Name: אינדוקציה של דלקת מעיים על ידי העברה מאמצת של CBir1 TCR תאי CD4 + TCR מהונדסים לעכברים חיסוניים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-16T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: למדו אינדוקציה של דלקת מעיים באמצעות העברה מאמצת של תאי CD4+ TCR מהונדסים מעכברי CBir1 לעכברים חסרי Rag1. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני מחלת מעי דלקתית והערכת טיפולים פוטנציאליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מעניקים DK125011, AI1502110, ו- DK124132, פרס STARs מערכת אוניברסיטת טקסס (Y.C.), וקרן מלגת ג'יימס ו. מקלפלין מהסניף הרפואי של אוניברסיטת טקסס בגלווסטון (W.Y.). איור 1 נוצר עם BioRender.com.

<ol><li>Kaplan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+IBD%3A+From+2015+to+2025%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">The global burden of IBD: From 2015 to 2025.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 12 (12), 720-727 (2015).</li>
<li>Ananthakrishnan, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+risk+factors+for+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and risk factors for IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 12 (4), 205-217 (2015).</li>
<li>Yang, W., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota-derived+metabolites+in+the+regulation+of+host+immune+responses+and+immune-related+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+%26+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota-derived metabolites in the regulation of host immune responses and immune-related inflammatory diseases.</a> Cellular & Molecular Immunology. 18 (4), 866-877 (2021).</li>
<li>Pickard, J. M., Zeng, M. Y., Caruso, R., Núñez, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPickard%2C+JM+%22Gut+microbiota%3A+Role+in+pathogen+colonization%2C+immune+responses%2C+and+inflammatory+disease%22">Gut microbiota: Role in pathogen colonization, immune responses, and inflammatory disease</a>. 279 (1), 70-89 (2017).</li>
<li>Russler-Germain, E. V., Rengarajan, S., Hsieh, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+regulatory+T-cell+responses+to+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific regulatory T-cell responses to intestinal microbiota.</a> Mucosal Immunology. 10 (6), 1375-1386 (2017).</li>
<li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota+metabolite+butyrate+differentially+regulates+Th1+and+Th17+cells%27+differentiation+and+function+in+induction+of+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Diseases%22%5BJournal%5D)">Microbiota metabolite butyrate differentially regulates Th1 and Th17 cells' differentiation and function in induction of colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 25 (9), 1450-1461 (2019).</li>
<li>Cong, Y., Weaver, C. T., Lazenby, A., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial-reactive+T+regulatory+cells+inhibit+pathogenic+immune+responses+to+the+enteric+flora%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Bacterial-reactive T regulatory cells inhibit pathogenic immune responses to the enteric flora.</a> Journal of Immunology. 169 (11), 6112-6119 (2002).</li>
<li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+flagellin+is+a+dominant+antigen+in+Crohn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Bacterial flagellin is a dominant antigen in Crohn disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 113 (9), 1296-1306 (2004).</li>
<li>Targan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+to+CBir1+flagellin+define+a+unique+response+that+is+associated+independently+with+complicated+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Antibodies to CBir1 flagellin define a unique response that is associated independently with complicated Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 128 (7), 2020-2028 (2005).</li>
<li>Mombaerts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RAG-1-deficient+mice+have+no+mature+B+and+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">RAG-1-deficient mice have no mature B and T lymphocytes.</a> Cell. 68 (5), 869-877 (1992).</li>
<li>Charan, J., Kantharia, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+calculate+sample+size+in+animal+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+%26+Pharmacotherapeutics%22%5BJournal%5D)">How to calculate sample size in animal studies.</a> Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).</li>
<li>Kwizera, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+trypan+blue+stain+in+the+TC20+automated+cell+counter+as+a+point-of-care+for+the+enumeration+of+viable+cryptococcal+cells+in+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Mycology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of trypan blue stain in the TC20 automated cell counter as a point-of-care for the enumeration of viable cryptococcal cells in cerebrospinal fluid.</a> Medical Mycology. 56 (5), 559-564 (2018).</li>
