Name: גישה כירורגית סטריאוטקסית למיקרו-איניגקט גזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ציסטרנה מגנה בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: למדו גישה כירורגית סטריאוטקסית לגזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון בעכברים דרך הציסטרנה מגנה. שיטה זו מגבירה דיוק בהזרקות ננוליטריות ליעדים מוגבלים ומאפשרת מחקרי נוירואנטומיה מתקדמים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי R01 NS079623, P01 HL149630 ו- P01 HL095491.

המחבר מצהיר כי הפרוטוקול תואם את הנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים במרכז הרפואי בית ישראל.
1. הכנת כלי ניתוח ומסגרת סטריאוטקסית
הערה: הניתוח מבוצע בתנאים אספטיים. הסטריליות נשמרת באמצעות טכניקת הקצה הסטרילית.
<ol><li>התקינו את הזרוע הסטריאוטקסית באמצעות מיקרופיפט או מזרק מלא בהזרקה לפי בחירה (וירוס הקשור לאדנו (AAV) או עוקבים קונבנציונליים) על המסגרת הסטריאוטקסית והכינו את מתאם העכבר (איור 2A).</li>
	<li>מכינים כלי ניתוח אוטוקלביים (טבלת חומרים) ומניחים אותם על משטח סטרילי.</li>
</ol>2. אינדוקציה של הרדמה והכנת עכבר
<ol><li>הפעילו את O2 ב-0.5 ליטר לדקה והגדירו את מכשיר האידוי איזופלורן ל-4.0, וודאו שזרימת O2 מגיעה לתיבת האינדוקציה. אזהרה: ודא שתיבת האינדוקציה של האיזופלורן ממוקמת במכסה המנוע ושהאיזופלורן נטרף הרחק מאתר הניתוח.</li>
	<li>מקם את העכבר (C57BL/6J זכר בן 10 שבועות) בתא האינדוקציה.</li>
	<li>לאחר שהאשימה הואטה, פתחו את תא האינדוקציה והרימו מעט את העכבר. השתמשו בקוצץ כדי להסיר את השיער מהראש אל הכתפיים.</li>
</ol>3. מיקום העכבר במסגרת הסטריאוטקסית
<ol><li>הזיזו את העכבר למסגרת הסטריאוטקסית והניחו את האף בחרוט אף גמיש. בשלב זה, ודא שזרימת O2 מופנית כעת לחרוט האף.</li>
	<li>מקם את העכבר במסגרת הסטריאוטקסית באמצעות סרגלי אוזניים בלבד. הערה: ודא שסורגי האוזניים אחידים והראש מאוזן.</li>
	<li>Anteroflex את ראש העכבר לזווית של 90° על ידי הכוונה ידנית של האף. כדי לאבטח את המיקום הזה, הניחו מחסום פלסטיק בין עמודי מוט האוזן של מתאם העכבר, במקביל לעמודים. החלק השטוח של הגולגולת משמש כהתייחסות, בדומה לגישת הגולגולת השטוחה בניתוח סטריאוטקסי קונבנציונלי. הערה: אין להגמיש את הראש יתר על המידה (כלומר מעבר לזווית של 90° בין מישור עצם הגולגולת הקדמית למישור פני השטח של השולחן) מכיוון שהדבר מעכב את זרימת האוויר דרך דרכי הנשימה העליונות. אם זרימת האוויר נפגעת, מקם מחדש את העכבר, וודא שהגוף נתמך מתחת לתא המטען וכרטיס פלסטיק מוגדר ב-90° בין מישור עצם הגולגולת המצחית למישור פני השטח של השולחן כפי שמתואר באיור 2A,C.</li>
	<li>מניחים את כרית החימום מתחת לעכבר, ולאחר מכן מוודאים שהצוואר ושאר הגוף ממוקמים באותה רמה (כלומר, בערך 180° או במקביל לשולחן). ארגז הכלים שמחזיק את מספרי הקפיץ יכול לשמש להרמת הגוף לתנוחה זו. הערה: שלב זה חשוב מכיוון שגזע המוח הקאודלי וחבל הצוואר העליון נעים בהתאם למיקום, בניגוד לחלקים רוסטרליים יותר של מערכת העצבים המרכזית המוחזקים במקומם על ידי הגולגולת.</li>
	<li>הזריקו מנה אחת של 4 מ"ג/ק"ג מלוקסיקם בשחרור איטי (SR) תת עורית (s.c.) בנפח של 2 μL/g משקל גוף והניחו את חומר הסיכה על העיניים.</li>
	<li>נקו את אתר החתך הניתוחי תחילה עם כרית הכנה של 70% אלכוהול, לאחר מכן עם כרית הכנה לבטאדין, ואז שוב עם כרית הכנה לאלכוהול והניחו להתייבש.</li>
	<li>מניחים וילון מתחת לגוף.</li>
	<li>יש לחטא את הידיים וללבוש כפפות סטריליות.</li>
	<li>הניחו וילון באתר הניתוח.</li>
</ol>4. ניתוח לגישה לציסטרנה מגנה
