Name: הכנה מדגמית להדמיה תלת-ממדית מבוססת טומוגרפיה ממוחשבת של כלי דם הינדיים של מורין (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: למד שיטת הדמיה תלת-ממדית של כלי דם הינדיים בעכברים באמצעות טומוגרפיה ממוחשבת. הטכניקה מאפשרת הערכה מקיפה של מבני עורקים וורידים לחקר מחלות כלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ליסויו קימורה, מגומי נגהירו וסאקו טוקונאגה על התמיכה הטכנית המצוינת בניסויים בבעלי חיים.

כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת קומאמוטו (התייחסות לאישור לא. M30-040/A2020-105), התואמים את מדריך המכונים הלאומיים לבריאות בארה"ב לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (פרסום מס '85-23, מתוקן 2011).
1. הכנה
<ol><li>הכן את מנגנון הזלוף ואת מאגר vasodilator (4 מ"ג / L פפברין הידרוכלוריד, 4 g / L; אדנוזין, 1 g / L; הפרין, 1 U / mL מלוחים חוצצי פוספט (PBS)). הערה: מכשיר ריפלוקס ורייאגנטים מרחיבי כלי דם זהים לאלה שדווחו על ידי Weyers et al.5.</li>
	<li>חברו את הצנתר 22 G, צינור מאריך 2 מ"ל ו-stopcock תלת-כיווני (איור 1A). הערה: התאם את המד בהתאם לגודל החיה. עבור עכברי C57BL/6 בוגרים, 22 גרם הוא אופטימלי.</li>
	<li>מלאו את מנגנון זלוף הלחץ במאגר מרחיב כלי הדם (איור 1A). הערה: הימנעו מהיווצרות בועות כדי למנוע הפרעה במילוי המדיום הניגודי.</li>
</ol>2. זלוף
<ol><li>הזרקו 1 U/g הפרין ב-PBS לחלל הפנימי 30 דקות לפני הניתוח.</li>
	<li>להרדים לחלוטין את העכבר עם איזופלוריין ולהמית אותו על ידי נקע צוואר הרחם.</li>
	<li>לאחר עריפת הראש, לעשות חתך קו האמצע בעצם החזה ולתקן את בית החזה הפתוח עם סיכות. הערה: כדי למנוע דליפה של הניגודיות, הימנע מפגיעה בסרעפת.</li>
	<li>חותכים את אבי העורקים העולה ומסירים את הלב.</li>
	<li>הסר את הריאה ולחשוף את אבי העורקים היורד. הערה: אין לפגוע באבי העורקים היורד.</li>
	<li>חותכים את אבי העורקים היורד באלכסון כדי לחשוף את חתך הרוחב (איור 1B). הערה: אין לקלף את אבי העורקים; מקטע אלכסוני עדיף להכנסת קטטר.</li>
	<li>הכנס את הצנתר 22 G לתוך אבי העורקים היורד תוך הפעלת מאגר vasodilation. הערה: החדרת הצנתר בעת הפעלת מאגר vasodilation מונעת זיהום אוויר.</li>
	<li>הצמד את שורש הצנתר (איור 1C).</li>
	<li>צור קשר כדי למנוע דליפה עקב זרימה אחורית.</li>
	<li>יש לפזר תמיסה מחוממת של כלי דם (פפברין הידרוכלוריד, 4 גרם/ל'; אדנוזין, 1 ז/ל'; הפרין, 1 U/mL) למשך 3 דקות בלחץ קבוע בין 13 ל-15 kPa.</li>
	<li>Perfuse פתרון של 4% paraformaldehyde ב (PBS) במשך 3 דקות. הערה: את הצלחת הקיבעון ניתן לאשר על ידי תנועת כף הרגל (איור 1D).</li>
	<li>הכינו את מדיום הניגודיות ממש לפני הזלוף. הערה: התאם את קצב הדילול בהתאם למדגם; עבור עכברים בוגרים, לערבב את הכתם ודילול ביחס של 1:1.</li>
	<li>עצרו את הזלוף ומלאו את צינור ההרחבה ב-2 מ"ל של מדיום ניגודיות מדולל (איור 1E). הערה: יש להזריק את המדיום הניגודי לאט כדי למנוע פגיעה בכלי הדם.</li>
	<li>יש לפזר את מדיום הניגודיות בלחץ קבוע בין 13 ל-15 kPa.<ol>
<li>כדי לדמיין עורקים, בדקו את הציפורן כדי לוודא שמדיום הניגודיות הגיע לעורק (איור 1F).</li>
		<li>כדי לדמיין את כל כלי הדם, בדוק את הווריד התחתון של הסרעפת כדי לאשר מחזור מלא של מדיום הניגודיות. הערה: בהתחלה, הניגודיות מכילה את פתרון vasodilating; לפיכך, זרימת הדם הנכונה שלה היא חיונית.</li>
	</ol>
</li>
	<li>סגרו את העצירה התלת-כיוונית והסירו את הצינור (איור 1G). הערה: אם העצירה התלת-כיוונית אינה סגורה, החדות תזרום אחורה.</li>
	<li>לדגור על המדגם לילה ב 4 °C (5 °F).F.</li>
	<li>הסר את העור ולתקן אותו בתמיסת פורמלדהיד 10%.</li>
</ol>3. הדמיה
הערה: פרוטוקולי התצוגה החזותית משתנים בהתאם לסורק ה- CT. בפרוטוקול זה נעשה שימוש בסורק CT רנטגן מיקרופוקוס. יש צורך לייעל את שיטת ההדמיה על פי כל סורק CT.
<ol><li>תקן את המדגם בצינור 50 מ"ל המכיל PBS.</li>
	<li>הנח את צינור הדגימה על השולחן.</li>
	<li>סרוק את הדגימה עם מתח של 50 kV וזרם של 600 μA, מה שמבטיח מרחק מיקוד למרכז של 75.2 מ"מ. הערה: ממד של 1 voxel היה 28.7 מיקרומטר x 28.7 מיקרומטר x 28.7 מיקרומטר בהגדרה זו.</li>
	<li>טען את נתוני התמונה שנרכשו באמצעות פיג'י, פלטפורמת קוד פתוח לניתוח תמונה ביולוגית.</li>
	<li>לקבוע את ערך voxel שריר באמצעות שריר gastrocnemius.<ol>
<li>בחר את שריר gastrocnemius באמצעות הכלי מלבן .</li>
		<li>בדוק את הממוצע ואת סטיית התקן (SD) מההיסטוגרמה (לנתח | היסטוגרמה).</li>
		<li>הגדר את צפיפות voxel שרירים כממוצע + 2SD של שריר gastrocnemius.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הגדר את צפיפות voxel השריר כרמת הסף התחתונה (תמונה | להתאים | | סף הגדר | רמת סף נמוכה יותר). הערה: אזור כלי הדם ואזור העצם נשארים בנתונים הבינוניים לאחר קביעת הסף.</li>
</ol>

