Name: מיומנויות מיקרוכירורגיות של הקמת קנדול וריד הצוואר קבוע בחולדות עבור דגימת דם סדרתית של תרופה מנוהלת דרך הפה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: למד טכניקות מיקרוכירורגיות להקמת קנולה ורידית קבועה בעכברושים. שיטה זו מאפשרת דגימת דם סדרתית מבעלי חיים בהכרה תוך מזעור מתח וכאב, ותומכת במחקר פרמקוקינטי ובהערכת תרופות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס '82003692) כדי R.X. Zhang; מלגה אקדמית מובילה באוניברסיטה הפוליטכנית נורת'ווסטרן לר' מיאו.

ההליכים המתוארים להלן בוצעו כחלק מפרוטוקול שאושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ולשימוש באוניברסיטה הפוליטכנית נורת'ווסטרן (מס ' 202101117).
1. הכנה טרום ניתוחית (יום לפני הניתוח)
הערה: פתרונות נדרשים: תמיסת מלח רגילה (0.9% עם נתרן כלורי), תמיסת מלח הפרינית (1% w / v נתרן הפרין), פתרון נעילת קטטר, תרופה נוגדת דלקת לא סטרואידית (NSAID), כגון פתרון meloxicam (2 מ"ג / מ"ל).
<ol><li>הכנת פתרון<ol>
<li>Aliquot 200 μL של פתרון נעילת קטטר ארוז מראש בצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי 1.5 מ"ל. הערה: פתרון נעילת צנתר מורכב מלוחים הפריניזציה (0.4% v / v נתרן הפרין) מעורבב עם גליצרול (v / v, 1:1).</li>
		<li>מערבבים 1 גרם של נתרן הפרין ב 100 מ"ל של מלוחים רגילים כדי להכין 1% מלוחים הפרין.</li>
		<li>להמיס meloxicam מלוחים רגילים כדי להכין פתרון ריכוז 2 מ"ג / מ"ל להקלה על הכאב לאחר הניתוח. הערה: תמיסת מלח הפריניזציה מוכנה ופתרון meloxicam מסוננים באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר. כל הפתרונות מעוקרים ומאוחסנים בטמפרטורה של 4°C לשימוש עתידי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מכשירים וחומרים כירורגיים<ol>
<li>ארזו את כל הכלים הכירורגיים הנקיים בשקית והדביקו אותה עם חתיכת סרט עיקור אוטומטי. עיינו באיור 1A עבור המכשירים הכירורגיים הספציפיים שבהם נעשה שימוש.</li>
		<li>Autoclave את הכיס הכירורגי ב 121 °C (50 °F) במשך 30 דקות לשימוש למחרת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנת בעלי חיים<ol>
<li>לפני הניתוח, בית כל זכר Sprague-Dawley חולדות (SD) בחדר החיות הסטנדרטי עם טמפרטורה מבוקרת ב 22 ± 1 °C (50 °F). להאכיל אותם עם מזון מעבדה סטנדרטית ומים ad libitum במשך 7 ימים לפחות. הערה: ניתן להשתמש הן בחולדות זכר והן בחולדות נשיות עבור דגם JVC, וגילן ומשקלם האופייניים משתנים בין 9-14 שבועות ו-294 ± 57 גרם, בהתאמה.</li>
		<li>להרדים את החולדה עם 3%-3.5% איזופלוריין מעורבב עם חמצן בתא טרום הרדמה. לקבוע אם החולדה הופכת מחוסרת הכרה על ידי חוסר תגובה לצביטת כף הרגל.</li>
		<li>מוציאים בעדינות את החולדה, מניחים את האף של החולדה בתוך אף הרדמה המספק 2%-2.5% איזופלוריין.</li>
		<li>בתנוחה הגחונית והגבית, הסר את הפרווה ביסודיות סביב כתפו הימנית ואזורי הצוואר האחוריים עם קרם depilatory ותער לחיות מחמד. החזר את החולדה לכלוב לניתוח שיבוצע למחרת.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. לפני הניתוח ביום
<ol><li>הכנת תחנת העבודה האספטית<ol>
<li>יש לרסס 75% אלכוהול רפואי כדי לחטא את אזור הפעולה, ולאחר מכן להניח את כרית החימום המכוסה בכרית נקייה. הגדר את מנורת ה- LED עם מקור אור קר ליד תחנת העבודה.</li>
		<li>מחממים מראש את הפתרונות הנדרשים (שלב 1.1) לטמפרטורת החדר.</li>
		<li>מלאו 0.6 מ"ל של תמיסת מלח הפרינית ו-0.15 מ"ל של תמיסת נעילת צנתר בשני מזרקים סטריליים של 1.0 מ"ל, בהתאמה. משוך 2.5 מ"ל של תמיסת מלח רגילה באמצעות מזרק סטרילי 5.0 מ"ל.</li>
		<li>משרים את כדורי הכותנה ב-75% אלכוהול רפואי. יש לסחוט אתנול עודף לפני השימוש.</li>
		<li>לשקול ולתעד את משקל הגוף של החולדה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. במהלך הניתוח
<ol><li>הכנה כירורגית<ol>
<li>יש ללבוש את המעיל הכירורגי, הכפפות הסטריליות ומסכת הפנים. לאחר מכן פתחו את השקית הכירורגית המעוקרת, השאירו את כל הכלים הכירורגיים ב-75% אלכוהול רפואי, וייבשו אותם לפני השימוש.</li>
	</ol></li>
	<li>בידוד וריד הצוואר הערה: זמן הפעולה המשוער עבור חלק זה הוא 10 דקות.<ol>
<li>להרדים את החולדה המוכנה לניתוח ומגולחת עם 3%-3.5% איזופלוריין מעורבב עם חמצן בתא אינדוקציה ולקבוע אם החולדה הופכת מחוסרת הכרה על ידי חוסר תגובה לצביטת כף הרגל.</li>
		<li>מניחים את האף של החולדה לתוך האף המסופק עם 2%-2.5% איזופלוריין כדי לשמור על ההרדמה.</li>
		<li>הזרקה תת עורית (s.q.) תמיסת meloxicam במינון של 2 מ"ג/ק"ג. הערה: הקפד לבחור משככי כאבים שאינם אינטראקציה עם תרכובת התרופה של עניין במחקר פרמקוקינטיקה.</li>
		<li>באמצעות סרט הדבקה, לרסן את זרועות החולדה בעמדת הגחון שלהם לכל צד של הפלטפורמה כירורגית.</li>
		<li>לשפשף בעדינות את האזור הניתוחי על ידי לסירוגין בין כדורי כותנה ספוגים 75% אלכוהול רפואי קרצוף מבוסס יוד בסך הכל שלוש פעמים.</li>
		<li>בזהירות להרים את העור ליד עצם הבריח בצד ימין של קו האמצע של הצוואר עם מלקחיים ולעשות חתך לכיוון החזה על 1.5-2.0 ס"מ אורך עם זוג מספריים כירורגיים.</li>
		<li>בוטה לנתח את כיסוי הרקמה הדקה עם מספריים קשתית לחשוף את הווריד הצווארי מתחת. הקצה הצפלי הפרוקסימלי של וריד הצוואר החיצוני מורכב משני ענפים, אשר ניתן לזהות חזותית. הערה: בהתאם לגיל ומין החולדה, הרקמה הרכה (למשל, בלוטות הרוק, בלוטות הלימפה ורקמות השומן) המכסות את וריד הצוואר משתנה. בהשוואה לחולדות הצעירות, החולדות הישנות שמנות יותר (למשל, BW > 300 גרם), ולכן זקוקות להפרדת רקמות נוספת לפני שנראה לווריד הצוואר.</li>
		<li>הרם את וריד הצוואר יחד עם רקמות membranous החיבור שלה כדי לדמיין את בלוטת הלימפה המחוברת לווריד הצוואר. בזהירות להפריד את הווריד לאורך כיוון כלי הדם מן השרירים שמסביב, שומן, ורקמות אחרות.</li>
		<li>לדחוף את המלקחיים מתחת לווריד הצוואר מבלי לפגוע בכלי הדם המשניים ולעבור שתי חתיכות של תפר 6-0 מתחת לווריד כדי לסמן את שני הקצוות של כלי הדם בנפרד.</li>
		<li>משוך חתיכה אחת של התפר ככל האפשר לכיוון ראש החולדה ולכסות את הווריד cranily עם 2-3 קשרים באמצעות מלקחיים.</li>
		<li>מניחים את הקשירה השנייה על הקצה caudal של הווריד עם קשר רופף אחד.</li>
