Name: גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: חקור מנגנוני כאב ראש בעכברים באמצעות גירוי דוראלי מינימלי פולשני ובדיקות פריאורביטל פון פריי. שיטה זו מאפשרת חקירת השפעת פרולקטין על רגישות פנים ללא צורך בקרניוטומיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NS104200 ו- NS072204 עד GD).

כל ההליכים נערכו באישור מראש של הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת טקסס בדאלאס. במחקר זה נעשה שימוש בעכברים מסוג ICR (CD-1) (30-35 גרם) וב-C57/BL6 (25-30 גרם).
1. אינפוזיה דוראלית
<ol><li>צרו את המזרקים/מזרקים לעכבר על-ידי שינוי צינורית פנימית ומזרק הזמינים מסחרית להזרקות חד-צדדיות עם מכסה פלסטיק סיליקה מתמזג שאינו מתכתי, הניתן לכוונון ומכניס/מתרחב מתחת לצינורית מנחה של 28 גרם עם קוטר פנימי (I.D.) של 0.18 מ"מ וקוטר חיצוני (O.D.) של 0.35 מ"מ (איור 1A).</li>
	<li>השתמש בקליפר או במכשיר מדידה אחר כדי להתאים את מכסה הפלסטיק סיליקה שהתמזג על האינפיר לאורך של 0.6 מ"מ; נמדד מקצה האינפיר ועד לקצה מכסה הפלסטיק של סיליקה.<ol>
<li>יש להיזהר שלא לכופף או להקהות את ההחדרה בעת כוונון מכסה הפלסטיק.</li>
		<li>עבור זני עכברים אחרים שלא שימשו בעבר להזרקות דוראליות, קבעו את אורך ההחדרה האופטימלי על ידי הגדרת האורך ל-0.6 מ"מ וביצוע זריקות טייס עם דיו או צבע, התאמת אורך האינפיר עד שיבחין כי הצבע נמצא רק ב-dura mater ולא במוח או בגולגולת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>חברו את הקצה הארוך (או את הקצה שלא נמדד כ-0.6 מ"מ) של החדר המותאם לצינורות פלסטיק (צינורות משאבה, 2 עצירות, תעודת זהות 0.19 מ"מ, אורך 406 מ"מ).<ol>
<li>חותכים את הצינורות לאורך מינימלי של 8 אינץ' כדי להבטיח שיש מספיק קו כדי להחזיק נפח של 5 μL.</li>
		<li>וודאו שהצינורות מכסים את חלק המתכת ואת החלק העליון של פקק הפלסטיק הממוקם על האינפיר. זה יעזור למנוע מבועות אוויר להצטבר בשורה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>חברו את הקצה השני של הצינור למיקרו-מזרק זכוכית של 10 מיקרו-ליטר (מחט צמנטית אטומה לגז; 21 גרם עם הקרנה של 10 מ"מ), שוב, והקפידו על אטימה הדוקה מעל החלק המתכתי של המזרק (איור 1A).</li>
	<li>לאחר חיבור הקו, מלאו את המזרק ב-5 μL של מלוחים עם מאגר פוספט (PBS), נוזל אינטרסטיציאלי סינתטי (SIF) או כלי רכב אחרים לפי בחירתם כדי למנוע היווצרות של בועות אוויר.<ol>
<li>אם בועות אוויר נצפות בקו, הצפת את הקו עם הרכב עד שהבועות יתפוגגו. הערה: זה עשוי לעזור למלא את המזרק ברכב לפני חיבורו לקו ולאחר מכן לדחוף את הנוזל דרך הקו לאחר החיבור.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר שהקו מתמלא ב-5 μL של הרכב ופועל ביעילות, העמיסו 5 μL של התרופה/תמיסה לתוך מזרק המילטון (דיו או צבע עשויים לשמש כחלופה לתרופה/תמיסה אם לומדים או מתרגלים טכניקה זו).<ol>
<li>ודא שכל פתרונות הרכב הניתנים על הדורה נשמרים ב- pH 7.4 ונמדדים לאוסמולאליות של 310. זה מקטין את ההפעלה הפוטנציאלית של תעלות יונים עם חישה חומצית ותעלות אוסמוזנסיטיביות אחרות בתוך הדורה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הנפח המרבי שנבדק בעכברים שלא גרם לדליפה לתוך המוח הוא בערך 10 μL. ההשפעות ההתנהגותיות לאחר זריקות עם נפח זה לא נבדקו. מסיבה זו, לנהל רק 5 μL של הפתרון על dura. הערה: תצפיות אלה מבוססות על זני/גילאים/משקלים של עכברי CD1/ICR בני 6-8 שבועות.</li>
</ol>2. זריקות דוראל
<ol><li>לאחר הכנת המזרק והתרופה טעונה, הניחו עכבר שטוח על בטנו והרדמה אותו תחת איזופלורן קצר של 3% עם קצב זרימת חמצן של 0.5-1 ליטר/דקה באמצעות חרטום האף.<ol>
<li>לאחר שהעכבר כבר לא מציג רפלקס צביטה, התאימו את ההרדמה וקיימו אותה באיזופלורן של 1.5%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר הרדמה, להחיל משחה אופטלמית סטרילית על העיניים ולגלח את ראש החיה, ולאחר מכן לחטא את העור עם povidone-יוד ואתנול. בעקבות זאת, להגיע למצב התורם לזריקה מוצלחת.</li>
	<li>השתמש ביד אחת כדי לייצב את ראש החיה ולהחזיק את ההחדרה ביד השנייה.</li>
	<li>בדקו היטב ואתרו את הצומת של התפרים הסגיטליים והלמבדואידיים על גולגולת העכבר (איור 1B, C).<ol>
<li>כדי לאתר את הצומת הדיסקרטי הזה דרך העור, השתמש בתכונות הטופוגרפיות של הגולגולת ובדוק בעדינות את המיקום הכללי של הצומת עם החדר.</li>
		<li>ודא את מיקום הצומת על ידי מיקום מחדש של ההחדרה לאורך הגולגולת ותחושת המיקום המדויק.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ברגע שהתפר ממוקם והתפר נמצא במקומו, לאט מאוד ובעדינות מנגבים את האינפיר קדימה ואחורה עד שהוא חודר דרך העור ויורד אל הצומת עד לפקק הפלסטיק. הערה: הקפד להכניס את כל קצה ה- 0.6 מ"מ של ההחדרה לצומת.</li>
	<li>כדי לאמת את הדיוק, השתמש בדיו או בצבע כפתרון הזרקה והרדמה ועריפת ראש של העכבר.<ol>
<li>הסר את מכסה הגולגולת כדי לדמיין את הצבע בתוך הדורה מאטר (איור 1C). הערה: אין לראות צבע על המוח או על החלק החיצוני של הגולגולת. כמו כן, עכברים בכל ניסוי צריכים להיבדק לאחר המוות כדי לוודא את דיוק ההזרקה, כמו גם כדי להבטיח את שלמות הדורה מאטר לא נפגעה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר ההזרקה, מוציאים את העכבר מהרדמה, ממתינים עד שהוא יחזור להכרה ואז חוזרים לכלוב שלו או מניחים אותו בתא בדיקה כדי להתחיל את הבדיקות הרצויות. הערה: אפשר לעכבר להתאושש מהרדמה למשך 30 דקות לפחות לפני ביצוע ניסויים התנהגותיים כלשהם.</li>
</ol>3. פריורביטל פון פריי
<ol><li>התחל את המחקר עם קבוצה של כ 16-20 עכברים.</li>