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis.</a> Annual Review of Medicine. 57, 1-18 (2006).</li>
<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer%2C+vascular%2C+rheumatoid+and+other+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease.</a> Nature Medicine. 1 (1), 27-31 (1995).</li>
<li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb%3A+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PLoS One. 8 (12), 84047(2013).</li>
<li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li>
<li>Weyers, J. J., Carlson, D. D., Murry, C. E., Schwartz, S. M., Mahoney, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+perfusion+and+filling+of+mouse+coronary+vasculature+as+preparation+for+micro+computed+tomography+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Retrograde perfusion and filling of mouse coronary vasculature as preparation for micro computed tomography imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (60), e3740(2012).</li>
<li>Arima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+collateral+source+characteristics+with+3-dimensional+analysis+using+micro-X-ray+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Evaluation of collateral source characteristics with 3-dimensional analysis using micro-X-ray computed tomography.</a> Journal of the American Heart Association. 7 (6), 007800(2018).</li>
<li>Tian, T., Yang, Z., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+technique%3A+Recent+progress+and+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing technique: Recent progress and biomedical applications.</a> Journal of Anatomy. 238 (2), 489-507 (2021).</li>
<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+CUBIC+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Advanced CUBIC protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nature Protocols. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li>
<li>Fernandez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+liver+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in liver disease.</a> Journal of Hepatology. 50 (3), 604-620 (2009).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+pancreatic+cancer%3A+current+research+status+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in pancreatic cancer: current research status and clinical implications.</a> Angiogenesis. 22 (1), 15-36 (2019).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

