביופסיה: 1</td></tr><tr><td>פריט: 21 גרם מחט 21 גרם x 1 1/2 אינץ' 0.8 מ"מ x 38 מ"מ</td><td>טרומו</td><td>AN*2138R1</td><td>לכל ביופסיה:</td></tr><tr><td>2 פריט: 26 G<&br/> 26 גרם x 1/2 אינץ' מחט מיקרולנס 0.45 מ"מ x 13 מ"מ</td><td>BD</td><td>303800</td><td>לכל ביופסיה: 2</td></tr><tr><td>פריט: 5 מ"ל מזרק 5 מ"ל luer</td><td>DB plastipak</td><td>302187</td><td>לכל ביופסיה: 2</td></tr><tr><td>פריט: חבישת פצעים דביקה חבישה נגדית לאחר הניתוח 9.5 x 8.5</td><td>Smith & אחיין</td><td>6600709</td><td>לכל ביופסיה: 1</td></tr><tr><td>פריט: אזמל סטרילי חד פעמי אזמל חד פעמי להב סטרילי מס' 10</td><td>Swann Morton</td><td>/0501</td><td>לכל ביופסיה: 1</td></tr><tr><td>פריט: Icepack BlueDot חבילה לשימוש חוזר חם/קר 26.5 ס"מ x 13.0 ס"מ</td><td>NuCare</td><td>F711</td><td>לכל ביופסיה: פריט אחד</td></tr><tr><td>: תמיסת חיטוי על בסיס יוד Videne Ecolab</td><td>Videne</td><td>3030440</td><td>לכל ביופסיה: q.s</td></tr><tr><td>פריט: לידוקאין 2% w/o אפינפרין לידוקאין 2% הזרקה 5 מ"ל</td><td>B בראון</td><td>3558553</td><td>לכל ביופסיה: 5 מ"ל</td></tr><tr><td>פריט: כפפות לא סטריליות כפפות ניטריל רגישות ללא אבקה Starguard</td><td></td><td>Starguard SG-N-S</td><td>לכל ביופסיה: זוג</td></tr><tr><td>פריט: נתרן כלורי 0.9% נתרן כלריד 0.9% w/v עירוי תוך ורידי BP</td><td>BBraun</td><td>S8004-5384</td><td>לכל ביופסיה: ש.ס.</td></tr><tr><td>פריט: תמיסת ייצוב* תמיסת ייצוב RNAlater</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM7020</td><td>לכל ביופסיה: q.s</td></tr><tr><td>פריט: מלקחיים סטריליים מלקחיים סטריליים</td><td>Rocialle</td><td>RML109-006</td><td>לכל ביופסיה: 1</td></tr><tr><td>פריט: ספוגיות גזה סטריליות ספוגיות לא ארוגים סטריליות 7.5 x 7.5 ס"מ</td><td>Prestige</td><td>1860</td><td>לכל ביופסיה: 5</td></tr><tr><td>פריט: כפפות סטריליות כפפות רפואיות סטריליות ויניל רכות ללא אבקה</td><td>Prestige</td><td>S: P4301 M:P3302 L:P3301</td><td>לכל ביופסיה: זוג</td></tr><tr><td>פריט: צינורות מיקרוצנטריפוגה סטריליים 1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה סטריליים</td><td>StarLab</td><td>I1415-5510</td><td>לכל ביופסיה: q.s</td></tr><tr><td>פריט: גיליון סטרילי נייר לבן רגיל 90 x 90 ס"מ</td><td>Rocialle</td><td>RML 126-216</td><td>לכל ביופסיה: 1</td></tr><tr><td>פריט: סירת שקילה סירות בצורת יהלום</td><td>הית'רו סיינטיפיק</td><td></td><td>HS1427C לכל ביופסיה: 1</td></tr><tr><td>* מציין חומרים</td><td></td><td></td><td></td> אופציונליים</tr></tbody></table>