<ol><li>ודא שהעכבר מורדם כראוי על ידי צביטה של הבהונות או בדיקת רפלקס הקרנית.</li>
	<li>הפחת את האיזופלורן לרמות תחזוקה (2.0).</li>
	<li>יש לבצע חתך של 1-1.2 ס"מ עם להב כירורגי מס' 10 מקצה העצם העורפית לכיוון הכתפיים בתנועה חלקה אחת.</li>
	<li>לעשות חתך בקו האמצע של שריר הטרפז. זה חושף את שרירי הלוגוס קאפיטיס הזוגיים. הערה: בעכברים, שריר הטרפז הוא שריר דק מאוד, כמעט שקוף. הקפידו להישאר בקו האמצע ולא לחתוך לשרירים הבסיסיים מכיוון שהדבר יגרום לדימום מיותר.</li>
	<li>מניחים את שני הווים הנסוגים בין שרירי הלוגוס קאפיטיס הזוגיים, אחד מכוון שמאלה והשני ימינה. משקלם של ההמוסטאטים מספק מתח לקרסים הנסוגים אשר ניתן לשנותו על ידי התאמה מחדש של מיקום ההמוסטאטים.</li>
	<li>מקם את המיקרוסקופ הכירורגי במקומו כדי לדמיין טוב יותר את שדה הניתוח.</li>
	<li>השתמש במלקחיים הלמינקטומיה הבוטים כדי להפריד בין הבטן השמאלית והימנית של שריר הלוגוס קפיטיס הזוגי, החל מהאוקסיפוט, שם קו האמצע נראה בקלות. הנח את המלקחיים הבוטים על פני עצם העורף בקו האמצע עד למקום שבו הוא פוגש את הדורה מאטר הציסטרנלית, ולאחר מכן המשך על פני הדורה מאטר אל האטלס. הערה: אין צורך לחתוך את שרירי הלוגוס קאפיטיס הזוגיים מכיוון ששום דבר לא מחזיק אותם יחד בקו האמצע; פעולה זו תגרום לדימום מיותר.</li>
	<li>מקם מחדש את הנסוגים והתאים את המתח על ידי מיקום מחדש של ההמוסטטים, ופתח את הנוף של הציסטרנה מגנה.</li>
	<li>השתמש במלקחיים הלמינקטומיה הבוטים כדי להפריד את השרירים עוד יותר בקו האמצע כדי לקבל חלון צפייה טוב של גזע המוח והמוח הקטן.</li>
	<li>חזור על שלבים 4.7-4.9 לפי הצורך עד שהמוח הקטן וגזע המוח יופיעו מתחת לדורה.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים למינכטומיה קהים, נקו את הדורה מהגדילים הקטנים של רקמת החיבור על ידי הזזת המלקחיים מקו האמצע בכיוון רוחבי, עד שיש מבט ברור על גזע המוח וכדי ליצור מרחב רוחבי יותר, לפי הצורך עבור המטרה.</li>
</ol>5. פתיחת קרום הציסטרנלי
<ol><li>השתמש במלקחיים הזוויתיים של דומונט (#4/45) כדי לתפוס את הדורה, המשתרעת מהעצם העורפית ועד האטלס. תפסו את הדורה ליד העצם העורפית והשתמשו במספריים הקפיץ כדי ליצור פתח קטן (כ-0.5 עד 1.5 מ"מ) בדורה. הערה: במיקום רוסטרלי זה, הרווח בין גזע המוח לבין הדורה העליונה הוא הרחב ביותר, ומספק מספיק מקום למניפולציה בטוחה של הדורה.</li>
	<li>השתמשו במספריים הקפיץ כדי להרים את הדורה ולפתוח את הדורה עוד יותר. גודל החלון תלוי במטרה. הערה: יהיה צורך בחלון גדול יותר בעת ביצוע זריקות אורך מרובות או זריקות דו-צדדיות; חלון קטן יספיק בעת ביצוע זריקות חד צדדיות או קו אמצע בודדות.</li>
	<li>לאחר פתיחת הדורה, יש לנקז עודפי נוזל מוחי עם קצה רמז סטרילי.</li>
</ol>6. זיהוי ציוני דרך ונקודת אפס
<ol><li>צפו במשטח הגבי של גזע המוח עם ציוני דרך מפורטים דרך הדורה הפתוחה. האובקס, הנקודה שבה התעלה המרכזית נפתחת לחדר IV, היא נקודת האפס הקדמית-אחורית והמדיולטרלית הסטנדרטית.</li>
</ol>7. קואורדינטות יעד
הערה: עבור מטרות שונות, כללנו רשימה של קואורדינטות סטנדרטיות עם קואורדינטות אחוריות קדמיות (AP) ומדיולטרליות (ML) ביחס לקואורדינטות bregma ו- cisterna magna של נקודת אפס עם קואורדינטות AP ו- ML ביחס ל- zero point obex כדי להקל על המעבר בין מתודולוגיות (טבלה 1). קואורדינטות Dorsoventral (DV) הן יחסית לפני השטח של המוח או המוח הקטן (גישה סטנדרטית) או פני השטח של גזע המוח או כבל צוואר הרחם העליון (גישת cisterna magna) בנקודת הכניסה AP ו- ML. התכנון צריך להיעשות לפני הניתוח.
