Name: ב-Vivo שיטות להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 18 s
Description: למד שיטות in vivo להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים כמו עזים ומקוקי רזוס. השיטות כוללות FVEP, PERG ו-OCT לחקר העברת אותות חזותיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי המענקים הבאים: תוכנית המפתח הלאומית של סין (2021YFA1101200); פרויקט המחקר הרפואי של וונג'ואו (Y20170188), תוכנית המחקר והמחקר הלאומית של סין (2016YFC1101200); הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81770926;81800842); תוכנית מפתח למו"פ של מחוז ג'ה-ג'יאנג (2018C03G2090634); ותוכנית מפתח מו"פ של בית החולים עין וונג'ואו (YNZD1201902). לארגון החסות או למימון לא היה כל תפקיד בעיצוב או בהתנהלות של מחקר זה.

<ol><li>Benowitz, L., Yin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rewiring+the+injured+CNS%3A+lessons+from+the+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve.</a> Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).</li>
<li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN%2FmTOR+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li>
<li>Duan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+following+axotomy%3A+effects+of+osteopontin+and+mTOR+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific regeneration of retinal ganglion cells following axotomy: effects of osteopontin and mTOR signaling.</a> Neuron. 85 (6), 1244-1256 (2015).</li>
<li>Bei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+visual+function+by+enhancing+conduction+in+regenerated+axons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Restoration of visual function by enhancing conduction in regenerated axons.</a> Cell. 164 (1-2), 219-232 (2016).</li>
<li>He, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+control+of+axon+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Intrinsic control of axon regeneration.</a> Neuron. 90 (3), 437-451 (2016).</li>
<li>Yang, S. -G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+to+promote+long-distance+optic+nerve+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Strategies to promote long-distance optic nerve regeneration.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 119(2020).</li>
<li>Foroozan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+treatments+for+nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurologic+Clinics%22%5BJournal%5D)">New treatments for nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy.</a> Neurologic Clinics. 35 (1), 1-15 (2017).</li>
<li>Singman, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indirect+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Military+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Indirect traumatic optic neuropathy.</a> Military Medical Research. 3, 2(2016).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+retinal+ganglion+cells+and+optic+nerve%27s+integrity+in+large+animals+by+multi-modality+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of retinal ganglion cells and optic nerve's integrity in large animals by multi-modality analysis.</a> Experimental Eye Research. 197, 108117(2020).</li>
<li>Tolbert, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Rhesus+macaque+to+human%3A+structural+evolutionary+pathways+for+immunoglobulin+G+subclasses%5BTitle%5D)+AND+%22mAbs%22%5BJournal%5D)">From Rhesus macaque to human: structural evolutionary pathways for immunoglobulin G subclasses.</a> mAbs. 11 (4), 709-724 (2019).</li>
<li>Preuss, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreuss%2C+T+%22Specializations+of+the+human+visual+system%3A+the+monkey+model+meets+human+reality%22">Specializations of the human visual system: the monkey model meets human reality</a>. , CRC Press. Boca Raton, FL. 231-259 (2004).</li>
<li>Friedli, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pronounced+species+divergence+in+corticospinal+tract+reorganization+and+functional+recovery+after+lateralized+spinal+cord+injury+favors+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pronounced species divergence in corticospinal tract reorganization and functional recovery after lateralized spinal cord injury favors primates.</a> Science Translational Medicine. 7 (302), (2015).</li>
<li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+assessment+of+retinal+ganglion+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological assessment of retinal ganglion cell function.</a> Experimental Eye Research. 141, 164-170 (2015).</li>
<li>Smith, C. A., Vianna, J. R., Chauhan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+retinal+ganglion+cell+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Assessing retinal ganglion cell damage.</a> Eye. 31 (2), 209-217 (2017).</li>
<li>Schuman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+and+histologic+measurements+of+nerve+fiber+layer+thickness+in+normal+and+glaucomatous+monkey+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography and histologic measurements of nerve fiber layer thickness in normal and glaucomatous monkey eyes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (8), 3645-3654 (2007).</li>
<li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+reproducibility+of+VEP+recording+in+rats%3A+electrodes%2C+stimulus+source+and+peak+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Improving reproducibility of VEP recording in rats: electrodes, stimulus source and peak analysis.</a> Documenta Ophthalmologica. 123 (2), 109-119 (2011).</li>
<li>Odom, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ISCEV+standard+for+clinical+visual+evoked+potentials%3A+%282016+update%29%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">ISCEV standard for clinical visual evoked potentials: (2016 update).</a> Documenta Ophthalmologica. 133 (1), 1-9 (2016).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> eLife. 8, 45881(2019).</li>
<li>Seidman, S. H., Telford, L., Paige, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertical%2C+horizontal%2C+and+torsional+eye+movement+responses+to+head+roll+in+the+squirrel+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Vertical, horizontal, and torsional eye movement responses to head roll in the squirrel monkey.</a> Experimental Brain Research. 104 (2), 218-226 (1995).</li>
<li>Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+pattern+electroretinogram%5BTitle%5D)+AND+%22Documenta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">The mouse pattern electroretinogram.</a> Documenta Ophthalmologica. 115 (3), 145-153 (2007).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול של VEP, PERG, ו- OCT במקוק עז ורזוס. שיטות ויואו אלה ניתן ליישם במודלים בעלי חיים גדולים של נוירופתיות אופטיות שונות, כגון גלאוקומה, איסכמי, או נוירופתיה אופטית טראומטית ודלקת עצבים אופטית9.
PVEP יציב ורגיש יותר מאשר FVEP17; עם זאת, זה לא יכול להיות עורר goat9. ככזה, FVEP מבוצע עז ו PVEP מבוצע מקוק רזוס במעבדה שלנו כדי להעריך את השלמות של מסלול רטינו-geniculo-קליפת המוח. המנגנון שבבינ...