	<li>יום אחד לפני ההרגלה, טפלו בכל עכבר במשך 5 דקות לפחות.</li>
	<li>כ-24 שעות לאחר הטיפול, התרגלו העכברים לתנאי חדר הבדיקה ולמנגנון הבדיקה של פון פריי (איור 2A). הערה: מנגנון הבדיקה האקרילי מורכב מתאים בודדים עם מכסים שהם בערך 3 אינץ ' x 3.5 אינץ ' x 5 אינץ ' (W x H x D) ונתמכים על ידי מעמדי אלומיניום המחוברים באמצעות 0.25 ב 19 G חוט רשת פלדה מגולוון מרובע.<ol>
<li>הניחו את העכברים בתוך נייר לבנה באורך 4 אונקיות הממוקמת אופקית, חסרת ריח ואינה מכילה פוליתן או שעוות פרפין. הערה: סוגים אלה של כוסות מועדפים מכיוון שהם מפחיתים את ההפרעות במערכת העיכול בעכברים אם הם נבלעים (איור 2B).</li>
	</ol></li>
	<li>בזמן שהחיות נמצאות בחדרים המתאימים להן, מניחות כדור של דיאטת הצ'או הרגילה בחדר הבודד של כל עכבר כדי להרגיע את החיות ולהימנע מכל לחץ מיותר על בעלי החיים. עשו זאת במשך 3 ימים לפני כל בדיקת התנהגות של פון פריי.<ol>
<li>ודא שבכל פעם שהעכברים נמצאים בחדר יש גישה למזון.</li>
		<li>מספר והקצה כל חיה לאותו שטח במדף הבדיקה. הניחו את העכבר באותה בכל יום של תקופת הבדיקה כדי להבטיח שכל בעל חיים יתאקלם בסביבת הבדיקה שלו. הערה: עכברים יכרסמו את הכוסות ולאחר מכן ישמידו את הכוסות. אם זה אמור לקרות, החלף את הכוס ותייג אותה במספר העכבר המתאים.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר 3 הימים הראשונים של ההרגלה, הניחו את העכברים בתאים הבודדים שלהם.<ol>
<li>אפשרו לבעלי החיים להתאקלם בחדר הבדיקה ובחדרי הבדיקה למשך שעה לפחות לפני כל ניסוי של פון פריי כדי לאפשר לעכברים להירגע ולאחר מכן קל יותר לבחון אותם.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר ההתאקלמות לחדר ביום הבדיקה, יש להסיר עכבר אחד בעודו בכוס שלו מהתא המתאים.<ol>
<li>שמרו על הגביע במצב האופקי כך שהעכבר נמצא גם על המצח וגם על כפות הרגליים האחוריות כדי לסייע בפיזור שווה של משקלם. הערה: חלוקת משקל לא שוויונית עשויה לשנות את תגובות בעלי החיים ואף למנוע מבעלי חיים להגיב.</li>
	</ol></li>
	<li>הניחו את הכוס עם העכבר בפנים על השולחן מתחת לארון הבדיקה על משטח הספיגה.</li>
	<li>לצורך בדיקת פון פריי פריי, הניחו את נימת פון פריי 0.07 גרם ישירות במרכז הפנים ובין העיניים.</li>
	<li>הפעילו מספיק לחץ על החוט כדי לגרום לשיער פון פריי להתכופף לתצורה בצורת "C".<ol>
<li>שמור על קשר עם האזור לפחות 3 שניות אבל לא יותר מ 5 שניות או עד שהעכבר מושך את ראשו ומחליק על החוט עם הכפה שלו. הערה: אם החוט מחליק או יותר מכפי שקצה החוט נוגע בבעל החיים במהלך הניסויים, אין לספור את כל התגובות. תגובות אלה עשויות להיות בתגובה למברשת המופעלות על ידי מכניורצפטורים שונים ולכן עשויות שלא לשקף תוצאות מדויקות.</li>
		<li>החל את חוטי פון פריי על פי שיטת "מעלה-מטה" של דיקסון22,23.<ol>
<li>בתחילה, החל את נימה פון פריי אשר יש משקל של 0.07 גרם. החוט הנמוך ביותר האפשרי והנימה הנבדקת הגבוהה ביותר במחקר זה הם חוטים עם משקלים של 0.008 גרם ו -0.6 גרם, בהתאמה.</li>
			<li>השתמש בחוטים של משקל 0.008 גרם, 0.02 גרם, 0.04 גרם, 0.07 גרם, 0.16 גרם, 0.4 גרם ו- 0.6 גרם כדי לבצע בדיקה זו.</li>
			<li>בשיטה זו, אם בעל חיים אינו מפגין תגובה לחוט, החל את החוט של משקל הגרם הגבוה הבא.</li>
			<li>אם העכבר אכן מגיב לחוט, שקול שהעכבר מגיב לחוט זה. אם זה המקרה, החל את החוט של משקל הגרם התחתון הבא.</li>
			<li>חזרו על דפוס זה עד שהחיה תיבדק 4 פעמים לאחר התגובה הראשונית או שבעל החיים ייקבע כלא מגיב לחוטים כלשהם שנבדקו בבדיקה. הערה: הימנעו מהפעלת לחץ נוסף הנובע מהזרוע או מפרק כף היד. ניתן להשתמש בסולם כדי לתרגל את היישום של החוט.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>4. בדיקת ספי נסיגה בסיסיים
<ol><li>לפני ההכללה בניסוי, ודא שהעכברים מגיעים לסף נסיגה בסיסי בין 0.5-0.6 גרם.<ol>
<li>עכבר מגיע לנקודת ההתחלה אם הוא לא מגיב לכל נימה שנבדקה בסדרה המוזכרת בשלב 3.9.2.2 (0.07 גרם, 0.16 גרם, 0.4 גרם ו- 0.6 גרם).</li>
	</ol>
</li>
	<li>בדוק עכברים מדי יום בעת קביעת ספי נסיגה בסיסיים.<ol>
<li>ניסויים מאפשרים לבעלי חיים להתאקלם לתנאי הניסוי וללחץ של חוטי פון פריי.</li>
		<li>אם העכברים עדיין רגישים מאוד לאחר היום השלישי של הבדיקה, נסו להמתין יום או יומיים לפני הבדיקה שוב. הערה: זמן רב מדי בין ימי הניסוי עלול לגרום לכך שבעל החיים לא יסתגל למשקל הנימה באזור הפריאורביטלי שלו, ובכך לא יגיע לסף הנסיגה הממוקד.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בדקו את העכברים במשך כ-7 ימים לפני שקבעו אילו בעלי חיים אינם עומדים בקריטריוני ההכללה לניסוי. הערה: כ-70% מהעכברים יגיעו לרמה הבסיסית הממוקדת.<ol>
<li>לפני גירוי דוראלי, נתח את הנתונים הבסיסיים כדי לא לכלול כל עכבר שלא הגיע לערך בסיסי של 0.5-0.6 גרם ומעלה.</li>
		<li>לאחר ההחרגה, הקצה באופן אקראי כל עכבר שנותר לקבוצת בדיקה. השג זאת על-ידי ציור מתוך או כתיבת סקריפט בגיליון אלקטרוני כדי לחלק מספרים באופן אקראי לקבוצה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. ניתוח תוצאות פון פריי
<ol><li>לאחר קבלת סדרת התגובות, קבעו את ערך הדלתא, k, סף ה-50% ואת סף הנסיגה בגרמים על פי שיטות שפורסמו בעבר24.</li>
	<li>חשב את סף הנסיגה באמצעות נוסחה זו WT = 10(x*F+B), כאשר WT = סף נסיגה, F = סף נסיגה הכפה המחושב בשיטת Chaplan, ו- B = רגרסיה ליניארית של יומן (כוח כיפוף) = x* מספר נימה + B.</li>
	<li>התאם את הנתונים כסף נסיגה של 50% או סף משיכה ממוצע בגרמים.</li>
</ol>