<li>Boyman, O., Létourneau, S., Krieg, C., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+proliferation+and+survival+of+na%C3%AFve+and+memory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Homeostatic proliferation and survival of naïve and memory T cells.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2088-2094 (2009).</li>
<li>Chai, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells%2C+derived+from+na%C3%AFve+CD4%2BCD25-+T+cells+by+in+vitro+Foxp3+gene+transfer%2C+can+induce+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells, derived from naïve CD4+CD25- T cells by in vitro Foxp3 gene transfer, can induce transplantation tolerance.</a> Transplantation. 79 (10), 1310-1316 (2005).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161(2016).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161(2016).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Erben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+histomorphological+evaluation+of+intestinal+inflammation+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 7 (8), 4557-4576 (2014).</li>
<li>Tuijnman, W. B., Van Wichen, D. F., Schuurman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+distribution+of+human+IgG+Fc+receptors+CD16%2C+CD32+and+CD64%3A+An+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Tissue distribution of human IgG Fc receptors CD16, CD32 and CD64: An immunohistochemical study.</a> APMIS. 101 (4), 319-329 (1993).</li>
<li>Yang, W., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYang%2C+W+%22Intestinal+microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+regulation+of+immune+cell+IL-22+production+and+gut+immunity%22">Intestinal microbiota-derived short-chain fatty acids regulation of immune cell IL-22 production and gut immunity</a>. 11 (1), 4457(2020).</li>
<li>Reinoso Webb, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+to+t+cell-induced+colitis+in+mice.+Role+of+the+Intestinal+Microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammatory+Bowel+Disease%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility to t cell-induced colitis in mice. Role of the Intestinal Microbiota.</a> Inflammatory Bowel Disease. 24 (2), 361-379 (2018).</li>
<li>Bamias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+intestinal+lymphocyte+activation+and+Th1+cytokine+production+by+antibiotic+therapy+in+a+murine+model+of+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of intestinal lymphocyte activation and Th1 cytokine production by antibiotic therapy in a murine model of Crohn's disease.</a> Journal of Immunology. 169 (9), 5308-5314 (2002).</li>
<li>Steinbach, E. C., Gipson, G. R., Sheikh, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+murine+intestinal+inflammation+by+adoptive+transfer+of+effector+CD4%2B+CD45RB+high+T+cells+into+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction of murine intestinal inflammation by adoptive transfer of effector CD4+ CD45RB high T cells into immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52533(2015).</li>
<li>Atale, N., Gupta, S., Yadav, U. C., Rani, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-death+assessment+by+fluorescent+and+nonfluorescent+cytosolic+and+nuclear+staining+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Cell-death assessment by fluorescent and nonfluorescent cytosolic and nuclear staining techniques.</a> Journal of Microscopy. 255 (1), 7-19 (2014).</li>
<li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gut+microbiota+in+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">The gut microbiota in IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li>
<li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+promote+Th1+cell+IL-10+production+to+maintain+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Microbiota-derived short-chain fatty acids promote Th1 cell IL-10 production to maintain intestinal homeostasis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3555(2018).</li>
<li>Feng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th17+cells+induce+colitis+and+promote+Th1+cell+responses+through+IL-17+induction+of+innate+IL-12+and+IL-23+production%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production.</a> Journal of Immunology. 186 (11), 6313-6318 (2011).</li>
<li>Chiaranunt, P., Tometich, J. T., Ji, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChiaranunt%2C+P+%22T+Cell+Proliferation+and+Colitis+Are+Initiated+by+Defined+Intestinal+Microbes%22">T Cell Proliferation and Colitis Are Initiated by Defined Intestinal Microbes</a>. 201 (1), 243-250 (2018).</li>
<li>Feng, T., Cao, A. T., Weaver, C. T., Elson, C. O., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-12+converts+Foxp3%2B+regulatory+T+cells+to+interferon-%CE%B3-producing+Foxp3%2B+T+cells+that+inhibit+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Interleukin-12 converts Foxp3+ regulatory T cells to interferon-γ-producing Foxp3+ T cells that inhibit colitis.</a> Gastroenterology. 140 (7), 2031-2043 (2011).</li>
</ol>

לאף מחבר אין אינטרסים כלכליים, מקצועיים או אישיים סותרים.