עצב הראייה (ON), המורכב אקסונים מתאי הגנגליון ברשתית (RGC), משדר אות חזותי מהרשתית למוח. מחלות ON, כגון גלאוקומה, נוירופתיה אופטית טראומטית או איסכמית, גרמו לעתים קרובות ניוון ON/ RGC בלתי הפיך ואובדן חזותי הרסני. למרות שיש כיום פריצות דרך רבות בהתחדשות ON והגנה על RGC במודלים מכרסמים1,2,3,4,5,6, טיפולים קליניים עבור רוב מחלות ON נותרו זהים במהותם בחצי המאה האחרונה עם תוצאה לא מספקת7,8 . כדי למלא את הפער בין מחקר בסיסי לפרקטיקה קלינית, מחקרים תרגומיים המשתמשים במודל בעלי חיים גדול של מחלות ON נחוצים ומועילים לעתים קרובות בגלל הדמיון האנטומי הקרוב יותר שלהם לבני אדם מאשר מודלים מכרסמים.
מקוק עזים ורזוס הם שני מינים גדולים של בעלי חיים המשמשים במעבדה שלנו לדגם מחלת ON של האדם. גודל גלגל העין של עז, ON, והמבנה הסמוך (חלל מסלולית ואף, בסיס הגולגולת וכו ') דומה לזה של אדם המבוסס על סריקת CT גולגולת9. ככזה, מודל עז מספק הזדמנות להעריך ולשכלל מכשירים טיפוליים או הליכים כירורגיים לפני השימוש בבני אדם. מקוק רזוס, כמו פרימט לא אנושי (NHP), יש מערכת חזותית ייחודית דמוית אדם שאינו קיים במינים אחרים10,11. בנוסף, תגובות פתולוגיות לפציעות וטיפולים ב- NHP דומה בהרבה לזה אצל בני אדם12.
בבדיקות vivo להערכת המבנה והתפקוד של ON ו- RGC חשובים במחקרים בבעלי חיים גדולים. אלקטרורטינוגרמה דפוס (PERG) שימש להערכת הפונקציה RGC. פוטנציאל עורר חזותי פלאש (FVEP) משקף את השלמות של מסלול רטינו-geniculo-קליפת המוח במערכת הראייה. לכן, PERG בשילוב עם FVEP יכול לשקף את הפונקציה ON9,13,14 . הדמיית טומוגרפיה של קוהרנטיות רשתית אופטית (OCT) יכולה להראות את מבנה הרשתית ברזולוציה טמפורלית ומרחבית גבוהה, המאפשרת מדידה של עובי קומפלקס הגנגליון ברשתית (GCC)9,15. לבדיקות אלקטרופיזיולוגיות במחקר זה, ניטור סימנים חיוניים (קצב חום, קצב הפרה, לחץ דם) ורמת רוויית החמצן (SpO2) לפני הבדיקה הם קריטיים שכן לפרמטרים אלה יש השפעות חזקות על זרימת הדם העין ולכן על תפקוד מערכת הראייה. עם זאת, לא עקבנו אחר הסימנים החיוניים בעת ביצוע הדמיית רשתית OCT למען הפשטות. על פי המחקר הקודם שלנו9, עובי GCC נמדד על ידי הדמיית רשתית OCT הוא יציב למדי, עם מקדם בין מפגשים של וריאציה קרוב ל 3%. אלה במבחני vivo במקוק עז ורזוס תוארו בפירוט במחקר הקודם שלנו9. כאן אנו מציגים שיטות אלה כדי לסייע בהגברת השקיפות והשחזור הניסיוניים.