<ol><li>GBD 2016 Disease and Injury Incidence and Prevalence Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+incidence%2C+prevalence%2C+and+years+lived+with+disability+for+328+diseases+and+injuries+for+195+countries%2C+1990-2016%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 328 diseases and injuries for 195 countries, 1990-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 390 (10100), 1211-1259 (2017).</li>
<li>Woldeamanuel, Y. W., Cowan, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine+affects+1+in+10+people+worldwide+featuring+recent+rise%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+community-based+studies+involving+6+million+participants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Neurological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Migraine affects 1 in 10 people worldwide featuring recent rise: A systematic review and meta-analysis of community-based studies involving 6 million participants.</a> Journal of the Neurological Sciences. 372, 307-315 (2017).</li>
<li>Burch, R. C., Loder, S., Loder, E., Smitherman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+and+burden+of+migraine+and+severe+headache+in+the+United+States%3A+updated+statistics+from+government+health+surveillance+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Headache%22%5BJournal%5D)">The prevalence and burden of migraine and severe headache in the United States: updated statistics from government health surveillance studies.</a> Headache. 55 (1), 21-34 (2015).</li>
<li>Ashina, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Migraine.</a> New England Journal of Medicine. 383 (19), 1866-1876 (2020).</li>
<li>Ashina, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine%3A+integrated+approaches+to+clinical+management+and+emerging+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Migraine: integrated approaches to clinical management and emerging treatments.</a> Lancet. 397 (10283), 1505-1518 (2021).</li>
<li>Jacobs, B., Dussor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+contributions+to+migraine%3A+Moving+beyond+vasodilation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurovascular contributions to migraine: Moving beyond vasodilation.</a> Neuroscience. 338, 130-144 (2016).</li>
<li>Koyuncu Irmak, D., Kilinc, E., Tore, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shared+Fate+of+Meningeal+Mast+Cells+and+Sensory+Neurons+in+Migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Shared Fate of Meningeal Mast Cells and Sensory Neurons in Migraine.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 136(2019).</li>
<li>Levy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine+pain%2C+meningeal+inflammation%2C+and+mast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain+and+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Migraine pain, meningeal inflammation, and mast cells.</a> Current Pain and Headache Reports. 13 (3), 237-240 (2009).</li>
<li>Levy, D., Labastida-Ramirez, A., MaassenVanDenBrink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+understanding+of+meningeal+and+cerebral+vascular+function+underlying+migraine+headache%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Current understanding of meningeal and cerebral vascular function underlying migraine headache.</a> Cephalalgia. 39 (13), 1606-1622 (2019).</li>
<li>Phebus, L. A., Johnson, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+inflammation+model+of+migraine+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dural inflammation model of migraine pain.</a> Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 9, Unit 9.1 (2001).</li>
<li>Fried, N. T., Maxwell, C. R., Elliott, M. B., Oshinsky, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Region-specific+disruption+of+the+blood-brain+barrier+following+repeated+inflammatory+dural+stimulation+in+a+rat+model+of+chronic+trigeminal+allodynia%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Region-specific disruption of the blood-brain barrier following repeated inflammatory dural stimulation in a rat model of chronic trigeminal allodynia.</a> Cephalalgia. 38 (4), 674-689 (2018).</li>
<li>Avona, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+calcitonin+gene-related+peptide+produces+female-specific+responses+in+rodent+migraine+models%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dural calcitonin gene-related peptide produces female-specific responses in rodent migraine models.</a> The Journal of Neuroscience. 39 (22), 4323-4331 (2019).</li>
<li>Burgos-Vega, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+dural+stimulation+in+mice%3A+A+novel+preclinical+model+of+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Cephalalgia%22%5BJournal%5D)">Non-invasive dural stimulation in mice: A novel preclinical model of migraine.</a> Cephalalgia. 39 (1), 123-134 (2019).</li>
<li>Avona, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meningeal+CGRP-Prolactin+interaction+evokes+female-specific+migraine+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Meningeal CGRP-Prolactin interaction evokes female-specific migraine behavior.</a> Annals of Neurology. 89 (6), 1129-1144 (2021).</li>
<li>Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+used+to+evaluate+pain+behaviors+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Methods used to evaluate pain behaviors in rodents.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284(2017).</li>
<li>Lipton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+allodynia+in+the+migraine+population%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cutaneous allodynia in the migraine population.</a> Annals of Neurology. 63 (2), 148-158 (2008).</li>
<li>Goadsby, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migraine%2C+allodynia%2C+sensitisation+and+all+of+that%5BTitle%5D)+AND+%22European+Neurology%22%5BJournal%5D)">Migraine, allodynia, sensitisation and all of that.</a> European Neurology. 53, Suppl 1 10-16 (2005).</li>
<li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nature Methods. 7 (6), 447-449 (2010).</li>
<li>Mogil, J. S., Pang, D. S. J., Silva Dutra, G. G., Chambers, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+and+use+of+facial+grimace+scales+for+pain+measurement+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The development and use of facial grimace scales for pain measurement in animals.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 116, 480-493 (2020).</li>
<li>Vuralli, D., Wattiez, A. S., Russo, A. F., Bolay, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+cognitive+animal+models+in+headache+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Headache+and+Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral and cognitive animal models in headache research.</a> The Journal of Headache and Pain. 20 (1), 11(2019).</li>
<li>Mason, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+migraine-like+photophobic+behavior+in+mice+by+both+peripheral+and+central+CGRP+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22The+journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Induction of migraine-like photophobic behavior in mice by both peripheral and central CGRP mechanisms.</a> The journal of Neuroscience. 37 (1), 204-216 (2017).</li>
<li>Dixon, W. J., Mood, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+obtaining+and+analyzing+sensitivity+data%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">A method for obtaining and analyzing sensitivity data.</a> The Journal of the American Statistical Association. 43 (241), 109-126 (1948).</li>
<li>Dixon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+up-and-down+method+for+small+samples%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">The up-and-down method for small samples.</a> The Journal of the American Statistical Association. 60, (1965).</li>
<li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+up-down+method+%28SUDO%29+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pain%22%5BJournal%5D)">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Molecular Pain. 10, 26(2014).</li>
<li>Ramachandran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+inflammation+and+its+role+in+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunopathology%22%5BJournal%5D)">Neurogenic inflammation and its role in migraine.</a> Seminars in Immunopathology. 40 (3), 301-314 (2018).</li>
<li>Edvinsson, L., Haanes, K. A., Warfvinge, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+inflammation+have+a+role+in+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neurology%22%5BJournal%5D)">Does inflammation have a role in migraine.</a> Nature Reviews Neurology. 15 (8), 483-490 (2019).</li>
<li>Stokely, M. E., Orr, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+effects+of+calvarial+damage+on+dural+mast+cells%2C+pial+vascular+permeability%2C+and+cerebral+cortical+histamine+levels+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Acute effects of calvarial damage on dural mast cells, pial vascular permeability, and cerebral cortical histamine levels in rats and mice.</a> Journal of Neurotrauma. 25 (1), 52-61 (2008).</li>
<li>Theoharides, T. C., Donelan, J., Kandere-Grzybowska, K., Konstantinidou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+migraine+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in migraine pathophysiology.</a> Brain Research Reviews. 49 (1), 65-76 (2005).</li>
<li>Conti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+in+migraine%3A+Role+of+mast+cells+and+pro-inflammatory+and+anti-inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Progression in migraine: Role of mast cells and pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines.</a> European Journal of Pharmacology. 844, 87-94 (2019).</li>
<li>Rea, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripherally+administered+calcitonin+gene-related+peptide+induces+spontaneous+pain+in+mice%3A+implications+for+migraine%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripherally administered calcitonin gene-related peptide induces spontaneous pain in mice: implications for migraine.</a> Pain. 159 (11), 2306-2317 (2018).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שינויים לא מסתגלים במערכת הנוסיקפטיבית המקומית בדורה נחשבים לתורמים מרכזיים לשלב כאבי הראש של התקפי מיגרנה למרות היעדר פגיעהברקמות 25,26. כאן המחקר מציג שיטה לפיה גירוי זעיר פולשני של הדורה יכול לגרום לרגישות יתר של מישוש בפנים. הבהרת המנגנונים והאירועים המעורבים בהפעלת נוסיספטורים דוראליים מבלי לגרום נזק לגולגולת ולרקמות עשויה לשקף בצורה מדויקת יותר את מנגנוני המיגרנה במודל פרה-קליני.
קרניוטומיה והשתלת צינורית שימשו זה מכבר להערכת תפק...