למרות כל צעד חיוני עבור רבייה של מודל קוליטיס זה, ישנם מספר צעדים קריטיים. הנמען Rag-/- עכברים צריכים לקבל נאותה naϊve CD4 + תאי T כדי לגרום לדלקת מעיים. השתמשנו בטחול לבידוד של תאי CD4 + T נאיביים במקום MLNs. כי התשואה של תאי CD4+ T נאיביים ב- MLNs נמוכה בהרבה מאשר בטחול. CD62L מתבטא מאוד בתאי T נאיביים, ו- CD44 ו- CD25 הם סמני ההפעלה של תאי T13,14. במחקר זה, השתמשנו לראשונה בחרוזים מגנטיים נגד CD4 כדי לבודד ת...

מחלות מעי דלקתיות (IBD), בעיקר כולל מחלת קרוהן (CD) וקוליטיס כיבית (UC), מאופיינות בדלקת כרונית, חוזרת ונשנית של מערכת העיכול, המשפיעה על מיליונים ברחבי העולם1. מספר גורמים היו מעורבים בהתפתחות ובפתוגנזה של מחלת המעי הרגיז, כולל רגישות גנטית, מיקרוביוטה במעיים, תגובות חיסוניות, תזונה ואורח חיים2. עם זאת, המנגנון המדויק של IBD עדיין לא מובן לחלוטין.
אחד האינטרסים הספציפיים הוא האינטראקציה בין מיקרוביוטה במעיים ותגובות חיסוניות מארחות בוויסות דלקת מעיים3. מיקרוביוטה במעיים מספקת סדרה של מולקולות ואנטיגנים אימונוסטימולטוריים, שיכולים להפעיל תגובות חיסוניות4. בעוד שהאיזון בין תאי T משפיעים לתאי T תקינים (Tregs) הוא קריטי בשמירה על הומאוסטזיס מעיים, תגובת תאי רירית המעיים המוגזמת CD4+ T לאנטיגנים של מיקרוביוטה במעיים תורמת לדלקת מעיים 5,6,7. כאנטיגן מיקרוביוטה מעיים אימונודומיננטי, CBir1 flagellin היה קשור לפתוגנזה של CD8,9 אנושי. יתר על כן, העברה של תאי TCR מהונדסים CBir1 TCR (Tg) T גורמת לדלקת מעיים בעכברים לקויים במערכת החיסון6, הדומה מאוד ל- IBD האנושי, המציין כי מודל העברת תאי T זה מסייע לחקור את המנגנונים של מחלת המעי הרגיז האנושית.
עבודה זו מתארת את הפרוטוקול המפורט של גרימת קוליטיס ב Rag1-/- עכברים על ידי העברה מאמצת של CBir1 TCR Tg naϊve CD4 + תאי T והערכה של חומרת המחלה. חוץ מזה, התוצאות הצפויות מוצגות, ואת השלבים הקריטיים של ההליך ופתרון בעיות נדונים, אשר יסייע לחוקרים לחקור את המנגנונים של פתוגנזה של דלקת מעיים ולבדוק את התרופות הפוטנציאליות לטיפול במחלת המעי הרגיז.