	</ol></li>
	<li>קנסולציה של וריד הצוואר הערה: זמן הפעולה המשוער עבור חלק זה הוא 15 דקות.<ol>
<li>פתחו את האריזה המכילה צנתר פוליאוריטן (PU) בגודל 11 ס"מ (I.D. 0.6 מ"מ x O.D. 0.9 מ"מ, איור 1B) והצמידו את הצנתר למזרק הקהה המוכן המלא בתמיסת מלח המופרינת.</li>
		<li>לדחוף לאט את תמיסת מלח הפרין לתוך קטטר, כדי למנוע בועות אוויר.</li>
		<li>דחף את הצד השטוח ללא קצה של המלקחיים מתחת לווריד הצוואר כדי לצאת בצד השני. לעשות חתך קטן בצורת V על הווריד ליד העניבה הגולגולתית עם זוג מספריים מיקרו castroviejo ולפתוח בעדינות את החתך עם קצה מלקחיים מרחיב כלי המרפק. הערה: יש לשטוף את החתך עם תמיסת מלח רגילה שחוממה מראש (37 °F), אם כמות קטנה של דם נשפכת החוצה.</li>
		<li>חותכים את הפתח האלכסוני של הקצה הקדמי של צנתר וריד הצוואר. מהדקים את הקצה האלכסוני של הצינור עם מלקחיים ולהחליק אותו לתוך הווריד הצווארי. הערה: ייתכן ששלב זה יזדקק לאדם אחר כדי להקל על החלקת הצנתר.</li>
		<li>תוך כדי קידום הצנתר, לסגת לאט את המלקחיים מיקרוכירורגיים המרפק ומהדק את פני השטח החיצוניים של הכלי עם מלקחיים. הערה: אם כלי הדם הנכון נבחר ואת קצה הצנתר הוא החליק בהצלחה לתוך כלי הדם, כל תהליך החדרת קטטר לא צריך להרגיש שום התנגדות זרימה.</li>
		<li>הפסיקו להכניס את הצנתר עם הפגיעה בסימן הכחול הראשון של צינור ה-PU (איור 1B), שאורכו כ-3.0 ס"מ.</li>
		<li>אבטחו את הצנתר המוחדר לווריד עם קשירות קוודליות ורוסטרליות באמצעות מלקחיים.</li>
		<li>חוט תפר 6-0 דרך הרקמה החשופה בצד ימין של החתך באמצעות מחט תפר (1/2 חיתוך מעוקל, 12 מ"מ) ולקשור את קשירת עם hemostat.</li>
		<li>כופפו את הצנתר בסימן הכחול השני (איור 1B) כדי להיקשר עם אותה קשירה (בשלב 3.3.8) ולהימנע מחסימת צינורות PU.</li>
		<li>חותכים את כל חוט התפר הנוסף וסוגרים את הצנתר על ידי החלפת המזרק הקהה עם תקע נירוסטה 22 גרם.</li>
	</ol></li>
	<li>חיצוניזציה של צנתר הערה: זמן הפעולה המשוער עבור חלק זה הוא 10 דקות.<ol>
<li>מניחים את החולדה בתנוחת הגב ומנקים בעדינות את האזור שבין השכם לבין כדור הכותנה ספוג ב -75% אלכוהול רפואי.</li>
		<li>בצע חתך קטן מאוד במרכז הצוואר הגבי עם מספריים כירורגיים. דרך חתך הגב, להנחות בעדינות לדחוף את trochar מתחת לעור לכיוון החתך הגחוני בצד ימין של הצוואר.</li>
		<li>שים את קטטר ורידים לתוך trochar ולאחר מכן לשלוף ולהנחות את קטטר ורידים לכיוון חתך הגב.</li>
		<li>אבטחו את הצנתר החיצוני בשכבת השריר באותו אופן עם התפר (ראו את ההליך בשלבים 3.3.8 ו-3.3.9).</li>
		<li>סגור את שכבת העור של חתכים גחוניים וגב עם תפר ניילון 6-0 מחט תפר (3/8 חיתוך מעוקל, 17 מ"מ). ספוגית כל החתכים כירורגיים עם יודופור. הערה: פצע-קליפס היא שיטה חלופית כדי לסגור את חתך העור.</li>
		<li>הסר את תקע הצנתר על ידי אחיזת הצנתר בקצות האצבעות. מניחים מזרק קהה חדש ולאט לאט למשוך בחזרה את המזרק כדי לבדוק את זרימת הדם. הערה: מאז החולדה נמצאת בתנוחה סופית, אחד לא יכול להיות מסוגל להשיג דגימות דם. ניתן להשיג דגימות דם על ידי שינוי לתנוחת גוף צדדית.</li>
		<li>החזק את הצנתר שוב עם קצות האצבעות והזריק 0.2 מ"ל של תמיסת מלח הפרין ו 0.1 מ"ל של פתרון מנעול לתוך הצנתר באמצעות מזרק קצה קהה.</li>
		<li>החזק את הצנתר בקצות האצבעות והחלף את המזרק בתקע נירוסטה. מבטלים את הקטטר ודוחפים מעט את התקע פנימה כדי להבטיח את הלחץ של הצנתר.</li>
	</ol></li>
</ol>4. טיפול מיידי לאחר הניתוח
<ol><li>לשחזר את החולדה בתנוחת decubitus הגב על ידי caging אותו בנפרד עם מצעים קלח תירס טרי. לעתים קרובות, לספק כרית חימום מווסתת טמפרטורה כדי לשמור על טמפרטורת הגוף הליבה. הערה: לרווחת בעלי החיים, השארת מזון ומים על המצעים היא דרך יעילה להקל על הכאב הנגרם על ידי תנועות הצוואר בעת אכילה ושתייה.</li>
	<li>להקליט את שעת הסיום של הניתוח ולפקח על החולדה במרווחים של 2 שעות לפחות 4 שעות. ספק משככי כאבים נוספים להתאוששות אם החולדה מראה סימנים של כאב או מצוקה.</li>
</ol>5. ניטור פיזיולוגי והמטולוגי בשלב ההחלמה
<ol><li>נטר את משקל הגוף ואת צריכת המזון והמים מדי יום ורשום את הנתונים.</li>
	<li>כדי לאסוף נפח קטן של דם טרי לבדיקה המטולוגית, למקם את החולדה בריסון. פתח את התקע והכנס את המזרק לצנתר PU הוורידי כדי להבטיח שהקטטר לא ייחסם. הערה: איסוף הדם בוצע בו זמנית מדי יום במשך 6 ימים רצופים.</li>
	<li>יש להשליך את הדם הראשוני שנסוג, המכיל תערובת של דם, תמיסת מלח הפרינית ותמיסת נעילת קטטר.</li>
	<li>השתמש מזרק חדש כדי לאסוף 150 μL של דגימת דם טרי ולהעביר את דגימת הדם לצינור 0.5 מ"ל המכיל K2EDTA (1.8 מ"ג / מ"ל דם) ספריי מיובש על דופן הצינור. הערה: אם הצנתר חסום, 0.2 מ"ל של תמיסת מלח הפרין ניתן להזריק לתוך הצנתר כדי לשטוף את הצנתר כמה דקות לפני זמן איסוף הדם הבא.</li>
	<li>הזרקו תמיסת מלח סטרילית באותו נפח כדי לפצות על הדם שנסוג. להזריק 150 μL של מלוחים רגילים שחוממו מראש (37 °C (37 °F)) ולהחדיר 0.2 מ"ל סטרילי הפרין מלוח רגיל דרך הצנתר.</li>
	<li>הזריקו 100 μL של פתרון המנעול לתוך הצנתר כדי להבטיח את האיטום והסטריליות של הצנתר לפני איסוף המדגם הבא.</li>
	<li>לנתח את דגימות הדם בתוך 2 שעות של איסוף באמצעות מונה תאי דם אוטומטי.</li>
</ol>6. דגימת דם חוזרת ונשנית למחקרים פרמקוקינטיים של תרופות המנוהלות על ידי הפה
הערה: חולדות עם עלייה במשקל >10 גרם ורמה המטולוגית יציבה מוצעים להירשם למחקר עתידי. בעקבות הפרוטוקול הנוכחי, חולדות JVC נדרשו 4 עד 6 ימים כדי להתאושש.
<ol><li>לאחר 4-6 ימים של ניתוח, מהר החולדה במשך 12 שעות עם גישה חופשית למים. הערה: בהתאם למטרה הניסיונית, צום החיה הוא אופציונלי.</li>
	<li>דרך הפה gavage החולדה הצום עם חומצה אלגית פנול ביואקטיבית טבעית במינון של 6 מ"ג/ק"ג עם מחט gavage ישר16.</li>
	<li>לאסוף 200 μL של דגימות דם בצינורות הפריניזציה באמצעות צינורית וריד הצוואר בנקודות זמן שנקבעו מראש מעל 24 שעות לאחר מתן אוראלי. תהליך איסוף הדם עוקב אחר ההליך בשלב 5.5. הערה: אין צורך לסגור את הצנתר עם פתרון הנעילה עד להשלמת איסוף הדם.</li>
	<li>מיד צנטריפוגה דגימת הדם ב 3000 x g ב 4 °C (50 °F) במשך 10 דקות.</li>
	<li>לנתח את דגימת הפלזמה שחולצה על ידי ספקטרוסקופיה כרומטוגרפיה-מסהנוזלית 17,18.</li>
</ol>