מיגרנה כואבת עדיין בעיה מרכזית בבריאות הציבור ברחבי העולם. ארגון הבריאות העולמי מדרג אותה כמחלה השישית בשכיחותה בעולם, כשהיא סובלת מקצת פחות מ-15% מאוכלוסיית כדור הארץ1 וגורמת לנטל חברתי-כלכלי משמעותי על החברה 2,3. אפשרויות הטיפול ויעילותן היו לא אופטימליות ומספקות רק הקלה סימפטומטית ואינן משנות באופן משמעותי אירועים פתופיזיולוגיים שבבסיסם התרחשות מיגרנה 4,5. חוסר ההצלחה הטיפולית נובע ככל הנראה מכך שמיגרנה היא הפרעה מולטי-פקטוריאלית שהפתולוגיה שלה אינה מובנת היטב, מה שמוביל למספר מוגבל של מטרות טיפוליות. מיגרנה היא גם מאתגרת ללכידה מלאה במודלים של בעלי חיים, במיוחד לאור העובדה שאבחון מיגרנה נעשה על סמך תקשורת מילולית עם מטופלים המתארים את החוויה שלהם עם סימני היכר של מיגרנה כגון הילה, כאבי ראש, פוטופוביה ואלודיניה. עם זאת, חשוב לציין כי ההתקדמות האחרונה בטיפולי מיגרנה עולה כיום על טיפולים במצבים נוירולוגיים רבים שאומתו היטב על ידי מודלים פרה-קליניים. לדוגמה, נוגדנים חד-שבטיים ומולקולות קטנות המכוונות לפפטיד הקשור לגן קלציטונין, או לקולטן שלו, הצליחו מאוד לשפר את איכות חייהם של הסובלים ממיגרנה ועלולים לשנות את הניהול הקליני של מיגרנה. אמנם חלה התקדמות בהבנת ההפרעה הזו, אך עדיין יש הרבה דברים שטרם הובהרו.
בהתבסס על מודלים פרה-קליניים של בעלי חיים ומחקרים בבני אדם, מקובל כי מיגרנות נגרמות על ידי הפעלה חריגה של סיבים נוסיצפטיביים בתוך קרום המוח המאותתים דרך הגרעינים הטריגמינליים והצוואריים העליונים 6,7,8,9,10. למרות תיאוריה זו, מחקרים רבים עדיין משתמשים במתן סיסטמי של תרופות כדי להבין את המנגנונים התורמים הבסיסיים במיגרנה. בעוד שמינון מערכתי של תרופות חיזק באופן משמעותי את הבנתנו, ממצאים אלה אינם מעריכים באופן ישיר אם פעולות מקומיות בתוך רקמת המטרה המעניינת ממלאות תפקיד במיגרנה. לעומת זאת, מספר מחקרים נקטו בגישה כדי לעורר את הדורה; עם זאת, ניסויים אלה דורשים השתלת צינורית באמצעות כריתת גולגולת פולשנית וזמני התאוששות ממושכים11,12. בגלל המגבלות האלה, פיתחנו גישה זעיר פולשנית כדי לעורר את הדורה באופן מקומי, כאשר היעדר כריתת גולגולת מבטל את ההחלמה לאחר הניתוח ומאפשר ניסויים מיידיים בבעלי חיים ערים 12,13,14. זריקות אלה מבוצעות בהרדמה איזופלורנית קלה וניתנות בצומת של תפרים סגיטליים ומבדואידים בעכברים.
מספר גישות פותחו כדי להעריך תגובות התנהגותיות nociceptive במכרסמים15. אלודיניה עורית דווחה בכ-80% מהסובלים ממיגרנה16,17 ומייצגת נקודת קצה תרגומית פוטנציאלית לשימוש במכרסמים. במודלים פרה-קליניים, היישום של חוטי פון פריי על האזור הכפי של כף המכרסמים שימש להערכת התנהגויות כאב במודלים פרה-קליניים של מיגרנה. המגבלה העיקרית של גישה זו היא שהיא אינה בודקת את האזור הצפלי. ניקוד עגמומי פנים שימש ללכידת התנהגויות כאב במכרסמים על ידי ניתוח הבעות פנים לאחר אינדוקציה של גירויי כאב18,19. עם זאת, מגבלותיו כוללות רק לכידת תגובות לגירויים חריפים ולא מצבי כאב כרוניים. טיפוח פנים וגידול מופחת נחשבים גם לתפוקות של תגובות התנהגותיות במודלים פרה-קליניים של מיגרנה20,21. המגבלות של הראשונים כוללות קושי בהבחנה בין תגובות כאב לבין טיפוח שגרתי רגיל ותחושות אחרות כגון גירוד. במקרה של האחרון, התנהגויות גידול בדרך כלל פוחתות במהירות לאחר הכנסת מכרסמים לסביבות חדשות. למרות שכל אחת מנקודות הקצה ההתנהגותיות הללו היא בעלת ערך בהבנת מנגנונים שונים התורמים למצבי כאב, קיים צורך קריטי במודלים פרה-קליניים של הפרעות כאב כגון מיגרנה כדי לכלול נקודות קצה הלוכדות באופן ספציפי תגובות רגישות יתר צפלית. הערכת רגישות יתר למישוש של העור הפריאורביטלי בעקבות גירוי דוראלי היא שיטה שעשויה לספק תובנה טובה יותר לגבי מנגנונים התורמים למיגרנות שבהן הסימפטומים החושיים הם בעיקר צפליים בטבעם. כאן אנו מתארים שיטה למתן חומרים על דורה העכבר כמודל פרה-קליני של מיגרנה. בעקבות היישום הדוראלי, אנו מציגים גם שיטה מפורטת לבדיקת רגישות יתר של מישוש פריאורביטלי באמצעות חוטי פון פריי מכוילים המיושמים בשיטת דיקסון למעלה-מטה.

