Name: פלטפורמת גילוי חזקה לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: למד שיטות מחקר מתקדמות לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה באמצעות מודלים חיות מסודרים. זרימת העבודה מספקת כלים לגילוי מטרות טיפוליות ופיתוח תרפיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים למחלקה לטכנולוגיות מחקר מתקדמות (DART) ב- NYU Langone Health, ובמיוחד למעבדה לחקר הפתולוגיה הניסויית, למרכז הטכנולוגי של הגנום, למעבדת ציטומטריה ומיון תאים, ליבת הדמיה פרה-קלינית, הנתמכים באופן חלקי על ידי מענק התמיכה של מרכז הסרטן פרלמוטר NIH / NCI 5P30CA016087. אנו מודים לקבוצה הבין-תחומית השיתופית של מלנומה של NYU (PI: Dr. Iman Osman) על מתן גישה לתרביות קצרות טווח של מלנומה שמקורן בחולה + (10-230BM ו- 12-273BM), אשר התקבלו באמצעות פרוטוקולים שאושרו על ידי IRB (מחקר הסכמה אוניברסלית #s16-00122 ומחקר קבוצת מלנומה שיתופית בין-תחומית #10362). אנו מודים לד"ר רוברט קרבל (אוניברסיטת טורונטו) על מתן קווי תאי מלנומה 113/6-4-4L ו-131/4-5B1* ולד"ר מיינהרד הרלין (מכון Wistar) על אספקת WM 4265-2, WM 4257s-1, WM 4257-2 תרביות מלנומה לטווח קצר**. E.H. נתמך על ידי NIH/NCI R01CA243446, P01CA206980, פרס המדע של האגודה האמריקאית לחקר מלנומה-מלנומה, ו-NIH Mellanoma SPORE (NCI P50 CA225450; פי: I.O.). איור 1 נוצר עם Biorender.com.

