Name: רחם לשעבר תרבות של עוברי עכבר מ pregastrulation כדי Organogenesis מתקדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: למד שיטת תרבות רחם לשעבר לעוברי עכבר מ pregastrulation עד אורגנוגנזה מתקדמת. פרוטוקול זה מאפשר מחקר מפורט של תהליכי התפתחות עובריים במעבדה למשך עד שישה ימים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי פסקל ואילנה מנטוקס; מועצת המחקר האירופית (ERC-CoG-2016 726497-Cellnaivety); דיילת המועצה למחקר רפואי (FAMRI); הקרן הישראלית לחקר הסרטן (ICRF), BSF, מכון הלן ומרטין קימל לחקר תאי גזע, פרס הלן ומרטין קימל לחקירה חדשנית; הקרן הישראלית למדע (ISF), מינרבה, מכון שרמן לכימיה רפואית, מרכז נלה וליאון בנוזיו למחלות נוירולוגיות, מרכז משפחת דוד ופלה שפל לחקר הפרעות גנטיות, מכון משפחת קססט לגנטיקה רפואית, קרן המחקר לתאי גזע של ד"ר בית רום-רמר, קרנות אדמונד דה רוטשילד, קרן הצדקה זנטקר, אחוזת צביה זרוני.

<ol><li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-embryo+culture+and+the+study+of+mammalian+embryos+during+organogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews+of+the+Cambridge+Philosophical+Society%22%5BJournal%5D)">Whole-embryo culture and the study of mammalian embryos during organogenesis.</a> Biological Reviews of the Cambridge Philosophical Society. 53 (1), 81-122 (1978).</li>
<li>Tam, P. P., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+gastrulation%3A+the+formation+of+a+mammalian+body+plan%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Mouse gastrulation: the formation of a mammalian body plan.</a> Mechanisms of Development. 68 (1-2), 3-25 (1997).</li>
<li>Huang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of mouse embryos.</a> Science. 368 (6487), 181-186 (2020).</li>
<li>White, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lived+binding+of+Sox2+to+DNA+predicts+cell+fate+in+the+four-cell+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Long-lived binding of Sox2 to DNA predicts cell fate in the four-cell mouse embryo.</a> Cell. 165 (1), 75-87 (2016).</li>
<li>Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postimplantation+mouse+development%3A+whole+embryo+culture+and+micro-manipulation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Postimplantation mouse development: whole embryo culture and micro-manipulation.</a> International Journal of Developmental Biology. 42 (7), 895-902 (1998).</li>
<li>Nicholas, J. S., Rudnick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+rat+embryos+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The development of rat embryos in tissue culture.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 20 (12), 656-658 (1934).</li>
<li>New, D. A., Stein, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+mouse+embryos+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cultivation of mouse embryos in vitro.</a> Nature. 199, 297-299 (1963).</li>
<li>Rivera-Pérez, J. A., Jones, V., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+whole+mouse+embryos+at+early+postimplantation+to+organogenesis+stages%3A+developmental+staging+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Culture of whole mouse embryos at early postimplantation to organogenesis stages: developmental staging and methods.</a> Methods in Enzymology. 476, 185-203 (2010).</li>
<li>New, D. A. T., Coppola, P. T., Terry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+explanted+rat+embryos+in+rotating+tubes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reproduction+and+Fertility%22%5BJournal%5D)">Culture of explanted rat embryos in rotating tubes.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 35 (1), 135-138 (1973).</li>
<li>Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+and+historical+review+of+culture+methods+for+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A comparative and historical review of culture methods for vertebrates.</a> International Journal of Developmental Biology. 41 (12), 127-137 (1997).</li>
<li>Parameswaran, M., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regionalisation+of+cell+fate+and+morphogenetic+movement+of+the+mesoderm+during+mouse+gastrulation%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Genetics%22%5BJournal%5D)">Regionalisation of cell fate and morphogenetic movement of the mesoderm during mouse gastrulation.</a> Developmental Genetics. 17 (1), 16-28 (1995).</li>
<li>Beddington, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+a+second+neural+axis+by+the+mouse+node%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Induction of a second neural axis by the mouse node.</a> Development. 120 (3), 613-620 (1994).</li>
<li>Aguilera-Castrejon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+utero+mouse+embryogenesis+from+pre-gastrulation+to+late+organogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ex utero mouse embryogenesis from pre-gastrulation to late organogenesis.</a> Nature. 593 (7857), 119-124 (2021).</li>
<li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51969(2014).</li>
<li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. Isolation, culture and manipulation of postimplantation embryos. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBehringer%2C+R+%22Manipulating+the+Mouse+Embryo%3A+a+Laboratory+Manual%22">Manipulating the Mouse Embryo: a Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 149-193 (2014).</li>
<li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+and+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Development, Growth and Differentiation. 50 (6), 485-497 (2008).</li>
<li>Mathieu, J., Ruohola-Baker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+remodeling+during+the+loss+and+acquisition+of+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Metabolic remodeling during the loss and acquisition of pluripotency.</a> Development. 144 (4), 541-551 (2017).</li>
<li>Sturm, K., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+whole+postimplantation+embryos+and+germ+layer+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of whole postimplantation embryos and germ layer derivatives.</a> Methods in Enzymology. 225, 164-190 (1993).</li>
</ol>