<ol><li>השתמש בשלוש קבוצות הקואורדינטות כדי לקבוע את היעד: AP, ML ו- DV. בשל מיקום הראש, האוריינטציה היחסית של מבני גזע המוח משתנה בהתאם למיקום.<ol>
<li>עבור מרחק המטרה >0.4 מ"מ מ-caudal ל-obex (איור 1B, ירוק) בצע את הפעולות הבאות.<ol>
<li>AP: השתמש בכל אטלס ייחוס סטריאוטקסי סטנדרטי (לדוגמה, אטלס פקסינוס ופרנקלין2) או בסדרת רקמות שנחתכה במישור הרוחבי כדי להעריך את מרחק ה-AP בין obex למטרה.</li>
			<li>ML: השתמש בכל אטלס ייחוס סטריאוטקסי סטנדרטי או בסדרת רקמות שנחתכו במישור הרוחבי כדי להעריך את מרחק ה- ML בין obex לבין המטרה.</li>
			<li>DV: אומדן קואורדינטות ביחס לפני השטח של המוח או המוח הקטן בנקודת המטרה AP ו- ML. השתמש בכל אטלס ייחוס סטריאוטקסי סטנדרטי או בסדרת רקמות שנחתכו במישור הרוחבי כדי להעריך את המרחק בין משטח גזע המוח בקואורדינטות AP ו- ML הרצויות לבין המטרה.</li>
		</ol>
</li>
		<li>עבור מרחק המטרה <0.4 מ"מ מ-caudal ל-obex (איור 1B, כתום) בצע את הפעולות הבאות.<ol>
<li>AP: התאם קואורדינטות כך שיתחשבו באנטרופלקסיה של גזע המוח. עבור קואורדינטות גחוניות ורוסטרליות, נקודת הכניסה של גזע המוח AP תהיה קאודלית יותר ביחס לקואורדינטות AP של המטרה במישור הסטנדרטי.</li>
			<li>ML: גזור קואורדינטות מטרה מאטלס ייחוס סטריאוטקסי סטנדרטי או מסדרת רקמות שנחתכו במישור הרוחבי. הקואורדינטות יהיו יחסית לקו האמצע המוצג באופן חזותי ברמת AP היעד.</li>
			<li>DV: אומדן קואורדינטות ביחס לפני השטח של גזע המוח בנקודת המטרה AP ו- ML. התאם את ה- DV כדי להסביר את האנטרופלקסיה של גזע המוח. עבור קואורדינטות גחוניות ורוסטרליות, קואורדינטות ה- DV יהיו גדולות יותר מהמרחק מהמשטח הגבי של גזע המוח במישור הסטנדרטי.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. הזרקת המטרה
<ol><li>הורידו את הפיפטה או המזרק אל המטרה באמצעות הזרוע הסטריאוטקסית והזריקו תמיסה כמו בגישות סטריאוטקסיות סטנדרטיות. השאר במקום למשך 1-5 דקות לאחר ההזרקה, כדי להימנע ממסלול מחט בעת שימוש בנפחים בין 3-50 nL. לאחר מכן, הרימו את הפיפטה או המזרק באמצעות הזרוע הסטריאוטקסית.</li>
	<li>חזור על שלב 8.1. עבור מטרות מרובות.</li>
</ol>9. סגירת השדה הכירורגי
<ol><li>הסר את הווים בזהירות משדה הניתוח. שרירי הלונגוס קאפיטיס הזוגיים ייפלו בחזרה לתנוחה נייטרלית, ויכסו באופן מלא את הציסטרנה מגנה. אין לסגור את שריר הטרפז ואת דורה מאטר בקו האמצע מכיוון שהם שבירים מכדי להחזיק תפרים.</li>
	<li>סגור את העור עם שלושה תפרים ניילון או פוליפרופילן (5-0 או 6-0).</li>
</ol>10. טיפול לאחר הניתוח
<ol><li>כבה את האיזופלורן והסר את העכבר מהמסגרת הסטריאוטקסית. מניחים את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום ומתבוננים עד שהוא מתעורר וזז.</li>
	<li>עקוב אחר מצב הבריאות, המשקל והתפרים בימים שלאחר הניתוח 1-3. הסר תפרים ביום 10 אם עדיין לא הוסרו.</li>
</ol>

<ol><li>JoVE. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Stereotaxic+Surgery%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+Science+Education+Database%22%5BJournal%5D)">Rodent Stereotaxic Surgery.</a> JoVE Science Education Database. , Neuroscience (2021).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. (2001).</li>
<li>Lein, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+atlas+of+gene+expression+in+the+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genome-wide atlas of gene expression in the adult mouse brain.</a> Nature. 445 (7124), 168-176 (2007).</li>
<li>Rangarajan, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+in+vivo+assessment+of+targeting+accuracy+of+stereotactic+brain+surgery+in+experimental+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Image-based in vivo assessment of targeting accuracy of stereotactic brain surgery in experimental rodent models.</a> Scientific Reports. 6 (1), 38058(2016).</li>
<li>Blasiak, T., Czubak, W., Ignaciak, A., Lewandowski, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+detection+of+the+bregma+point+on+the+rat+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A new approach to detection of the bregma point on the rat skull.</a> Journal of Neuroscience Methods. 185 (2), 199-203 (2010).</li>
<li>Popesko, P., Rajtova, V., Horak, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPopesko%2C+P+%22A+Colour+Atlas+of+the+Anatomy+of+Small+Laboratory+Animals%2C+Volume+2%3A+Rat%2C+Mouse+and+Golden+Hamster%22">A Colour Atlas of the Anatomy of Small Laboratory Animals, Volume 2: Rat, Mouse and Golden Hamster</a>. 2, Wolfe Publishing Ltd. (1992).</li>
<li>Allen Mouse Brain Atlas. Allen Institute for Brain Science. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://mouse.brain-map.org/experiment/thumbnails/100042147?image_type=atlas">https://mouse.brain-map.org/experiment/thumbnails/100042147?image_type=atlas</a> (2004).</li>
<li>Vanderhorst, V. G. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+retroambiguus-spinal+pathway+in+the+mouse%3A+Localization%2C+gender+differences%2C+and+effects+of+estrogen+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Nucleus retroambiguus-spinal pathway in the mouse: Localization, gender differences, and effects of estrogen treatment.</a> The Journal of Comparative Neurology. 488 (2), 180-200 (2005).</li>