<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+Estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Adler, N. R., Haydon, A., McLean, C. A., Kelly, J. W., Mar, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+pathways+in+patients+with+cutaneous+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Metastatic pathways in patients with cutaneous melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 30 (1), 13-27 (2017).</li>
<li>Platz, A., Egyhazi, S., Ringborg, U., Hansson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cutaneous+melanoma%3B+a+review+of+NRAS+and+BRAF+mutation+frequencies+in+relation+to+histogenetic+subclass+and+body+site%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Human cutaneous melanoma; a review of NRAS and BRAF mutation frequencies in relation to histogenetic subclass and body site.</a> Molecular Oncology. 1 (4), 395-405 (2008).</li>
<li>Alonso, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+study+in+melanoma+identifies+epithelial-mesenchymal+transition+as+a+major+determinant+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A high-throughput study in melanoma identifies epithelial-mesenchymal transition as a major determinant of metastasis.</a> Cancer Research. 67 (7), 3450-3460 (2007).</li>
<li>Rowe, C. J., Khosrotehrani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+biological+determinants+of+melanoma+progression%3A+Should+all+be+considered+for+clinical+management%5BTitle%5D)+AND+%22Australasian+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Clinical and biological determinants of melanoma progression: Should all be considered for clinical management.</a> Australasian Journal of Dermatology. 57 (3), 175-181 (2016).</li>
<li>Plebanek, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-metastatic+cancer+exosomes+induce+immune+surveillance+by+patrolling+monocytes+at+the+metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Pre-metastatic cancer exosomes induce immune surveillance by patrolling monocytes at the metastatic niche.</a> Nature Communications. 8 (1), 1319(2017).</li>
<li>Orgaz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+pigment+epithelium-derived+factor+enables+migration%2C+invasion+and+metastatic+spread+of+human+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Loss of pigment epithelium-derived factor enables migration, invasion and metastatic spread of human melanoma.</a> Oncogene. 28 (47), 4147-4161 (2009).</li>
<li>Ladhani, O., Sanchez-Martinez, C., Orgaz, J. L., Jimenez, B., Volpert, O. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pigment+epithelium-derived+factor+blocks+tumor+extravasation+by+suppressing+amoeboid+morphology+and+mesenchymal+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Pigment epithelium-derived factor blocks tumor extravasation by suppressing amoeboid morphology and mesenchymal proteolysis.</a> Neoplasia. 13 (7), 633-642 (2011).</li>
<li>Ju, R. J., Stehbens, S. J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+melanoma+cell-stroma+interaction+in+cell+motility%2C+invasion%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine+-+Dermatology%22%5BJournal%5D)">The role of melanoma cell-stroma interaction in cell motility, invasion, and metastasis.</a> Frontiers in Medicine - Dermatology. 5, 307(2018).</li>
<li>Wiley, H. E., Gonzalez, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+CC+chemokine+receptor-7+and+regional+lymph+node+metastasis+of+B16+murine+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma.</a> Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).</li>
<li>Meier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+pathways+and+time+courses+in+the+orderly+progression+of+cutaneous+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Metastatic pathways and time courses in the orderly progression of cutaneous melanoma.</a> British Journal of Dermatology. 147 (1), 62-70 (2002).</li>
<li>Turner, N., Ware, O., Bosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+metastasis%3A+melanoma+and+other+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Genetics of metastasis: melanoma and other cancers.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 35 (5-6), 379-391 (2018).</li>
<li>Ubellacker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+protects+metastasizing+melanoma+cells+from+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Lymph protects metastasizing melanoma cells from ferroptosis.</a> Nature. 585 (7823), 113-118 (2020).</li>
<li>Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+cell-matrix+adhesions+to+the+third+dimension%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Taking cell-matrix adhesions to the third dimension.</a> Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).</li>
<li>Cunningham, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin-binding+protein+requirement+for+cortical+stability+and+efficient+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Actin-binding protein requirement for cortical stability and efficient locomotion.</a> Science. 255 (5042), 325-327 (1992).</li>
<li>Unger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+carcinomas%3A+physiologically+relevant+3D+models+to+improve+anti-cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Modeling human carcinomas: physiologically relevant 3D models to improve anti-cancer drug development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 79-80, 50-67 (2014).</li>
<li>Fong, E. L., Harrington, D. A., Farach-Carson, M. C., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heralding+a+new+paradigm+in+3D+tumor+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Heralding a new paradigm in 3D tumor modeling.</a> Biomaterials. 108, 197-213 (2016).</li>
<li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+melanoma+cell+lines+by+their+mortal+malignancy+using+an+experimental+metastatic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Science%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse melanoma cell lines by their mortal malignancy using an experimental metastatic model.</a> Life Science. 70 (7), 791-798 (2002).</li>
<li>Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+YUMM+lines%3A+a+series+of+congenic+mouse+melanoma+cell+lines+with+defined+genetic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).</li>
<li>Koya, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BRAF+inhibitor+vemurafenib+improves+the+antitumor+activity+of+adoptive+cell+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">BRAF inhibitor vemurafenib improves the antitumor activity of adoptive cell immunotherapy.</a> Cancer Research. 72 (16), 3928-3937 (2012).</li>
<li>Jenkins, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+murine+BRaf%28V600E%29+melanoma+cell+lines+with+sensitivity+to+PLX4032%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Multiple murine BRaf(V600E) melanoma cell lines with sensitivity to PLX4032.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 27 (3), 495-501 (2014).</li>
<li>Tuncer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SMAD+signaling+promotes+melanoma+metastasis+independently+of+phenotype+switching%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">SMAD signaling promotes melanoma metastasis independently of phenotype switching.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (7), 2702-2716 (2019).</li>
<li>Schwartz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incipient+Melanoma+Brain+Metastases+Instigate+Astrogliosis+and+Neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Incipient Melanoma Brain Metastases Instigate Astrogliosis and Neuroinflammation.</a> Cancer Research. 76 (15), 4359-4371 (2016).</li>
<li>Perez-Guijarro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodel+preclinical+platform+predicts+clinical+response+of+melanoma+to+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodel preclinical platform predicts clinical response of melanoma to immunotherapy.</a> Nature Medicine. 26 (5), 781-791 (2020).</li>
<li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li>
<li>Agrawal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systems+biology+approach+identifies+FUT8+as+a+driver+of+melanoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A systems biology approach identifies FUT8 as a driver of melanoma metastasis.</a> Cell. 31 (6), 804-819 (2017).</li>
<li>Hanniford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+CDR1as+drives+IGF2BP3-mediated+melanoma+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of CDR1as drives IGF2BP3-mediated melanoma invasion and metastasis.</a> Cancer Cell. 37 (1), 55-70 (2020).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+control+of+cGAS%2FSTING+and+NLRC5+pathways+defines+melanoma+response+to+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">PRMT5 control of cGAS/STING and NLRC5 pathways defines melanoma response to antitumor immunity.</a> Science Translational Medicine. 12 (551), (2020).</li>
<li>de Miera, E. V., Friedman, E. B., Greenwald, H. S., Perle, M. A., Osman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+five+new+melanoma+low+passage+cell+lines+representing+the+clinical+and+genetic+profile+of+their+tumors+of+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Development of five new melanoma low passage cell lines representing the clinical and genetic profile of their tumors of origin.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 25 (3), 395-397 (2012).</li>
<li>Morsi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+clinically+relevant+mouse+model+of+melanoma+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a clinically relevant mouse model of melanoma brain metastasis.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 26 (5), 743-745 (2013).</li>
<li>Huynh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+in+vivo+microRNA+targeting+of+liver+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Efficient in vivo microRNA targeting of liver metastasis.</a> Oncogene. 30 (12), 1481-1488 (2011).</li>
<li>Zou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+variables+that+affect+human+hepatocyte+AAV+transduction+in+liver+chimeric+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy+Methods+and+Clinical+Development%22%5BJournal%5D)">Experimental variables that affect human hepatocyte AAV transduction in liver chimeric mice.</a> Molecular Therapy Methods and Clinical Development. 18, 189-198 (2020).</li>
<li>Kleffman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanoma-secreted+Amyloid+Beta+Suppresses+Neuroinflammation+and+Promotes+Brain+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Melanoma-secreted Amyloid Beta Suppresses Neuroinflammation and Promotes Brain Metastasis.</a> bioRxiv. , 854885(2019).</li>
<li>Curtis, A., Calabro, K., Galarneau, J. R., Bigio, I. J., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+variations+of+skin+pigmentation+in+C57BL%2F6+mice+affect+optical+bioluminescence+quantitation%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Temporal variations of skin pigmentation in C57BL/6 mice affect optical bioluminescence quantitation.</a> Molecular Imaging and Biology. 13 (6), 1114-1123 (2011).</li>
<li>Sil, P., Wong, S. W., Martinez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+skin+deep%3A+autophagy+is+vital+for+skin+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">More than skin deep: autophagy is vital for skin barrier function.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1376(2018).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+in+a+mouse+model+of+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis.</a> Cell. 160 (6), 1246-1260 (2015).</li>
<li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163 (6), 1515-1526 (2015).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+essential+genes+in+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of essential genes in the human genome.</a> Science. 350 (6264), 1096-1101 (2015).</li>
<li>Edgar, R., Domrachev, M., Lash, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Expression+Omnibus%3A+NCBI+gene+expression+and+hybridization+array+data+repository%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Gene Expression Omnibus: NCBI gene expression and hybridization array data repository.</a> Nucleic Acids Research. 30 (1), 207-210 (2002).</li>
<li>Lappalainen, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+European+Genome-phenome+Archive+of+human+data+consented+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">The European Genome-phenome Archive of human data consented for biomedical research.</a> Nature Genetics. 47 (7), 692-695 (2015).</li>
<li>Cerami, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cBio+cancer+genomics+portal%3A+an+open+platform+for+exploring+multidimensional+cancer+genomics+data%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">The cBio cancer genomics portal: an open platform for exploring multidimensional cancer genomics data.</a> Cancer Discovery. 2 (5), 401-404 (2012).</li>
<li>Grossman, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+shared+vision+for+cancer+genomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Toward a shared vision for cancer genomic data.</a> New England Journal of Medicine. 375 (12), 1109-1112 (2016).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