<table><tbody><tr><td>צגים בגודל 47.6 x 26.8 ס"מ DELL</td><td>Inc.</td><td>E2216HV</td><td>הגירויים החזותיים של לוחות שחמט שחור-לבן היפוך ניגודיות הוצגו על גבי מסכים</td></tr><tr><td>6.0 מ"מ צינור קנה הנשימה</td><td>Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd</td><td>PVC 6.0</td> להבטיח <td>את</td></tr><tr><td>קליפ</td><td></td><td></td><td></td>התנין</tr> בדרכי הנשימה <tr><td>אטרופין</td><td>גואנגדונג Jieyang Longyang בעלי חיים פרמצבטיקה ושות', בע"מ.</td><td></td><td>הפחתת הפרשת הסימפונות והגנה על הלב מפני הפעלת עצב הנרתיק</td></tr><tr><td>Carbomer Eye Gel</td><td>Fabrik GmbH חברת בת של Bausch & Lomb</td><td></td><td>להרטיב את הקרנית ולייצב את אלקטרודות ההקלטה</td></tr><tr><td>ERG-Jet אלקטרודות הקלטה</td><td>Roland Consult Stasche& Finger GmbH</td><td>2300 La Chaux-De-Fonds</td><td>ERG הקלטת</td></tr><tr><td>ספקולום עיניים</td><td>שנחאי Jinzhong Medical Device Co., Ltd</td><td>ZYD020</td><td>סדק פלפברלי פתוח</td></tr><tr><td>היידלברג ספקטרליס OCT מערכת</td><td>היידלברג הנדסה</td><td></td><td>OCT</td></tr><tr><td>מערכת הדמיה</td><td></td><td></td><td>( https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)</td></tr> <tr><td>isoflurane</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td>isoflurane הרדמה</td></tr><tr><td>זכר Saanen עזים Caimu</td><td>Livestock Company, מדינה (האנגג'ואו, סין)</td><td></td> <td>עזי Saanen הזכרים, בגילאי 4 עד 6 חודשים במשקל של 19&ndash; </td></tr><tr><td>אלקטרודה מחט</td> 23 ק"ג <td>Roland Consult Stasche& שימוש ב-Finger GmbH</td><td>U51-426-G-D</td><td>לאלקטרודה קרקעית FVEP ואלקטרודות ייחוס PERG</td></tr><tr><td>צנתר ורידי היקפי תוך ורידי</td><td>BD שנחאי מכשור רפואי ושות', בע"מ</td><td>383019</td><td>גישה תוך ורידית לאטרופן ופרופופול</td></tr><tr><td>פרופופול</td><td>Xian Lipont Enterprise Union Management Co., Ltd.</td><td></td><td>לגרום להרדמה איזופלורן בטיפות</td></tr><tr><td>עיניים טרופיקמיד פנילפרין</td> בעזים <td>SANTEN OY, יפן</td><td></td><td>5% טרופיקמיד ו-5% פנילפרין הידרוכלוריד</td></tr><tr><td>מכשיר אלקטרופיזיולוגיה חזותית</td><td>Gotec Co., Ltd</td><td>GT-2008V-III</td><td>שימוש עבור FVEP & PERG</td></tr><tr><td>xylazine</td><td>Huamu מוצרי בריאות בעלי חיים ושות', בע"מ</td><td></td><td>הרדמת קסילזין: הזרקה תוך שרירית של קסילזין 3 מ"ג/ק"ג</td></tr><tr><td>zoletil50</td><td>Virbac</td><td></td><td>לגרום להרדמת איזופלורן בקוף</td></tr></tbody></table>