י.ח.ה. הוא יועץ לתעשיות ביולוגיות בע"מ והגיש בקשת פטנט המכסה את תנאי התרבות הרולר והסטטי המתוארים להלן (שהוגשו על ידי י.ח.ה. ומכון ויצמן למדע). מחברים אחרים מצהירים שאין אינטרסים מתחרים.

פרוטוקול התרבות המוצג כאן יכול לקיים רחם עובר עכבר תקין ומתמשך למשך עד שישה ימים, מ- E5.5 עד E11. בעבר, עוברים בשלבים התפתחותיים אלה יכולים להתפתח כרגיל בתרבות רק לתקופות קצרות (עד 48 שעות)15. הזיווג של מודול ויסות הגז לחממת תרבות הרולר לשליטה מדויקת בריכוז החמצן ולחץ הגז ההיפרברי הוא קריטי לתרבות עוברי העכבר הנכונה המתוארת כאן. הגדלת לחץ הגז ל 7 פסאיי משפרת את פיזור החמצן, ומאפשרת פיתוח עובר עד E11 באטמוספירה של עד 21% O2/5% CO2, בניגוד לתנאים שהועסקו בעבר של 95% <s...

ההתפתחות התוך רחמית של העובר היונקים הגבילה את המחקר של השלבים המוקדמים של התפתחות לאחר ההשתלה1,2. חוסר הנגישות של העובר המתפתח מעכב את ההבנה של תהליכים התפתחותיים מרכזיים המתרחשים לאחר השתלות העובר לרחם, כגון הקמת תוכנית גוף בעלי החיים, מפרט שכבות הנבט, או היווצרות רקמות ואיברים. יתר על כן, הגודל הקטן מאוד של העובר שלאחר ההשתלה המוקדמת מקשה על התבוננות על ידי הדמיה תוך-ויטמית ברחם לפני E103. חוסר היכולת להתבונן ולתפעל עוברים חיים בשלבים אלה הגבילה את המחקר של עוברי לאחר ההשתלה המוקדמים לתמונות במהלך ההתפתחות.
פרוטוקולים לתרבות הפריה חוץ גופית של עוברים יונקים טרום ההשתלה מבוססים היטב, אמינים, ומנוצלים באופן קבוע4. אף על פי כן, הניסיונות להקים מערכות תרבות הרחם לשעבר המסוגלות לתמוך בצמיחה נכונה של העובר לאחר ההשתלה היונקים נחלו הצלחה מוגבלת5. מגוון טכניקות תרבות הוצעו במשך למעלה ממאה שנה, בעיקר על ידי פולחן העוברים בלוחות סטטיים קונבנציונליים6,7,8 או בקבוקים מסתובבים (תרביות רולר)5,9,10. פלטפורמות אלה הוכיחו את עצמן כמועילות בהרחבת הידע על התפתחות היונקים לאחר ההשתלה 11,12, למרות היותן מאוד לא יעילות להישרדות העובר הרגילה ומוגבלות לתקופות קצרות. העוברים החלו להציג פיגור התפתחותי וחריגות מורפולוגיות כבר 24-48 שעות לאחר חניכת התרבות.
מחקר זה מספק תיאור מפורט להקמת מערכת תרבות העובר ברחם לשעבר המאפשרת התפתחות רציפה משלב טרום-אסטרולציה לשלבי אורגנוגנזה מתקדמים במשך עד שישה ימים של התפתחות לאחר ההשתלה13. מאמר זה מתאר את פרוטוקול תרבות הרולר המשופר התומך בצמיחה של עוברים E7.5 (לוח עצבי ושלב כיסוי הראש) עד שלב היווצרות הגפיים האחוריות (~ E11) ואת התרבות המורחבת מ- E5.5/ E6.5 על ידי שילוב תרבות על לוחות סטטיים ופלטפורמות תרבות רולר.