דו"ח זה מציג שיטה מתוחכמת לדמיין כלי דם בפלג הגוף התחתון. ישנם מספר שלבים קריטיים בתהליך זה: הראשון הוא preperfusion לפני הזרקת מדיום ניגודיות. אם לא יוסר מספיק דם, הניגודיות לא תמלא את המערכת. בנוסף, הכללת בועות אוויר מפריעה למילוי הניגודיות; לפיכך, יש להסיר לחלוטין את האוויר במעגל. יתר על כן, מכיוון שמדיום הניגודיות אינו מתמצק מיד לאחר ההזרקה, אין להזיז את המדגם יתר על המידה.
שיטה זו שימושית כדי להעריך את היווצרות מוגברת של כלי דם ומחזור הדם, כגון זרימת הדם בטחונות. לעומת זאת, כמגבלה, קשה להעריך כלי דם מצומצמים, שכן קשה להבחין בין היצרות לבין ירידה מלאכותית במדיום ניגודיות. בנוסף, זה מאתגר להעריך את כלי הדם בעצמות, כמו ההפרדה של דם ועצמות קשה.
שיטה חלופית להדמיה תלת-ממדית היא חיסון. באמצעות טכניקת ניקוי הרקמות, מספר שיטות זמינות עבור הדמיה 3D7. חיסון הוא יתרון כפי שהוא מאפשר כתמים של חלבונים ספציפיים באמצעות נוגדנים. דו"ח שנערך לאחרונה מאתגר הדמיה לכל הגוף בהתבסס על חיסון8; עם זאת, הדמיה מבוססת CT אינה דורשת טיפול מקדים לניקוי רקמות. 
שיטה זו מאפשרת הדמיה של כל כלי הדם מתחת לסרעפת, כולל איברי הבטן. אנגיוגנזה באיברי הבטן יש השפעה חזקה על שמירה על הומאוסטזיס ופיתוח מחלות9,10. כמו פרוטוקול זה היה מותאם להערכה של כלי הגפיים התחתונות, פרימינג ספציפי לאיברים יאפשר הדמיה של אנגיוגנזה הקשורים לכל גורם, כגון דלקת או גידולים.

כלי דם הם רשתות מורכבות עם מבנים דמויי עץ. אנגיוגנזה ויצירת כלי דם חדשים ממלאים תפקידים חיוניים בשמירה על הומאוסטזיס איברים1. אנגיוגנזה מווסתת לטיפול במחלות איסכמיות וממאירות2. לכן חיוני להבין את המנגנונים הבסיסיים של אנגיוגנזה. כלי דם אחוריים מורין משמשים לעתים קרובות כמודל שימושי למחקר כלי דם3; קשירה ipsilateral של איליאק או עורק הירך הוא מודל איסכמיה אחורית ידועה המשמש להערכת אנגיוגנזה ושיפוץ כלי דם אנגיוגנזה פיזיולוגית ופתולוגית4. עם זאת, ההערכה של אנגיוגנזה מבוצעת בעיקר על ידי כתמי סעיף, ושיטות להערכת מורפולוגיה כלי דם 3D מוגבלות במיוחד.
בהשוואה לכתמי מקטעים, CT מאפשר הדמיה תלת-ממדית. לאחרונה, Weyers ואח ' דיווח פרוטוקול מתוחכם מתאים הדמיה CT, המאפשר הדמיה של מערכת הדם הכלילית למבוגרים murine5. שינינו את השיטה שלהם כדי ליצור שיטת הכנת מדגם המתאימה להדמיית CT של כלי הדם בגפיים התחתונות6. כאן, שרף אטום קרינה מוזרק דרך אבי העורקים היורד, וכלי הדם בגפיים התחתונות מלאים בצבע. על ידי התאמת הזמן של הזרקת צבע, מילוי ספציפי לעורקים אפשרי גם, ודגימות ניתן להשיג עם כל מכשיר טומוגרפיה ממוחשב מיקרו-רנטגן. שיטת ניגודיות זו מספקת טכניקה בסיסית להערכה תלת-ממדית של כלי דם מוריניים מתחת לסרעפת ובאברי הבטן ובגפיים התחתונות.