<li>Yokota, S., Kaur, S., VanderHorst, V. G., Saper, C. B., Chamberlin, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory-related+outputs+of+glutamatergic%2C+hypercapnia-responsive+parabrachial+neurons+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Respiratory-related outputs of glutamatergic, hypercapnia-responsive parabrachial neurons in mice.</a> Journal of Comparative Neurology. 523 (6), 907-920 (2015).</li>
<li>Anselmi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonographic+anatomy+of+the+atlanto-occipital+region+and+ultrasound-guided+cerebrospinal+fluid+collection+in+rabbits+%28Oryctolagus+cuniculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Radiology+%26+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Ultrasonographic anatomy of the atlanto-occipital region and ultrasound-guided cerebrospinal fluid collection in rabbits (Oryctolagus cuniculus).</a> Veterinary Radiology & Ultrasound. 59 (2), 188-197 (2018).</li>
<li>Herbert, H., Moga, M. M., Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connections+of+the+parabrachial+nucleus+with+the+nucleus+of+the+solitary+tract+and+the+medullary+reticular+formation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Connections of the parabrachial nucleus with the nucleus of the solitary tract and the medullary reticular formation in the rat.</a> The Journal of Comparative Neurology. 293 (4), 540-580 (1990).</li>
<li>Vanderhorst, V. G., Holstege, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caudal+medullary+pathways+to+lumbosacral+motoneuronal+cell+groups+in+the+cat%3A+evidence+for+direct+projections+possibly+representing+the+final+common+pathway+for+lordosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Caudal medullary pathways to lumbosacral motoneuronal cell groups in the cat: evidence for direct projections possibly representing the final common pathway for lordosis.</a> The Journal of Comparative Neurology. 359 (3), 457-475 (1995).</li>
<li>Vanderhorst, V. G., Terasawa, E., Ralston, H. J., Holstege, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+projections+from+the+nucleus+retroambiguus+to+motoneurons+supplying+the+abdominal+wall%2C+axial%2C+hindlimb%2C+and+pelvic+floor+muscles+in+the+female+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic projections from the nucleus retroambiguus to motoneurons supplying the abdominal wall, axial, hindlimb, and pelvic floor muscles in the female rhesus monkey.</a> The Journal of Comparative Neurology. 424 (2), 233-250 (2000).</li>
<li>Wall, N. R., Wickersham, I. R., Cetin, A., De La Parra, M., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+circuit+tracing+in+vivo+through+Cre-dependent+targeting+and+complementation+of+modified+rabies+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic circuit tracing in vivo through Cre-dependent targeting and complementation of modified rabies virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21848-21853 (2010).</li>
<li>Krashes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+reversible+activation+of+AgRP+neurons+drives+feeding+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Rapid, reversible activation of AgRP neurons drives feeding behavior in mice.</a> The Journal of Clinical Investigation. 121 (4), 1424-1428 (2011).</li>
<li>Ganchrow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+of+the+solitary+tract+in+the+C57BL%2F6J+mouse%3A+Subnuclear+parcellation%2C+chorda+tympani+nerve+projections%2C+and+brainstem+connections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Nucleus of the solitary tract in the C57BL/6J mouse: Subnuclear parcellation, chorda tympani nerve projections, and brainstem connections.</a> The Journal of Comparative Neurology. 522 (7), 1565-1596 (2014).</li>
<li>Ung, K., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber-optic+implantation+for+chronic+optogenetic+stimulation+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Fiber-optic implantation for chronic optogenetic stimulation of brain tissue.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (68), e50004(2012).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

ניתוח סטריאוטקסי סטנדרטי מסתמך בדרך כלל על ציוני דרך של גולגולת כדי לחשב את הקואורדינטות של אתרי המטרה ב- CNS1. לאחר מכן ניגשים לאתרי המטרה דרך חורי בור שנקדחים דרך הגולגולת1. שיטה זו אינה אידיאלית לגזע המוח הקאודלי, שכן אתרי המטרה ממוקמים הרחק מציוני הדרך של הגולגולת במישורים האנטרופוסטריים והדורסו-בנטרליים2 וכאשר האנטומיה של הגולגולת והשרירים העליונים הופכים את הגישה למאתגרת6 (איור 1Bi)...

