Name: שיטה פשוטה שונה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: למד שיטה פשוטה ומהירה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים באמצעות חומרים כירורגיים נפוצים. שיטה זו מאפשרת חקר שיקום הלב ופיתוח טיפולים חדשניים למחלות לב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81930007, 81625002, 81800307, 81470389, 81500221, 81770238), תוכנית המנהיגים האקדמיים המצטיינים של שנחאי (18XD1402400), ועדת המדע והטכנולוגיה של עיריית שנחאי (201409005200), תוכנית הכישרונות של שנחאי פוג'יאנג (2020PJD030) והקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (2020M671161, BX20190216).

הניסויים הכוללים עבודה בבעלי חיים מבוצעים עם כל האישורים הדרושים מוועדת האתיקה לרווחת בעלי חיים במעבדה של בית החולים רנג'י, אוניברסיטת ג'יאו טונג בשנחאי, בית הספר לרפואה (R52021-0506). במחקר נעשה שימוש בעכברי C57BL/6J נקבות וזכרים בגילאי 8-10 שבועות.
1. הכנת ציוד הרדמה פשוט (אופציונלי)
הערה: זוהי התקנה אופציונלית לפני הניתוח וניתן להחליפה בהרדמה טיטראטית כנזכר בסעיף 2. יש להתייעץ עם ועדת האתיקה המוסדית של בעלי חיים ועם הווטרינרים לפני התאמת מערך זה בנוהלי בעלי חיים.
<ol><li>קח צינור צנטריפוגה 15 מ"ל, ולעשות חתך בניצב לציר הארוך של הצינור כ 3 ס"מ מהפתח. הערה: ודא שהחתך גדול ממחצית ההיקף המעגלי של לומן הצינור, כך שניתן יהיה להחדיר את השסתום בהצלחה.</li>
	<li>קידוח חורים (קוטר, 2 מ"מ) בדופן צינור הצנטריפוגה בין החתך לפתח הצינור.</li>
	<li>חותכים חתיכה בגודל מתאים של השסתום מיריעת פלסטיק ומכניסים את השסתום לחתך בדופן הצינור. הערה: ניתן להשתמש בשסתום כדי לשלוט בקצב השחרור של איזופלורן על ידי שינוי עומק ההחדרה.</li>
	<li>בתוך מכסה אדים, חתכו את תחתית הצינור וחברו אותו לאספקת החמצן. מניחים כדור צמר גפן קרוב לקצה התחתון של הצינור, מוסיפים עומס 0.5 מ"ל איזופלורן (כפי שהושג, ראו טבלת חומרים) על כדור הצמר גפן, וסוגרים את השסתום.</li>
	<li>בדוק את יעילות ההרדמה על ידי מיסוך העכברים עם צינורות שהוכנו כמתואר לעיל. עקוב אחר קצב הנשימה ועומק ההרדמה על ידי תגובת צביטת הבוהן. הערה: קצב נשימה נמוך מפי 10/10 שניות מצביע על הרדמת יתר, ויש להתאים את עומק החדרת המסתם. עבור כל ההליכים הכרוכים בהרדמה, יש להשתמש במסנן גז מלא ביריעות פחם פעיל (איור 1A-i), ולבצע ניתוח בתוך מכסה מנוע.</li>
</ol>2. הכנה אופרטיבית והרדמה
<ol><li>הכינו ועיקרו את כל המכשירים הדרושים ביום הניתוח, כולל זוג מלקחיים, המוסטט מיקרו-יתוש, זוג מספריים כירורגיים, שני זוגות מחזיקי מחט, תפר כירורגי משי 4-0, תפר כירורגי משי 6-0, מסנן גז ומקור אור (ראו טבלת חומרים) (איור 1A).</li>
	<li>שימו מסכה כירורגית וכפפות סטריליות.</li>
	<li>החל את קרם depilatory על תיבת העכבר ולחכות 1 דקה. נגבו בעדינות את קרם ההידור והשיער עם גזה רטובה.</li>
