הקלטה של מערך Microelectrode של קצב הירי של צמת Sinoatrial כדי לזהות פגמים מהותיים בקצב הלב בעכברים

מדידת קצב לב מהותי היא אינדיקטור חשוב לבריאות הלב. טכניקה זו מודדת במדויק שיעור זה תוך אי הכללת רוב ההשפעות המבלבלות על צומת sinoatrial. הקלטת MEA של קצב לב מהותי לוכדת נתוני קצב ירי מדויקים הדומים להקלטות של תא בודד ללא הכשרה אלקטרופיזיולוגית נרחבת.

אנשים המשתמשים בטכניקה זו עשויים להיאבק כדי להשיג תכשירי רקמות בריאים בניסויים מוקדמים, לכן תרגלו את הניתוח ומיטבו את המאגרים והגדרות איסוף הנתונים לפני תחילת איסוף הנתונים האמיתי. מדגים את ההליך יהיו רופאים מאן סי ופרבין קומאר, חוקרי פוסט דוקטורט במעבדה שלי. התחל על ידי החזקת העור של העכבר המתת חסד עם hemostat ולהשתמש במספריים כירורגיים כדי להפוך חתך רוחבי בעור ממש מתחת לתחתית בית החזה מן הקשת העלות השמאלית לקשת קוסטל ימין.

השתמש במספריים כירורגיות כדי לחתוך את צפק ולהפריד בזהירות את הכבד מן הסרעפת מבלי לחתוך את הכבד כדי למנוע דימום מוגזם. תחשוף את הסרעפת לאורך בית החזה כדי לחשוף את חלל בית החזה. השתמש במספריים הניתוחיות כדי לחתוך את הקירות לרוחב של בית החזה משולי הקשתות הקוסטליות עד לבריחיים כדי לחשוף את הלב, ואז השתמש במחט מזרק 23 מד כדי להצמיד את בית החזה על הכתף.

השתמש פיפטת העברה כדי להפיל תמיסה מלאה הפרין חם של טיירוד על הלב כדי לשמור אותו לח. החזק את הריאות עם מלקחיים גראפה עדינים במיוחד ולחתוך את קנה הנשימה עם מספריים כירורגיים כדי להסיר את הריאות. להסרת הלב, להחזיק את פסגת הלב עם מלקחיים גראפה עדינים במיוחד לחתוך את aorta ו vena קאווה נחות עם מספריים כירורגיים.

מעבירים את הלב לצלחת פטרי המכילה אלסטומר סיליקון נרפא ומשתמשים בפשת העברה לרחצה בלב עם שניים עד שלושה מיליליטרים של פתרון שלם של טיירוד. מחברים את פסגת הלב לצלחת עם סיכת ניתוח. החזק את הוועד הנבוב הנחות עם מלקחיים לכריתת דמה דומונט 2.

הכנס מחט מזרק 22 מד דרך צעעת הנתלה הנחותה והנעלה כדי לאתר את מיקומם באטריום הימני, אשר מזהה גם את המיקום המשוער של צומת sinoatrial. החזק את התוספתן הימני של האיתורים עם מלקחיים לכריתת למינקטומיה של דומונט 2, והכניס סיכת ניתוח דרך התוספתן הימני של האיתוזים כדי להחזיק אותו במקומו. חזור על אותו הליך עבור תוספת האיזותר השמאלית, ולאחר מכן להסיר את מחט המזרק המשתרעת על הוועד הנרק.

השתמש במספריים Castroviejo כדי להסיר את פסגת הלב על ידי ביצוע שרף רוחבי על פני החדרים לשחרור הדם מהלב, ולאחר מכן לשטוף את הלב על ידי הוספת תמיסה מלאה של טיירוד. השתמש במספריים Castroviejo לחתוך לאורך מחיצת atrioventricular עד atria מופרדים מן החדרים ולשמור על החתך קרוב יותר לחדר. חותכים לאורך המחיצה הבין-אטראלית כדי להסיר את האטריום השמאלי.

מניחים את סיכות הפירוק בפריפריה של האטריום הימני כדי להפוך אותו לשכב שטוח. הסר כל שומן, כלי דם, או רקמה הנותרים מן האטריום באמצעות מספריים Castroviejo ולאתר את צומת sinoatrial באטריום הימני. הוסף את הפתרון של טיירוד למודל פתרון הקלט והדליק את זרימת גז הקרבוגן כדי לחמצן את הפתרון של טיירוד.

הגדר את המשאבה peristaltic ל 25 סל"ד, אשר נותן קצב זרימה של שני מיליליטר לדקה. לאחר הפעלת המשאבה, ודא כי המאגר אינו דולף מהמערכת ולהגדיר את בקר הטמפרטורה ל 37 מעלות צלזיוס. השתמש דומונט 55 מלקחיים כדי להעביר את הרקמה המנותחת מצלחת פטרי לנתח על רשת מערך microelectrode.