ניתוח סטריאוטקסי סטנדרטי לאיתור אתרי מוח בעכברים1 כולל בדרך כלל קיבוע של הגולגולת באמצעות סט של מוטות אוזניים ומוט פה. הקואורדינטות נאמדות לאחר מכן על סמך אטלסים ייחוס 2,3, ונקודות ציון של הגולגולת, כלומר, bregma (הנקודה שבה התפרים של העצמות המצחיות והקודקודיות מתאחדות) או למבדה (הנקודה שבה התפרים של העצמות הקודקודיות והאוציפיטליות מתאחדות; איור 1א,ב). דרך חור בור לתוך הגולגולת שמעל המטרה המשוערת, ניתן להגיע לאזור המטרה, בין אם לצורך אספקת מיקרו-אינטגרציות או מכשור עם צינוריות או סיבים אופטיים. בשל שונות באנטומיה של תפרים אלה וטעויות בלוקליזציה של bregma או lambda 4,5, המיקום של נקודות אפס ביחס למוח משתנה מחיה לחיה. בעוד שטעויות קטנות במיקוד, הנובעות מהשתנות זו, אינן מהוות בעיה עבור מטרות גדולות או קרובות, השפעתן גדולה יותר עבור אזורי עניין קטנים יותר המרוחקים מנקודות האפס במישורים האנטרופוסטריוריים או הגביים ו/או כאשר חוקרים בעלי חיים בגדלים משתנים בשל גיל, מתח ו/או מין. ישנם מספר אתגרים נוספים שהם ייחודיים למדולה אובלונגטה ולחוט הצוואר העליון. ראשית, שינויים קטנים בקואורדינטות אנטרופוסטריות קשורים לשינויים משמעותיים בקואורדינטות הגב-ונטרליות ביחס לדורה, בשל המיקום והצורה של המוח הקטן (איור 1Bi)2,6,7. שנית, חוט הצוואר העליון אינו כלול בתוך הגולגולת2. שלישית, תנוחת ההטיה של העצם העורפית והשכבה העליונה של שרירי הצוואר2 הופכת את הגישה הסטריאוטקסית הסטנדרטית למאתגרת עוד יותר עבור מבנים הממוקמים בסמוך למעבר בין גזע המוח לחוט השדרה (איור 1Bi). לבסוף, מטרות רבות של עניין בגזע המוח הקאודלי ובחובר צוואר הרחם הן קטנות2, הדורשות זריקות מדויקות וניתנות לשחזור 8,9.
גישה חלופית באמצעות הציסטרנה מגנה עוקפת את הבעיות הללו. הציסטרנה מגנה היא חלל גדול המשתרע מהעצם העורפית ועד האטלס (איור 1A, כלומר עצם החוליה השנייה)10. הוא מלא בנוזל שדרתי ומכוסה על ידי דורה מאטר10. רווח זה בין העצם העורפית לבין האטלס נפתח בעת אנטרופלקסינג של הראש. ניתן לגשת אליו על ידי ניווט בין הבטן הזוגית העליונה של שריר הלונגוס קפיטיס, וחושף את פני השטח הגביים של גזע המוח הקאודלי. לאחר מכן ניתן להתמקד באזורים מעניינים על סמך ציוני הדרך של אזורים אלה עצמם אם הם ממוקמים בסמוך לפני השטח הגביים; או על ידי שימוש ב-obex, הנקודה שבה התעלה המרכזית נפתחת לחדר IV, כנקודת אפס לקואורדינטות כדי להגיע למבנים עמוקים יותר. גישה זו שימשה בהצלחה במגוון מינים, כולל חולדה11, חתול12, עכבר 8,9, ופרימט לא אנושי13 כדי להתמקד בקבוצת הנשימה הגחונית, היווצרות רשתית מדיאלית מדולרית, גרעין דרכי הבודדות, אזור פוסטרמה או גרעין היפוגלוסלי. עם זאת, גישה זו אינה נמצאת בשימוש נרחב מכיוון שהיא דורשת ידע באנטומיה, ערכת כלים מיוחדת וכישורים כירורגיים מתקדמים יותר בהשוואה לגישה הסטריאוטקסית הסטנדרטית.
כאן אנו מתארים גישה כירורגית שלב אחר שלב כדי להגיע לגזע המוח ולחוט הצוואר העליון דרך הציסטרנה מגנה, לדמיין ציוני דרך, להגדיר את נקודת האפס (איור 2), ולהעריך ולמטב את קואורדינטות המטרה להעברה סטריאוטקסית של מיקרו-איניג'מנטים לתוך גזע המוח הבדיד ואזורי העניין של חוט השדרה (איור 3). לאחר מכן נדון ביתרונות ובחסרונות הקשורים לגישה זו.