	<li>החזק את העכבר עם היד הדומיננטית לאחר depilation. יש להשרות הרדמה באמצעות שאיפת איזופלורן מאדה (4%) עם אספקת חמצן (1L/min) ולשמור על 2-3% איזופלורן.</li>
	<li>יש לאשר הרדמה נאותה על ידי חוסר תגובה של צביטת בוהן.</li>
	<li>יש למרוח קרם עיניים סטרילי על שתי העיניים למניעת יובש בקרנית.</li>
	<li>אבטחו את העכברים על משטח ניתוח במצב שכיבה. יש למרוח מקלוני פובידון-יוד (ראו טבלת חומרים) על החזה שלוש פעמים ולכסות את החזה המחוטא במקלון סטרילי.</li>
</ol>3. אינדוקציה של אוטם שריר הלב
<ol><li>החליפו את הכפפות המזוהמות כדי להבטיח סטריליות.</li>
	<li>יש לחתוך עור בקוטר 0.5 ס"מ לאורך הקו המחבר בין הקסיפואיד לבית השחי לאחר בלוק מקומי עם לידוקאין.</li>
	<li>הפרידו בבוטות את שרירי החזה והחזה המינוריים באמצעות מלקחיים והמוסטאט מיקרו-יתוש כדי לחשוף את החלל הבין-קוסטלי הרביעי.</li>
	<li>פתח את החלל הבין-קוסטלי הרביעי באמצעות המוסטט מיקרו-יתוש.</li>
	<li>להחצין את הלב על ידי דחיפת הלב לכיוון החלל הבין-קוסטלי הרביעי עם האצבע המורה של יד שמאל.</li>
	<li>לאבטח את הלב ביד שמאל, ולקשור את הענף היורד הקדמי השמאלי עם תפר 6-0 3 מ"מ ממקורו.</li>
	<li>החזירו את הלב לחלל בית החזה במהירות. הערה: זה בטוח להחצין את הלב במשך פחות מ -30 שניות.</li>
	<li>יש לפנות את האוויר החוצה מחלל בית החזה על ידי לחיצה עדינה על חלל החזה באופן ידני.</li>
	<li>סוגרים את שכבת השריר מעל הצלעות בתפר משי 6-0.</li>
	<li>סגרו את העור בתפר משי 4-0.</li>
	<li>הניחו את העכברים על פד (37°C) מיד לאחר הניתוח.</li>
	<li>הזריקו בופרנורפין (0.05-0.1 מ"ג/ק"ג) תת עורית כל 4-6 שעות כדי להפחית את הכאב שלאחר הניתוח למשך עד 72 שעות.</li>
	<li>החזירו את העכברים המנותחים לכלובים כאשר החלימו לחלוטין. הערה: העכברים יחלימו לחלוטין תוך 3-5 דקות לאחר הניתוח.</li>
	<li>בזהירות לפקח על העכברים ולספק מזון רטוב עד 7 ימים.</li>
</ol>4. קצירת הרקמות
<ol><li>להקריב את העכברים בנקודות זמן שונות לאחר הקמת MI על ידי נקע צוואר הרחם.</li>
	<li>אבטחו את העכברים שהוקרבו על משטח הניתוח במצב שכיבה.</li>
	<li>בצע חתך גחוני (~ 3-4 ס"מ) בבטן העליונה. חותכים את הצלעות משני צידי חלל בית החזה, ומסירים את הסרעפת.</li>
	<li>לנקב את הלב עם 10 מ"ל מלוחים חוצצים פוספט קר (1x PBS, 4 ° C) באמצעות הזרקה תוך חדרית.</li>
	<li>לאסוף את הלב על ידי חיתוך שורש אבי העורקים ומיד לאחסן את הלב ב -80 ° C. הערה: על פי ניסיון המחברים, ניתן לבצע צביעת TTC תוך שבועיים מהאחסון.</li>
	<li>להכתים את הלב עם 2,3,5-Triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).<ol><li>פורסים את הלב הקפוא למקטעים בעובי 1 מ"מ על קרח באמצעות סכיני גילוח.</li>
		<li>יש לדגור על פרוסות הלב המוכנות בתמיסת TTC 1% (מומסת ב-1x PBS) בטמפרטורה של 37°C למשך 10-15 דקות. הערה: לאחר דגירה של 15 דקות, השליכו את תמיסת TTC וטבלו את פרוסות הלב המוכתמות לתוך PBS אחד.</li>
	</ol></li>
	<li>צלמו את הפרוסות באמצעות מצלמה דיגיטלית.</li>
</ol>