<table><tbody><tr><td>0.22 ומיקרו; m מסנן עליון בקבוק חד פעמי מונע ואקום</td><td>MilliporeSigma</td><td>SCGPS05RE</td><td></td></tr><tr><td>100x פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>קורנינג</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>100-&micro; m מסננת</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>3-mL העברת פיפטה</td><td>פישרברנד</td><td>13-711-9CM</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD16/32</td><td>Biolegend</td><td>101302</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD25-Percp/Cy5.5</td><td>Biolegend</td><td>102030</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD3-Percp/Cy5.5</td><td>Biolegend</td><td>100327</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD4 APC</td><td>Biolegend</td><td></td><td></td></tr><tr><td>100516 נגד עכבר CD4 חלקיקים מגנטיים</td><td>BD Biosciences</td><td>551539</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD4-BV421</td><td>Biolegend</td><td>100544</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD62L-PE</td><td>Biolegend</td><td>104408</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר Foxp3-PE</td><td>ThermoFisher</td><td>12-5773-82</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר IFN&gamma;-FITC</td><td>Biolegend</td><td>505806</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר IL-17A-PE/Cy7</td><td>Biolegend</td><td>506922</td><td></td></tr><tr><td>מונה תאים אוטומטי</td><td>Bio-rad</td><td>TC20</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP1600-1</td><td></td></tr><tr><td>C tube</td><td>Miltenyi</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>מגנט הפרדת תאים</td><td>BD Biosciences</td><td>552311</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז IV</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>מכונת דיסוציאטור</td><td>Miltenyi</td><td>130-096-427</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>EDTA קורנינג</td><td>46-034-CI</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5 מ', PH 8.0)</td><td>קורנינג</td><td>46-034-CI</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>מו"פ D Systems</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>ציטומטר זרימה</td><td>BD Biosciences</td><td>LSD Fortessa</td><td></td></tr><tr><td>מנורת חום</td><td>CoverShield</td><td>BR40</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין ואאוזין (H& ה) ערכת כתמים</td><td>Abcam</td><td>ab245880</td><td></td></tr><tr><td>מזרקי אינסולין</td><td>BD Biosciences</td><td>329412</td><td></td></tr><tr><td>Ionomycin</td><td>ThermoFisher</td><td>I24222</td><td></td></tr><tr><td>חי/מת ניתן לתיקון קרוב ל-IR ערכת כתמי תאים מתים</td><td>ThermoFisher</td><td>L10119</td><td></td></tr><tr><td>MaxQ 6000 שייקרים הניתנים לערמה מודגרים/מקוררים</td><td>ThermoFisher</td><td>SHKE6000</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Thermo Scientific</td><td>A687-500</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Phorbol-12-myristate 13-acetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 בינוני</td><td>Cytiva HyClone</td><td>SH3002702</td><td></td></tr><tr><td>סדרן</td><td>BD Biosciences</td><td>Arial Fusion</td><td></td></tr><tr><td>Tissue מעבד אוטומטי</td><td>ThermoFisher</td><td>STP120</td><td></td></tr><tr><td>קלטת הטמעה/עיבוד רקמות</td><td>Fisher Healthcare</td><td>22048142</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Thermo Scientific</td><td>BP154-1</td><td></td></tr><tr><td>סט מאגר גורם שעתוק גרעיני אמיתי (כולל מאגר סלסול)</td><td>Biolegend</td><td>424401</td><td></td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של דלקת מעיים על ידי העברה מאמצת של cbir1 tcr תאי cd4 + tcr מהונדסים לעכברים חיסוניים

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

עם העלייה בשכיחות, מחלות מעי דלקתיות (IBD), שהן מחלות כרוניות המשפיעות על מערכת העיכול, מטילות נטל בריאותי וכלכלי ניכר על יחידים וחברה. לכן, זה קריטי לחקור את המנגנונים שבבסיס הפתוגנזה ופיתוח של IBD. כאן מתואר מודל קוליטיס של העברת תאי T ספציפיים למיקרוביוטה במעיים אנטיגן. CBir1 flagellin הוכר כאנטיגן חיידקי המעיים האימונודומיננטי בקוליטיס ניסיוני וחולים עם מחלת קרוהן. CBir1 TCR מהונדס naϊve CD4+ תאי T, ספציפיים ל- CBir1 flagellin, יכולים לגרום לקוליטיס כרונית לאחר העברה מאמצת לעכברים Rag1-/- לקויי מערכת החיסון. חומרת המחלה מוערכת על ידי היסטופתולוגיה. הפנוטיפים של תאי CD4+ T בלמינה פרופריה המעי הגס נקבעים גם הם. מודל זה דומה מאוד להתפתחות של מחלת המעי הרגיז, המספקת מודל מורין אידיאלי לחקירת המנגנונים המניעים את הפתוגנזה של מחלת המעי הרגיז ובדיקת התרופות הפוטנציאליות לטיפול במחלת המעי הרגיז.

כ 5 x 106 CBir1 TCR TCR Tg naϊve CD4 + T תאים לטחול היו מבודדים מעכבר CBir1 TCR TG בוגר. העברה של CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ תאי T המושרה קוליטיס כרונית בנמען Rag1-/- עכברים. לאחר העברת תאים, סימנים קליניים היו במעקב כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת מעיים, כולל ירידה במשקל, עקביות הצואה, ויציבה כפופה. כצפוי, עכברים החלו לרדת במשקל כשלושה שבועות לאחר העברת התא, והמשקל הגיע לסביבות 80%-85% מהמשקל המקורי שישה שבועות לאחר העברת התא (איור 3). בנוסף,...