<table><tbody><tr><td>0.22 ומיקרו; מסנן גודל נקבוביות m (250 מ"ל)</td><td>JetBiofil</td><td>FCA-206-250</td><td></td></tr><tr><td>0.22 & מזרק בגודל נקבוביות m מסנן PVDF</td><td>Millipore</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>8 בארות &מיקרו;-צלחות תחתית זכוכית/ibiTreat</td><td>iBidi</td><td>80827/80826</td><td></td></tr><tr><td>בקבוק עם מכסה מתאם לכניסת גז</td><td>Arad Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bungs (חור)</td> <td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td><td>BTC 06</td><td>משמש לאיטום הבקבוקים לתוף</td></tr><tr><td>Bungs (מוצק)</td><td>B.T.C. הנדסה, קולום סטאר הנדסה מדויקת</td><td>BTC 07</td><td>משמש לאיטום התוף המסתובב</td></tr><tr><td>בקבוקי תרבות</td><td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td><td>BTC 03/BTC 04</td><td>או בקבוקי זכוכית (קטנים) BTC 03 או בקבוקי זכוכית (גדולים) BTC 04</td></tr><tr><td>D(+)-גלוקוז מונוהידראט</td><td>J.T. בייקר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סכין יהלום</td><td>Fine Science</td><td>Tools 10100-30/45</td><td></td></tr><tr><td>מד לחץ דיגיטלי</td><td>שנחאי Benxu אלקטרוניקה טכנולוגיה בע"מ</td><td>BX-DPG80</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>GIBCO</td><td>11880</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Bio Industries</td><td>02-020-1A</td><td></td></tr><tr><td>תעשיות ביולוגיות</td><td>סרום בקר עוברי</td><td>04-013-1A</td><td></td></tr><tr><td>מודול ויסות גז</td><td>ארד טכנולוגיות</td><td>HannaLab1</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>GIBCO</td><td>35050061</td><td>גלוטמין</td></tr><tr><td>מלקחיים Graefe</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11052-10</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>GIBCO</td><td>15630056</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרוכירורגיים (Dumont #5, #55)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטר (זכוכית)</td><td>פיפטות פסטר של הילגנברג</td><td>3150102</td><td></td></tr><tr><td>(פלסטיק)</td><td>Alexred</td><td>SO P12201</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>תעשיות ביולוגיות</td><td>03-031-1B</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פטרי (60 מ"מ ו-100 מ"מ)</td><td>Falcon</td><td>351007/351029</td><td></td></tr><tr><td>מערכת חממה מדויקת</td><td>B.T.C. הנדסה, Cullum Starr הנדסה מדויקת</td><td>דגם BTC01</td><td>BTC01 עם ערכת מבעבע גז</td></tr><tr><td>מבחנות סטריליות פרו-קרישה (5 מ"ל)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>#456005</td><td></td></tr><tr><td>סרום תרבית עובר שלם של חולדה</td><td>ENVIGO Bioproducts</td><td>B-4520</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאוסקופי מצויד בצלחת חימום</td><td>Nikon</td><td>SMZ18</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים סטריליים (5, 10 מ"ל) לסינון סרום</td><td>Pic Solution</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14094-11</td><td></td></tr></tbody></table>

רחם לשעבר תרבות של עוברי עכבר מ pregastrulation כדי organogenesis מתקדם

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

שיטות התרבות של היונקים לאחר ההשתלה היו בדרך כלל לא יעילות ומוגבלות לתקופות קצרות לאחר ניתוח הרחם. פלטפורמות פותחו לאחרונה עבור תרבות רחם לשעבר חזקה וממושכת מאוד של עוברי עכבר משלבי גליל ביצה עד organogenesis מתקדם. פלטפורמות אלה מאפשרות פיתוח מתאים ונאמן של עוברים טרום-כבידה (E5.5) עד לשלב היווצרות הגפיים האחוריות (E11). עוברים גסטריים מאוחרים (E7.5) גדלים בבקבוקים מסתובבים בהגדרות אלה, בעוד שתרבות מורחבת משלבי טרום-סטרולציה (E5.5 או E6.5) דורשת שילוב של תרביות בקבוקים סטטיות ומסתובבות. בנוסף, רגולציה רגישה של ריכוז O2 ופחמן דו חמצני, לחץ גז, רמות גלוקוז, ושימוש במדיום תרבית הרחם לשעבר ספציפי הם קריטיים להתפתחות העובר הנכון. כאן, פרוטוקול מפורט צעד אחר צעד עבור תרבות עובר עכבר הרחם לשעבר מורחב מסופק. היכולת לגדל עוברי עכבר רגילים לשעבר הרחם מן gastrulation כדי organogenesis מייצג כלי בעל ערך לאפיון ההשפעה של הפרעות ניסיוניות שונות במהלך התפתחות עוברית.

