מודל בעלי חיים גדולים להערכת יעילות הטיפול הגנטי בלב איסכמי

טיפול גנטי בשריר הלב למחלות לב איסכמיות טומן בחובו הבטחה גדולה לטיפולים עתידיים. כאן, אנו מציגים מודל חייתי גדול להערכת היעילות של ריפוי גנטי בלב איסכמי.

השיטות ושיטות ההדמיה המשמשות בפרוטוקול זה מהוות תמונה מצוינת של הבטיחות והיעילות של ריפוי גנטי בלב איסכמי לפני שממשיכים לניסויים קליניים. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם הפולשנות הנמוכה של מודל האיסכמיה, אלא גם מיקוד מדויק של הטיפול הגנטי לאזורים היפוקינטיים אך עדיין קיימא של הלב. התחל על ידי ביצוע אקוקרדיוגרפיה transthoracic לפני ניתוח איסכמיה, העברת גנים, המתת חסד כדי להעריך כל נוזל קרום הלב לגילוי ולקבוע את מתח שריר הלב.

הניחו את המתמר בחלל הבין-קוסטלי השלישי או הרביעי מתחת לבית השחי של החזיר עם סמן המצביע על עצם החזה של החזיר לצורך גישה למבט על ציר קצר פאראסטרנלי ברמת המסתם המיטרלי, שריר הפפילרי ורמות האפיקל. לאחר מכן לחץ על רכישה כדי לשמור קליפ. לביצוע אנגיוגרפיה כלילית ממש לפני ניתוח איסכמיה יש להשתמש בצנתר 6-F בהנחיה פלואורוסקופית עם חומר ניגוד יוד כדי לדמות את העורק הכלילי הימני, העורק הכלילי העולה השמאלי והעורק היורד הקדמי השמאלי.

עבור הדמיית cine במזרק האוטומטי, הגדר את משך הבולוס לשלוש שניות, ואת הנפח הכולל עבור 21 מיליליטר, ולאחר מכן לחץ יחיד, וכן כדי לתת חומר ניגוד יוד לחדר השמאלי באמצעות צנתר זנב חזיר 5-F. בצע הדמיית cine של החיה במנוחה ולאחר מכן לתת dobutamine תוך ורידי מינונים מסלימים עבור השראת מתח. לאחר שהושג דופק יעד של 160 פעימות לדקה, מבצע הדמיה ומוציא את צנתר זנב החזיר.

כדי לחשב את מקטע השליפה פתח את תוכנת המדידה, בחר ניתוח חדרי של התמונה המדוברת. גלול בתמונה כדי לבחור מסגרת זמן, אחת בדיאסטולה ואחת בסיסטולה, ולאחר מכן בחר כלי לציור קווי מתאר חדריים של כל מסגרת זמן. לגרימת איסכמיה כרונית של שריר הלב, 14 יום לפני העברת הגנים, הניחו סליל לעורק הכלילי השמאלי, החליקו את סטנט צוואר הבקבוק לעורק הכלילי השמאלי, והניחו את הסטנט באופן מרוחק לאלכסון הראשון.

ניפוח הסטנט ללחץ נומינלי בעורק, באמצעות אינדפלטור עם יחס סטנט לומן של 1.3 לעיגון צוואר הבקבוק במקומו. לאחר 15 שניות נוספות, לרוקן את הסטנט, למשוך את הציוד מן העורק, ולהבטיח את המיקום הנכון של סטנט צוואר בקבוק על ידי אנגיוגרפיה. לאחר אנגיוגרפיה ומדידות תפקודיות בהנחיה פלואורוסקופית יש להכניס קטטר מיפוי לחדר שמאל דרך מעטפת הירך למיפוי אלקטרו אנטומי, ולאסוף לפחות 100 נקודות מהחדר השמאלי, וללחוץ על קבל כדי לאשר נקודה.

במפה הסופית, לצורך כדאיות, השתמש במתח חד קוטבי מעל חמישה מיליוולטים כקריטריון. ועבור היפוקינזיה, בחר קיצור ליניארי מקומי נמוך ככל האפשר, לפחות נמוך כמו 12% אבל עדיף מתחת 6% לאחר המתת חסד החיה, לקצור את הלב מחלל בית החזה. לאחר שטיפת הלב שנקצר, הניחו מחט באורך 18 מד מעל המסתם האאורטלי וחברו את המחט למשאבת זילוח.

לערבב את הלב עם 750 מיליליטר של 1% paraformaldehyde. השתמשו בסכין חדה כדי לחתוך את הלב לפרוסות בעובי של סנטימטר אחד, ואספו את הדגימות מאזור העברת הגנים ל-4% פרפורמלדהיד וחנקן נוזלי. אחסנו את הדגימות להכתמה ב-4% פרפורמלדהיד למשך 48 שעות בארבע מעלות צלזיוס.

יעילות הטיפול הגנטי נותחה על ידי מדידת המתח ההיקפי, מקטע הפליטה וזילוח שריר הלב על ידי סריקת PET במים 15O. ניתן לאסוף את דגימות הרקמה ישירות מאזור העברת הגנים, על ידי השוואת הלב למפה האלקטרו-אנטומית. ביטוי הטרנסגנים והאנגיוגנזה הטיפולית הוערכו באמצעות ניתוח היסטולוגי חיסוני על ידי ניתוח מספר התאים החיוביים לאחר צביעת בטא-גלקטוזידאז, ועל ידי ניתוח אזור נימי שריר הלב, לאחר צביעת מולקולת הדבקת טסיות/תאי אנדותל-1.

חשוב לאשר את המיקום של סטנט צוואר הבקבוק באמצעות אנגיוגרמה ואיסוף דגימות מאזור העברת הגנים, אשר ניתן לאשר על ידי השוואת הלב למפה אלקטרואנטומית. בסך הכל, חיוני לבצע את כל המדידות בצורה הניתנת ביותר לשחזור.