מטרת דוח טכני זה היא להציע זרימת עבודה סטנדרטית מלמעלה למטה לחקירת שחקנים פוטנציאליים בגרורות מלנומה. מכיוון שניסויי in vivo יכולים להיות יקרים וגוזלים זמן רב, אסטרטגיות למקסום היעילות ולהעלאת הערך של המידע המתקבל הן בעלות חשיבות עליונה.
חובה להשתמש בגישות משלימות לאורך כל הדרך כדי להצליב ממצאים בתוך אותו ניסוי. לדוגמה, הן צביעה אימונוהיסטוכימית של NuMA והן BLI הן שיטות משלימות לכמות הנטל הגרורתי מכיוון שאף אחת מהן אינה מקיפה. בעוד ש-BLI היא שיטה שלא תסולא בפז ולא פולשנית למעקב אחר הת...

התמותה הגבוהה הקשורה למלנומה גרורתית בשילוב עם שכיחות גוברת של מלנומה ברחבי העולם1 (עלייה מוערכת של 7.86% עד 2025) קוראים לגישות טיפול חדשות. ההתקדמות בגילוי מטרות תלויה במודלים הניתנים לשחזור של גרורות, תהליך מורכב ביותר. לאורך השלבים של המפל הגרורתי, תאי מלנומה חייבים להתגבר על אינספור מחסומים כדי להשיג התחמקות ממערכת החיסון והתיישבות של רקמות רחוקות2. העמידות ויכולת ההסתגלות של תאי מלנומה נובעים מגורמים רבים, כולל נטל המוטציה הגנטית הגבוהה שלהם3 ומקורם העצבי, המעניקים פלסטיות פנוטיפית חיונית 3,4,5. בכל שלב, תוכניות שעתוק מאפשרות לתאי מלנומה גרורתיים לעבור ממצב אחד למשנהו בהתבסס על רמזים מההצלבה עם המיקרו-סביבה, הכוללת את מערכת החיסון6, את הסביבה החוץ-תאית 7,8 ואת הארכיטקטורה התאית של מחסומים פיזיים9 שאיתם הם באים במגע. לדוגמה, תאי מלנומה חומקים ממעקב חיסוני על ידי הפחתת הוויסות של הביטוי של גורמים חשובים המופרשים על ידי גידולים המופרשים על-ידי מערכת החיסון6.
מחקרים מתארים "נישה פרמטסטטית", שבמסגרתה תאי מלנומה מפרישים כימוקינים וציטוקינים כדי להכין את איבר ה"מטרה" המרוחק לגרורות10. ממצאים אלה מעלים שאלות חשובות לגבי טרופיזם האיברים של תאי מלנומה גרורתיים והדרך האנטומית שהם נוקטים כדי לגשת לרקמות רחוקות. לאחר התפשטות, ידוע שתאי מלנומה שולחים גרורות באמצעות לימפה (התפשטות לימפטית) וכלי דם (התפשטות המטוגנית)2,11. בעוד שרוב החולים נמצאים עם מחלה מקומית, תת-קבוצה קטנה של מקרים מציגה מחלה גרורתית מרוחקת וללא הפצה לימפטית (מעורבות שלילית של בלוטות הלימפה)11, מה שמרמז על קיומם של מסלולים גרורתיים חלופיים למלנומה.
כאשר הם מתיישבים באתר גרורתי, תאי מלנומה עוברים התאמות אפיגנטיות ומטבוליות12,13. כדי לגשת לתאים חדשים ופלשו אליהם, תאי מלנומה משתמשים בפרוטאזות14 ובשינויי שלד11,15, המאפשרים להם לחצות ולגדול במיקומם החדש. הקושי להתמקד בתאי מלנומה שוכן במורכבות ובמספר של התאמות כאלה; לפיכך, על התחום לעשות מאמצים ליצור מחדש באופן ניסיוני כמה שיותר שלבים והתאמות. למרות ההתקדמות הרבה במבחנים במבחנה כגון אורגנואידים ותרביות תלת-ממדיות 16,17, מודלים אלה רק משחזרים באופן חלקי את המפל הגרורתי in vivo.
מודלים של מורין הראו ערך על ידי יצירת איזון בין יכולת שכפול, היתכנות טכנית וסימולציה של מחלות אנושיות. באופן תוך-שרירי, אורתטופי והטרוטופי מושתל בתאי מלנומה מקסנוגרפטים שמקורם בחולה או מתרביות קצרות טווח לעכברים הסובלים מפגיעה במערכת החיסון או מהאנישה, מייצגים את עמוד השדרה של גילוי המטרה במלנומה גרורתית. עם זאת, מערכות אלה חסרות לעתים קרובות מגבלה ביולוגית מכרעת על גרורות: מערכת החיסון. מודלים של גרורות מלנומה סינגנית בעלי אילוץ זה הם נדירים יחסית בתחום. מערכות אלה, שפותחו בעכברים מדוכאי חיסון, כולל B16-F1018, משפחת YUMM של קווי תאים19, SM120, D4M321, RIM322 או לאחרונה, RMS23 ו- M1 (Mel114433), M3 (HCmel1274), M4 (B2905)24 קווי תאי מלנומה, מאפשרות לחקור את התפקיד המורכב של התגובה החיסונית של המארח בהתקדמות מלנומה.
כאן מוצג צינור לזיהוי מטרות של גרורות מלנומה. כאשר מערכי נתונים 'אומיים' הולכים וגדלים נוצרים מקבוצות חולי מלנומה, אנו מניחים שמחקרים המחזיקים בהבטחה הקלינית הגדולה ביותר הם אלה הנובעים משילוב ביג דאטה, מה שמוביל לחקירה פונקציונלית ומכניסטית קפדניתשל 25,26,27,28. על ידי שימוש במודלים של עכברים כדי לחקור מטרות פוטנציאליות בתהליך הגרורתי, ניתן להסביר אירועים ספציפיים ל-in vivo ואינטראקציות רקמה, ובכך להגדיל את ההסתברות לתרגום קליני. מתוארות שיטות רבות לכימות העומס הגרורתי, המספקות נתונים משלימים על התוצאות של כל ניסוי נתון. פרוטוקול לבידוד של תאים בודדים מגידולים באיברים שונים מתואר כדי לסייע באפיון בלתי מוטה של ביטוי גנים בתאים גרורתיים, שעשוי להקדים ריצוף RNA חד-תאי או בתפזורת.