בפרוטוקול זה מתואר מודל קוליטיס אימוץ של תאי T ספציפיים למיקרוביוטה במעיים. תאי CD4+ T מבודדים מעכברים מהונדסים CBir1 TCR. אלה הם ספציפיים עבור מיקרוביוטה המעי immunodominant אנטיגן CBir1 flagellin, אשר מועבר לתוך המטופל Rag1-/- עכברים, המוביל דלקת מעיים.

אינדוקציה של דלקת מעיים על ידי העברה מאמצת של CBir1 TCR תאי CD4 + TCR מהונדסים לעכברים חיסוניים

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

מחלות מעי דלקתיות, או מחלת המעי הרגיז, מטילות נטל בריאותי וכלכלי ניכר על יחידים ועל החברה. מודל קוליטיס זה מועיל ללמוד את המנגנונים של IBD ולהעריך את הטיפולים עבור IBD. זה immunodominant Cbir flagellin T-cell ספציפי העברת קוליטיס מודל מספק תובנות כיצד חיידקי המעיים אנטיגן גורם תגובות תאי T כדי לגרום קוליטיס.לאחר המתת חסד העכבר, לעשות כ סנטימטר אחד חתך הבטן השמאלית ולמשוך את העור מן רקמת שריר הבטן. לאחר מכן, לבצע חתך של כשלושה סנטימטרים ברקמת שריר הבטן. לאחר מכן, להסיר את הטחול עם מספריים סטריליים מלקחיים.מניחים את הטחול בצלחת תרבית המכילה חמישה מיליליטר של חוצץ כביסה מקורר מראש. טוחנים את הטחול עם המשטח המחוספס של שתי מגלשות זכוכית סטריליות. העבר את ההשעיה התא לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר על ידי העברתו דרך מסננת תא 100 מיקרומטר.שוטפים את מגלשות הזכוכית ואת צלחת התרבות עם חמישה מיליליטרים של חיץ כביסה מקורר מראש, ולהעביר את חיץ הכביסה לתוך הצינור. צנטריפוגה ההשעיה התא, להשליך את supernatant, ו resuspend התאים עם חמישה מיליליטרים של טריס אמוניום כלוריד תמוגה מראש חיץ לטחול. יש לדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.הוסף 10 מיליליטר של חוצץ כביסה מקורר מראש לצינור. לאחר מכן, צנטריפוגה השעיית התא, להשליך את supernatant, ו respend התאים עם 10 מיליליטר של חיץ בידוד מקורר מראש. כדי לספור את התאים, ערבבו 10 מיקרוליטרים כל אחד מהשעיית התא וכחול טריפאן ביסודיות, וטענו 10 מיקרוליטרים לשקופית.לאחר מכן, הכנס את השקופית למונה התאים האוטומטי כדי להשיג את מספר התא הניתן לקיום. צנטריפוגה ההשעיה התא הנותרת ולהשליך את כל supernatant. מערבולת חלקיקים מגנטיים CD4 נגד עכבר, להוסיף ישירות 50 microliters של החלקיקים לכל 10 מיליון תאים, ולערבב עם כדורי תאים ביסודיות.לדגור על התערובת במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס. העבר את השעיית חלקיקי התא לתוך צינור איסוף סטרילי. הוסף 3.5 מיליליטר של חיץ בידוד מקורר מראש לתוך הצינור.