<table><tbody><tr><td>פד אלכוהול</td><td>Med-Vet International</td><td>מק"ט:</td><td>MDS090735Z תכשיר עור למניעת זיהום באתר הניתוח</td></tr><tr><td>מלקחיים זוויתיים, Dumont #5/45</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td>רק כדי לתפוס דורה</td></tr><tr><td>בטדין פד</td><td>Med-Vet International</td><td>מק"ט:PVP-PAD</td><td>הכנת עור למניעת זיהום באתר הניתוח</td></tr><tr><td>תת-יחידה רעלן כולרה-b, Alexa Fluor 488/594 מצומד</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>488: C34775, 594: C22842</td><td>Fluorescent</td></tr><tr><td>tracer Clippers</td><td></td><td>Wahl דגם MC3, 28915-10</td><td>לגילוח פרווה באתר הכירורגי</td></tr><tr><td>מחזיק אלקטרודות עם מהדק פינתי</td><td>Kopf</td><td>1770</td><td>להחזקת פיפטה מזכוכית</td></tr><tr><td>מד זרימה</td><td>מכשירי גילמונט</td><td>דגם # 65 מ"מ</td><td>לוויסות זרימת איזופלורן וחמצן לעכבר במישור</td></tr> <tr><td>הכירורגימיקרוספירות פלואורסצנטיות, פוליסטירן</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>F13080</td> כרית חימום <td>עוקב פלואורסצנטי</td></tr><tr><td></td><td>Stoelting</td><td>53800M</td><td>ויסות תרמי</td></tr><tr><td>תא אינדוקציה עם ערכת חיבור יציאה</td><td>תא 93805107 92800131 Midmark Inc</td><td></td><td>המספק הרדמה ראשונית</td></tr><tr><td>מזרק אינסולין</td><td>Exelint International</td><td>26028</td><td>למתן מי מלח ומשכך כאבים</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td><td>מק"ט:RXISO-250</td><td>חומר הרדמה משאף</td></tr><tr><td>Isoflurane Matrix VIP 3000 וופורייזר</td><td>Midmark Inc</td><td>91305430</td><td>מכשיר למתן הרדמה משאיפה</td></tr><tr><td>מלקחיים למינקטומיה, Dumont #2</td><td>FST</td><td>11223-20</td><td>רק לניקוי</td></tr><tr><td>אוויר רפואי dura, דחוס</td><td>Linde</td><td>UN 1002</td><td>בשימוש עם ממריץ & PicoPump לאספקת אוויר להזרקת תמיסה מדויקת</td></tr><tr><td>Meloxicam SR</td><td>Zoo Pharm LLC</td><td>Lot # MSR2-211201</td><td>משכך כאבים</td></tr><tr><td>Microhematocrit זכוכית בורוסיליקט צינור נימי מכויל מראש</td><td>Globe Scientific Inc</td><td>51628</td><td>להעברת חומר לקואורדינטות ייעודיות</td></tr><tr><td>מתאם עכבר</td><td>Stoelting</td><td>0051625</td><td>&nbsp; התאמת מסגרת סטריאוטקסית של חולדה לניתוח עכבר</td></tr><tr><td>מחזיק מחט, סטודנט Halsted- המוסטטים נגד יתושים</td><td>FST</td><td>91308-12</td><td>לתפירת</td></tr><tr><td>ווסת חמצן</td><td>מוצרי תמיכה בחיים</td><td>S/N 909328, הרבה 092109</td><td>לווסת את רמות החמצן ממיכל חמצן</td></tr><tr><td>מיכל חמצן,</td><td>לינדה</td> דחוס <td>USP UN 1072</td><td>מסופק יחד עם הרדמה איזופלורן</td></tr><tr><td>כרטיס פלסטיק</td><td>לא ישים</td><td>לא ישים</td><td>כל כרטיס פלסטיק מוצק, חתוך כך שיתאים למסגרת הסטריאוטקטית (למשל תעודת זהות)</td></tr> <tr><td>PicoPump פנאומטי (או דומה)</td> <td>World Precision Instruments (WPI)</td> <td>SYS-PV820</td><td>להזרקת תמיסה מדויקת</td></tr><tr><td>מלוחים, ציוד רפואי סטרילי</td><td>בצד ההר</td><td>H04888-10</td><td>להחלפת נוזלי גוף שאבדו במהלך</td></tr><tr><td>הניתוח ידית אזמל, #3</td><td>FST</td><td>10003-12</td><td>ל להחזיק</td></tr><tr><td>אזמל מספריים, Wagner</td><td>FST</td><td>14070-12</td><td>לחיתוך תפר פוליפרופילן</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים, Vannas 2.5 מ"מ עם קופסה נלווית</td><td>FST</td><td>15002-08</td><td>מספריים רק לפתיחת דורה, קופסה להרמת הגוף</td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור סטריאוטקטי</td><td>Kopf</td><td>1760-61</td><td>מחובר למחזיק האלקטרודה כדי להתאים את המיקום על סמך קואורדינטות</td></tr><tr><td>מכלול מסגרת 'U' סטריאוטקטית