<table><tbody><tr><td>#15 להב סקאפל&nbsp;</td><td>WPI</td><td>500242</td><td>להליכים כירורגיים</td></tr><tr><td>#3 ידית סקייפל</td><td>WPI</td><td>500236</td><td>להליכים כירורגיים</td></tr><tr><td>מזרק טוברקולין 1 מ"ל, קצה החלקה&nbsp;</td><td>זריקות BD</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל, קצה החלקה&nbsp;</td><td>BD</td><td>301029</td><td>זלוף</td></tr><tr><td>10% פורמלין נתרן חוצץ</td><td>EK Industries</td><td>4499-20L</td><td>לקיבוע זילוף/רקמות</td></tr><tr><td>15 מ"ל קורנינג חרוטי</td><td>&nbsp;</td><td></td><td>430052 תרבית תאים</td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה פוליפרופילן חרוטי</td><td>פלקון</td><td>352196</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>200 הוכחה אתנול</td><td>Deacon Labs</td><td>04-355-223</td><td>היסטולוגיה</td></tr><tr><td>22G &ndash; מחט 22 מ"מ</td><td>BD</td><td>305156</td><td>זלוף</td></tr><tr><td>4-0 תפר ויקריל</td><td>Ethicon</td><td>J464G</td><td>תפר</td></tr><tr><td>4% פוספט קרסון חוצץ פרפורמלדהיד&nbsp;</td><td>EMS</td><td>15733-10</td><td>לקיבוע זילוף/רקמות</td></tr><tr><td>40&micro; m</td><td>Corning</td><td>431750</td><td>עיבוד רקמות</td></tr><tr><td>5-0 תפר נספג&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>6542000</td><td>סגירה</td></tr><tr><td>50 מ"ל חרוטי&nbsp;</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td></td><td>430828 תרבית תאים</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה פוליפרופילן חרוטי</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>תרבית</td></tr><tr><td>תאים 7-0 תפר משי&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-70</td><td>ליגטורה</td></tr><tr><td>70 ומיקרו; m</td><td>Corning</td><td>431751</td> עיבוד <td>רקמות</td></tr><tr><td>מדיית הרכבה נגד דהייה&nbsp; &nbsp;</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000-10</td><td>קירוב אימונופלואורסצנטי</td></tr><tr><td>באמצעות מלקחיים, 10 ס"מ&nbsp;</td><td>WPI</td><td>14189</td><td>להליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>קונסולת Avance</td><td>Bruker</td><td>3 HD</td><td>NMR&nbsp;</td></tr><tr><td>ביוספק: 7030&nbsp;</td><td>Bruker</td><td>7030</td><td>Micro MRI</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioreg</td><td>A941</td><td>NuMA מלקחיים תפרים מכתימים</td></tr><tr><td>Castroviejo, קצות ישרים פלטפורמת קשירה 5.5 מ"מ, 11 ס"מ&nbsp;</td><td>WPI</td><td>WP5025501</td><td>להליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>צנצנת צביעה קופלין</td><td>Bel-Art&nbsp;</td><td>F44208-1000</td><td>היסטולוגיה</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D9542-1MG</td><td>אימונופלואורסצנציה</td></tr><tr><td>dCas9-KRAB</td><td>Addgene</td><td>110820</td><td>מניפולציה גנטית</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>NEB</td><td>M0303L</td><td>עיבוד רקמות</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>קורנינג</td><td>21-030-CM</td><td>עיבוד רקמות</td></tr><tr><td>חד במיוחד להב קצה יחיד</td><td>GEM</td><td>62-0167</td><td>עיבוד רקמות</td></tr><tr><td>מצע מטריצה חוץ-תאית&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>354234</td><td>מחשיבים את גורם הגדילה מופחת (כחלופה&nbsp;</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Cytiva</td><td>SH30910.03</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>פיג'י תמונה J</td><td>פיג'י תמונה J</td><td>תוכנה</td><td>אימונופלואורסצנציה</td></tr><tr><td>עז אנטי ארנב HRP מצומד מולטימר&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>A16104</td><td>NuMA סרום עיזים מכתים</td></tr><tr><td></td><td>Gibco</td><td>PCN5000</td><td>אימונופלואורסצנטי</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td>עיבוד רקמות</td></tr><tr><td>המטוקסילין&nbsp;</td><td>ריצ'רד-אלן סיינטיפיק&nbsp;</td><td>7231</td><td>היסטולוגיה</td></tr><tr><td>אילומינה III&nbsp;</td><td>מזרק אינסולין מכשיר PerkinElmer</td><td>CLS136334</td><td>BLI</td></tr><tr><td>28G - מחט 8 מ"מ</td><td>BD</td><td>329424</td><td>זריקות</td></tr><tr><td>מזרק אינסולין 31G - מחט 6 מ"מ&nbsp;</td><td>BD</td><td>326730</td><td>זריקות</td></tr><tr><td>מלקחיים לקשתית, 10.2 ס"מ, עקומה מלאה,</td><td>WPI</td><td>504478</td> משוננת <td>לזלוף והליכים כירורגיים</td></tr><tr><td>Isoflurane USP</td><td>Covetrus</td><td>11695067772</td><td>תכשיטני הרדמה</td></tr><tr><td>#7 מלקחיים טיטניום 11 ס"מ 0.07 x 0.01 מ"מ טיפ</td><td>WPI</td><td>WP6570</td><td>להליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>קטמין HCl 100 מ"ג/מ"ל</td><td>Mylan Ind.