<ol><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Pharmacotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Sadler, A. M., Bailey, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+refined+technique+for+taking+repeated+blood+samples+from+juvenile+and+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Validation of a refined technique for taking repeated blood samples from juvenile and adult mice.</a> Laboratory Animals. 47 (4), 316-319 (2013).</li>
<li>Zhang, R. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinating+biointeraction+and+bioreaction+of+a+nanocarrier+material+and+an+anticancer+drug+to+overcome+membrane+rigidity+and+target+mitochondria+in+multidrug-resistant+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Coordinating biointeraction and bioreaction of a nanocarrier material and an anticancer drug to overcome membrane rigidity and target mitochondria in multidrug-resistant cancer cells.</a> Advanced Functional Materials. 27 (39), 12(2017).</li>
<li>Zhang, R. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer-lipid+hybrid+nanoparticles+synchronize+pharmacokinetics+of+co-encapsulated+doxorubicin-mitomycin+C+and+enable+their+spatiotemporal+co-delivery+and+local+bioavailability+in+breast+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine-Nanotechnology+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Polymer-lipid hybrid nanoparticles synchronize pharmacokinetics of co-encapsulated doxorubicin-mitomycin C and enable their spatiotemporal co-delivery and local bioavailability in breast tumor.</a> Nanomedicine-Nanotechnology Biology and Medicine. 12 (5), 1279-1290 (2016).</li>
<li>Zhang, R. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+extraction+and+simultaneous+chromatographic+quantitation+of+doxorubicin+and+mitomycin+C+following+drug+combination+delivery+in+nanoparticles+to+tumor-bearing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Sample extraction and simultaneous chromatographic quantitation of doxorubicin and mitomycin C following drug combination delivery in nanoparticles to tumor-bearing mice.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e11(2017).</li>
<li>Bakar, S. K., Niazi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+reliable+method+for+chronic+cannulation+of+the+jugular+vein+for+pharmacokinetic+studies+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Simple reliable method for chronic cannulation of the jugular vein for pharmacokinetic studies in rats.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 72 (9), 1027-1029 (1983).</li>
<li>Harms, P. G., Ojeda, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+simple+procedure+for+chronic+cannulation+of+the+rat+jugular+vein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">A rapid and simple procedure for chronic cannulation of the rat jugular vein.</a> Journal of Applied Physiology. 36 (3), 391-392 (1974).</li>
<li>Thrivikraman, K. V., Huot, R. L., Plotsky, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jugular+vein+catheterization+for+repeated+blood+sampling+in+the+unrestrained+conscious+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Protocols%22%5BJournal%5D)">Jugular vein catheterization for repeated blood sampling in the unrestrained conscious rat.</a> Brain Research Protocols. 10 (2), 84-94 (2002).</li>
<li>Weeks, J. R., Davis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+intravenous+cannulas+for+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Chronic intravenous cannulas for rats.</a> Journal of Applied Physiology. 19 (3), 540-541 (1964).</li>
<li>Goldkuhl, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+concentrations+of+corticosterone+and+buprenorphine+in+rats+subjected+to+jugular+vein+catheterization%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Plasma concentrations of corticosterone and buprenorphine in rats subjected to jugular vein catheterization.</a> Laboratory Animals. 44 (4), 337-343 (2010).</li>
<li>Steffens, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+frequent+sampling+of+blood+and+continuous+infusion+of+fluids+in+the+rat+without+disturbing+the+animal%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">A method for frequent sampling of blood and continuous infusion of fluids in the rat without disturbing the animal.</a> Physiology & Behavior. 4 (5), 833-836 (1969).</li>
<li>Terao, N., Shen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+serum+protein+binding+and+pharmacokinetics+of+l-propranolol+in+the+rat+elicited+by+the+presence+of+an+indwelling+venous+catheter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Alterations in serum protein binding and pharmacokinetics of l-propranolol in the rat elicited by the presence of an indwelling venous catheter.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 227 (2), 369-375 (1983).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheterization+of+the+carotid+artery+and+jugular+vein+to+perform+hemodynamic+measures%2C+infusions+and+blood+sampling+in+a+conscious+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (95), e51881(2015).</li>
<li>Karim, N., Ali, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jugular+vein+cannulation+in+rats+-+A+mini+review%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Pure+and+Applied+Sciences%22%5BJournal%5D)">Jugular vein cannulation in rats - A mini review.</a> Canadian Journal of Pure and Applied Sciences. 3, 929-935 (2009).</li>
<li>Ling, S., Jamali, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cannulation+surgery+and+restraint+stress+on+the+plasma+corticosterone+concentration+in+the+rat%3A+application+of+an+improved+corticosterone+HPLC+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+%26+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Effect of cannulation surgery and restraint stress on the plasma corticosterone concentration in the rat: application of an improved corticosterone HPLC assay.</a> Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 6 (2), (2003).</li>
<li>Lei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+study+of+ellagic+acid+in+rat+after+oral+administration+of+pomegranate+leaf+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B-Analytical+Technologies+in+the+Biomedical+and+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic study of ellagic acid in rat after oral administration of pomegranate leaf extract.</a> Journal of Chromatography B-Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 796 (1), 189-194 (2003).</li>
<li>Yan, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+development+and+validation+for+pharmacokinetic+and+tissue+distributions+of+ellagic+acid+using+Ultrahigh+Performance+Liquid+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry+%28UPLC-MS%2FMS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Method development and validation for pharmacokinetic and tissue distributions of ellagic acid using Ultrahigh Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (UPLC-MS/MS).</a> Molecules. 19 (11), 18923-18935 (2014).</li>
<li>Long, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioavailability+and+bioactivity+of+free+ellagic+acid+compared+to+pomegranate+juice%5BTitle%5D)+AND+%22Food+%26+Function%22%5BJournal%5D)">Bioavailability and bioactivity of free ellagic acid compared to pomegranate juice.</a> Food & Function. 10 (10), 6582-6588 (2019).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKSolver%3A+An+add-in+program+for+pharmacokinetic+and+pharmacodynamic+data+analysis+in+Microsoft+Excel%5BTitle%5D)+AND+%22Computer+Methods+and+Programs+in+Biomedicine%22%5BJournal%5D)">PKSolver: An add-in program for pharmacokinetic and pharmacodynamic data analysis in Microsoft Excel.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 99 (3), 306-314 (2010).</li>
<li>Christakis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+curve+of+vessel+cannulation+in+rats+using+cumulative+sum+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Learning curve of vessel cannulation in rats using cumulative sum analysis.</a> Journal of Surgical Research. 193 (1), 69-76 (2015).</li>
<li>Nm, S., Oduola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematological+profile+shows+that+Inbred+Sprague+Dawley+rats+have+exceptional+promise+for+use+in+biomedical+and+pharmacological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Journal+of+Biomedical+and+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Haematological profile shows that Inbred Sprague Dawley rats have exceptional promise for use in biomedical and pharmacological studies.</a> Asian Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences. 4 (37), 33-37 (2014).</li>
<li>Lillie, L. E., Temple, N. J., Florence, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reference+values+for+young+normal+Sprague-Dawley+rats%3A+weight+gain%2C+hematology+and+clinical+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Human+%26+Experimental+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Reference values for young normal Sprague-Dawley rats: weight gain, hematology and clinical chemistry.</a> Human & Experimental Toxicology. 15 (8), 612-616 (1996).</li>
<li>He, Q. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-specific+reference+intervals+of+hematologic+and+biochemical+analytes+in+Sprague-Dawley+rats+using+the+nonparametric+rank+percentile+method%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Sex-specific reference intervals of hematologic and biochemical analytes in Sprague-Dawley rats using the nonparametric rank percentile method.</a> PLoS One. 12 (12), 18(2017).</li>
<li>EPA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+and+Documentation+of+Biological+Values+for+Use+in+Risk+Assessment%5BTitle%5D)+AND+%22U.S.+Environmental+Protection+Agency%22%5BJournal%5D)">Recommendations for and Documentation of Biological Values for Use in Risk Assessment.</a> U.S. Environmental Protection Agency. , EPA/600/6-87/008 (NTIS PB88179874) (1988).</li>
<li>Gaud, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+jugular+vein+cannulated+rats+may+not+be+suitable+for+intravenous+pharmacokinetic+screening+of+high+logP+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Single jugular vein cannulated rats may not be suitable for intravenous pharmacokinetic screening of high logP compounds.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 99, 272-278 (2017).</li>
<li>Turck, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pharmacokinetics+of+meloxicam%5BTitle%5D)+AND+%22Arzneimittel-Forschung%2FDrug+Research%22%5BJournal%5D)">Clinical pharmacokinetics of meloxicam.</a> Arzneimittel-Forschung/Drug Research. 47 (3), 253-258 (1997).</li>
<li>Aghazadeh-Habashi, A., Jamali, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+meloxicam+administered+as+regular+and+fast+dissolving+formulations+to+the+rat%3A+Influence+of+gastrointestinal+dysfunction+on+the+relative+bioavailability+of+two+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of meloxicam administered as regular and fast dissolving formulations to the rat: Influence of gastrointestinal dysfunction on the relative bioavailability of two formulations.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 70 (3), 889-894 (2008).</li>
<li>Ludwig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+human+cytochrome+P-450+3A4-catalyzed+meloxicam+5+%27-methylhydroxylation+by+quinidine+and+hydroquinidine+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Activation of human cytochrome P-450 3A4-catalyzed meloxicam 5 '-methylhydroxylation by quinidine and hydroquinidine in vitro.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 290 (1), 1-8 (1999).</li>
<li>Zhang, R. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticulate+drug+delivery+strategies+to+address+intestinal+cytochrome+P450+CYP3A4+metabolism+towards+personalized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Nanoparticulate drug delivery strategies to address intestinal cytochrome P450 CYP3A4 metabolism towards personalized medicine.</a> Pharmaceutics. 13 (8), (2021).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שליטה בטכניקה של קנוניציה כלי דורש תרגול משמעותי ולמידה של הלקח מכל פעולה. Christakis ואח ' באמצעות ניתוח סכום מצטבר (CUSUM), מצא כי חוקר צריך לתרגל 200 חולדות על פני תקופה של שנה אחת לפני להיות מוכן להערכת PK של מועמדים לסמים20. עם זאת, זמן הפעולה הנדרש עבור cannulation הווריד יכול להיות מופחת באופן משמעותי על ידי מספר החולדות שבוצעו13,20. באמצעות הפרוטוקול שלנו, שיעור ההצלחה של שכפול יעיל של וריד הצוואר ואיסוף דגימת הדם עלה מכ -50% ליותר...