<table><tbody><tr><td>4 oz כוסות נייר חמות</td><td>Choice Paper Company</td><td>5004W</td><td>https://www.webstaurantstore.com/choice-4-oz-white-poly-paper-hot-cup-case/5004W.html</td></tr><tr><td>רפידות תחתונות סופגות</td><td>Fisherbrand</td><td>14-206-65</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-absorbent-underpads-8/p-306048</td></tr><tr><td>C313I/SPC פנימי 28 G צינורית</td><td>P1 טכנולוגיות (לשעבר Plastics One)</td> <td>8IC313ISPCXC</td><td>תעודת זהות 18 מ"מ, OD 35 מ"מ</td></tr><tr><td>אטום לגז דגם 1701 SN מזרקים</td><td>המילטון</td><td>80008</td><td></td></tr><tr><td>https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80008 Ismatec צינורות משאבה, 0.19 מ"מ</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-96460-10</td><td>מעמד https://www.coleparmer.com/i/ismatec-pump-tubing-2-stop-tygon-s3-e-lab-0-19-mm-id-12-pk/9646010</td></tr><tr><td>עם חוט עוף</td><td>מותאם אישית</td><td></td><td>מידות חוט העוף מפלדה מגולוונת הן 0.25 אינץ'. x מתלה בדיקה בגודל 19</td></tr><tr><td>עם פרט&nbsp; תאים</td><td>מותאמים אישית</td><td></td><td>לכל תא צריכה להיות חלוקה בין כל עכבר ומכסים כדי להכיל את העכבר. התאים צריכים להיות גדולים מספיק כדי להכיל נייר של 4 אונקיות.</td></tr><tr>מבחן מגע <td>של חוטי פון פריי</td><td>/ סטולטינג</td><td>58011</td><td>https://www.stoeltingco.com/touch-test.html</td></tr></tbody></table>

גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

קרום המוח הגולגולתי, המורכב מהדורה מאטר, ארכנואיד ופיה מאטר, נחשבים כמשרתים בעיקר תפקודים מבניים של מערכת העצבים. לדוגמה, הם מגנים על המוח מפני הגולגולת ומעגנים/מארגנים את האספקה הווסקולרית והנוירונית של קליפת המוח. עם זאת, קרום המוח מעורב גם בהפרעות במערכת העצבים כגון מיגרנה, שם הכאב שחווה במהלך מיגרנה מיוחס לדלקת סטרילית מקומית והפעלה לאחר מכן של אפרנטים נוסיספטיים מקומיים. מבין השכבות בהרי קרום המוח, הדורה מאטר מתעניין במיוחד בפתופיזיולוגיה של מיגרנות. הוא בעל כלי דם גבוהים, מכיל תאי עצב מקומיים, והוא ביתם של מגוון רחב של תאים מקומיים כגון תאים חיסוניים. שינויים עדינים במיקרו-סביבה המקומית של קרום המוח עלולים להוביל להפעלה ורגישות של נוציצפטורים פריווסקולריים דוראליים, ובכך להוביל לכאבי מיגרנה. מחקרים ביקשו לטפל באופן שבו אפרנטים דוראליים הופכים להיות מופעלים/רגישים על ידי שימוש באלקטרופיזיולוגיה in vivo, טכניקות הדמיה או מודלים התנהגותיים, אך אלה דורשים בדרך כלל ניתוחים פולשניים מאוד. פרוטוקול זה מציג שיטה ליישום לא פולשני יחסית של תרכובות על דורה מאטר בעכברים ושיטה מתאימה למדידת רגישות מישוש דמוית כאב ראש באמצעות בדיקת פון פריי פריי פריירביטלית לאחר גירוי דוראלי. שיטה זו שומרת על שלמות הדורה והגולגולת ומפחיתה את ההשפעות המבלבלות של טכניקות פולשניות על ידי הזרקת חומרים דרך צינורית שונה בקוטר 0.65 מ"מ בצומת של תפרים סגיטליים ולאמבדואידים לא מאוכלסים. מודל פרה-קליני זה יאפשר לחוקרים לחקור מגוון רחב של גירויים דוראליים ואת תפקידם בהתקדמות הפתולוגית של מיגרנה, כגון הפעלת נוציצפטורים, הפעלת תאי מערכת החיסון, שינויים בכלי הדם והתנהגויות כאב, כל זאת תוך שמירה על מצבים נטולי פציעות בגולגולת ובקרומי קרום המוח.

שיטת הזרקה זו משמשת למתן גירויים על הדורה של עכברים, כך שבדיקות התנהגותיות עוקבות עשויות להתרחש. התפוקה ההתנהגותית הנפוצה ביותר שנמדדה במודל זה היא רגישות יתר עורית לפנים שהוערכה באמצעות von Frey 12,13,14. כאן אנו מראים כיצד ניתן להשתמש במודל זה כדי להעריך תרומות פוטנציאליות ספציפיות למין לפתולוגיה של מיגרנה (איור 3).
הליך זה שימש לבחינת ההשפעות של פרולקטין דוראלי (PRL) ע...