<table><tbody><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>10% תמיסת פורמלין</td><td>Fujifilm-Wako</td><td>068-03841</td><td></td></tr><tr><td>10x מי מלח חוצץ פוספט (-) (PBS)</td><td>Fujifilm-Wako</td><td>163-25265</td><td>הכן 1x קטטר PBS</td></tr><tr><td>22 G (22 G S5 x 1 אינץ' V(F))</td><td>MEDIKIT</td><td>HP2140</td><td>נעשה שימוש רק בצנתר.</td></tr><tr><td>מחט 23 גרם</td><td>TERUMO</td><td>NN-2325R</td><td>השתמש כסיכה</td></tr><tr><td>4% פרפורמלדהיד ב-PBS</td><td>Fujifilm-Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr><tr><td>מזרק</td><td></td><td></td><td></td>5 מ"ל</tr><tr><td>5-0 תפר עם מחט</td><td>Alfresa Pharma Corporation</td><td>ER1205SB45</td><td></td></tr><tr><td>Adenosine</td><td>Sigma-aldrich</td><td>A9251-5G</td><td>לתמיסה מרחיבה של כלי הדם</td></tr><tr><td>Dumont #55 מלקחיים</td><td>FST</td><td>No.11255-20</td><td></td></tr><tr><td>צינור הארכה</td><td>TOP</td><td>X2-FL50</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50 מ"ל צינור</td><td>קורנינג</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Graefe מלקחיים</td><td>FST</td><td>מס' 11051-10</td><td></td></tr><tr><td>הפרין נתרן 5,000 יחידות/5 מ"ל</td><td>Mochida Co. Ltd.</td><td></td><td></td>224122458</tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fujifilm-Wako</td><td>099-06571</td><td></td></tr><tr><td>תרכובות הזרקת מיקרופיל</td><td>Flow Tech Inc.</td><td>MV-117</td><td>תערובת נוזלית MV-תרכובת (כתם) ומדלל MV 1: 1</td></tr><tr><td>פפאברין הידרוכלוריד</td><td>פוג'יפילם</td><td>164-18002</td><td>לתמיסה מרחיבה כלי דם</td></tr><tr><td>חומר הרדמה לבעלי חיים קטנים</td><td>Muromachi Kikai Co. Ltd.</td><td>MK-A100ECOW-ST</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים - מספריים כירורגיים בזווית לצד</td><td>FST</td><td>מס' 15006-09</td><td></td></tr><tr><td>- חד-קהה</td><td>FST</td><td>מס' 14001-12</td><td></td></tr><tr><td>זין תלת כיווני</td><td>TERUMO</td><td>TS-TR1K</td><td></td></tr><tr><td>העברת פיפטה</td><td>SAMCO SCIENTIFIC</td><td>SM262-1S</td><td>שימוש לערבוב ניגודיות בינונית</td></tr><tr><td>סורק CT רנטגן</td> בינוני <td>Toshiba IT & תאגיד מערכות בקרה</td><td>TOSHIBA TOSCANNER 32300 FPD</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנה מדגמית להדמיה תלת-ממדית מבוססת טומוגרפיה ממוחשבת של כלי דם הינדיים של מורין

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

כלי הדם הם רשתות מורכבות עם מבנים דמויי עץ, ורשתות כלי דם חיוניות לשמירה על זרימת הדם ושמירה על תפקוד האיברים. הבהרת המנגנון של היווצרות כלי הדם היא אפוא שימושית ביותר להבהרת תהליכים התפתחותיים ומנגנונים פתולוגיים. כלי גב-גפיים מורין משמשים לעתים קרובות כמודל לאנגיוגנזה פיזיולוגית ופתולוגית. ההערכה מתבצעת בעיקר באמצעות שיטה דו-ממדית באמצעות מקטעי רקמות. עם זאת, שיטות להערכת מורפולוגיה כלי דם תלת מימדית (3D) מוגבלות במיוחד. מאמר זה מציג שיטה להדמיה של איברים אחוריים מוריניים באמצעות טומוגרפיה ממוחשבת (CT). שרף אטום קרינה מוזרק דרך אבי העורקים היורד, וכלי דם שלמים מלאים בצבע. על ידי התאמת הזמן של הזרקת צבע, מילוי ספציפי לעורקים אפשרי גם, ודגימות ניתן להשיג עם כל מכשיר CT מיקרו-רנטגן. שיטת ניגודיות זו מספקת טכניקה בסיסית להערכה תלת-ממדית של כלי דם מוריניים בגפיים התחתונות. יתר על כן, שיטה זו יכולה לשמש כדי לדמיין את כל כלי הדם מתחת לסרעפת ולהעריך את כלי הדם באיברי הבטן.