תנאי תרות הרולר המתוארים עבור עוברים E7.5 (שלב גסטרולציה מאוחרת) תומכים בצמיחה קבועה ונורמלית של עוברים ביעילות ממוצעת של קרוב ל-75% לאחר 4 ימי תרבות (איור 2 ולוח 1). היעילות של התפתחות העובר עשויה להשתנות על-פני רקעים גנטיים מגוונים של עכברים, אך היא איתנה באופן עקבי (איור 2C). תוספי HBS במקום HCS מניבים יעילות של ~68% לאחר 4 ימים של תרבות הרחם לשעבר , בהתאם לרקע הגנטי של העכברים (איור 2D וטבלה 2</...

פלטפורמה משופרת לתרבות העוברים המלאים מאפשרת פיתוח רחם אקס רציף וחזק של עוברי עכבר לאחר ההשתלה עד שישה ימים, משלבי טרום ההדבקה ועד לאורגנוגנזה מתקדמת. בפרוטוקול זה, אנו מפרטים את ההליך הסטנדרטי לתרבות עוברית מוצלחת באמצעות לוחות סטטיים ומערכות בקבוק מסתובבות.

רחם לשעבר תרבות של עוברי עכבר מ pregastrulation כדי Organogenesis מתקדם

Postimplantation mammalian embryo culture methods have been generally inefficient and limited to brief periods after dissection out of the uterus. ...

שיטה זו תהיה בסיסית להבנת גסטרולציה לאורך היווצרות ביונקים. על ידי מתן אפשרות לניסויים בעוברים חיים בשלבים עובריים שהוסתרו זה מכבר בתוך הרחם האימהי. זה מאפשר, ממשיך צמיחה יעילה ומתאימה של עוברי עכבר מחוץ לרחם לתקופה ממושכת של עד 6 ימים.ניתוח עובר מהיר והולם ו pregastrulation של ריכוז הגז ולחץ הם הצעדים הקריטיים ביותר לצמיחה מוצלחת של העובר. כדי להתחיל פולחן 7.5 יום או עוברי עכבר מתקדמים יותר, להפעיל את המסובב ואת יחידת החימום של מערכת החממה תרבות רולר לפחות 1 שעה לפני הניתוחים העובר. כמו כן, מוסיפים מי autoclave לבקבוק כניסת הגז ואת המבחנה שקע.לאחר מכן, הפעל את מודול וסת הגז על ידי לחיצה על המתג הראשי, ולאחר מכן השתמש בבקרים המתאימים כדי להגדיר את ערכי החמצן והפחמן הדו חמצני ל -5% פתח את וסת הגז והזז את מתג המתח במשדר הלחץ כדי להגדיר את לחץ הגז לכ -6.5 עד 7 פאונד לאינץ 'מרובע. אשר את ערך לחץ הגז באמצעות מד לחץ דיגיטלי. נטר את זרימת הגז על ידי בדיקת קצב הבועות שנוצרו בתוך מבחנה מלאה במי מוצא שהוקצתה בתוך האינקובטור המדויק.הגדר את קצב הבועה הנכון על ידי סגירה או פתיחה של שסתום זרימת הגז על מכסה בקבוק המים. ודא כי זרימת הגז מאפשרת היווצרות של בועות בקצב של 2 עד 4 בועות לשנייה או להגדיר את זרימת הבועה בנקודה הראשונה שבה מבעבע יוצא צינור שקע מלא מים. לאחר מכן, מלא את בקבוקי התרבות עם 2

ex-utero-culture-mouse-embryos-from-pregastrulation-to-advanced

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אנו מציגים שיטה להכין פרוסות organotypic של אמצע ההיריון עוברי עכברים הדמיה טיפוח זמן לשגות תולדה של עצבים היקפיים.

פורסים תרבות Organotypic של ה-GFP-לבטא עוברי עכברים עבור הדמיה בזמן אמת תולדה של עצבים היקפיים

שיטה המאפשרת מניפולציה תרופתי ישירה של עוברי עכברים במהלך neurulation עוקף מטבוליזם אימהית מתואר. הטכניקה ניתן להתאים ללמוד היבטים שונים של neurulation על ידי שינוי נקודת זמן סוכן תרופתי.