התסמין הבולט ביותר של מיגרנה הוא כאבי ראש חמורים, וההשערה היא כי הדבר מתווך על ידי נוירונים חושיים המחדירים את קרום המוח. כאן אנו מציגים שיטה ליישום מקומי של חומרים על הדורה באופן זעיר פולשני תוך שימוש ברגישות יתר לפנים כפלט.

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

אילו אירועים מתרחשים בתוך קרום המוח התורמים לכאבי ראש בהיעדר פגיעה ברקמות? שלא כמו שימוש קודם במודלים של גירוי דוראלי בחולדות, הוא מאפשר שימוש בקטלוג הנרחב של עכברים מהונדסים גנטית. המאבק העיקרי יהיה איתור ההצטלבות של התפרים הלמבדואידליים והסגיטליים על ידי מישוש הגולגולת עם המזרק.כדי להתחיל, צור את ההחדרות לעכבר על ידי שינוי צינורית פנימית זמינה מסחרית וחדר עם מכסה פלסטיק סיליקה מתמזג אשר מתכוונן ומכניס לתוך צינורית מנחה של 28 מדים. השתמשו בקליפר כדי לכוונן את מכסה הפלסטיק של סיליקה שהתמזגה על ההחדרה מבלי לכופף את האינפיר. התאימו את האינפיר לאורך של 6 מילימטרים שנמדדו מקצה האינפיר ועד לקצה מכסה הפלסטיק של סיליקה.בצע זריקות פיילוט עבור זני עכברים אחרים והתאם את האורך כך שיזריק במדויק ב-dura mater. לאחר מכן, חברו את הקצה הארוך של האינפיר לצינורות פלסטיק של שמונה אינץ' או יותר כדי להחזיק נפח של חמישה מיקרוליטרים. הכנס את הצינור תוך הקפדה על כיסוי מלא של חלק המתכת והחלק העליון של פקק הפלסטיק הממוקם על האינפיר כדי למנוע הצטברות של בועות אוויר בקו.לאחר מכן, מלאו את המיקרו-מזרק והצמידו את הקצה השני של הצינור למיקרו-מזרק זכוכית של 10 מיקרוליטר, מה שמבטיח איטום הדוק מעל החלק המתכתי של המזרק. לאחר מכן, מלאו את המזרק בחזרה בחמישה מיקרוליטרים של PBS או נוזל אינטרסטיציאלי סינתטי או כלי רכב אחרים שנבחרו כדי למנוע היווצרות בועות אוויר. במידת הצורך, הצפת את הקו עם הרכב כדי לפזר בועות מוכנות מראש.לחלופין, מלאו מראש את המזרק, ולאחר החיבור, דחפו את הנוזל דרך הקו המחובר. לאחר שהקו המלא ברכב פועל ביעילות, טען חמישה מיקרוליטרים של הפתרון למזרק המילטון. ברגע שהעכבר מורדם לחלוטין, להחיל משחה עיניים סטרילית על העיניים ולגלח את ראש החיה, ולאחר מכן לחטא את העור עם יוד povidone ואתנול.מייצבים את ראש החיה ביד אחת ומחזיקים את המזרק עם המזרק הטעון בסמים ביד השנייה. לאחר מכן, באמצעות אינפוזיה, לחקור בקפידה, לאתר ולאמת את הצומת של התפרים הסגיטליים והלמבדואידיים על גולגולת העכבר. ברגע שהתפר ממוקם והאינפוזר נמצא במקומו, מנדנדים באיטיות ובעדינות את האינטגרה קדימה ואחורה עד שהתפר חודר דרך העור ויורד אל הצומת עד לפקק הפלסטיק, מה שמבטיח את החדרת כל קצה ה-6 מילימטרים לתוך הצומת.לאחר מכן, דחפו באיטיות את הבוכנה של המזרק כדי לגרש את חמשת המיקרוליטרים של הנוזל לתוך ה-dura mater. ביום הבדיקה, לאחר ההתאקלמות לחדר, הסירו עכבר אחד יחד עם הכוס מהתא המתאים. שמרו על הגביע במצב האופקי לצורך חלוקת משקל גוף שווה, שכן חלוקת המשקל הלא שווה עשויה לשנות או למנוע את תגובת בעלי החיים.הניחו את הכוס עם העכבר על משטח סופג שנשמר על השולחן מתחת לארון הבדיקה. לאחר מכן, לצורך בדיקת פון פריי פריי, הניחו את נימת פון פריי במשקל 07 גרם במרכז הפנים בין העיניים והפעילו מספיק לחץ על החוט כדי לגרום לשיער פון פריי להתכופף לתצורה בצורת C. שמרו על קשר עם נימה למשך כשלוש עד חמש שניות או עד שהעכבר מחליק את החוט באמצעות הראש או הכפות.כדי לעקוב אחר שיטת דיקסון כלפי מעלה-מטה, החל את החוט הבא במשקל נמוך יותר אם העכבר מגיב לחוט, אחרת, החל נימה במשקל גבוה יותר. ההליך שימש לבחינת ההשפעות של פרולקטין דוראלי על רגישות יתר של הפנים המעוררת מכנית. תוצאות המחקר הדגימו ירידה משמעותית בסף הגמילה מהפנים אצל נקבות עכברי ICR בתגובה לחמישה מיקרוגרם של פרולקטין דוראלי.מינון נמוך פי עשרה של 5 מיקרוגרם של פרולקטין הראה גם הוא סף נסיגה מופחת לפנים, בדומה למינון גבוה של פרולקטין. זריקות הפרולקטין יצרו התנהגויות ספונטניות הקשורות לכאב, אשר הוערכו באמצעות צער. דוראל 5 מיקרוגרם של פרולקטין גרם לגרום לגרגור משמעותי אצל עכברים נקבות והדגים עוד יותר תפקיד ברור לפרולקטין דוראלי בהתנהגויות דמויות מיגרנה נשית בדיקות התנהגותיות באמצעות חוטי פון פריי או עגמומי פנים כדי לקבוע אם הגירוי, בהיעדר פציעה, גורם לתגובת כאב ראש.כיום ניתן להשתמש בטכניקה זו כדי לחקור מנגנונים מבוססי דלקת בקורי המוח ללא חשש מפני אזהרות הנגרמות על ידי קרניוטומיות והדלקת שלאחר מכן.