מניחים את הצינור על מגנט הפרדת התא במשך שמונה דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, בזהירות לשאוף את supernatant עם פיפטה העברת שלושה מיליליטר. הסר את הצינור ממגנט הפרדת התאים.לאחר מכן, resuspend התאים עם 3.5 מיליליטר של חיץ בידוד מקורר מראש ומניחים את הצינור על המגנט במשך ארבע דקות בטמפרטורת החדר. שאפו בזהירות את הסופר-נרטיב עם פיפטה של 3 מיליליטר. לבסוף, הקדישו מחדש את התאים למיליליטר אחד של מאגר FACS מקורר מראש.כדי להעביר את התאים לעכברי הנמען, הזן מחדש את תאי ה- TCR הטרנסגניים-נאיביים-CD4-נאיבית של Cbir1 ל-5 מיליון תאים למיליליטר ב- 1x PBS. מחממים את העכברים תחת מנורת חום ומרסנים את העכברים באמצעות מרסן עכברים. תוך ורידי להזריק 200 מיקרוליטרים של ההשעיה התא לתוך הווריד האחורי של העכברים.לאחר המתת חסד העכבר, לעשות כ חתך עור קו אמצע גחון סנטימטר אחד. משוך את העור הרחק מרקמת שריר הבטן. לאחר מכן, לעשות חתך של שלושה סנטימטרים ברקמת שריר הבטן.לאחר מכן, לזהות את coecum ולהסיר את המעי הגס כולו עם מספריים סטריליים מלקחיים. הרטיבו את המעי הגס עם PBS מקורר מראש בצלחת תרבות. יש לחרוט את המעי הגס לאורכו ולשטוף אותו ב-PBS מקורר מראש.חותכים 1/3 של המעי הגס אורך. מניחים את רצועת המעי הגס במגבת נייר כשהצד הלומנלי פונה כלפי מעלה. בצע גלגול שוויצרי באמצעות קיסם.מניחים את המעי הגס השוויצרי לתוך קלטת, ולשים את הקלטת ב 10% פורמלין חוצץ במשך 24 שעות. מייבשים ומטביעים את המעי הגס בפרפין עם מעבד אוטומטי. לאחר מכן, לחתוך מקטעי רקמת חמישה מיקרומטר על מיקרוטום.הר את הרקמה על שקופיות ולבצע הכתמת המטוקסילין ואאוזין. עכברי נוקאאוט סמרטוט החלו לרדת במשקל כשלושה שבועות לאחר העברת התא, ומשקלם הגיע סביב 80 עד 85% ממשקלם המקורי שישה שבועות לאחר העברת התא. עכברי נמען הראו אורך המעי הגס הקצר שישה שבועות לאחר העברת התא.עכברי הנמען הדגימו יותר חדירת תאים במעיים למינה פרופריה ארבעה שבועות לאחר העברת התאים. הם הראו אובדן תאי גביע והיפרפלזיה של תאי אפיתל במעיים חמישה שבועות לאחר העברת התאים, כמו גם שחיקת הרירית וחדירת תאים דלקתיים בתת-הקוקוסה של המעי הגס שישה שבועות לאחר העברת התאים. הציונים ההיסטופתולוגיים עלו משמעותית מארבעה לשישה שבועות.בו זמנית, לא הייתה דלקת בעכברים נוקאאוט Rag מקבל PBS לבד. באמצעות הליך זה, רמות ציטוקינים המעי הגס יכול להיקבע על ידי ELISA ו qPCR.