רכישה חוזרת ונשנית של דגימות דם מחיות מעבדה קטנות, כגון מכרסמים, שרקנים וארנבות, היא היבט חשוב לאופטימיזציה של עופרת פרמצבטית וגם להפחתת מספר בעלי החיים המשמשים במחקר 1,2. הצינור לפיתוח כלי אבחון חדשים וניסוחים תרופתיים (למשל, חיסון) דורש גישה לכמויות שונות של דם על מנת להעריך את החוסן והביצועים שלהם ב- vivo, כגון פרמקוקינטיקה (PK), רעילות ורגישות 3,4,5.
גישת המעבדה לאיסוף דגימות דם מסווגת באופן כללי לשני סוגים, כירורגיים ולא כירורגיים6. הגישה הלא-כירורגית קלה יחסית לתפיסה עבור החוקר, הכוללת טכניקות נפוצות, כגון ניקוב לב, ניקוב סינוס מסלולי ודימום של הווריד הספני והזנב. דגימת דם מרובה אפשרית על ידי כמה שיטות לא כירורגיות, אבל נפח המדגם הוא קטן והוא יכול לגרום פצע פיזי ומתח פסיכולוגי לבעלי החיים1. מצד שני, הגישה הכירורגית היא חלופה מועדפת לווניפונקטורה חוזרת ונשנית, והיא כוללת מיקום של צינורית זמנית או קבועה בכלי הדם של בעלי חיים 7,8,9. נפח הדם הגדול יכול להיות נסוג שוב ושוב דרך הצינורית בחולדות מודעות תוך הימנעות הלחץ והכאב עקב טכניקת הטיפול, ריסון, והרדמה 7,8,10,111. עם זאת, השתלת הצינורית דורשת חוקר מנוסה עם הכשרה נאותה על מנת לאסוף בהצלחה את הדם.
איסוף דם באמצעות קנסולציה וריד הצוואר (JVC) בחולדות היא השיטה הנפוצה ביותר ללמוד את התרופה PK 6,10,12,13. עם זאת, הקמת מודל חולדות JVC זקוקה לתרגול זהיר של מיומנויות מיקרו-כירורגיות וידע בטיפול ותחזוקה פוסט-כירורגיים. במיוחד, לאחר הניתוח, החולדה דורשת מתן משככי כאבים וזמן החלמה מספיק כדי להגיע למצב פיזיולוגי יציב לניסויים נוספים 13,14,15. למרות העלייה במשקל הגוף (כלומר, >10 גרם) הוא אינדיקטור תקף ומיושם בדרך כלל להתאוששות החולדה, זה לא נדיר כי החולדות יש מוות בלתי צפוי לאחר הניתוח עקב התייבשות, זיהום, ודלקת, אשר יכול להיות עדין להבחין בתחילת14,15. בנוסף, חסימת קטטר במודל JVC נותרה בעיה במהלך איסוף הדם.
הפרוטוקול הנוכחי הדגים בפירוט את ההליכים המיקרוכירורגיים עבור JVC בחולדה מרדימה עם דגש ספציפי על זיהוי, בידוד, ו cannulation של וריד הצוואר. החשיבות של ניטור פיזיולוגי והמטולוגי של החולדות במהלך שלב ההתאוששות מודגשת. לבסוף, דגימות דם סדרתיות נאספו דרך צנתר ורידים כדי ללמוד את PK של חומצה אלגית פנול טבעי מנוהל דרך הפה עם זמינות ביולוגית ירודה (כלומר, ריכוז מערכתי נמוך) כדי לאמת את מודל חולדת JVC.