<ol><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+in+vivo+cardiac-specific+gene+manipulation+by+intramyocardial+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for in vivo cardiac-specific gene manipulation by intramyocardial injection in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57074(2018).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population.</a> The New England Journal of Medicine. 312 (16), 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Electrocardiology%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> Journal of Electrocardiology. 41 (2), 144-151 (2008).</li>
<li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">β-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 11 (3), 293-296 (2013).</li>
<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update%3A+A+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141 (9), 139(2020).</li>
<li>Cahill, T. J., Choudhury, R. P., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+and+repair+after+myocardial+infarction%3A+Translational+opportunities+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration and repair after myocardial infarction: Translational opportunities for novel therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (10), 699-717 (2017).</li>
<li>Froese, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-androgenic+therapy+with+finasteride+improves+cardiac+function%2C+attenuates+remodeling+and+reverts+pathologic+gene-expression+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Anti-androgenic therapy with finasteride improves cardiac function, attenuates remodeling and reverts pathologic gene-expression after myocardial infarction in mice.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 122, 114-124 (2018).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+branched+chain+amino+acid+catabolism+contributes+to+cardiac+dysfunction+and+remodeling+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Defective branched chain amino acid catabolism contributes to cardiac dysfunction and remodeling following myocardial infarction.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (5), 1160-1169 (2016).</li>
<li>Acikel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+dantrolene+against+myocardial+injury+induced+by+isoproterenol+in+rats%3A+Biochemical+and+histological+findings%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Protective effects of dantrolene against myocardial injury induced by isoproterenol in rats: Biochemical and histological findings.</a> International Journal of Cardiology. 98 (3), 389-394 (2005).</li>
<li>vanden Bos, E. J., Mees, B. M. E., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+A+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+an+early+and+a+late+phase+of+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Demonstration of an early and a late phase of ischemic preconditioning in mice.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 275 (4), 1375-1387 (1998).</li>
<li>Kumar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+myocardial+infarction%3A+Mainstay+in+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Animal models of myocardial infarction: Mainstay in clinical translation.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 76, 221-230 (2016).</li>
<li>Das, S., MacDonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).</li>
<li>Johns, T. N., Olson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+myocardial+infarction.+I.+A+method+of+coronary+occlusion+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental myocardial infarction. I. A method of coronary occlusion in small animals.</a> Annals of Surgery. 140 (5), 675-682 (1954).</li>
<li>Ahn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 286 (3), 1201-1207 (2004).</li>
<li>Gao, E., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation in the mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1037, 299-311 (2013).</li>
<li>Most, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+S100A1+protein+levels+determine+contractile+performance+and+propensity+toward+heart+failure+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac S100A1 protein levels determine contractile performance and propensity toward heart failure after myocardial infarction.</a> Circulation. 114 (12), 1258-1268 (2006).</li>
<li>Christia, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+characterization+of+myocardial+inflammation%2C+repair%2C+and+remodeling+in+a+mouse+model+of+reperfused+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Systematic characterization of myocardial inflammation, repair, and remodeling in a mouse model of reperfused myocardial infarction.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 61 (8), 555-570 (2013).</li>
<li>Frantz, S., Bauersachs, J., Ertl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-infarct+remodelling%3A+Contribution+of+wound+healing+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Post-infarct remodelling: Contribution of wound healing and inflammation.</a> Cardiovascular Research. 81 (3), 474-481 (2008).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הדו"ח הנוכחי הדגים פרוטוקול קל להשראת MI בעכברים עם חומרים זמינים, אשר שונה משיטה שדווחה על ידי גאו16. מודלים של Murine MI הם הכרחיים לחקירה מכניסטית וסינון תרופות עבור תפקוד לקוי לאחר MI ושיפוץ12. בין הטכניקות הקיימות להשראת MI, קשירת עורקים כליליים מייצגת את הנפוצה ביותר. קשירת עורקים כליליים משחזרת נאמנה את אופי האיסכמיה של אוטם שריר הלב ומובילה לתגובת ריפוי ושיפוץ צלקת בדומה לתרחיש הקליני18,19. עם זאת, הפרוטוקול...

