מסך התנהגותי להתקפים הנגרמים על ידי חום במודלים של עכבר של אפילפסיה

מטרת השיטה היא לסנן היפרתרמיה או התקפים הנגרמים בחום במודלים של עכבר. הפרוטוקול מתאר את השימוש בתא שנבנה בהתאמה אישית עם ניטור רציף של טמפרטורת הגוף כדי לקבוע אם טמפרטורת הגוף הגבוהה מובילה להתקפים.

מוטציות GEFS+ גורמות להתקפים חום בחולים. היכולת לחקור התקפים הנגרמים היפותרמיה בעכברים GEFS + מאפשרת לנו לבחון את הקשר בין מוטציות ספציפיות ופרופיל פרכוסים. בקר הטמפרטורה הדיגיטלי מסייע בהגדרת שיפוע הטמפרטורה בתיבת החימום באופן ניתן לשחזור.

לכן, טמפרטורת הגוף של העכבר ניתן להגדיל בקצב איטי ויציב. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לזהות טיפולים פוטנציאליים, כגון תרופות או הגבלות תזונתיות, כי ניתן להשתמש כדי להפחית או לחסל התקפים חום. כדי להכניס את בדיקת הטמפרטורה הרקטלית לעכבר ללא פציעה, אנו ממליצים להרדים בקצרה את העכבר, ולשמן את קצה הבדיקה הרקטלית.

התחל על-ידי הפעלת תא החום של העכבר באמצעות לחצן ההפעלה ולאחר מכן לחץ על לחצן החימום. באמצעות המקלדת בבקר הטמפרטורה הדיגיטלי, הגדר את הטמפרטורה של תא החום ל 50 מעלות צלזיוס. מרפדים את רצפת תא החום במצעי קלח.

התקן מצלמת הקלטת וידאו מול תא החום. מרפדים צלחת פטרי בקוטר 140 מילימטר עם שכבות עבות של נייר טישו ומניחים אותה על קרח כדי לשמש כרית קירור. לבדיקת ההקרנה, ודא שמשקל הגוף של העכבר הוא 15 גרם או יותר.

לפני תחילת ההליך, ודא שהעכבר מורדם לחלוטין עם צביטת בוהן. מצפים את קצה המתכת של בדיקת הטמפרטורה הרקטלית בחומר סיכה ומכניסים אותו בעדינות לעכבר. אבטח את הגשוש הפי הטבעתי לזנב העכבר עם סרט הדבקה.

מקם את העכבר בכלוב התאוששות חדש מרופד עם מצעים קלח. התחל טיימר להתבונן בעכבר במשך חמש דקות תוך ניטור טמפרטורת הגוף הליבה, עד העכבר מתאושש לחלוטין מהרדמה והטמפרטורה מתייצבת על 35 עד 36 מעלות צלזיוס. בתום חמש דקות, שים לב לטמפרטורת הגוף של העכבר כמו טמפרטורת הגוף הראשונית באפס דקה.

העבר את העכבר במהירות לרצפת תא החום של העכבר שחומם מראש כדי להתחיל את ניסוי הניסוי. לאחר שהעכבר ממוקם בתא העכבר שחומם מראש, הפעל את המצלמה ואת שעון העצר, להגביר את הטמפרטורה של תא החום במרווחי זמן קבועים, כך טמפרטורת הגוף של העכבר עולה בקצב של 25, 2.5 מעלות צלזיוס לדקה. התחל להקליט את טמפרטורת הגוף של העכבר במרווחי זמן של דקה אחת למשך הניסוי.

ב 9.5 דקות, להגדיר את הטמפרטורה של תא החום ל 55 מעלות צלזיוס כדי לייצב את הטמפרטורה של תא החום ב 55 מעלות צלזיוס על ידי הדקה ה -10. באופן דומה להשיג טמפרטורה יציבה של תא החום ל 60 מעלות צלזיוס על ידי הדקה ה -20. כל ניסוי סינון התקפים נמשך 30 דקות.

אם העכבר חווה התקף, רשום את טמפרטורת הגוף של העכבר במהלך ההתקף, כמו טמפרטורת סף התקף. שימו לב למאפייני התנהגות ההתקפים המוצגים על ידי העכבר, ולאחר מכן הרימו במהירות את העכבר מהתא והניחו אותו על משטח הקירור. אם עכבר אינו חווה התקפים הנגרמים מחום בתוך תקופת התצפית של 30 דקות, או שטמפרטורת הגוף של העכבר מגיעה ל -44 מעלות צלזיוס, הנח את העכבר על משטח הקירור.

כאשר טמפרטורת הגוף של העכבר מסתכמת 36 עד 37 מעלות צלזיוס, להעביר את העכבר לכלוב התאוששות. כדי להסיר את הבדיקה הפי הטבעתית מהעכבר, לחתוך בזהירות את הסרט בין זנב העכבר לבין חוט בדיקה רקטלי. נגב ונקה את קצה המתכת של הגשוש הפי הטבעתי עם 70% אתנול.

שים לב לעכבר עד שהוא מתאושש לפני החזרתו לכלוב הבית. המשך לפקח על מצב העכבר. סמן את סוף הניסוי.

אפס את הטמפרטורה של תא החום של העכבר ל 50 מעלות צלזיוס ולאפשר לו שיווי משקל לפני הבדיקה הבאה. בבדיקת התקפי החום, טמפרטורת הגוף הממוצעת של העכברים נרשמה בכל דקה באמצעות פרוטוקול החימום, וקצב שינוי טמפרטורת הגוף לאורך זמן הוערך. לא היה הבדל בשיעור השינוי בטמפרטורת הגוף בין מוטציה הטרוזיגוס לעכברים מסוג הטרוזיגוס ועכברים מסוג בר, ברקע הגנטי המתאים.

קבוצות ניסוי ובקרה של עכברים הציגו התנהגות שונה כאשר נחשפו לעלייה תקופתית בטמפרטורת הגוף. כל העכברים המוטנטיים ההטרוזיגוס מרקע גנטי של 129X1 או B6NJ הציגו התקפים הנגרמים מחום. אף אחד מהעכברים הפראיים ברקע המועשר של 129X1 לא חווה התקפים, בעוד שרק שליש מהעכברים מרקע B6NJ הרגיש להתקף הראו התקפים.

טמפרטורת סף התקפים ממוצעת של עכברים מוטנטיים 129X1 לא הייתה שונה באופן משמעותי מטמפרטורת סף ההתקפים הממוצעת שנראתה בעכברים B6NJ. שליש מעכברי B6NJ פראיים שהפגינו התקפים הנגרמים מחום, היו טמפרטורת סף התקפים שהייתה גבוהה משמעותית מעכברי מוטציה הטרוזיגוס B6NJ. חומרת ההתקפים נמדדה באמצעות סולם ראסין שהשתנה.

הציון המרבי של עכברים מוטנטיים הטרוזיגוס 129X1 ברקע מועשר 129X1 לא היה שונה באופן משמעותי מעכברים מוטנטיים הטרוזיגוס ברקע גנטי B6NJ. בעת הגדרת פרוטוקול החימום, אנא ודא כי טמפרטורת הגוף של העכבר אינו עולה בקצב מהיר יותר מ 25 מעלות צלזיוס לדקה, או שזה יכול להזיק לבריאות של החיה. זה יהיה מאוד מגניב לשלב את פרוטוקול החימום עם הקלטות EEG בו זמנית, שיאפשרו לנו לתאם דפוסים שונים של פעילות מוחית עם סוגים שונים של התנהגות התקפים.