<table><tbody><tr><td>מבחנה 0.5 מ"ל המכילה נוגד קרישה EDTA</td><td>Xinkang</td><td>N/A</td><td>איסוף דגימות דם לבדיקה המטולוגית</td></tr><tr><td>מזרק 0.5*20 מ"מ 1.0 מ"ל</td><td>KLMEDICAL</td><td>N/</td><td>A שטיפה או החלפת הנוזל במי מלח</td></tr><tr><td>0.6*28.5 מ"מ מזרק 5.0 מ"ל</td><td>HD</td><td>N/A</td><td>הזרקה תת עורית</td></tr><tr><td>1.0 מ"ל מזרק קהה (22G)</td> <td>מיומנויות</td><td>S4-PKT22G</td><td>להזריק את מי המלח ולאסוף דגימות דם דרך קטטר</td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינור מיקרו-צנטריפוגה סטרילי</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C-S</td><td>אחסן תמיסת נעילת צנתר סטרילית תמיסת מלח ומלוקסיקם</td></tr><tr><td>1.5&nbsp; צינורות מיקרוצנטריפוגה מ"ל</td><td>איסוף דם</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td></tr><tr><td>1/2&nbsp; חיתוך מעגל 5*12 מ"מ</td><td>כישורי</td> מחט תפריםדגם <td>S4-FHZ</td><td>השחילו את שכבת השריר כדי לתקן את הקטטר</td></tr><tr><td>3/8 חיתוך מעגל 7*17 מ"מ</td><td>כישורי</td> מחט תפר <td>S5-FHZ</td><td>תפר את החתך של קליפת העכברוש</td></tr><tr><td>6-0 חוט תפר משי סטרילי שאינו נספג</td><td>JUNSHENG</td><td>N/A</td><td>קשירה</td></tr><tr><td>75% אלכוהול רפואי</td><td>HONGSONG</td><td>N / A</td><td>חיטוי</td></tr><tr><td>סרט דבק</td><td>LIUTAI</td><td>N / A</td><td>מיקום החולדה</td></tr><tr><td>סרט עיקור חיטוי</td><td>Biosharp</td><td>BS-QT-028</td><td>סימן פריטים מעוקרים</td></tr><tr><td>מונה תאי דם אוטומטי</td><td>Sysmex</td><td>XN-550</td><td>מבחן המטולוגיה</td></tr><tr><td>Castroviejo מיומנויות מיקרו מספריים</td><td>דגם</td><td>WA1010</td><td>חותכים את הפתח בכלי הדם</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75002402</td><td>הכנת פלזמה</td></tr><tr><td>כרית נקייה</td><td>Qingjie</td><td>N/A</td><td>הכן את אזור הפעולה</td></tr><tr><td>כדורי צמר גפן</td><td>HC</td><td>N/A</td><td>חיטוי ועיקור פצעים</td></tr><tr><td>צמר גפן</td><td>BEITAGOGO</td><td>N/A</td><td>חיטוי</td></tr><tr><td>המוסטט</td> <td>מעוקלמיומנויות</td> מודל <td>קשירה</td><td>N/A</td></tr><tr><td>DN50 מיומנויות ריסון חולדות מנירוסטה</td><td></td><td>S4-RGDQ1</td><td>הגבל את תנועת החולדות להפעלה קלה</td></tr><tr><td>חומצה אלגית</td><td>אלאדין</td><td>E102710-25 גרם</td><td>פנול טבעי למתן דרך הפה</td></tr><tr><td>מיומנויות</td><td>מלקחיים מעוקלים למחצהמודל</td><td>53072</td><td>הרם את שכבת השריר והרקמה, בודד את וריד הצוואר וקשר את התפר</td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>חבר חם</td><td>N / A</td><td>מניעת אובדן חום של בעלי חיים</td></tr><tr><td>נתרן</td><td>Heparin Solarbio</td><td>H8060</td><td>נוגד קרישה</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Xidebao</td><td>N/A</td><td>נקה את הפצע</td></tr><tr><td>מספריים איריס</td><td>מיומנויות מודל</td><td>54002</td><td>הפרדה קהה של שכבת השריר</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD</td><td>R510-22-16</td><td>מנורת</td></tr> <tr><td></td><td>LED להרדמהEMPERORFEEL</td><td>N/A</td><td>SUGERY</td></tr><tr><td>כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרוסקופיה מסה</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>VQF01-20001/ TSQ02-10002</td><td>זיהוי ריכוז תרופה בפלזמה</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Hongqiang</td><td>N/A</td><td>משכך כאבים</td></tr><tr><td>תמיסת מלח רגילה</td><td>KL</td><td>N/A</td><td>Prepara את התמיסה ולהגן על כלי הדם מפני התייבשות</td></tr><tr><td>סכין גילוח לחיות מחמד</td><td>Codos</td><td>3180</td><td>גילוח הפרווה</td></tr><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט</td><td>ZHHC</td><td>PW012</td><td>הכנת תמיסת חומצה אלגית</td></tr><tr><td>צנתר PU</td><td>מיומנויות</td><td>RJVC-PU</td><td>קנולציה של וריד צוואר</td></tr><tr><td>קונסולת הרדמה לתפעול בעלי חיים קטנים</td><td>RWD</td><td>68620</td><td>תחנת עבודה להפעלה</td></tr><tr><td>בקבוק ריסוס</td><td>אחר</td><td>N/A</td><td>תחנת עבודה אספטית</td></tr><tr><td>תקע נירוסטה (22G)</td> <td>מיומנויות</td><td>S4-PKD22G</td><td>חבר את הקטטר כדי להבטיח את איטומו</td></tr><tr><td>כישורי</td><td>טרוצ'אר מנירוסטהדגם</td><td>S$-PKDGZ</td><td>מדריך את החיצוניות של הצנתר</td></tr><tr><td>מיומנויות</td><td>פתרון נעילה סטרילית</td> מודל <td>SK-FB</td><td>לנעול את הצנתר כדי להבטיח את סטריליות שלו</td></tr><tr><td>כישורי</td><td>מחט הזנה ישרה</td><td>N / A</td><td>גבאז' אוראלי</td></tr><tr><td>נרתיק כירורגי</td><td>BKMAM</td><td>N / A</td><td>מיכל לעיקור מכשירים כירורגיים</td></tr><tr><td>כישורי</td><td>מספריים כירורגיים</td><td>מודל J21070</td><td>חתך חתוך בעור חולדה</td></tr><tr><td>מרחיב כלי דם מלקחיים מאוזנים</td><td>מיומנויות</td><td>WA3020</td><td>הרחב את כלי הדם והנח את הצינורית להחליק במכונת</td></tr><tr><td>הרדמה לבעלי חיים קטנים</td><td>ZSLab</td><td>1057003</td><td>השראת ושמירה על הרדמה</td></tr></tbody></table>