ב-vivo שיטות להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים

In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals

עצב הראייה אוסף אותות אקסונים מתאי הגנגליון ברשתית ומשדר אות חזותי למוח. מודלים גדולים של בעלי חיים של פגיעה בעצב הראייה חיוניים לתרגום אסטרטגיות טיפוליות חדשניות ממודלים מכרסמים ליישום קליני בשל הדמיון הקרוב יותר שלהם לבני אדם בגודל ובאנטומיה. כאן אנו מתארים כמה שיטות vivo כדי להעריך את הפונקציה והמבנה של תאי גנגליון הרשתית (RGCs) ועצב הראייה (ON) בבעלי חיים גדולים, כולל פוטנציאל מעורר חזותי (VEP), אלקטרורטינוגרמה דפוס (PERG) וטומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT). במחקר זה הועסקו גם עיזים וגם פרימטים לא אנושיים. על ידי הצגת שיטות ויוו אלה צעד אחר צעד, אנו מקווים להגדיל את הרבייה הניסיונית בין מעבדות שונות ולהקל על השימוש במודלים בעלי חיים גדולים של נוירופתיות אופטיות.

איור 1A מציג תוצאות מייצגות של FVEP בעז. למרות צורות הגל באותה עוצמת הבזק יש דמיון יחסי, אנו עדיין ממליצים לבחון את צורות הגל פעמיים. גלים אלקטרומגנטיים הנוצרים על ידי מכשירים אלקטרוניים יפריעו לאותות החשמליים שנאספו, וכתוצאה מכך רעש בסיסי גבוה ויכולת חזרה לקויה של צורת הגל. לכן, מומלץ לוודא כי אין מכשירים אלקטרוניים מיותרים המחוברים לסביבה שמסביב במהלך בדיקה אלקטרופיזיולוגית כדי למנוע הפרעות כאלה, ומומלץ לחזור על לפחות שתי מדידות כדי לקבוע את היציבות ואת החזרה של תוצאות ניסיוניות. כאשר תיקו...

כאן אנו מורידים בדרגה מספר בדיקות ויואו (פוטנציאל מעורר חזותי פלאש, אלקטרורטינוגרמה דפוס וטומוגרפיה קוהרנטיות אופטית) במקוק עזים ורזוס כדי להבין את המבנה והתפקוד של עצב הראייה והנוירונים שלו.

ב-Vivo שיטות להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים

The optic nerve collects axons signals from the retinal ganglion cells and transmits visual signal to the brain. Large animal models of optic nerve injury ...