דגימת רקמת שומן תת-עורית אנושית באמצעות טכניקת שאיבת שומן קטנה

Human Subcutaneous Adipose Tissue Sampling Using a Mini-Liposuction Technique

מחקרים על רקמת שומן מועילים בהבנת מצבים מטבוליים ואחרים. רקמת שומן תת עורית אנושית נגישה. עם הכשרה מתאימה והקפדה על טכניקה אספטית, דגימות שומן תת עוריות ניתן להשיג בבטחה וביעילות בסביבה לא קלינית על ידי חוקרים. לאחר מתן הרדמה מקומית צידית לטבור, מחט 14 גרם המחוברת למזרק 5 או 10 מ"ל מוחדרת דרך העור לרקמה התת עורית. תחת יניקה, המזרק מועבר בתנועה הדדית, חיתוך כדי לבודד שברי רקמת שומן. משיכת הבוכנה מספיקה כדי להבטיח כי שברי רקמת השומן שואפים דרך המחט לתוך המזרק. ביופסיה בודדת יכולה לאסוף כ-200 מ"ג רקמה. טכניקת ביופסיה זו בטוחה מאוד הן למשתתפים והן לצוות המחקר. בעקבות הביופסיה, המשתתפים יכולים לחדש את רוב הפעילויות היומיומיות, אם כי הם צריכים להימנע משחייה ופעילויות מאומצות מדי במשך 48 שעות כדי למנוע דימום מוגזם. המשתתפים יכולים לעבור בבטחה 2 ביופסיות תוך יום אחד, כלומר ניתן ליישם את הטכניקה במחקרי התערבות חריפה לפני-אחרי.

הליך הביופסיה המתואר של רקמת השומן הוא טכניקה יעילה ובעלת סיכון נמוך עבור חוקרים להשיג דגימות רקמת שומן תת עורית ממתנדבים אנושיים. ביצענו 39 ביופסיות רקמת שומן תת עורית באמצעות ההליך המתואר ב-11 נשים בריאות במשקל תקין (גיל, 27.4 ± 3.3 שנים; מדד מסת גוף (BMI), 22.6 ± 1.5 ק"ג2). כל המשתתפים הגיעו למעבדה בין השעות 07:00-10:00 לאחר תקופת צום של 8-12 שעות. תפוקת הדגימה באמצעות הליך ביופסיה של רקמת שומן זו הייתה 192.0 ± 97.1 מ"ג (טווח = 32.8-393.6 מ"ג) (איור 4). לא ראינו קשר בין תפוקת ה...

כתב היד והסרטון הנלווה אליו מדגימים טכניקת ביופסיה מלעורית לקבלת דגימות של רקמת שומן תת עורית מאזורים המקיפים את הטבור. שיטה זו היא דרך זולה ויעילה לחקור מגוון פרמטרים (למשל, ביטוי גנים או חלבונים, פעילות אנזימים, תכולת שומנים) בתוך רקמת השומן.

Studies on adipose tissue are useful in understanding metabolic and other conditions. Human subcutaneous adipose tissue is accessible. With appropriate ...