מיומנויות מיקרוכירורגיות של הקמת קנדול וריד הצוואר קבוע בחולדות עבור דגימת דם סדרתית של תרופה מנוהלת דרך הפה

Microsurgical Skills of Establishing Permanent Jugular Vein Cannulation in Rats for Serial Blood Sampling of Orally Administered Drug

דגימת דם בחיות מעבדה קטנות נחוצה לאופטימיזציה של עופרת פרמצבטית, אך יכולה לגרום נזק רב ומתח לבעלי חיים ניסיוניים, מה שעלול להשפיע על התוצאות. קנדול וריד הצוואר (JVC) בחולדות הוא מודל נפוץ לאיסוף דם חוזר, אך דורש הכשרה נאותה של מיומנויות ניתוח וטיפול בבעלי חיים. מאמר זה מפרט את ההליכים המיקרוכירורגיים להקמת ושמירה על מודל עכברוש JVC קבוע עם דגש ספציפי על מיקום ואיטום של צינורית הצוואר. החשיבות של ניטור פיזיולוגי (למשל, משקל גוף, מזון וצריכת מים) ופרמטרים המטולוגיים, הודגשה עם תוצאות שהוצגו במשך 6 ימים לאחר הניתוח במהלך התאוששות החולדה. פרופיל זמן ריכוז פלזמה סמים של חומצה אלגית פנול טבעי מנוהל דרך הפה נקבע במודל חולדת JVC.

פרוטוקול זה הדגים ביסודיות כיצד להקים מודל JVC לטווח ארוך באמצעות מיומנויות מיקרו-כירורגיות לאיסוף דם סדרתי. איור 1A מציג את המכשירים והחומרים הכירורגיים החיוניים המשמשים לביצוע הניתוח. המפרט של קטטר PU עם שלושה סימנים כחולים מודגם גם, אשר מועיל להנחות את החוקר למקם את צינורית הווריד בשלב 3.3., כיצד להשתמש בסימנים על קטטר PU כדי להנחות את הקנוליה (איור 1B). חשוב גם להיות מודעים לציר הזמן הנדרש כדי להקים את מודל חולדות JVC (איור 1C</...