dural-stimulation-periorbital-von-frey-testing-mice-as-preclinical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

במחקר זה, החוקרים מדווחים בפעם הראשונה רומן 3D-Immersive &amp; האינטראקטיבי Neuronavigation (3D-IIN) דרך ההשפעה של התקף מיגרנה ספונטני במערכת μ-אופיואידים של המוח של מטופל בגוף חי.

3D-Neuronavigation<em&gt; בVivo</em&gt; דרך המוח של חולה במהלך מיגרנה ספונטנית

כאן, אנו מתארים שיטות של מניפולציה אלקטרואופטיקה של סוגים מסוימים של נוירונים במהלך ניטור של שינה/ערנות מדינות בעכברים, הצגת העבודה האחרונה שלנו על גרעין המיטה של מסוף הניסטריה כדוגמה.

מניפולציה אלקטרואופטיקה של מעגלים עצביים בזמן ניטור שינה/ערות מדינות עכברים

מכרסמים אינם מסוגלים לדווח על תסמיני מיגרנה. כאן, אנו מתארים פרדיגמת בדיקה הניתנת לניהול (בדיקות שדה בהירות/כהות ופתוחות) למדידת סלידה קלה, אחד הסימפטומים הנפוצים והמטרידים ביותר בחולים עם מיגרנות.

חקירת התנהגות דמוית מיגרנה באמצעות סלידה קלה בעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את מודל שחרור הפפטיד הקשור לגן ex vivo calcitonin (CGRP) ואת האסטרטגיה לכמת את ההשפעה של חומרים פרמקולוגיים על כמות CGRP המשתחררת מהמערכת הטריגמינווסקולרית במכרסמים.

אקס ויוו שחרור פפטיד הקשור לגן קלציטונין ממערכת Trigeminovascular במכרסמים

אנו מתארים פרוטוקול להערכת עקומות מנה-תגובה לגירוי חוץ-גולגולתי במונחים של מדידות שדה חשמלי במוח וזרימת דם רלוונטית של סמן ביולוגי-מוחי. מכיוון שפרוטוקול זה כולל החדרת אלקטרודות פולשניות למוח, יש צורך בהרדמה כללית, כאשר נשימה ספונטנית עדיפה על פני נשימה מבוקרת.

מיקום אלקטרודות מעוררות חוץ-גולגולתיות ומדידת זרימת דם מוחית ושדות חשמליים תוך גולגולתיים בעכברים מורדמים

במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול סטנדרטי לכימות הרפלקס האופטוקינטי. הוא משלב גירוי תוף וירטואלי ווידאו-אוקולוגרפיה, ובכך מאפשר הערכה מדויקת של סלקטיביות התכונה של ההתנהגות והפלסטיות האדפטיבית שלה.

כימות סלקטיביות תכונות חזותיות של רפלקס האופטוקינטי בעכברים

פגיעה כרונית בהיצרות של העצב האינפרא-אורביטלי הדיסטלי בעכברים גורמת לשינויים בהתנהגות ספונטנית (פעילות טיפוח פנים מוגברת) ובהתנהגות נוציפנסיבית בתגובה לגירוי מישושי (תגובתיות יתר לגירוי שיער פון פריי) המהווים סימנים לכאב מתמשך ולאלודיניה ומשמשים מודל לכאב נוירופתי טריגמינלי.

פגיעה כרונית בהיצרות של העצב האינפרא-אורביטלי הדיסטלי (DIoN-CCI) בעכברים לחקר כאב נוירופתי טריגמינלי

כאן מוצג הליך כירורגי זעיר פולשני, הכולל הנחת בדיקת דופלר לייזר על הגולגולת מעל האזור הדיסטלי של עורק המוח האמצעי (MCA), מיקום פריאורביטלי המתאים לחולדות ועכברים, כדי להעריך את זרימת הדם במהלך חסימת MCA חולפת.

מיקום פריאורביטלי של בדיקת דופלר לייזר לניטור זרימת דם מוחית לפני חסימת עורק מוחי אמצעי במודלים של מכרסמים

פרוטוקול זה מספק שיטה למעקב אחר פזילה אוטומטית של העיניים במכרסמים לאורך זמן באופן התואם נעילת זמן למדדים נוירופיזיולוגיים. פרוטוקול זה צפוי להיות שימושי לחוקרים החוקרים מנגנונים של הפרעות כאב כגון מיגרנה.

שיטת פזילה אוטומטית לסנכרון זמן התנהגות ודינמיקה מוחית במחקרי כאב עכברים

במאמר זה, נבחן את המתודולוגיה שיקולים רלוונטיים שילוב של TMS ו-fMRI לבחון את ההשפעות של גירוי המוח ברשת מחדל.

שילוב של גירוי מגנטי fMRI Transcranial ולבחון את רשת מצב ברירת מחדל

חקור מנגנוני כאב ראש בעכברים באמצעות גירוי דוראלי מינימלי פולשני ובדיקות פריאורביטל פון פריי. שיטה זו מאפשרת חקירת השפעת פרולקטין על רגישות פנים ללא צורך בקרניוטומיה.

גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש

גלה סרטונים נוספים