אוטם שריר הלב (MI) מייצג את אחד הגורמים המשמעותיים למוות ונכות ברחבי העולם 1,2,3,4,5. למרות reperfusion בזמן, יש כיום מחסור של טיפולים יעילים לטיפול remodeling לב לאחר MI. בהתאמה, נעשו מאמצים ניכרים לחקירה מכניסטית ולניצול טיפולי עבור MI 6,7,8. יש לציין כי הקמת מודלים של אמ"ן היא תנאי מוקדם לעמידה ביעדים אלה.
מספר שיטות (למשל, טיפול באיזופרוטרנול, קריופציעה, קשירת עורקים כליליים וכו ') הוצעו כדי לגרום למודלים של MI בבעלי חיים קטנים. טיפול באיזופרוטרנול הוא שיטה פשוטה להשראת MI, אך הוא אינו יכול לגרום לאוטם של אזור היעד9. Cryoinjury מוביל לנמק שריר הלב באמצעות יצירת גבישי קרח ושיבוש של קרום התא במקום איסכמיה ישירה10. לעומת זאת, קשירת עורקים כליליים מאפשרת שליטה מדויקת באתר החסימה ובהיקף אזור האוטם ומשחזרת נאמנה את תגובת השיפוץ לאחר אוטם11,12. קשירת עורקים כליליים מבוצעת בדרך כלל לאחר אינטובציה, אוורור מכני ותורקוטומיה, שהיא מאתגרת מבחינה טכנית13,14. מספר פרוטוקולים ששונו לקשירת עורקים כליליים (למשל, ללא אוורור) דווחו והעצימו את השראת MI, אך הדגמות חזותיות מפורטות חסרות15,16,17. סוגיות אלה מציבות חסם פיננסי וטכני משמעותי בפני קבוצות המעוניינות לעסוק במחקר באמצעות מודלים של אמ"ן. דו"ח זה מציג גישה להשראת MI בעכברים. השיטה הנוכחית קלה, חוסכת זמן, ומשתמשת בכלים כירורגיים ובציוד שניתן למצוא ברוב המעבדות.