טכניקות מיקרוכירורגיות מפורטות מודגמות כדי להקים מודל עכברוש קנביטציה וריד הצוואר לטווח ארוך יותר עבור איסוף דם רציף באותה חיה. פרמטרים פיזיולוגיים והמטולוגיים היו במעקב במהלך שלב ההתאוששות של החולדה. מודל זה יושם כדי ללמוד פרמקוקינטיקה של פוליפנול דרך הפה מבלי לגרום ללחץ בעלי חיים.

Blood sampling in small laboratory animals is necessary for pharmaceutical lead optimization but can cause great harm and stress to experimental animals, ...

דגימת דם חוזרת ונשנית מחיית המעבדה הקטנה היא היבט חשוב של אופטימיזציה של עופרת פרמצבטית. פרוטוקול זה מפרט את הכישורים המיקרו-כירורגיים כדי להקים מודל קבוע של חולדת קנביטת וריד הצוואר. טכניקה זו יכולה להקים ביעילות מודל עכברוש קנולי וריד הצוואר ולאסוף שוב ושוב דגימות דם דרך הצינורית בחולדות מודעות תוך הימנעות מתח וכאב.חשוב לאתר את וריד הצוואר ואת הקנוליה שלו כמו הדגמה חזותית של מורכבות אנטומית אינו זמין עבור מודל זה. כדי להתחיל, להכין את תחנת העבודה aseptic עם 75% אלכוהול רפואי, ולאחר מכן להרדים את החולדה מגולחת עם איזופלוריין מעורבב עם חמצן. תת עורית להזריק תמיסת meloxicam במינון של שני מיליגרם לקילוגרם, ולאחר מכן בזהירות להרים את העור ליד עצם הבריח בצד ימין של קו האמצע של הצוואר עם מלקחיים, באמצעות זוג מספריים כירורגיים, לעשות חתך באורך 1.5 עד 2 ס"מ לכיוון החזה.לחשיפת הווריד הצווארי שמתחת, השתמש במספריים קשתית כדי לנתח בוטה את כיסוי הרקמה הדקה. הקצה הצפאלי הפרוקסימלי של וריד הצוואר החיצוני מורכב משני ענפים שניתן לזהות חזותית. הרם את וריד הצוואר יחד עם רקמת הממברנה החיבורית שלו כדי לדמיין את בלוטת הלימפה המחוברת לווריד הצוואר.בזהירות להפריד את הווריד לאורך כיוון כלי הדם מן השריר שמסביב, שומן, ורקמות אחרות. לדחוף את המלקחיים מתחת לווריד הצוואר מבלי לפגוע בכלי הדם המשניים ולעבור שתי חתיכות של תפר 6-0 מתחת לווריד כדי לסמן את שני הקצוות של כלי הדם בנפרד. משוך חתיכה אחת של התפר ככל האפשר לכיוון ראש החולדה ולכסות את הווריד cranily עם שניים עד שלושה קשרים באמצעות מלקחיים.מניחים את הקשירה השנייה על הקצה caudal של הווריד עם קשר רופף אחד. חבר פוליאוריטן 11 ס"מ, או PU, קטטר למזרק קצה קהה מוכן מלא תמיסת מלח הפרין, ולדחוף לאט את מלוח הפרין לתוך קטטר כדי למנוע בועות אוויר. דחף את הצד השטוח ללא קצה של המלקחיים מתחת לווריד הצוואר כדי לצאת בצד השני.לעשות חתך קטן בצורת V על הווריד ליד העניבה הגולגולתית עם זוג microscissors castroviejo, ופתח בעדינות את החתך עם קצה מלקחיים מרחיבים כלי המרפק. חותכים את הפתח האלכסוני של הקצה הקדמי של צנתר וריד הצוואר. לשתול את הקצה האלכסוני של הצינור עם מלקחיים ולהחליק אותו לתוך הווריד הצווארי.תוך כדי קידום הצנתר, לסגת לאט את המלקחיים המיקרוכירורגיים המרפק, ומהדקים את פני השטח החיצוניים של הכלי עם מלקחיים. להפסיק להכניס את הצנתר על להכות את הסימן הכחול הראשון של צינור PU, שהוא כשלושה סנטימטרים אורך. אבטחו את הצנתר המוחדר לווריד עם קשירות קוודליות ורוסטרליות באמצעות מלקחיים.חוט תפר 6-0 דרך הרקמה החשופה בצד ימין של החתך באמצעות מחט תפר, ולקשור את הקשירה עם hemostat. ואז לכופף את הצנתר בסימן הכחול השני כדי לאגד עם אותו קשירה ולהימנע חסימת צינורות PU. לאחר חיתוך כל חוט התפר הנוסף, לסגור את הצנתר על ידי החלפת מזרק קצה קהה עם תקע נירוסטה 22 מד.מניחים את החולדה בתנוחת הגב ומנקים בעדינות את האזור שבין השכם עם כדור הכותנה ספוג ב -75% אלכוהול רפואי. באמצעות המספריים כירורגיים, לעשות חתך קטן מאוד במרכז הצוואר הגב. דרך חתך הגב, להנחות בעדינות לדחוף את trochar מתחת לעור לכיוון החתך הגחוני בצד ימין של הצוואר.שים את קטטר ורידים לתוך trochar ולאחר מכן לשלוף ולהנחות את קטטר ורידים לכיוון חתך הגב. לאחר אבטחת הצנתר החיצוני לשכבת השריר, סגור את שכבת העור של החתכים הגחוניים והגביים עם תפר ניילון 6-0 ומחט תפירה וספוגית כל החתכים הכירורגיים עם יודופור. לאחר מכן, להסיר את תקע קטטר על ידי הידוק הצנתר עם קצות האצבעות.מניחים מזרק קצה קהה חדש לאט למשוך בחזרה את המזרק כדי לבדוק את זרימת הדם. החזק את הצנתר שוב עם קצות האצבעות. הזריקו 0.2 מיליליטר של תמיסת מלח הפריניזציה ו-0.1 מיליליטר של תמיסת נעילה לצנתר באמצעות מזרק קצה קהה, ולאחר מכן החליפו את המזרק בתקע נירוסטה.מבטלים את הקטטר ודוחפים מעט את התקע פנימה כדי להבטיח את ההידוק של הצנתר. כדי לאסוף דגימות דם לבדיקות המטולוגיות, למקם את החולדה בריסון, לפתוח את התקע, ולהכניס את המזרק לתוך קטטר PU ורידים כדי להבטיח את הצנתר אינו חסום. השליכו את הדם שנסוג בתחילה המכיל תערובת של דם, תמיסת מלח הפרינה ותמיסת נעילת קטטר.באמצעות מזרק חדש, לאסוף 150 microliters של דגימת דם טרי ולהעביר את דגימת הדם לצינור 0.5 מיליליטר רוסס בעבר עם K2EDTA. הזריקו 150 מיקרוליטרים של תמיסת מלח רגילה שחוממה מראש, והחדירו 0.2 מיליליטרים של תמיסת מלח רגילה הפרינית סטרילית דרך הצנתר. הזריקו 100 מיקרוליטרים של תמיסת המנעול לצנתר כדי להבטיח את האיטום והסטריליות של הצנתר לפני איסוף הדגימה הבאה.במחקר הנוכחי נחקרו התנאים הפיזיולוגיים וההמטולוגיים במשך שישה ימים לאחר הניתוח. רוב החולדות התאוששו בתוך ארבעה עד שישה ימים לאחר הניתוח כפי שמעיד על ידי עלייה במשקל הגוף של יותר מ -10 גרם, צריכת מזון קבועה, רכיבי דם נבחרים הנוגעים לזיהום, התייבשות ודלקת, כולל תאי דם לבנים, תאי דם אדומים, המוגלובין, וספירת טסיות דם. לכן, החולדות דרשו מינימום של ארבעה עד שישה ימים להחלמה לאחר ההליך.צריכת המים הגדולה הצביעה על התייבשות ביום הראשון שלאחר הניתוח. בנוסף, הפרמקוקינטיקה של החומצה האלגית פוליפנול הטבעית נחקרה במודל חולדת הקנוליה של וריד הצווארי שנקבע והזמינות הביולוגית הירודה של החומצה האלגית צוינה על ידי ריכוז הפלזמה הנמוך שלה במשך 24 שעות. בידוד נכון של וריד הצוואר הוא הצעד הראשון החשוב ביותר כי וריד הצוואר מוטבע בתוך רקמות רכות אחרות לא יכול להיות גלוי מיד לחוקר.דגימת דם רציפה בתוך אותה חיה יכולה להתבצע במודל העכברושים JVC שנקבע. זהו כלי שימושי וחזק להערכת ביצועי ניסוחים של תרופות ב- vivo.