טכניקה זו מתאימה במיוחד לכל מחקר המיישם תכנון לפני ואחרי המחקר או רוצה לאפיין אוכלוסייה מסוימת ואינו דורש כמויות מוגזמות של רקמות לאחר הגוף. היתרונות העיקריים הם שהטכניקה חסכונית יחסית וכמעט נטולת כאבים. ניתן לבצע מספר ביופסיות על אותו משתתף באותו יום.טכניקה זו יכולה לסייע בהבנת הפיזיולוגיה של רקמת השומן, ובמיוחד בהבנת מחלות ותפקוד מטבולי. כדי להתחיל, ודא כי המעבדה יש חדר פרטי כראוי עם משטחים נקיים, לא נקבובי, ומיטה נוחה ונקייה שעליה המשתתף יכול לשכב במצב שכיבה. לאחר מכן באמצעות תרסיס 70% אתנול ומגבות נייר נקיות מנקים את כל המשטחים הדרושים להליך הביופסיה.במקום הבא פחים חד פעמיים חד-פעמיים ושקיות מותן ביו-האזרד בהישג יד מהאזור בו תבוצע הביופסיה והאדם הנוטל את הביופסיה. לפני שהמשתתף מגיע למעבדה, הגדר את הציוד הדרוש להליך על עגלה רפואית כללית שזה עתה נוקתה. לאחר קבלת הסכמה מדעת בכתב, בקשו מהמשתתף למלא שאלון בכתב כדי לוודא שהוא אינו אלרגי לחומרים המשמשים בהליך זה.לאחר אישור מילולי של זהות המשתתף, ודא שהמשתתף מבין את ההליך שיש לבצע ותופעות לוואי משניות אפשריות כולל שטפי דם, כאבים וזיהום. בנוסף להסכמה מדעת בכתב יש ליטול גם הסכמה בעל פה מהמשתתף. לאחר מכן, תאר את ההליך למשתתף תוך הדגשת אופן מתן ההרדמה והביופסיה.כמו כן, ודא כי המשתתף נוח עם המשך. שוב, ודא כי למשתתף אין אלרגיות להרדמה המקומית, מתכות מסוימות ורכיכות וכי המשתתף אינו נוטל כל צורה של תרופות נוגדות קרישה. ברגע שהמשתתף שוכב במצב שכיבה לזהות את אתר הביופסיה כ 5 עד 10 ס"מ לרוחב הטבור.לאחר מכן, לשטוף ידיים עם סבון ומים חמים על פי הנחיות רפואיות סטנדרטיות. והניחו סדין סטרילי על העגלה או פינת העבודה הנקייה תוך הקפדה לגעת רק בקצוות החיצוניים של הסדין. ללבוש כפפות כירורגיות סטריליות באמצעות טכניקה אספטית נכונה.לאחר מכן יש את העוזר לפתוח את שאר הציוד כך שהוא נופל על הסדין סטרילי מוכן ללא כל נגיעה או זיהום. ודא שהסייען אינו נוגע בפריטים בעת הסרתם מהעטיפות הסטריליות שלהם. לאחר מכן, להורות לעוזר להוציא כמות קטנה של תמיסת יוד על בסיס גזה סטרילית כלשהי.לאחר מכן לחטא את העור בתנועה ספירלית הנעה החוצה מאתר הביופסיה המוצע. יש להסיר את עודפי הנוזלים, אם בכלל, על ידי ניגוב בגזה סטרילית טרייה. אשר מילולית את התוכן ואת תאריך התפוגה של בקבוקון ההרדמה המקומי עם העוזר.לאחר מכן הנחו את העוזר להחזיק את הבקבוקון הפתוח הפוך. ובאמצעות מחט 21 מד לשאוב חמישה מיליליטר של הרדמה מקומית לתוך מזרק. השליכו את המחט לתוך הספין החד וודאו שהמזרק נקי מבועות אוויר.לאחר מכן, להחיל מחט 26 מד על מזרק לגרש כל בועות אוויר. לאחר מכן צובטים בעדינות את עור הבטן ורקמת השומן ומרחיקים אותו מדופן הבטן ומחדירים את המחט אופקית לתוך הרקמה התת עורית בזווית שאינה עולה על 10 מעלות ביחס לפני העור. לאחר מכן, למשוך את הבוכנה של מזרק ועוד 0.5 מיליליטר.אם הדם מופיע במזרק, למשוך ולהכניס מחדש את המחט בזווית אחרת, ולאחר מכן להרים bleb בקוטר שניים עד ארבעה מילימטרים כדי להרדים את אזור ההחדרה. מקדמים את המחט לתוך הרקמה התת עורית ונותנים מיליליטר אחד של לידוקאין בתבנית בצורת מניפה. יש להסיר ולהשליך את מחט ה-26.