<table><tbody><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td><td>SIGMA</td><td>T8877-25G</td><td>TTC מכתים</td></tr><tr><td>4-0 תפר משי</td><td>YUANKANG</td><td>4-0</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>חיטוי</td><td>HIRAYAMA</td><td>HVE-50</td><td>עיקור עבור המוצק</td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd.</td><td>H10940181</td><td>להפחית כאבים לאחר הניתוח</td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה</td><td>ביולוגי תקווה</td><td>1850-K</td><td>15 מ"ל</td></tr><tr><td>קרם אפילציה</td><td>ZIKER BIOTECHNOLOGY</td><td>ZK-L2701</td><td>חומר אפילציה לחיות מעבדה</td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>RWD</td><td>F12028</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>מסנן גז</td><td>ZHAOXIN</td><td>SA-493</td><td>הגנת המפעיל</td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>RWD</td><td>20071302</td><td>משמש להרדמה</td></tr><tr><td>מקור אור</td><td>בייג'ינג PDV</td><td>LG-150B</td><td>מנורת הפעלה</td></tr><tr><td>מיקרו-יתושים המוסטט</td><td>FST</td><td>13011-12</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>מחט</td><td>BINXIONG</td><td>42180104</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>מחט ותפר משי 6-0</td><td>JIAHE</td><td>SC086</td> מכשיר <td>כירורגי</td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>ShangHaiJZ</td><td>J32030</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>ShangHaiJZ</td><td>J32010</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>ספוגיות פובידון-יוד</td><td>SingleLady</td><td>GB26368-2010</td> מספריים <td>לחיטוי עור</td></tr><tr><td></td><td>CNSTRONG</td><td>JYJ1030</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>קרם עיניים סטרילי</td><td>שניאנג Xingqi פרמצבטיקה ושות', בע"מ</td><td>H10940177</td><td>למנוע יובש בקרנית</td></tr><tr><td>מערכת הדמיית אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה במיוחד לבעלי חיים קטנים</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td>ניתוח אקו לב</td></tr></tbody></table>

שיטה פשוטה שונה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים

A Modified Simple Method for Induction of Myocardial Infarction in Mice

אוטם שריר הלב (MI) מייצג את אחד הגורמים המובילים למוות. מודלים של MI נמצאים בשימוש נרחב לחקר הפתומנגנונים של שיפוץ פוסט-MI והערכה של טיפולים חדשניים. שיטות שונות (למשל, טיפול באיזופרוטרנול, קריופציעה, קשירת עורקים כליליים וכו ') שימשו להשראת MI. בהשוואה לטיפול באיזופרוטרנול והקפאה, קשירת עורקים כליליים עשויה לשקף טוב יותר את התגובה האיסכמית ואת העיצוב מחדש הכרוני לאחר MI. עם זאת, שיטות מסורתיות לקשירה כלילית בעכברים מאתגרות מבחינה טכנית. המחקר הנוכחי מתאר תהליך פשוט ויעיל להשראת MI בעכברים עם חומרים זמינים. עור החזה של העכבר נחתך בהרדמה יציבה. הלב הוחצן מיד דרך החלל הבין-קוסטלי לאחר הפרדה בוטה של החזה הגדול והפקטורליס מינור. הענף היורד הקדמי השמאלי (LAD) היה קשור בתפר 6-0 3 מ"מ ממקורו. לאחר קשירת LAD, צביעה עם 2,3,5-Triphenyltetrazolium כלוריד (TTC) הצביעה על השראת MI מוצלחת ושינויים זמניים בגודל הצלקת שלאחר MI. בינתיים, תוצאות ניתוח ההישרדות הראו תמותה גלויה תוך 7 ימים לאחר MI, בעיקר בגלל קרע לבבי. יתר על כן, הערכה אקוקרדיוגרפית לאחר MI הדגימה השראות מוצלחות של תפקוד לקוי של התכווצות ועיצוב מחדש של חדרים. לאחר השליטה, מודל MI ניתן להקים בעכברים בתוך 2-3 דקות עם חומרים זמינים.

פרוטוקול הניסוי וחלק מהשלבים הקריטיים מוצגים באיור 1. ציוד ההרדמה הפשוט גרם להרדמה. כפי שניתן לראות באיור 2A, ההרדמה המושרה הייתה יציבה, כפי שמשתקף מקצב הנשימה הסדיר (נע בין 90 ל-107 נשימות לדקה בעכברים שנבדקו). לאחר קשירת עורקים כליליים, ניתוח צביעת TTC הצביע על השראת אוטם שריר הלב מוצלחת ושינויים זמניים בגודל הצלקת שלאחר MI (איור 2B). בינתיים, תוצאות ניתוח הישרדות הראו תמותה גלויה בתוך 7 ימים לאחר MI בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6J ...