מקם בעדינות את הרקמה עם מברשת צבע רכה כדי לכסות את אזור הצומת סינואטריאלי של רשת האלקטרודה. לאחר מכן מניחים את הרשת מעל הרקמה באמצעות מלקחיים העצם או כל מלקחיים מעוקלים. באמצעות מלקחיים העצם, למקם את עוגן נבל על הרשת להחזיק את הכל במקום.

מסדרים את צלחת מערך המיקרו-ectrode על צלחת המחבר. מניחים בזהירות את מכסה ההדבקה על צלחת מערך המיקרו-ectrode מבלי להפריע לעוגן פרוסת הנבל ומאבטחים את מרווח ההדבקה עם סרט הדבקה. הפעל את המגבר והגדר זרימת עבודה עבור ההקלטה בתוכנה.

בחר beat_recording. תבנית מופלו. פתח אותו והגדר את מספר העקבות, משך המעקב, מרווח המעקב, מתח הכניסה, קצב הדגימה ופרמטרים אחרים להקלטה בהתאם לתנאי ההקלטה הרצויים.

לחץ על לחצן ההקלטה וההפעלה כדי להתחיל את ההקלטה ולרכוש נתונים במשך 10 עקבות של משך של דקה אחת עם שתי דקות של מרווחים בין המעקבים. השהה את המשאבה והעבר את צינורות זרימת המשאבה מפתרון ההקלטה הרגיל לפתרון של טיירוד המכיל את התרופה הרצויה לפי בחירה. הפעל מחדש את המשאבה וחידש את ההקלטה.

ברגע שהתמיסה של טיירוד חדורה בתרופה הגיעה לרקמה, תקליט 10 עקבות באותו אופן שנעשה בעבר להקלטות הבסיסיות. קח תמונה סופית של מיקום הרקמה במערך microelectrode. פתח את קובץ הנתונים המוקלט שנשמר בתבנית ניתוח תדירות פעימה של תוכנת הניתוח.

לחץ על ההפעלה ואפשר להקלטה כולה לפעול להצגה חזותית של נתונים ולאחר מכן הקצה פרמטרי ניתוח מתאימים. בחר את הערוצים שייכללו בניתוח והגדר את ערכי הסף הרצויים של משרעת או משרעת מינימה לזיהוי שיא אוטומטי של צורת גל. לחץ שוב על סמל ההפעלה כדי להפעיל מחדש את ערכת הנתונים ולאשר כי פרמטרי הניתוח מתאימים לחילוץ ספייק.

לצורך ניתוח, זהה את שלושת העקבות היציבים ביותר ברציפות המציגים קצב מכות יציב עבור כל עקבות ברוב הערוצים במהלך תקופת הבסיס של הניסוי ועוד שלושה עקבות יציבים רצופים במהלך תקופת החשיפה לתרופה. לחץ על סמל ההפעלה וההקלטה כדי להתחיל בניתוח. הנתונים נאספו מעכבר שוויצרי שחור בן 45 יום עבור מדידת תדירות פעימות הצומת הסינוטריאלית.

צורות הגל עם צורות ומשרות שונות נצפו בערוצים שונים וכל הערוצים הראו מרווחי בין-ספייק זהים ותדרי ירי. עם זאת, מידת המגע רקמה עם האלקטרודה עשוי גם להשפיע על המאפיינים צורת הגל כגון משרעת. מתוך 10 העקבות המתועדים, שלושת הערוצים הרצופים עם תדירות פעימה יציבה ומרווח בין-ספייק נבחרו לניתוח נוסף.

דפוסי ספייק שחולצו רע צריך להיעדר, אבל אם הנוכחי מושפעים רעש או לא יציב. צורות הגל המתאימות לפעימות לב בודדות משקפות פעילות עשיית קצב לבבי מהותית. מערכת מערך microelectrode מאפשר יישום קל של סוכני תרופות לנתח את ההשפעות הפרמקולוגיות.

שיעור הירי המהותי של שלוש עקבות נבחרות בכל 64 הערוצים נמצא כ-320 פעימות לדקה בנתוני הדגימה. המבוא של 4-aminopyrimidine הגדיל את מרווחי interspike כצפוי, אשר הפחית את תדירות הקצב מ 320 ל 210 פעימות לדקה. כדי לאסוף נתונים אמינים לניתוח, חשוב לאשר כי הרקמה בריאה במהלך ההקלטה על ידי אימות כי עקבות יציבים ועומדים בקריטריונים הסטנדרטיים.

MEAs יכול לשמש כדי להקליט פעילות לב באזורים אחרים של הלב, המאפשר אפיון מפורט ספציפי לאזור כי הוא נוח ללמוד את ההשפעות של מניפולציה גנטית פרמקולוגית.