שלום לכולם. זה ייקוי ג'אנג מבית החולים וונג'ואו איי. העצב העליון חסר אקסונים מתאי גנגליון orexin, ולאחר מכן להעביר את האות החזותי למוח.מודל גדול יותר של פגיעה בעצבים העליונים חיוניים כדי לתרגם את הטיפול החדש ממודל רובוט ליישום לימפה. כאן, אנו מתארים כמה שיטות vivo כדי להעריך את המבנה והתפקוד של תאי גנגליון orexin בעצב העליון בבעלי חיים גדולים. על ידי הצגת שיטה זו צעד אחר צעד, אנו מקווים להגדיל את לקויות הרבייה הניסיוניות ולהקל על השימוש במודלים גדולים יותר של נוירוזה אופטית.תגלח עם סכין גילוח אלקטרוני. וגם, להכין אותו עם 70% אלכוהול שלוש פעמים, כדי לנקות את העור ולחשוף את הווריד התת עורי. הכנס גלגלית ורידית היקפית תוך ורידי.ואז לטפטף אטרופין ופרופופול. לצנרר את העז עם צינור קנה הנשימה שישה מילימטר ולהתחבר למכונת הנשמה מלאכותית. הרדמה נשמרה עם 3.5% איזופלוראן בחמצן בקצב זרימה קבוע של שני ליטרים מנוהל.מניחים את חיישן הטמפרטורה מתחת ללשון העז. חותכים את דבק רוויית החמצן לקצה הפרוקסימלי של אוזן העז. לקשור את שרוול לחץ הדם לבסיס הירך.מהדק א.ק.ג. נצמד על הגפיים לפי הסדר. לאחר מכן, אנו יכולים לפקח על האינדיקטורים החיוניים של העז. לגלח את השיער ולחטא את העור עם betadine ו 70% אלכוהול שלוש פעמים במרכז העצם הקדמית.פתחו את שקית החיטוי המכילה מספריים ומסמרים. לעשות חותמות בעור כדי לחשוף את הגולגולת עם מספריים. ברגי פלדה להשתלה במרכז העצם הקדמית.לגלח את השיער ולחטא את העור עם betadine ו 70% אלכוהול שלוש פעמים בנקודת אמצע של שתי אוזניים בעצם העורף. לעשות חותמות בעור. ברגי פלדה להשתלה בנקודת האמצע של שתי אוזניים בעצם העורפית.המחט הקרקעית מתחשמלת מתחת לבורג הגולגולת הקדמי. האלקטרודה הפעילה ואלקטרודה הייחוס מחוברות לברגים חזיתיים ומערביים בהתאמה עם קליפים תנין כדי להפחית את אימפוטנציה אלקטרודה. תיקון עין אחת.יש למרוח טיפות עיניים הרדמה אקטואלי על פני השטח העין. האישונים משני הצדדים מתרחבים על ידי טיפות עיניים רידריאזיס. מניחים את ראש העז במעורר מלא גז מכוון לאור אמבולנטי.מניחים את השמיכה השחורה מעל הממריץ ואת ראש העז למשך חמש דקות הסתגלות. ספקולום עפעפיים משמש כדי לחשוף באופן מלא את האישון שלה. בדוק את אימפוטנציית המגע של רקמת האלקטרודה.ודא כי אימפוטנציה היא מתחת 10 ק"מ עבור כל אחד כדי למנוע הפרעות אלקטרומגנטיות ממכשירים חשמליים אחרים באותו החדר. בדוק את הרעש הבסיסי ללא גירוי אור. התחל הקלטת FVEP.שים לב שהקלטת FVEP בכל עוצמת אור מתבצעת פעמיים. שימו לב כי לחות הקרנית עם קרע מלאכותי אם היא נראית יבשה. חזור על צעדים לעין הנגדית.התחל הקלטת FVEP בעוצמות אור שונות ברציפות. עבור כל הקלטה, 64 עקבות הם בממוצע להניב צורת גל אחד. השיא החיובי והפעיל הראשון בצורת גל FVEP הוגדר כ- P1 ו- N1. אלקטרודה הקרקע מעוקר ממוקם בתנוך האוזן.האלקטרודות הפעילות והמתייחסות המעוקרות מוכנסות באופן תת עורי לאורך קו האמצע ועצם קדמית וערופית בהתאמה. ספקולום עפעפיים משמש כדי לחשוף באופן מלא את האישון שלה. תיקון עין אחת.דפוס רישום תגובות VEP של העין השנייה בתדרים מרחביים שונים ברציפות. התחבר לאלקטרודה הקרקעית עם קליפ תנין. שתי אלקטרודות התייחסות מחט מעוקרות ממוקמות מתחת לעור סנטימטר אחד מאחורי הקנתוס לרוחב משני הצדדים.