תחת הרדמה מספקת, לב העכבר הוחצן דרך החלל הבין-קוסטלי, ואוטם שריר הלב נגרם בהצלחה על ידי קשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) באמצעות חומרים הזמינים ברוב המעבדות.

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI ...

דו"ח זה מציג גישה ייחודית להשראת אוטם שריר הלב בעכברים. השיטה הנוכחית קלה, חוסכת זמן, והיא משתמשת בצינורות הכירורגיים ובציוד שניתן למצוא ברוב המעבדות. הקמתם של מודלים לאוטם שריר הלב מספקת הנחת יסוד לחקר מנגנוני העבר של שיפוץ פוסט-MI, ווריאציה של טיפולים חדשניים.החל את קרם depilatory על תיבת העכבר, ולחכות דקה אחת. לאחר מכן נגב בעדינות את קרם depilatory ואת השיער עם גזה רטובה. אבטח את העכבר על משטח ניתוח במצב שכיבה.לחטא את אזור הניתוח כמתואר בטקסט. לאחר מכן הניחו וילון סטרילי סביב האזור המחוטא. בצע חתך עור של 0.5 ס"מ לאורך הקו המחבר בין הקסיפואיד לבית השחי, והפריד בבוטות את שרירי החזה והחזה המינוריים באמצעות מלקחיים.פתח את החלל הבין-קוסטלי הרביעי באמצעות המוסטט מיקרו-מוסקיטו (Micro-Mosquito). להחצין את הלב על ידי דחיפתו לכיוון החלל הבין-קוסטלי הרביעי עם האצבע המורה של יד שמאל. הדקו את הלב ביד שמאל וקשרו את הענף היורד הקדמי השמאלי בתפר 6/0 שלושה מילימטרים ממוצאו.החזירו את הלב לחלל בית החזה במהירות. יש לפנות את האוויר מחלל בית החזה על ידי לחיצה עדינה על חלל החזה. לטיפול בכאב לאחר הניתוח, יש להזריק בופרנורפין תת עורית כל ארבע עד שש שעות למשך עד שבעים ושתיים שעות לאחר הניתוח.הניחו את העכבר על כרית חימום כדי להתאושש מההרדמה. אבטחו את העכבר שעבר המתת חסד על משטח הניתוח במצב שכיבה. בצע חתך גחוני של כשלושה עד ארבעה סנטימטרים בבטן העליונה.חותכים את הצלעות משני צידי חלל בית החזה, ולאחר מכן להסיר את הסרעפת. לנקב את הלב עם 10 מיליליטר של קור ארבע מעלות צלזיוס 1X PBS באמצעות הזרקה תוך חדרית. לאחר מכן לאסוף את הלב על ידי חיתוך שורש אבי העורקים, ומיד לאחסן אותו ב מינוס 80 מעלות צלזיוס.חתכו את הלב הקפוא למקטעים בעובי מילימטר אחד על קרח באמצעות סכיני גילוח. דגרו על פרוסות הלב המוכנות בתמיסת 1% TTC מומסת ב-1X PBS אחד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 10 עד 15 דקות. לאחר מכן צלמו את הפרוסות באמצעות מצלמה דיגיטלית.לאחר קשירת עורקים כליליים, ניתוח צביעת TTC הצביע על השראת אוטם שריר הלב מוצלחת, ושינויים זמניים בגודל הצלקת שלאחר MI. תוצאות ניתוח הישרדות הראו תמותה גלויה בתוך שבעה ימים לאחר MI בעכברים זכרים ונקבות C57BL/6J. קרע חדרי היה סיבה שכיחה למוות לאחר MI.הערכה אקוקרדיוגרפית לאחר MI הדגימה השראות מוצלחות של תפקוד לקוי של התכווצות ועיצוב מחדש של חדרים. כאשר מנסים להחצין את הלב, אל תלחצו קודם כל על חלל החזה, ובעקבות ההתנגדות שלנו, יש צורך להתאים את הכיוון אל מול השבחים המשוקללים. לאחר הליך זה, הזרקה תוך שריר הלב של וקטורים נגיפיים או תאים יכולה להתבצע כדי לבדוק את היעילות של טיפולים גנטיים או טיפולים תאיים בענייני מחלות לב.