וצלחת בסיס תוך-תאית</td><td>Kopf</td><td>1730-B, 1711</td><td>מסגרת לניתוח</td></tr><tr><td>אפליקטורים סטריליים עם קצה כותנה</td><td>פוריטן</td><td>25-806 10WC</td><td>סופג דם משדה כירורגי</td></tr><tr><td>וילונות סטריליים ללא fenestrated</td><td>Henry Schein</td><td>9004686</td><td>לשדה כירורגי סטרילי</td></tr><tr><td>משחה אופטית סטרילית</td><td>Puralube</td><td>P1490</td><td>עיניים חומר סיכה</td></tr><tr><td>ממריץ & Tubing</td><td>Grass Medical Instruments</td><td>S44</td><td>כדי לספק אוויר מבוקר מראש להזרקת פתרון מדויק</td></tr><tr><td>להב כירורגי #10</td><td>Med-Vet International</td><td>מק"ט: 10SS</td><td>לחתך בעור</td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים, עדין במיוחד Graefe</td><td>FST</td><td>11153-10</td><td>להחזקת העור</td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות</td><td>Med-Vet International</td><td>MSG2280Z</td><td>לניתוחים</td></tr> <tr><td>אסקפטייםמיקרוסקופ כירורגי</td><td>Leica</td><td>דגם M320/F12</td><td>להגדלה של 5X-40X של אתר הניתוח</td></tr><tr><td>תפר 5-0 פוליפרופילן</td><td>Oasis</td><td>MV-8661</td><td>לסגירת העור</td></tr><tr><td>Tegaderm</td><td>3M</td><td>3M ID 70200749250</td><td>מספק מחסום סטרילי</td></tr><tr><td>מהדק אוניברסלי ועמוד מעמד</td><td>Kopf</td><td>1725</td><td>מחובר למסגרת U סטריאוטקטית וללוחית בסיס תוך-תאית</td></tr><tr><td>וו פצע עם הרטמן המוסטטים</td><td>FST</td><td>18200-09, 13003-10</td><td>להפרדת שרירים ומתן חלון כירורגי</td></tr></tbody></table>

גישה כירורגית סטריאוטקסית למיקרו-איניג'קט גזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ציסטרנה מגנה בעכברים

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

ניתוח סטריאוטקסי למיקוד אתרי מוח בעכברים מונחה בדרך כלל על ידי ציוני דרך של גולגולת. לאחר מכן מתקבלת הגישה באמצעות חורי בור שנקדחו דרך הגולגולת. גישה סטנדרטית זו יכולה להיות מאתגרת עבור מטרות בגזע המוח הקאודלי ובחוט הצוואר העליון בשל אתגרים אנטומיים ספציפיים מכיוון שאתרים אלה מרוחקים מציוני דרך של גולגולת, מה שמוביל לחוסר דיוק. כאן אנו מתארים גישה סטריאוטקסית חלופית באמצעות ה-cisterna magna ששימשה כדי להתמקד באזורים בדידים בעלי עניין בגזע המוח הקאודלי ובחוט הצוואר העליון. הציסטרנה מגנה משתרעת מהעצם העורפית ועד האטלס (כלומר, עצם החוליה השנייה), מלאה בנוזל מוחי, ומכוסה על ידי דורה מאטר. גישה זו מספקת נתיב גישה ניתן לשחזור למבנים נבחרים של מערכת העצבים המרכזית (CNS) שאחרת קשה להגיע אליהם בשל מחסומים אנטומיים. יתר על כן, הוא מאפשר הדמיה ישירה של ציוני דרך בגזע המוח בסמיכות לאתרי המטרה, מה שמגדיל את הדיוק בעת אספקת נפחי הזרקה קטנים לאזורי עניין מוגבלים בגזע המוח הקאודלי ובחובר הצוואר העליון. לבסוף, גישה זו מספקת הזדמנות להימנע המוח הקטן, אשר יכול להיות חשוב עבור מחקרים מוטוריים וסנסו-מוטוריים.

גישת ה-cisterna magna מאפשרת למקד את גזע המוח הקאודלי ואת המבנים של חוטי הצוואר העליונים שקשה להגיע אליהם בדרך אחרת באמצעות גישות סטריאוטקסיות סטנדרטיות או שהם מועדים למיקוד לא עקבי. הניתוח כדי להגיע לציסטרנה מגנה דורש חתכים של העור, שכבה דקה של שריר טרפז, ופתיחת הדורה מאטר ולכן הוא נסבל היטב על ידי עכברים. היא יעילה במיוחד ופחות פולשנית כאשר היא מתמקדת באתרים מרובים (מפוזרים לאורך או דו-צדדיים), שכן היא אינה דורשת קידוח של חורי בור מרובים כמו בגישות סטריאוטקסיות סטנדרטיות. בעכברים, יש לנו מבנים ממוקדים באופן שג...

ניתוח סטריאוטקסי למיקוד אתרי מוח בעכברים כולל בדרך כלל גישה דרך עצמות הגולגולת ומונחה על ידי ציוני דרך בגולגולת. כאן אנו מתווים גישה סטריאוטקסית חלופית כדי להתמקד בגזע המוח הקאודלי ובחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ה-cisterna magna המסתמך על הדמיה ישירה של ציוני דרך של גזע המוח.