</td><td>1049007</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>lentiCRISPRv2</td><td>Addgene</td><td>98290</td><td>מניפולציה גנטית</td></tr><tr><td>Lycopersicon Esculentum (עגבנייה) לקטין, DyLight 649</td><td>Invitrogen</td><td>L32472</td><td>סמן תאי אנדותל כלי דם</td></tr><tr><td>MEM חומצות אמינו לא חיוניות X 100</td><td>Corning</td><td>25-025-CI</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>מצנבאום מספריים</td><td>WPI</td><td>503269</td><td>לניתוחים נהלים</td></tr><tr><td>יחידת מיקרו הזרקה</td><td>KOPF</td><td>5000</td><td>זריקות תוך לב</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S25877&nbsp;</td><td>מכתים NuMA</td></tr><tr><td>מחט 30G x 25 מ"מ</td><td>BD</td><td>305128</td> מחט <td>הזרקה תוך לבבית</td></tr><tr><td>33G x 15 מ"מ</td><td>המילטון</td><td>7747-01</td> מחזיק <td>מחט הזרקה תוך קרוטידית</td></tr><tr><td>, Castroviejo, 14 ס"מ, עם מנעול, 1.2 מ"מ לסתות משוננות</td><td>WPI</td><td>14137-G</td><td>להליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>NOD. עכברי Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ עכברי</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>005557</td><td>עכברי</td></tr><tr><td>NU/J</td><td>002019</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>מודל עכברים</td></tr><tr><td>מנגנון מיטוטי גרעיני חלבון ארנב רב-שבטי אנטי-אנושי&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>97585</td><td>NuMA מכתים</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין 10000U/mL</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE</td><td>0891-01</td><td>תמיסת הפרדת צפיפות&nbsp;</td></tr><tr><td>PI כפפות כירורגיות קלאסיות</td><td>קרדינל בריאות</td><td>2D72PT75X</td><td>ניתוח</td></tr><tr><td>pLKO Tet-On</td><td>Addgene</td><td>21915</td><td>מניפולציה גנטית</td></tr><tr><td>פובידון-יוד 10% תמיסה</td><td>Medline</td><td>MDS093943</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח טיפות פרופרקאין 0.5%</td> <td>Akorn Pharma</td><td>AX0501</td><td>הרדמה מקומית אופטלמוסית</td></tr><tr><td>Puralube Petrolatum משחה אופטלמית</td><td>Dechra</td><td>83592</td><td></td></tr><tr><td>סכין גילוח הרדמה להבי קצה כפול&nbsp;</td><td>EMS</td><td>72000</td><td>גילוח וחיתוך מוח רטט&nbsp;</td></tr><tr><td>רפלקס 9 מ"מ EZ קליפ&nbsp;</td><td>בריינטרי</td><td>EZC-&nbsp; </td><td>סגירת פצע</td>KIT</tr><tr><td>RPMI 1640&nbsp;</td><td>קורנינג</td><td>10-040-CM</td> מספריים <td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>, קפיץ 10.5 ס"מ Str, להבים 8 מ"מ</td><td>WPI</td><td>501235</td><td>להליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>להב רוטט חצי אוטומטי מיקרוטום</td><td>Leica</td><td>VT1200</td><td>פרוסת מוח אימונופלואורסצנציה</td></tr><tr><td>מערכת אידוי הרדמה חד ערוצית</td><td>Kent Scientific</td><td>VetFlo-1210S&nbsp;</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>Smartbox מערכת תא שולחן ומפוח פליטה</td><td>EZ Systems</td><td>TT4000</td><td>CO2 המתת חסד</td></tr><tr><td>סטרילית סטרילית חד פעמית מנוסחת</td><td>medline</td><td></td><td>NON21002</td></tr><tr><td>ניתוח סטרילי לא מחוזק שמלות כירורגיות אורורה סטריליות לא מחוזקות עם שרוולים קבועים</td><td>medline</td><td></td><td>DYNJP2715 ניתוח</td></tr><tr><td>t25 בקבוק</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td>430639</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Corning</td><td>46-031-CM</td><td>NuMA מכתים</td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>X100-500ML</td><td>אימונופלואורסצנציה</td></tr><tr><td>טראוטמן מלקחיים קשירה, 10 ס"מ, דפוס G מעוקל, קצה 0.52 מ"מ עם פלטפורמת קשירה</td><td>WPI</td><td>WP505210</td><td>להליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>קליפס כלי 10G לחץ 5x 0.8 מ"מ לסתות, 5/חבילה</td><td>WPI</td><td>15911</td><td>עבור הליכים מיקרוכירורגיים</td></tr><tr><td>Visiopharm</td><td>Visiopharm Visiopharm</td><td></td><td>NuMA תוכנת כימות צביעה</td></tr><tr><td>קסילזין 100 מ"ג/מ"ל</td><td>Akorn Pharma</td><td>59399-111-50</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>קסילן</td><td>פישר</td><td>X3P-1GAL</td><td>היסטולוגיה</td></tr></tbody></table>