ניתן לדמיין את כל כלי הדם בגפיים התחתונות אם פרוטוקול זה מבוצע כראוי (איור 2A). במודל איסכמיה של הגפיים האחוריות, עורק הירך הלא קשור פועל במקביל לווריד הירך (איור 2B), ועורק ירך קשור יכול להיות מאושר על ידי הפרעה של מדיה ניגודית (איור 2C). התוצאות חשפו התפתחות של כלי שיט נלווים (איור 2D). זרימת הדם הסביבתית נוצרת בין העורקים הפרוקסימליים לעורק הקשור ולעורק באזור הרגל התחתונה ובצדדים הגחוניים והגביים של עורק הירך. עורק העכוז התחתון המתחיל בצד הגבי של האגן ופועל בצד הרוחבי של הירך - מתרחב בחוזקה בצד האיסכמי.
כלים מלאים בניגודיות מלאים במדיום הניגודיות (איור 2E); ההפרעה בניגוד מצביעה על ערבוב של מדיה לא-קונטרסטית (למשל דם, מאגר מרחיב כלי דם או בועות) או זלוף לא מספיק של הניגודיות (איור 2F). Vasodilatation וקיבעון לא יעבוד טוב אם כלי הדם התכווצו. למרות שהדמיה CT יכולה רק לדמיין את המדיום הניגודי, ניתן לראות את העורקים על פני השטח של הגוף על ידי תצפית מקרוסקופית או סטריאומיקרוסקופית (איור 2G). לכן, קל יותר להעריך פגמים באמצעות המדיום הניגודי (איור 2H).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63009/63009fig01.jpg"> איור 1: מתווה ההליך. (A) מנגנון זלוף לחץ וצנתר 22 G המחוברים באמצעות צינור מאריך 2 מ"ל ופסק זמן תלת-כיווני. (ב) אבי העורקים העולה נחתך באלכסון כדי לחשוף את חתך הרוחב (חץ צהוב). (ג) הצנתר תוקן באמצעות שני סיכות (חצים צהובים). (ד) הגפיים התחתונות הקבועות נמשכות על פי קיבעון (חצים צהובים). (ה) הזרקת ניגודיות דרך עצירה משולשת. כיוון ההזרקה מצוין על ידי חץ צהוב. (ו) הציפורן האחורית מלאה בניגודיות (חץ צהוב). (ז) העצירה סגורה ומוסרת ממנגנון הזלוף. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63009/63009fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63009/63009fig02.jpg"> איור 2: תמונות של כלי שיט. (א) תמונה שלמה של העצמות והכלים האחוריים. (ב) עורק הירך (חץ אדום) וריד (חץ כחול). (ג) עורק הירך הכרוך (חץ צהוב). הפריפריה נקטעת על ידי החסימה (קו מנוקד צהוב). (ד) כלי נלווה בצד הכרוך (חצים צהובים). הקו המקווקו הצהוב מייצג את עורק הירך שנקטע. (ה) מדגם מלא היטב של העורק הספני (חץ אדום) וריד (חץ כחול). (ו) זלוף לקוי מוביל להפרעה של כלי סאפינוס (קו מנוקד צהוב). (ז) תצפית סטריאומיקרוסקופית של מדגם מייצג. עורק הירך הימני (חץ צהוב) מלא במדיום ניגודיות. (H) תצפית סטריאומיקרוסקופית של מדגם כושל. עורק הירך הימני (חץ צהוב) חסר בינוני ניגודיות. סרגלי קנה מידה = 1 מ"מ (B-F), 2 מ"מ (G, H), 10 מ"מ (A). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63009/63009fig02large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

כאן, אנו מתארים שיטת הדמיה וכימות לכלי גפיים אחוריות של מורין באמצעות טומוגרפיה ממוחשבת מיקרו-רנטגן.