ספקולום עפעפיים משמש כדי לחשוף באופן מלא את האישון שלה. שתי אלקטרודות הקלטה ERG מחוטאות מרוכזות הן בקרנית לאחר יישום אקטואלי של קרע מלאכותי. שני ממריצים ממוקמים מול כל עין עם מרחק צפייה של 50 ס"מ.ודא כי אימפוטנציה היא מתחת 10 ק"מ. עקוב אחר רעש הבסיס ללא גירוי אור. כוון את האור האמבולנטי.התחל דפוס ERG הקלטה משתי העיניים בו זמנית בתדרים מרחביים שונים ברציפות. לבסוף, החזרה של המסך כדי להקליט תבנית ERG ללא ממריצים חזותיים ושליטה פעילה. מסנן bandpass מוגדר לנוע בין אחד ל 75 הרץ עבור שלושה דפוס CPD ERG.מסנן bandpass הוא מאחד עד 50 הרץ כדי להחליק את הצורה מבלי להשפיע על המשרעת שלה. הפסגות החיוביות והפעילות הראשונות בצורת הגל מיועדות כ-P1 ו-N1. התבנית משרעת ERG נמדדת מ- N1 עד P1.To להפחית אימפוטנציה אלקטרודה, התייחסות מחט מעוקרת ממוקמת מתחת לעור הקדמי. ואלקטרודה התייחסות מחט מעוקרת ממוקמת מתחת לעור סנטימטר אחד מאחורי הקנתוס לרוחב בצד אחד.אלקטרודה הקלטת ERG מחוטא ממוקם על הקרנית על יישום אקטואלי של קרע מלאכותי. תיקון עין אחת. תצוגה ממוקמת במרחק צפייה של 50 ס"מ.ספקולום עפעפיים משמש כדי לחשוף באופן מלא את האישון שלה. לאחר מכן, העז מונחת על מנוחת הסנטר. יישר את העז עם המצלמה כדי לשלוח את ראש עצב הראייה שלו בתמונת הלייזר אופטלמוסקופיה של סריקת הקונפוקלים על ידי שינוי תנוחת הראש שלה.לחץ על לחצן התחל כדי להזין את שלב הסיום של הזיהוי. המתן עד שהמכונה תסיים לטעון. לחץ על לחצן ההתחלה הצהוב כדי להתחיל את ההדמיה הרשמית.התאם את הג'ויסטיק כדי להאיר באופן שווה את תמונת האינפרא-אדום כדי לשפר את איכות התמונה. החלק את המצלמה קדימה עד שתמונת OCT ברשתית הזקופה תוצג במסך הימני העליון. שנה את הג'ויסטיק כדי שהוא ירקוד באופן שווה בתמונת OCT רשתית אופקית.לחץ על הלחצן בג'ויסטיק כדי לתפוס את התמונה באופן אוטומטי. החזק ג'ויסטיק זה כדי לשמור על איכות התמונה במסך התמונה החיה עד להשלמת ביצוע התמונה. לאחר מכן לחץ על רכוש.בחר תמונה ראשונית באיכות גבוהה. לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר הגדר הפניה. לחץ על לחצן המשך טיפול כדי לאפשר לתוכנית להתאים באופן אוטומטי את הסריקה הנוכחית לסריקה הבסיסית.לאחר ההתאמה, לחץ על הכפתור על הג'ויסטיק כדי להפעיל מעקב אוטומטי בזמן אמת. לחץ על לחצן המדידה כדי להזין את פלטפורמת המדידה. בחר את המחק כלי ונגב את קו ה- RFL, המסומן באופן אוטומטי על-ידי מחשב.בחר בכלי ציור הקו כדי לחלק באופן ידני את הגבול בין IPL ל- INL. בין הקווים האדומים והכחולים נמצא מתחם GCC. Retina השתנה הדמיה מקוק רזוס מבוצע באמצעות אותו ציוד והליך כמו אלה המשמשים עז.איור א' מציג FVEP מייצג בעז. איור B מציג תבנית מייצגת של צורת גל ERG בעז. איור C מציג תבנית מייצגת FVEP במקוק רזוס.ואיור ד' מראה תבנית מייצגת של צורת גל ERG במקוק רזוס. איור 2 מציג תמונות OCT רשתית מייצגות סביב ראש עצב הראייה ואת עובי קומפלקס GCC באזורים היקפיים שונים בעז ומקוק רזוס. מודל בעלי חיים גדול ממלא תפקיד חשוב במחקר התרגומי.במקרים רבים, השפעות טיפוליות מבטיחות במודלים של בעלי חיים קטנים לא תורגמו לחולים אנושיים. במחקר זה הצגנו פרוטוקול וידאו של FVEP, PERG ו- OCT בעז ומקוק רזוס. שיטה זו ב- vivo יכולה להיות מיושמת במודל גדול יותר של נוירוזה אופטית שונה, כגון גלאוקומה איסכמית או נוירופתיה אופטית טראומטית ודלקת עצבים אופטית.