לאחר מכן יש למרוח מחט של 21 מדים על המזרק ולתת את ארבעת המיליליטרים הנותרים של לידוקאין בתבנית בצורת מניפה. לאחר חמש דקות שימוש באזמל סטרילי, יש לדחוף בעדינות את אזור הביופסיה כדי לוודא שההרדמה המקומית נכנסה לתוקף ולזהות את גבולות האזור המורדם. לאחר מכן המתן דקה או שתיים נוספות ובצע הערכה מחדש.לאחר מרוצים כי ההרדמה עובדת, בעדינות לצבוט את העור ואת רקמת השומן ולעשות ניקור קטן אחד עד שני מילימטר בעור. לאחר מכן, להחיל מחט 14 מד על מזרק חמישה או 10 מיליליטר. לאחר מכן, תוך כדי צביטה עדינה של העור ורקמת השומן, יש להחדיר בעדינות את המחט דרך הנקב לתוך רקמת השומן בערך במרכז האזור המרדים בזווית שאינה עולה על 10 מעלות ביחס לפני העור.החל יניקה על ידי משיכת הבוכנה בערך 2.5 מיליליטר סימן. לאחר מכן לאסוף את הביופסיה על ידי הזזת המחט בתנועה מהירה, אחורה וקדימה כדי לפרוס שברי רקמת שומן. לאחר 30 שניות, סובבו את המחט והמזרק דרך 90 מעלות וחזרו על הליך זה כדי לשבור את שברי רקמת השומן אשר לאחר מכן שואפים לתוך המזרק על ידי יניקה.לאחר כדקה, הסר את המחט ורוקן את תוכן המזרק על שכבת גזה המכסה סירה דועכת המבטיחה כי לומן המחט פונה כלפי מטה כדי למנוע התזת דם פוטנציאלית. חזור על הליך איסוף הביופסיה לכל היותר שלוש פעמים כפי שהוכח, ובדוק שהמשתתף מרוצה להמשיך לפני שיחזור על ההליך בכל פעם. בעת איסוף הדגימות הנוספות, הנחו את העוזר לעבד ולהכין את הדגימות שנאספו בעבר לניתוח או לאחסון.עם איסוף דגימות משביעות רצון מניחים שכבה אחת עד שתיים של גזה סטרילית על פצע הניקוב. לאחר מכן מניחים חבילת קרח ומפעילים לחץ בחוזקה במשך כ-10 דקות כדי לגרום להומאוסטזיס. לאחר התרחשות הומאוסטזיס נגבו כל תמיסה על בסיס יוד או דם יבש עם גזה סטרילית, מרחו על האתר חבישת פצע דבק עם פד סופג.לאחר בדיקה כי המשתתף מרגיש טוב לספק הוראות בעל פה ובכתב על טיפול באתר ביופסיה, תוך הדגשה כי המשתתפים צפויים להפגין כמה שטפי דם בימים הקרובים. יש לפנות את החדים המשומשים והחומרים המזוהמים לתוך חדים ייעודיים או מיכלי פסולת קלינית ולאחר מכן לנקות את כל המשטחים המשמשים בהליך הביופסיה באמצעות 70% אתנול ולהניח פריטים חד פעמיים ולא חד פעמיים של מצעים בשקיות קליניות מתאימות או סילוק או ניקוי בהתאמה. במחקר זה בוצעו 39 ביופסיות רקמת שומן תת עורית ב-11 נקבות בריאות במשקל תקין.באמצעות הליך זה, התקבלו בממוצע 192 מיליגרם של דגימה. בחירת אתר ביופסיה קרוב מדי לטבור עלולה להוביל לחבלות נרחבות שלא לצורך. רשימה של סיבוכים שחווים המשתתפים בעקבות ביופסיות רקמת השומן מסוכמת כאן.ודא שהעור מכווץ בכל עת כדי למנוע מהמחט לנקב את שכבת השריר העמוקה יותר או לנקב דרך הצד השני של העור. תרגול מושלם מבטיח כי האימון מבוצע על ידי רופא מיומן לפני שהוא מנסה אותו על המשתתפים בפועל. וכאשר מחדירים את המחט כדי לשבור את רקמת השומן ודא כי האדם עושה את הביופסיה הוא בטוח מספיק כדי לשבור את הדגימה.