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

ניתן לצלם תמונות CT של כלי הדם בגפיים התחתונות ובאברי הבטן באמצעות פרוטוקול צעד. השיטה מאפשרת הערכה מקיפה של כל כלי הדם. בנוסף, ניתן להעריך רק עורקים או באותו זמן, עורקים ורידים.חשוב מאוד למנוע קרישי דם, דלף או דם היטב, ולהימנע בועות אוויר. לפני הניתוח, להזריק 1 יחידה / גרם הפרין ב- PBS לתוך החלל התוך-אפריטוני של העכבר. לאחר 30 דקות, לעשות חתך קו האמצע בעצם החזה של העכבר המתת חסד ולתקן את בית החזה הפתוח עם סיכות.חותכים את אבי העורקים העולה לפני הסרת הלב, ולאחר מכן להסיר את הריאה כדי לחשוף את אבי העורקים היורד. חותכים את אבי העורקים היורד באלכסון כדי לחשוף את חתך הרוחב של כלי השיט. לאחר מכן, הכנס קטטר 22-מד לתוך אבי העורקים היורד תוך הפעלת מאגר vasodilation.הצמד את השורש של הצנתר ולעשות קשר כדי למנוע דליפה עקב הזרימה האחורית. לאחר שנעשה, להתחיל את זלוף עם פתרון vasodilating מחומם בלחץ קבוע בין 13 ל 15 קילופסקל. לאחר שלוש דקות, perfuse פתרון של 4% paraformaldehyde ב PBS במשך 3 דקות.עצרו את הזלוף, ומלאו את צינור ההרחבה המחובר לצנתר ב-2 מ"ל של מדיום הניגודיות המוכן טרי המדולל ביחס 1:1 כדי לחטט ב-13 עד 15 קילופסקל קבוע. כדי לדמיין עורקים, לבדוק את הציפורן של הפה כדי לאשר כי המדיום הניגוד הגיע לעורק. באותו אופן, בדוק את הווריד התחתון של הסרעפת כדי לאשר את זרימת הדם המלאה של מדיום הניגוד ולדמיין את כל כלי הדם.אם זרימת הדם של מדיום הניגודיות הושלמה, סגור את העצירה התלת-כיוונית והסר את הצינור. לדגור על המדגם לילה ב 4 מעלות צלזיוס. בפרוטוקול זה, כל הכלים בגפיים התחתונות של העכבר היו דמיינו.התוצאות של מודל איסכמיה בגפיים האחוריות אישרו כי עורק הירך הלא קשור פעל במקביל לווריד הירך. כמו כן, ההפרעה בתקשורת הניגודית הקלה על צפייה בעורק הירך הקשור ובהתפתחות כלי שיט נלווים. ניתן היה לראות כמה כלים מלאים במדיום הניגודיות.מצד שני, ההפרעה בתקשורת הניגודית עקב ערבוב של מדיה לא-קונקרטית, או זלוף לא מספיק, הורגשה גם היא. זה היה בלתי אפשרי לראות את העורקים על פני השטח של הגוף על ידי מיקרוסקופי של תצפית סטריאומיקרוסקופית של המדיום הניגודי, אשר עשה את זה קל יותר להעריך פגמים בכלי הדם. חשוב מאוד להימנע מבועות אוויר בעת החדרת הצנתר.מאז איברי הבטן שלהם הם גם רגועים, אפשר להוציא את האיברים ולקחת סריקת CT. באמצעות שיטה זו, הצלחנו לזהות רבע חדש של רוויה.

sample-preparation-for-computed-tomography-based-three-dimensional

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ניגודיות משופרת כלי שיט קטן בעל חיים הדמיה על ידי microCT היא מהירה, חסכונית תפוקה גבוהה טכניקה...

כלי משופר ניגודיות הדמיה באמצעות MicroCT

Non-הרסני להדמיה נפח יכולה להיות מושגת רק על ידי טכניקות טומוגרפית, מתוכם היעילה ביותר היא טומוגרפיה רנטגן מיקרו ממוחשבת (CT).

ברזולוציה גבוהה 3D הדמיה של Ex-Vivo דגימות ביולוגיות באמצעות מיקרו-CT

ויזואליזציה של כלי הכליליים הוא קריטי לקידום ההבנה שלנו של מחלות לב וכלי דם. כאן אנו מתארים שיטה המרוססת בכלי הדם הכליליים Murine עם גומי radiopaque סיליקון (Microfil), לקראת הדמיה ממוחשבת מיקרו (μCT) טומוגרפיה.

