פיתוח רצועה חיסונית של זרימה רוחבית לגילוי מהיר וכמותי של תרכובות מולקולות קטנות

הנוהל מתאר את הכנת הזהב הקולואידי והרכבה של הרצועות החיסוניות. ראשית, חומצה כלורואורית ונתרן סיטראט שימשו לסינתזה של זהב קולואידי. נתרן סיטראט נוסף תמיסה חומצה כלורואורית מבושל כדי לקבל זהב קולואידי עם גודל החלקיקים המתאים.

סינתזה, הנוגדן לזהב הקולואידי מצומד. לאחר צנטריפוגה, חלקיקי זהב קולואידי הומסו בתמיסה מתאימה ולאחר מכן resuspended כדי לקבל פתרון זהב קולואידי. שקועים בקרום סיבי הזכוכית לתוך ההטיה כדי להכין את כרית הצומד.

זרוק אנטיגן מלאכותי ונוגדנים משניים על קרום NC כמו קו T וקו C. חבר את קרום NC, קרום סופג, כרית מדגם, ואת קרום סיבי הזכוכית לתוך לוח PVC בהתאמה. חותכים את לוח הנייר המורכב לרצועה ברוחב 3.5 מילימטרים.

תדביקו תמיסה של חומצת כלוריד זהב ו-1%sodium citrate בהתאמה. מפעילים את המערבב המגנטי ומניחים את הבקבוקון על מערבל. מוסיפים 120 מיליליטר מים מזוקקים לבקבוקון עגול ומחממים אותו לרתיחה על מערבב מגנטי תרמוסטטי.

שמור רותחים במהירות להוסיף 0.5 מיליליטר של חומצה כלורוארית אחוז מלא וחמישה מיליליטר של 1% נתרן ציטוטט. המשך חימום במשך חמש עד 10 דקות. שים לב לצבע הפתרון המשתנה מצהוב חיוור לאדום יין.

לכבות את הכוח של המערבל המגנטי התרמוסטטי, להתקרר לטמפרטורת החדר ומניחים את התערובת לבקבוק נקי. חנות בארבעה סנטיגרד. חלקיקי הזהב מראים את אפקט טינדל.

הגודל והמורפולוגיה של חלקיקי הזהב נקבעו על ידי ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה והדמיה מיקרוסקופ אלקטרונים שידור. הוסף 100 מיקרוליטרים פתרון נתרן כלורי לשמונה צינורות. התאימו את פתרונות הזהב הקולואידי ל-pH 5 עד 12 באמצעות 0.1 מול לליטר אשלגן פחמתי.

הוסף 100 מיקרוליטרים של תמיסת זהב קולואידי לשמונה צינורות המכילים נתרן כלורי. עמדו על עמוד מספר דקות לאחר המיזוג. שים לב לשינוי הצבע של כל פתרון צינור ולתעד את הצינור שנשאר אדום.

בחר את ערך ה- pH עם הכמות הנמוכה ביותר של אשלגן פחמתי מוסף וצבע פתרון יציב כערך ה- pH האופטימלי להכנת מצומד. התאים את אותה גישה. התבונן בשינוי הצבע ותיעד את הצינור שנשאר אדום.

בחר את כמות הנוגדנים עם הריכוז הנמוך ביותר של mAB וצבע פתרון יציב ככמות mAB אופטימלית. קח 10 מיליליטר תמיסת זהב קולואידי ולהשתמש 0.1 מול לליטר אשלגן פחמתי כדי להתאים את הפתרון לערך ה- pH האופטימלי. מוסיפים לאט MABs SSD עם הריכוז המתאים ומנערים בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות.

צנטריפוגות התערובת ב 2000 סל"ד במשך 20 דקות בארבעה centigrade. הסר את המשקעים המכילים זיהומים של זהב קולואידי מזורם. צנטריפוגות התערובת ב 10, 000 סל"ד במשך 40 דקות.

זרוק את סופר-טבעי. המשקעים הוא הונאת MAB זהב קולואידי. הוסף חומצה הידרוכלורית טריס, BSA, Tween 20, ו PEG 20, 000, ולאחר מכן לערבב היטב כדי להכין חוצץ resuspension.