microsurgical-skills-establishing-permanent-jugular-vein-cannulation

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מהדק hyperinsulinemic-euglycemic הוא "תקן הזהב" להערכת פעילות האינסולין. אינסולין הוא החדיר בקצב קבוע מגרה ספיגת הגלוקוז. כמות הגלוקוז אקסוגניים חדורים לפעול נגד זה טיפה מעיד על הרגישות לאינסולין. כאן ההליך מבוצע על חולדה, מודע מעצורים.

Hyperinsulinemic-Euglycemic קלאמפ של עכברוש המודע

היפרפלזיה Neointimal היא הגורם העיקרי להיצרות בעורקי arterialized. אנו מציעים פרוטוקול חדש שבו עורק הצוואר החיצוני הנכון מושתל באמצעות טכניקת השרוול בעורק הראשי המשותף של חולדות ספרג Dawley. שיעור ההישרדות היה 100% בנקודת הזמן של קרבה.

אימון טכניקה מתוחכמת מייקרו: התערבותם של שתלי וריד צוואר חיצוניים בעורק התרדמה המשותף בחולדות

גישות לכלי הדם למדידת המודינמיקה, אספקת נוזלים וביצוע דגימת דם חשובות לכל מחקר מודל של בעלי חיים קטנים. אנו מציגים טכניקה להשתלת קטטרים בעורק הצוואר ובווריד הצוואר המשותף בחולדה מורדמת לחיבור למערכת לביצוע ניטור, עירוי ודגימה.

צנתור של עורק התרדמה וצוואר הווריד לבצע צעדים המודינמית, חליטות ודגימת דם במודל עכברוש מודע

מאמר זה מתאר את מתן הגירוי החשמלי התוך גולגולתי הנפרד מבחינה זמנית ומרחבית מסביבת השימוש בסמים לטיפול בתלות במתאמפטמין לווריד.

שיטה כללית להערכת השפעות העמוקה גירוי המוח במתאמפטמין תוך ורידים-מנהל עצמי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאסוף דגימות דם מן הווריד בריחי של חולדה.

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה פשוטה ויעילה לאיסוף דם מהווריד הסובקלאבי בחולדות. הוא מאפשר דגימה מהירה, מהירה וקלה לזיהוי ללא הרדמה ומשיג דם איכותי באמצעות איסוף דגימות חוזר.

דגימת דם חוזרת מהווריד הסובקלבי של חולדה מודעת

פרוטוקול זה מציג את כינונו של דום היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדות, אשר ניתן ליישם כדי לחקור תסמונת תגובה דלקתית מערכתית, פגיעה איסכמיה/רפרפוזיה, עקה חמצונית, דלקת עצבית וכו '.

הקמת מעצר היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה פשוטה ויעילה לאיסוף בזמן אמת ודינמי של דם לב חולדה באמצעות טכניקת המיקרודיאליזה.

שאיבת דם דינמית רציפה מלב חולדה באמצעות טכניקת מיקרודיאליזה לא פולשנית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המציע חלופות איסוף דם מהירות, קלות ואמינות עבור מודל החולדות. אנו מתארים שלוש שיטות שונות לדגימת דם בהתאם להקשר: ניקוב וריד הזנב בהרדמה או בעל חיים בהכרה, וניקור ורידים בפין הגבי בהרדמה.

וריד זנב שונה וניקוב ורידים פין לדגימת דם במודל החולדה

כאן אנו מציגים שילוב של הגבלת חולדות יעילה ושיטות ניקור ורידים תת-קרקעיות המאפשרות איסוף דם מהיר, בטוח וחוזר בחולדות ללא הרדמה.

דגימת דם של ורידים תת-קלאביים בחולדות מודעות

פרוטוקול ניסויי זה מתאר מודל עכברוש מחובר לצינור לימפה כבד, המאפשר הערכה ישירה וכמותית של ניקוז לימפה וכלי דם בכבד. המודל מאפשר דגימה סימולטנית של לימפה כבדית ודם מערכתית כדי לחקור העברת כבד, מטבוליזם ואיתות חיסוני, ותומך במחקרים של פרמקוקינטיקה של תרופות וביולוגיה ספציפית לכבד.

מודל עכברים מקיף להערכת מסלולי העברת כבד באמצעות דגימת לימפה וכלי דם בו-זמנית

למד טכניקות מיקרוכירורגיות להקמת קנולה ורידית קבועה בעכברושים. שיטה זו מאפשרת דגימת דם סדרתית מבעלי חיים בהכרה תוך מזעור מתח וכאב, ותומכת במחקר פרמקוקינטי ובהערכת תרופות.

מיומנויות מיקרוכירורגיות של הקמת קנדול וריד הצוואר קבוע בחולדות עבור דגימת דם סדרתית של תרופה מנוהלת דרך הפה

גלה סרטונים נוספים