in-vivo-methods-to-assess-retinal-ganglion-cell-optic-nerve-function

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בתאי הגנגליון ברשתית מעבירים מידע חזותי מן העין אל המוח עם רצפים של פוטנציאל פעולה. כאן, אנו מדגימים כיצד להקליט את פוטנציאל הפעולה של תאים גנגליון...

יחידה יחידה ב-vivo הקלטות של התצלובת הראייה של עכברוש

סרטון זה מדגים שיטה, באמצעות סורק T קליני 3, לMR הדמיה משופר לעומת זאת, של ההשלכה החזותית העכבר הנאיבית ובמחקרי vivo חוזר על עצמו ואורך של ניוון עצב ראייה קשור עם פציעה למחוץ עצב ראייה חריפה וניוון עצב ראייה כרוני ב עכברים עקום החוצה (p50 KO).

בהדמית vivo של יושרה סיבי עצב הראייה על ידי contrast-enhanced MRI בעכברים

הפעלת המיקרוגלים וmicrogliosis הן תגובות מפתח לניוון של מערכת עצבים כרוניות. כאן, אנו מציגים שיטות לin vivo, הדמיה לטווח הארוך של תאים ברשתית microglial CX3CR1-GFP + על ידי ophthalmoscopy confocal, ולסף וmorphometric מנתח לזהות ולכמת ההפעלה שלהם. אנו עוקבים אחר שינויי microglial בגלאוקומה הקשורות לגיל שלבים מוקדמים.

בVivo הדינמיקה של רשתית microglial הפעלה במהלך מוחיה: Confocal Ophthalmoscopic הדמיה וMorphometry הסלולרי בעכבר גלאוקומה

Ex vivo ERG יכול לשמש לתיעוד פעילות חשמלית של תאי רשתית ישירות מרשתית שלמה מבודדת של בעלי חיים או בני אדם. אנו מדגימים כאן כיצד ניתן להתאים מערכות ERG in vivo להקלטות ERG ex vivo על מנת לנתח את הפעילות החשמלית של תאי הרשתית.

בו זמנית<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; בדיקות פונקציונליות של שתי הרשתיות על ידי<em&gt; In vivo</emמערכת electroretinogram&gt;

גלאוקומה מאופיינת בפגיעה בתאי גנגליון ברשתית. גרימת גלאוקומה במודלים של בעלי חיים יכולה לספק תובנה לגבי חקר מחלה זו. כאן, אנו מתארים הליך הגורם לאובדן RGCs במודל חולדה in vivo ומדגים את הכנת הרשתית השלמה לניתוח.

גלאוקומה וישכנע נוהל בבית<em&gt; In vivo</em&gt; מודל עכברוש ואת כל הר רשתית הכנה

כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור ויוו ההדמיה של הרשתית עכבר עם טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (SD-אוקטובר). הוא מתמקד תאי גנגליון (מהרשות לשיקום האסיר) באזור peripapillary, עם מספר סריקה וכימות הגישות שתוארו.

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית: הדמיה העכבר גנגליון תאים In Vivo

פרוטוקול זה מתאר איך ברזולוציה גבוהה טכניקות הדמיה כגון טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי, סריקת לייזר ophthalmoscopy יכול להיות מנוצל מכרסמים קטנים, באמצעות מערכת פלטפורמה אופטלמולוגיות הדמיה, כדי לקבל מידע על עובי רשתית, microglial תא הפצה, בהתאמה.

אין ויוו הדמיה של עכברים כתב Cx3cr1gfp/gfp עם תחומים הספקטרום טומוגרפיה אופטית קוהרנטית, סריקת לייזר Ophthalmoscopy

כאן, אנו מתארים את השימוש בטומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) כדי לדמיין מבנים ברשתית ובעין in vivo במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה.

הערכות מבניות In vivo של מחלות עיניים במודלים של מכרסמים באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

הדמיית in vivo היא כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה בבריאות ובמחלות. פרוטוקול זה מתאר הדמיה טרנס-אימונית של רשתית העכבר באמצעות מיקרוסקופ סטנדרטי של שני פוטונים. הוא גם מדגים שיטות שונות של הדמיה חיה כדי לתייג פלואורסצנטיות קבוצות תאים מרובות של הרשתית.

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

פרוטוקול זה מציג ומתאר שלבים לבידוד, דיסקציה, התרבות והכתמה של צמחי רשתית המתקבלים מעכבר בוגר. שיטה זו מועילה כמודל ex vivo לחקר מחלות נוירו-וסקולריות שונות ברשתית כגון רטינופתיה סוכרתית.

השתלת הרשתית של הרשתית של עכבר בוגר כמודל ex vivo לחקר מחלות נוירו-וסקולריות ברשתית

למד שיטות in vivo להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים כמו עזים ומקוקי רזוס. השיטות כוללות FVEP, PERG ו-OCT לחקר העברת אותות חזותיים.

ב-Vivo שיטות להערכת תפקוד ומבנה תאי גנגליון רשתית ועצבי הראייה בבעלי חיים גדולים

גלה סרטונים נוספים