הוסף את מאגר ההפצה מחדש ונתק את המשקעים. רצועת החומר הממברנה, כולל קרום תאית זכוכית, קרום תאית פוליאסטר, ואת לוח PVC. חומר הממברנה, צריך לעקוב ולהעריך על ידי מיקרוסקופ סטרילי כדי להיפטר inhomogeneity.

ראשית, למקם את קרום NC על לוח PVC שני סנטימטרים מקצה החלק של הלוח. שנית, זרוק שני מיליגרם למיליליטר SSd-BSA על קרום NC בשני סנטימטרים מהקצה העליון כקו בדיקה ושחרר 1.5 מיליגרם למיליליטר זהב אנטי עכבר IgG על קרום NC בשני סנטימטרים מהקצה התחתון כקו בקרה. חבר את כרית הספיגה לגיליון PVC מעל קרום NC וחפיפה עם קרום NC בשני מילימטרים.

חותכים את קרום סיבי הזכוכית לאורך חמישה ס"מ ורוחב של שני ס"מ ומנצלים כרפד מצומד. שקועים בקרום סיבי הזכוכית לתוך ננו-חלקיקי הזהב mAB מצומדים. להשרות במשך זמן מה כדי להפוך את חלקיקי הזהב mAB ספיגה.

יבש את הממברנה הרחבה באינקובטור ב 37 מעלות. הדבק את כרית מצומד מטופל מראש מתחת לקרום NC ואת האורך החופף עם קרום NC צריך להיות 0.1 ס"מ. חותכים את קרום ההיתוך3 ל באורך 1.8 ס"מ ורוחב 3.5 ס"מ ולהשתמש כרפד המדגם.

לאחר מכן, מניחים את משטח המדגם על לוח PVC וחופפים עם כרית מצומדת בשני מילימטרים. חותכים, מרכיבים את לוח הנייר לרצועות ברוחב 3.5 מ"מ באמצעות מכונת חיתוך וקומפקטיים באמצעות מערכת למינציה אצווה. לבסוף, מניחים את רצועות הבדיקה לתוך הקליפה.

אוטמים אותם בשקית רדיד אלומיניום המכילה חיטוי והחנות הרחק מהאור. ICS מורכב כעת. זרוק 50 מיקרוליטרים של פתרון מדגם על חור המדגם כדי לצפות בתהליך הכרומטוגרפיה.

לאחר מכן, נתח את הרצועות באמצעות קורא רצועות נייד. המחשב יכול לספק את היחס בין שורת הבדיקה לקו הבקרה. הערך את הספציפיות, הרגישות, יכולת החזרה והיציבות של מבחן ICS.

פתרונות הזהב הקולואידיים המוכנים נקראו. ניתוחי מיקרוסקופ אלקטרונים שידור גילו כי החלקיקים היו polyhedral בצורתם חולקו באופן אחיד עם קוטר ממוצע של 14 ננומטר. תמונות מיקרוסקופ אלקטרונים שידור ברזולוציה גבוהה הראו דפוס שוליים רציף עם מרווח של 0.117 ננומטר של חלקיקי זהב.

ספיגה אולטרה סגולה הנראית ציינה כי בגדלים שונים של חלקיקי זהב קולואידליים ניתן להשיג על ידי שינוי הפרופורציה של נתרן סיטראט וחומצה כלורוארית. בניסוי הכמותי, הרצועות עם תוצאות הבדיקה של saikosaponin D נסרקו באמצעות קורא ICS נייד. חישבנו עקומה סטנדרטית על ידי התייחסות לא ריכוזים של saikosaponin D לספיגה המתאימה בכל ריכוז.

לאחר חקירה מתודולוגית, ניתן ליישם את השיטה לגילוי כמותי וחצי איכותי של תרכובות מולקולות קטנות. הליך זה כולל הכנת זהב קולואידי, סינתזה של חלקיקי זהב mAB מצומדים, הרכבת הרצועה וחקירה מתודולוגית. עבודה זו מספקת פרוטוקול מפורט לפיתוח רצועה חיסונית לשימוש בזיהוי מהיר וכמותי של מולקולה קטנה.

לאחר צפייה בסרטון זה אני מקווה שיש לך הבנה טובה להכנת הרצועה החיסונית. תודה שצפיתם ובהצלחה על הניסויים שלכם.