פלטפורמת גילוי חזקה לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

גרורות הן תהליך מורכב, הדורש מהתאים להתגבר על מחסומים שרק מודלים באופן חלקי על ידי בדיקות חוץ גופיות . זרימת עבודה שיטתית הוקמה תוך שימוש במודלים חזקים וניתנים לשחזור in vivo ובשיטות סטנדרטיות לזיהוי שחקנים חדשים בגרורות מלנומה. גישה זו מאפשרת הסקה של נתונים בשלבים ניסיוניים ספציפיים כדי לאפיין במדויק את תפקידו של הגן בגרורות. מודלים נקבעים על ידי החדרת תאי מלנומה מהונדסים גנטית באמצעות זריקות תוך-לבביות, תוך-עוריות או תת-עוריות לעכברים, ולאחר מכן ניטור באמצעות הדמיית in vivo סדרתית. ברגע שמגיעים לנקודות קצה שהוקמו מראש, גידולים ראשוניים ו/או איברים נושאי גרורות נקטפים ומעובדים לניתוחים שונים. ניתן למיין את תאי הגידול ולהכפיף אותם לכל אחת מכמה פלטפורמות 'אומיקה', כולל ריצוף RNA חד-תאי. איברים עוברים הדמיה וניתוחים אימונוהיסטופתולוגיים כדי לכמת את הנטל הכולל של גרורות ולמפות את מיקומן האנטומי הספציפי. ניתן לאמץ את הצינור הממוטב הזה, הכולל פרוטוקולים סטנדרטיים לחריטה, ניטור, קצירת רקמות, עיבוד וניתוח, עבור תרביות קצרות טווח שמקורן בחולה וקווי תאים אנושיים ומורין מבוססים של סוגי סרטן מוצקים שונים.

הנתונים הבאים ממחישים כיצד זרימת העבודה המתוארת יושמה לזיהוי מניעים חדשים של גרורות מלנומה. איור 2 מסכם את התוצאות של מחקר שפורסם, שבו נחקרו26 ההשפעות של השתקת הפוקוסילטרנספראז FUT8 בגרורות מלנומה in vivo. בקצרה, ניתוח של נתונים גליקומיים של מטופלים אנושיים (המתקבלים על ידי מערכי לקטין) ופרופיל תעתיק חשפו רמות מוגברות של אלפא-1,6-fucose הקשורות להתקדמות ממלנומה ראשונית למלנומה גרורתית, העולה בקנה אחד עם עלייה בפוקוסילטרנספראז המתאים (FUT8).
<p class="jove...

מאמר זה מתאר זרימת עבודה של טכניקות המשמשות לבדיקת מתווכים מועמדים חדשים של גרורות מלנומה ומנגנוני הפעולה שלהם.