זלוף מדרדר ומילוי בכלי הדם הכליליים עכבר כהכנה מיקרו טומוגרפיה ממוחשבת והדמיה

מקור: Kim, D., et. al. הדמיה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום וטומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת להדמיה ישירה של טרומבואמבולי מוחי. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הדמיה של פקקת מוחית בעכברים באמצעות הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (מיקרו-CT). מודל של עכבר פקקת מוח מוזרק עם ננו-חלקיקי זהב ממוקדי פיברין הפועלים כחומר מנוגד. העכבר מונח על מצע של מכונת מיקרו-CT, והתמונות מתקבלות מזוויות מרובות. באמצעות תוכנה מתאימה, התמונות משוחזרות ומעובדות.

הדמיה של פקקת מוחית בעכבר באמצעות הדמיית טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת

ניתוח Ex vivo של נגעים עורקיים ממודלים של בעלי חיים של מחלות לב וכלי דם מסתמך באופן קלאסי על טכניקות היסטולוגיות ואימונוהיסטוכימיות. אלה מספקים מדידות דו-ממדיות בנגעים תלת מימדיים. כתב יד זה מתאר יצירת נגעים עורקיים לניתוח כמותי בתלת מימד באמצעות טומוגרפיה של הקרנה אופטית.

דור וQuantitation 3 ממדים של עורקי פצעים בעכברים באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

השרשה של שתלי עצם אוטולוגית ואלוגנאית מהווה קיבלה גישות לטיפול באובדן עצם craniofacial גדול. עם זאת, ההשפעה של הרכב שתל על יחסי הגומלין בין neovascularization, התמיינות תאים והיווצרות עצם לא ברורה. אנו מציגים פרוטוקול הדמיה multimodal נועד על מנת להבהיר את התלות ההדדית אנגיוגנזה-Osteogenesis בקרבת השתל.

טומוגרפיה ממוחשבת והדמיה אופטית של צימוד Osteogenesis-אנגיוגנזה להערכת שילוב של Autografts עצם הגולגולת וAllografts

מאמר זה מתאר מתודולוגיה מפורט של שימוש של גומי סיליקון עופרת ריתוך perfuse את להערכת מאתר על קוטר אבי העורקים כימות במודל של עכברים של מפרצת אבי העורקים, לנתיחה.

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של מסוף העכבר למבוגרים פלקים כריתת כריתה לחקור היווצרות בלסטאמה blastema ו intramembranous להתקשות, מנותח על ידי הפלורסנט אימונוהיסטוכימיה ו רציפים ב-vivo מיקרו טומוגרפיית.

כריתה של ספרות עכבר למבוגרים והתחדשות: מודל פשוט כדי לחקור ממגי בלסטאמה היווצרות הIntramembranous פיקציה

המטרה של טכניקה זו היא הדמיה ex vivo של רשתות עורקים ריאתיים של עכברים פוסט לידתיים ומבוגרים מוקדם באמצעות אינפלציה ריאות והזרקה של תרכובת פולימר אטומה רדיו באמצעות עורק הריאה. יישומים פוטנציאליים עבור רקמות יצוקות נדונים גם.

יציקת כלי דם של ריאות עכבר מבוגר ומוקדם לאחר הלידה עבור הדמיית מיקרו-CT

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל ייחודי ורלוונטי מבחינה קלינית של מחלת עורקים היקפית המשלב עורק הירך ואלקטרו-קרישת ורידים עם ניהול מעכב סינתאז תחמוצת החנקן כדי לגרום לנמק אחורי בעכברים FVB. זלוף תוך-לבבי DiI משמש לאחר מכן להדמיה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה של כלי הדם של משטח כף הרגל.

הדמיה תלת מימדית ברזולוציה גבוהה של כלי הדם של משטח כף הרגל במודל נמק הינדלימב מורין

בפרוטוקול זה נדון ביישום מודל של השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת (OLT) בעכברים. בנוסף, נדונים גם אדג'ובנטים לניתוח נוסף של פטנטיות אלוגרפט לאחר OLT מוצלח בעכבר, במיוחד באמצעות סריקות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (microCT).

השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת אנגיוגרפיה

למד שיטת הדמיה תלת-ממדית של כלי דם הינדיים בעכברים באמצעות טומוגרפיה ממוחשבת. הטכניקה מאפשרת הערכה מקיפה של מבני עורקים וורידים לחקר מחלות כלי דם.

הכנה מדגמית להדמיה תלת-ממדית מבוססת טומוגרפיה ממוחשבת של כלי דם הינדיים של מורין

גלה סרטונים נוספים