Tube סגירת עצבית בתרבות העובר שלם עכבר

מחקרים התפתחותיים בעכבר הם הקשו על ידי חוסר הנגישות של העובר במהלך הריון. על מנת לקדם את התרבות לטווח הארוך של הלב העוברי בשלבים מאוחרים של הריון, פיתחנו פרוטוקול בו הלב נכרת הוא בתרבית Matrigel חצי מוצק, לדלל.

רומן<em&gt; Ex vivo</em&gt; שיטת תרבות ללב העכבר העוברית

סרום מנוצל בתרבויות עובר מכיל מרכיבים לא ידועים שיכול להשפיע על התוצאה של ניסויים במיוחד במחקרים שכלל אינטראקציות איתות. כאן אנו מנוצלים מערכת תרבות מחומצן בסרום ללא ולהראות שעוברי עכברים באמצע ההריון תרבותי ל16-40 שעה להפגין פיתוח מורפולוגיים דומה לעוברים המתפתחים ברחם.

עכבר עוברי פיתוח במערכת סרום ללא תרבות שלמה עובר

אנו מתארים את הנתיחה וvivo התרבות לשעבר של עור העוברי של עכבר. מערכת התרבות שומרת על ממשק אוויר נוזלי על פני השטח של הרקמות ומאפשרת הדמיה במיקרוסקופ הפוכה. Melanoblasts, רכיב של העור מתפתח, שכותרתו fluorescently המאפשרת את התנהגותם כדי להיות שנצפתה באמצעות מיקרוסקופ confocal.

אקס תרבות Vivo של עור העכבר עוברי וLive-הדמיה של הגירת Melanoblast

טכנולוגיית הדמיה משופרת מאפשרת הדמיה תלת מימדית של איברים במהלך ההתפתחות. כאן אנו מתארים מערכת תרבית איברים שלמה המאפשרת הדמיה חיה של הווילי המתפתח במעי העכבר העוברי.

מערכת תרבות עכבר העוברי שלם מעי ל Ex Vivo מניפולציה של מסלולי איתות והדמית חיה תלת ממדית של פיתוח שליה

תרבית הטיפות הזקופות ex vivo היא אלטרנטיבה לטכניקות הניסוי הנוכחיות in vitro ו-in vivo. פרוטוקול זה קל לביצוע ודורש כמויות קטנות יותר של ריאגנטים, תוך מתן אפשרות לתפעל ולחקור כלי דם עובריים, מורפוגנזה ואורגנוגנזה.

שימוש<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבויות הזקופה טיפה של איברים העובר שלמים לחקר תהליכים התפתחותיים בעכבר organogenesis

אנו מציגים שיטה בידוד והתרבות של צינור העכבר Wolffian (WD). אנחנו גם מדגימים נוהל מפורט immunostaining הר שלם של WDS תרבותי / טרי מבודד עם נוגדנים מתויג fluorescently. יחד, טכניקות אלו מאפשרים את חקר התפתחות WD, התפתלות, והבחנה.

תרבות איברים שלמים הר Immunofluorescence מכתים של עכבר Wolffian צינוריות

אנו מציגים פרוטוקול מפורט לתרבית והדמיית עוברי עכבר המאפשר הדמיה תלת ממדית + זמן של תאי אב לבביים. ערכת כלי וידאו זו מתייחסת למיומנויות המפתח הנדרשות להדמיה חיה מוצלחת שאחרת קשה לרכוש מפרסומים של טקסט בלבד.

הדמיה חיה של אבות לב מוקדמים בעובר העכבר

מאמר זה קובע צינור להשעיה איכותית של תאים בודדים וגרעינים של עוברי עכברים גסטרולטיביים לצורך ריצוף של תאים בודדים וגרעינים.

ריצוף RNA חד-תאי של עוברי עכברים שלמים מוטנטיים: מהאפיבלסט ועד סוף הגסטרולציה

למד שיטת תרבות רחם לשעבר לעוברי עכבר מ pregastrulation עד אורגנוגנזה מתקדמת. פרוטוקול זה מאפשר מחקר מפורט של תהליכי התפתחות עובריים במעבדה למשך עד שישה ימים.

רחם לשעבר תרבות של עוברי עכבר מ pregastrulation כדי Organogenesis מתקדם

גלה סרטונים נוספים