a-modified-simple-method-for-induction-myocardial-infarction

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ההליך הניתוחי המשמש ללגרום לאוטם שריר לב בעכברי ניסוי מתחיל בבית חזה שמאלי בין השלישי ואת צלעות 4 כדי להמחיש את המשטח הקדמי של הלב והריאה שמאלית. העורק הכלל שמאלי גבעול, החזה סגור והעכבר מותר להתאושש באופן ספונטני.

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

מתואר מודל בעל יכולת שחזור גבוהה לאוטם שריר הלב בעכברים עם מניפולציות פולשניות מינימליות. ניתן לבצע את המודל בקלות, וכתוצאה מכך יכולת שחזור ושיעור הישרדות גבוהים. לפיכך, המודל המתואר יפחית את מספר בעלי החיים הנדרשים כמתבקש על ידי עקרון 3R (החלפה, עידון והפחתה).

נוהל כירורגי זעיר פולשנית של גרימת אוטם שריר הלב בעכברים

במהלך ניתוח איסכמיה/רפרפוזיה של שריר הלב בעכברים, מיקום נכון של הקשירה החוסמת מאושר בדרך כלל על ידי תצפית גלויה של חיוורון שריר הלב. כאן, שיטה לאישור אלקטרוקרדיוגרפי של איסכמיה ורפרפוזיה, להשלמת חיוורון שריר הלב שנצפה, מודגמת בעכברי C57Bl/6 זכרים.

אישור של שריר לב איסכמיה ופציעת reperfusion בעכברים באמצעות אלקטרוקרדיוגרפיה Pad Surface

אנו מספקים שיטה אמינה לקשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) במודל עכבר. שיטה זו פחות פולשנית יחסית משיטות אחרות, הכוללת אינטובציה אנדוטרכיאלית, גישת כריתת בית החזה בצד שמאל וניתוח בית החזה. שיטה זו יכולה לשמש כמודל לאוטם שריר הלב החריף והכרוני (MI).

Murine שמאל Anterior יורד (LAD) קשירת עורקים הכליליים: דגם משופר או פשוט עבור אוטם שריר לב

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

מאמר זה מציג שיטה יעילה לבצע איסכמיה שריר הלב ואת reperfusion כרונית הבאים חולדות באמצעות גישה פולשנית מינימלית. בנוסף, הפונקציה השמאלית התפקוד התפקודי של חולדות מוערך על ידי הד ושיטות עבודה מבודדים לב.

חצי מינימלי שיטה פולשנית כדי לגרום אוטם שריר הלב בחולדות הערכה של תפקוד הלב על ידי מערכת לב עבודה מבודדת

פרוטוקול זה מתווה את השלבים לגרימת אוטם שריר הלב בעכברים תוך שמירה על קרום הלב ותכולתו.

מודל מכרסם איסכמי שלם של קרום הלב

כאן אנו מתארים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור שיכולה לגרום לאוטם שריר הלב או לפגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים על ידי קשירה מדויקת של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי באמצעות מיקרומניפולציה.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

מוצג כאן הליך כירורגי לקשירה קבועה של העורק הכלילי השמאלי בעכברים. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה ואת התגובה הדלקתית הקשורים לאחר אוטם שריר הלב.

קשירת עורקים כליליים שמאליים: מודל מורין כירורגי של אוטם שריר הלב

למד שיטה פשוטה ומהירה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים באמצעות חומרים כירורגיים נפוצים. שיטה זו מאפשרת חקר שיקום הלב ופיתוח טיפולים חדשניים למחלות לב.

שיטה פשוטה שונה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים

גלה סרטונים נוספים