induction-intestinal-inflammation-adoptive-transfer-cbir1-tcr

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הדור של לימפוציטים T מ המושרה גזע pluripotent (שב"ס) תאים נותן גישה חלופית של שימוש בתאי גזע עובריים על חיסוני מבוססי תאים T. השיטה מלמדת כי על ידי ניצול...

התמיינות מכוונת של המושרה בתאי גזע pluripotent כלפי לימפוציטים-T

כאן, אנו פרט מתודולוגיה בידוד מהיר של המעיים עכבר תאים דנדריטים (DCS) ומקרופגים. אפיון פנוטיפי של DCS ומקרופגים המעי מתבצע באמצעות ריבוי צבעים ניתוח תזרים cytometric תוך העשרת חרוז מגנטי ואחריו מיון התא משמש להניב אוכלוסיות טהורות ביותר ללימודי תפקודית.

בידוד ואיפיון של תאים דנדריטים ומקרופגים מהמעי עכבר

אנו מספקים שיטת שחזור כדי לגרום לסוכרת מסוג 1 (T1D) בעכברים בתוך שבועיים על ידי העברת המאמצת של CD4 איון אנטיגן ספציפי, העיקרי + T תאים.

אינדוקציה מואצת סוכרת סוג 1 בעכברים על ידי העברת המאמצת של CD4 + T תאי Diabetogenic

N-בוטיל-N-(4-hydroxybutyl) ניטרוזמין-Induced מודל סרטן שלפוחית ​​השתן פותח בmucin האנושי 1 (MUC1) עכברים מהונדסים לצורך בדיקות MUC1 מכוון החיסוני. לאחר מתן חיסון פפטיד MUC1 ממוקד, תגובת הלימפוציטים T ציטוטוקסי לMUC1 אושרה על ידי רמות ציטוקינים בסרום ופעילות תאי T ספציפית מדידה.

אינדוקציה של קרצינומה של תאי מעבר שלפוחית ​​השתן פולשנית בMUC1 עכברים הטרנסגניים חיסוניים אנושיים שלמים: מודל לפיתוח חיסוני

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשראת דלקת במעי הגס בעכברים על ידי העברה מאמצת של תאי Tגבוהים CD4+CD45RB סינגניים לנמענים חסרי תאי T ו-B. מאפיינים קליניים והיסטופתולוגיים מחקים מחלות מעי דלקתיות אנושיות. שיטה זו מאפשרת לחקור את התחלת דלקת המעי הגס והתקדמות המחלה.

אינדוקציה של Murine דלקת מעיים על ידי העברת המאמצת של מפעיל CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; גבוה</sup&gt; תאי T לעכברי immunodeficient

במודל קוליטיס מונע אנטיגן זה, תאי OT-II CD4+ T המבטאים חלבון פלואורסצנטי אדום הועברו באופן מאומץ לעכברי RAG-/- המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק בפגוציטים חד-גרעיניים (MPS). המארחים אותגרו עם Escherichia coli (E.coli) המבטא את חלבון האובאלבומין (OVA) שהתמזג לחלבון פלואורסצנטי ציאן (CFP).

פיתוח מודל קוליטיס מונחה Antigen ללמוד מצגת של אנטיגנים על ידי אנטיגן הצגת תאים לתאי T

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול מתאר השתלת תא גזע allogeneic hematopoietic ומאפשרת חוזרות הערכות מיני-אנדוסקופית של המעי הגס דיסטלי באתרו נוכחות, מאפיינים של חומרת דלקת מעי בתוך בשידור חי עכברים הסובלים מעיים שתל – מול – מארח מחלות.

אינדוקציה של מעיים שתל – מול – מארח מחלות והערכה מיני-אנדוסקופית שלה בעכברים בשידור חי

אנו מתארים מודל הפטיטיס חיסון in vivo בעכברי BALB/c שניתן להשתמש בו כדי לחקור את הפתוגנזה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות, כולל הבדלי מין שנראו במחלה זו. נתאר כיצד מודל זה מדגים ניתוחים הניתנים לשחזור באמצעות טכניקות ניסיוניות in vivo ו- in vitro.

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור בvivo הגדלת הרגולטורים של הבטן הרגולציה האינדוקציה תא T. בפרוטוקול זה, תאים דנדריטים מהונדסים מקומית לייצר ריכוזים גבוהים של ויטמין D הפעיל (1, 25-דיהידרוטסטוסטרון ויטמין D או 1, 25 [הו]2ד) ו ויטמין פעיל (חומצה RETINOIC או RA) דה נובו.

ב Vivo הגדלת האינדוקציה תא T הרגולציה התקינה של הבטן

האינטראקציה של רגישות גנטית, חסינות רירית וסביבה מיקרואקולוגית במעיים מעורבת בפתוגנזה של מחלות מעי דלקתיות (IBD). במחקר זה יישמנו השתלת מיקרוביוטה בצואה בעכברים עם מחסור ב-IL-10 וחקרנו את השפעתה על דלקת המעי הגס ותפקוד הלב.

הערכה טיפולית של השתלת מיקרוביוטה בצואה במודל עכבר עם מחסור באינטרלוקין 10

למדו אינדוקציה של דלקת מעיים באמצעות העברה מאמצת של תאי CD4+ TCR מהונדסים מעכברי CBir1 לעכברים חסרי Rag1. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני מחלת מעי דלקתית והערכת טיפולים פוטנציאליים.

אינדוקציה של דלקת מעיים על ידי העברה מאמצת של CBir1 TCR תאי CD4 ⁺ TCR מהונדסים לעכברים חיסוניים

גלה סרטונים נוספים