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

פרוטוקול זה מתאר סדרה של טכניקות בתוך זרימת עבודה רציפה שניתן להשתמש בהן להערכת ההשפעות in vivo של מווסתים מועמדים של גרורות מלנומה, אך גם של גרורות של ממאירויות מוצקות אחרות. היתרון העיקרי של זרימת העבודה השיטתית שלנו הוא יכולת שכפול מוגברת של הנתונים עקב מודלים וטכניקות in vivo חזקים וסטנדרטיים. צינור זה מציע מסלול לגילוי מטרה ופיתוח טיפול על ידי בדיקת מועמדים המוסקים מנתוני Omics או ממבחני in vitro בסביבה in vivo.עקומת הלמידה הקשורה לטכניקות המוצגות בפרוטוקול זה מתקצרת על ידי שימוש בחומרים שסופקו ומעקב אחר התיאור המפורט בעת תרגול השלבים. מי שיסייעו להדגים את ההליך יהיו אורלנדו אריסטיזבל, מדען מחקר בליבת ההדמיה הפרה-קלינית ורן מובארק, מדריך במעבדה שלי. להזרקות תוך-עוריות, יש להרדים ולגלח עכבר בן שמונה עד עשרה שבועות בתוך ארון בטיחות ביולוגית תוך שמירה על מצבים אספטיים.לאחר מכן תפסו והחזירו את העור לאחור כנגד מסלול דקירה של המחט והשתמשו במחט מזרק אינסולין באורך שישה מילימטרים, 31 מדים, נקבו בעדינות את העור בזווית חריפה כאשר השיפוף פונה כלפי מעלה. הזריקו 30 מיקרוליטרים של מתלי תאי הגידול באיטיות, עד שנצפה גלגל בצורת כיפה. עקוב אחר התקדמות גידול הגידול, ירידה במשקל ומצב בריאותי כללי.במהלך מפגשי ניטור אלה, קח מדידות עם קליפרים והשתמש בממדי האורך והרוחב של הגידול כדי לחשב את הנפח. עבור זריקות תוך לב, להעביר עכבר מורדם על הפלטפורמה המחוממת של מכשיר האולטרסאונד. לאחר מכן באמצעות סרט היפואלרגני, מהדק את העכבר לחרוט האף.גילחו את בית החזה באמצעות סכין גילוח ישרה או להב אזמל, מוטה בזווית של 30 מעלות ונקו את העור סביב אזור ההליך עם יוד 10% פובידון. לאחר מכן, מקם את בדיקת האולטרסאונד באמצע בית החזה בצד שמאל של העכבר כדי ללכוד חלון אופקי המכוון כדי לקבל תצוגת חתך של החדר השמאלי. כאשר הציר הארוך של הגשושית פונה כלפי מעלה, קבעו את הגשושית בזווית של 50 מעלות ואת הפלטפורמה המחוממת בזווית של 20 מעלות, ואז נעלו את הגשושית ואת מסגרת התמיכה במצב.תוך כדי עבודה בתוך ארון הבטיחות, ציירו את מתלי התא במזרק שחפת אחד מיליליטר עם מחט בגודל 30 אינץ' אחד. הסר את בועות האוויר הקיימות במזרק. נעל את המזרק במזרק הסטריאוטקטי.ואז בהנחיית אולטרסאונד, מקדמים את המחט דרך דופן בית החזה לחדר השמאלי של הלב ומזריקים 100 עד 250 מיקרוליטרים של תרחיף תאי הגידול לאט. לניתוח הישרדות מבוים, הניחו את העכבר המרדים על כרית החימום ונקו את העור סביב אזור ההליך עם תמיסת יוד 10% povidone. לאחר שהתאמנו ציוד הגנה אישי סטרילי וכפפות, הניחו וילון סטרילי על גוף החיה.לאחר מכן, באמצעות מספריים של איריס או אזמל, מכניסים את העור, ושומרים על מרווח כריתה של חמישה עד שבעה מילימטרים מקצה הגידול. במקרה של גידולים תוך עוריים, יש לכרות את הגידול יחד עם העור ההיקפי. עבור גידולים תת עוריים, לנתח ולהסיר את הגידול מתחת לעור.לאחר כריתת הגידול, סגרו את הפצע באמצעות מכשיר הידוק של תשעה מילימטרים. להדמיית in vivo, תנו מצע d-לוציפרין לעכבר על ידי הזרקה תוך-צפקית עם מזרק אינסולין מיליליטר אחד ומחט 28 מדים ואז הרימו את העכבר והכניסו אותו לתוך חרוט אף בתוך סורק ההדמיה הביו-לומינסנציה. הפעל את המכשיר על ידי לחיצה על אתחול והגדר את זמן החשיפה לאוטומטי.ללכידת תמונה ריקה לחיסור רקע, לחץ על רכוש ושמור את התמונה לאחר השלמת רצף הרכישה. לניתוח נתונים ואותה תוכנת הדמיה in vivo, נווטו לתיקייה שבה נשמרות התמונות ופתחו את התמונות של כל העכברים מניסוי אחד. הגדר את היחידות לזוהר וודא שתיבת הסימון המציינת אדם אינה מסומנת מכיוון שהדבר ימנע נורמליזציה של האות בין קבוצות.לאחר מכן, באמצעות אזור העניין או כלי ציור החזר ההשקעה, ציירו ROI's מעגליים עבור אזור המוח ו- ROI מלבני עבור הגוף, לא כוללים את האוזניים והאף במוח ROI מכיוון שהם נוטים לפלוט זוהר לא ספציפי. כדי למזער את ההטיה, צייר ROI's על התמונות של העכברים ללא כיסוי האות הזוהר, ולאחר מכן בחר למדוד ROI's כדי לכמת את האות ולייצא את הנתונים לגיליון אלקטרוני. נתחו את ההבדלים בין הקבוצות על ידי התוויית שטף זוהר כולל באזורי הגוף המעניינים.לאחר צביעת NuMA באמצעות תוכנה, ציירו החזר על ההשקעה כדי לכלול את כל התאים המוכתמים של NuMA בתוך רקמת האיברים, למעט פרנכימה איברית אחרת וחללים ריקים. התאם את ההגדרות כדי לסווג את התאים החיוביים וה- NuMA השליליים של NuMA תוך שימוש בבקרות חיוביות ושליליות מתאימות עבור כל איבר. השתמש באלגוריתם תוכנה מבוסס כדי לכמת את המספר הכולל של האחוזים של תאים חיוביים של NuMA עבור כל דגימה.תמונות ביולומינסנציה, שדה בהיר, אקס-ויוו פלואורסצנציה והמטוקסילין וצביעת אאוזין ממחישות את הגישה הרב-ראשית לניתוח השפעות הגנים המועמדים על גרורות מלנומה. השתקת Fucosyltransferase פגעה בהפצה גרורתית של תאי מלנומה. קטעי הריאות המוכתמים NuMA של תאי מלנומה הנגועים בנגיף לינדה בקרה ועם מדכא גרורות המבטא את נגיף לינדה מוצגים כאן.תאי המלנומה הגרורתיים מסומנים בירוק ואזור האיברים תוחם על ידי קו ירוק בוקע. שמירה על מתח תקין בעור בעת ביצוע זריקות תוך-עוריות, הימנעות מתסחיף אוויר בעת הכנת מזרקים והשגת שולי כריתה נאותים שאינם אמורים להפריע לתנועה של החיה או לגרום לה לגרום לו לסיבוכי פצע, לעזור לשפר את שיעור ההצלחה ואת יכולת השכפול. שימוש נוסף בהדמיית מולטיפלקס כדי לבחון סינון חיסוני, ריצוף RNA של תאים בודדים לניתוח ביטוי גנים ותעתיקים מרחביים יכולים כולם לספק דרכים משלימות לבחינת ההטרוגניות התוך-תאית.שילוב הטכניקות המתוארות בפרוטוקול זה סייע לנו לזהות מווסתים חדשים בגרורות במוח מלנומה, כגון תפקידה של מלנומה המופרשת על ידי עמילואיד בטא בדיכוי דלקת עצבית ובקידום גרורות במוח.

a-robust-discovery-platform-for-identification-novel-mediators

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

מאמר זה מתאר את הנהלים של assay גרורות ניסיוני המשמש כדי לקבוע את פוטנציאל גרורתי של שורות תאים סרטניים אנושיים.