human-subcutaneous-adipose-tissue-sampling-using-mini-liposuction

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

אנו מציגים את הטכניקות הנדרשות לבידוד מקטע כלי הדם הסטרומלי (SVF) ממאגרי רקמות שומן מפשעתיים (תת עוריים) ופריגונדלים (קרביים) של עכברים כדי להעריך את ביטוי הגנים והפעילות הקולגנוליטית שלהם. שיטה זו כוללת העשרה של תאי גזעשמקורם בשומן גבוה Sca1 (ASCs) באמצעות הפרדת תאים אימונומגנטיים.

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1<sup&gt; גבוה</sup&gt; בתאי גזע שמקורם שומן (ASCs)

אנחנו סטנדרטיזציה ביופסיית רקמת שומן בבטן באמצעות שיטה שאינה diathermy לבצע בהרדמה מקומית. שלושה מקרים של פעולה-מאוחרת מופרזת דימום פעולות 115 (2.61%) אירעה. אנו מסיקים כי רקמת שומן בטן כירורגית ביופסיה באמצעות שיטה diathermy שאינו ניתן בבטחה להחיל על גברים בריאים.

שיטה לביופסיה רקמת השומן התת עורית בטן באמצעות שיטה בלתי-diathermy

מטרת מאמר זה היא להציג הליך שלב אחר שלב כדי לאסוף רקמות adipose לבן שונים של עכברים, לעבד את דגימות השמן ולחלץ את ה-RNA.

העכבר רקמת שומן איסוף ועיבוד לניתוח RNA

הבידול של adipocytes לבן ובייז של רקמת שומן אבות כלי הדם נושא פוטנציאל שיפור חילוף החומרים ההשמנה. נתאר פרוטוקולים של CD34 + CD31 + בידוד תאי אנדותל של שומן אנושי ואת הבאים במבחנה הרחבה, בידול לתוך לבן ובייז adipocytes. הם דנו מספר יישומים במורד הזרם.

בידוד, הרחבה, אינדוקציה Adipogenic CD34 + CD31 + תאי אנדותל של אדם עם פגיעה ו התת-עורית שומן

. בעזרת מכשיר מערכת סגור שיטה חדשה זו מאפשרת בידור של אשכולות תת-מילימטר של רקמת האדיפוז המתאימים להשתלה vivo, בתרבות החוץ-גופית ובבידוד תאים נוסף ואפיון.

מיקרו-הפיצול האנושי של רקמת אדיפוז לפנוטיפים של תאים ואפיון

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מתודולוגיה משופרת לבידוד ADSC וכתוצאה מכך תפוקה תאית אדירה עם רווח בזמן בהשוואה לספרות. מחקר זה מספק גם שיטה פשוטה להשגת מספר גדול יחסית של תאים בני קיימא לאחר שימור בהקפאה לטווח ארוך.

טכניקה לקבלת תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן ואפיון שבר כלי דם סטרומלי בשימור בהקפאה ארוכת טווח

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט המתאר את השימוש בשברים מיקרו-וסקולריים שבודדו מרקמת מכרסם או מרקמת שומן אנושית כגישה פשוטה להנדסת רקמת שומן פונקציונלית בצבע בז' וסקולרית.

תרבית תלת מימדית של רקמת שומן תרמוגנית וסקולרית מקטעים מיקרו-וסקולריים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שיכול להפוך רקמת שומן אוטולוגית לחומרים מרכיבי שומן שונים בעלי תכונות ותפקודים פיזיקוכימיים שונים.

פיצול רקמת שומן חדשני להפיכת שומן לרכיבים מיוחדים

בדוח וידאו זה, אנו מראים את היישום של הדמיית זוהר של צ'רנקוב (CLI) עבור רקמת שומן חומה בין-שכמה בעכברים בתנאים פעילים ומדוכאים.

Cerenkov הארת ההדמיה של רקמות Interscapular בראון שומן

למדו טכניקת ביופסיה תת-עורית לדגימת רקמת שומן אנושית סמוך לטבור. שיטה זו מאפשרת מחקר פיזיולוגי בטוח, כלכלי וכמעט ללא כאבים, עם אפשרות לדגימות מרובות באותו יום.

דגימת רקמת שומן תת-עורית אנושית באמצעות טכניקת שאיבת שומן קטנה

גלה סרטונים נוספים