גרורה ניסויית Assay

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול לביסוס מודל עכבר גרורות ספונטני של קסנוגרפטים או PDX שמקורם בסרטן המעי הגס. מודלים אלה של xenograft מחקים חלקית את המאפיינים של קרצינומה אנושית ומבינים את ההיבטים הקריטיים של ממאירויות אנושיות, כולל פלישה וגרורות.

מודלים ספונטניים של גרורות בעכבר: פלטפורמה לחקר הפוטנציאל הגרורתי של תאי סרטן המעי הגס בהזרקה אורתוטופית

בסרטון זה, תאי מלנומה מוזרקים דרך וריד הזנב במודל העכבר. תאי המלנומה ממשיכים לנוע במערכת הדם, מסתגלים למיקרו-סביבה הרחוקה וגורמים לגרורות באיברים כמו ריאות.

מודל ניסיוני של עכבר מלנומה גרורתי: פלטפורמה לחקר הפוטנציאל הגרורתי של תאי מלנומה בריאות

פרוטוקול זה מתאר טכניקה להכנת דגימות על ידי תרבית משותפת של צמחי שחלה עם תאי סרטן החצוצרה. דגימות אלה מוצגות באמצעות ספקטרוסקופיית מסות הדמיה, או IMS, כדי לזהות חילופי מולקולות קטנות בין התאים והרקמות המובילים להתפתחות הגידול.

מידול תקשורת סרטן השחלות לצורך הדמיה ניתוח ספקטרומטריית מסות: שיטה לזיהוי מתקשרים כימיים של מולקולות קטנות בהתפתחות גידול שחלות גרורתי

גרורות ממלאת תפקיד משמעותי באלימות הסרטן, ומהווה כ-90% ממקרי המוות.  אנו מדווחים על פרוטוקול למודל מלנומה גרורתית בעכברים השימושי לקביעת יעילותם של חומרים טיפוליים כנגד תופעה קלינית זו.

הזרקה של תאים syngeneic Murine מלנומה מנת לקבוע את פוטנציאל גרורתי שלהם בתוך הריאות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת 3D organotypic מלנומה ספרואיד העור מודל recapitulates הן את הארכיטקטורה ואת multicellular המורכבות של איברים/גידול של ויוו , אבל באותו זמן מסתגלת שיטתית ניסיוני התערבות.

מודל העור מלנומה Organotypic 3D ספרואיד

אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את רמת הביטוי של מחזורי microRNA (miRNAs) בדגימות הפלסמה של חולי סרטן. בפרט, השתמשנו ערכת זמינים מסחרית עבור מחזור miRNA החילוץ, שעתוק במהופך. לבסוף, ניתחנו את פאנל של 24 miRNAs שנבחר באמצעות לוחות מותאמים אישית בדיקה מראש הבחין בזמן אמת.

זיהוי של לוח מותאם אישית MicroRNA במחזור בחולים עם סרטן המעי הגס גרורתי

בעידן האימונותרפיה והפרופיל הגנומי של התא הבודד, ביולוגיה של סרטן דורשת כלים חדשניים במבחנה וחישוביים לחקר הממשק הגידולי-חיסוני בהקשר מרחבי-זמני נכון. אנו מתארים פרוטוקולים לניצול תרביות מיקרופלואידיות מיקרופלואידיות של גידולים חיסוניים בסביבות דו-ממדיות ותלת-ממדיות, התואמים לניטור דינמי ורב-פרמטרי של תפקודים תאיים.

מודלים של תרבית משותפת מיקרופלואידית לניתוח התגובה החיסונית במיקרו-סביבות גידוליות במבחנה

זוהי שיטה יעילה לסנן מדכאים או נהגים של גרורות סרטן. תאים, המועברים בספריית ביטויים, מוזרקים לתוך כלי הקרום chorioallantoic עוף כדי ליצור מושבות גרורתיות. מושבות שיש להם ירידה או פולשניות מוגברת הם excised, מורחב, reinjected כדי לאשר פנוטיפ שלהם, ולבסוף, מנותח באמצעות רצף תפוקה גבוהה.

גילוי של רגולטורים גרורתיים באמצעות מודל ממברנה צ'יק תוך-ויאטואי מהיר וכמותי

מלנומה היא מחלה אגרסיבית מאוד שמתפשטת במהירות לאיברים אחרים. פרוטוקול זה מתאר את היישום של הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, יחד עם עיבוד 3D, כדי לפקח על הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות במודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית.

ניתוח נפח בלוטות הלימפה על ידי הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד במודל העכבר המהונדס גנטית Braf /Pten של מלנומה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת אורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה על ידי תרבית תרחיפים של תאים מנותקים מרקמות מלנומה טרייה. אורגנואידים אלה משחזרים בנאמנות גידולים ספציפיים למטופל במבחנה, ומציעים גישה חדשנית לחקר מנגנוני דיכוי החיסון של הגידול, בדיקות סקר לתרופות, מנגנוני עמידות לתרופות וגישות מעקב אחר סרטן.

חשיפת הזדמנויות טיפוליות עם מודלים אורגנואידים שמקורם בחולה מלנומה

למד שיטות מחקר מתקדמות לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה באמצעות מודלים חיות מסודרים. זרימת העבודה מספקת כלים לגילוי מטרות טיפוליות ופיתוח תרפיות.

פלטפורמת גילוי חזקה לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה

גלה סרטונים נוספים