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

פרוטוקול זה מספק קווים מנחים שלב אחר שלב לנתיב גישה הניתן לשחזור לאזורי עניין בגזע המוח הקאודלי ובחוט הצוואר העליון. טכניקה זו מגבירה את הדיוק בעת אספקת נפחי הזרקה קטנים לאזורי עניין מוגבלים בגזע המוח הקאודלי ובחוט הצוואר העליון. טכניקה זו הייתה וניתן ליישם על מודלים אחרים של בעלי חיים.ד"ר ורוניק ונדרהורסט, פרופסור לנוירולוגיה והחוקרת הראשית של מעבדת ואנדרהורסט, תדגים את ההליך הזה. ודא שזרימת החמצן מופנית לחרוט האף. הזיזו את העכבר למסגרת הסטריאוטקסית והניחו את האף בחרוט אף גמיש.מקם את העכבר במסגרת הסטריאוטקסית באמצעות סרגלי אוזניים בלבד. מניחים חומר סיכה על העיניים. Anteroflex את ראש העכבר לזווית של 90 מעלות על ידי הנחיה ידנית של האף.כדי לאבטח מיקום זה, הניחו מחסום פלסטיק בין עמודי מוט האוזן של מתאם העכבר במקביל לעמודים כאשר החלק השטוח של הגולגולת משמש כהפניה. מניחים את כרית החימום מתחת לעכבר ומוודאים שהצוואר ושאר הגוף ממוקמים במקביל לשולחן על ידי הגבהת הגוף עם קופסה קטנה. מניחים וילון מתחת לגוף.הזריקו מנה אחת של ארבעה מיליגרם לקילוגרם לקילוגרם Meloxicam בשחרור איטי תת עורית בנפח של שני מיקרוליטרים לגרם של משקל הגוף. נקו את אתר החתך הניתוחי תחילה עם כרית הכנה של 70% אלכוהול, אחר כך עם כרית הכנה של בטאין, ואז שוב עם כרית הכנה לאלכוהול ותנו לו להתייבש. יש לחטא את הידיים ולשים כפפות סטריליות, ולאחר מכן להניח וילון באתר הניתוח.ודא שהעכבר מורדם כראוי על ידי צביטה של הבהונות או בדיקת רפלקס הקרנית. הפחיתו את האיזופלורן כדי לשמור על הרמות של 2.0. בצע חתך של סנטימטר אחד עד 1.2 ס"מ עם להב כירורגי של 10 מקצה העצם העורפית לכיוון הכתפיים בתנועה חלקה אחת.בזהירות לבצע חתך בקו האמצע של שריר הטרפז, וחושף את שרירי הלוגוס קפיטיס הזוגיים. מניחים את שני הווים החוזרים בין שרירי הלוגוס קאפיטיס הזוגיים, אחד מכוון שמאלה והשני ימינה. השתמש במלקחיים הלמינקטומיים הבוטים כדי להפריד בין הבטן השמאלית והימנית של שריר הלוגוס קפיטיס הזוגי, החל מהאוקסיפוט שבו קו האמצע נראה בקלות.הנחה את המלקחיים הבוטים על פני עצם האוקסיפוט בקו האמצע עד למקום שבו הוא פוגש את הדורה מאטר הציסטרינלית ואז המשך על פני הדורה מאטר אל האטלס. מקם מחדש את הנסיגים והתאים את המתח על ידי מיקום מחדש של ההמוסטאטים. השתמש במלקחיים למינכטומיה קהה כדי להפריד את השרירים עוד יותר בקו האמצע כדי לקבל תצוגה טובה של גזע המוח והמוח הקטן.חזור על ההליך הנ"ל לפי הצורך עד שהמוח הקטן וגזע המוח יופיעו מתחת לדורה. באמצעות מלקחיים למינכטומיה קהים, נקו את הדורה מהחוטים הקטנים של רקמת החיבור על ידי הזזת המלקחיים מקו האמצע בכיוון רוחבי עד שתהיה תצוגה ברורה של גזע המוח, תוך יצירת מרחב רוחבי יותר. צפו במשטח הגבי של גזע המוח עם ציוני דרך מפורטים דרך הדורה הפתוחה.השתמש במלקחיים הזוויתיים כדי לתפוס את הדורה המשתרעת מהעצם העורפית ועד האטלס, ולאחר מכן השתמש במספריים הקפיץ כדי ליצור פתח קטן של כ-0.5 עד 1.5 מילימטרים בדורה. לאחר פתיחת הדורה, יש לנקז עודפי נוזל מוחי עם קצה Q סטרילי. האובקס, הנקודה שבה התעלה המרכזית נפתחת לחדר הרביעי, היא נקודת האפס הקדמית-אחורית והמדיולטרלית הסטנדרטית.מקם את הפיפטה או המזרק למטרה באמצעות הזרוע הסטריאוטקסית. הורידו את הזרוע של הגב אל המשטח הגבי שנוצר מנקודת האפס הגבית. לאחר מכן הורידו את הפיפטה לגזע המוח והזריקו את התמיסה.השאירו את המחט במקומה למשך דקה עד חמש דקות לאחר ההזרקה כדי להימנע ממסלול מחט בעת שימוש בנפחים שבין שלושה ל-50 ננו-ליטרים. לאחר מכן הרימו את הפיפטה או המזרק באמצעות הזרוע הסטריאוטקסית וחזור על כך עבור מטרות מרובות. הסר את הווים בזהירות משדה הניתוח.שרירי הלוגוס קאפיטיס הזוגיים ייפלו בחזרה לתנוחה נייטרלית המכסה באופן מלא את הציסטרנה מגנה. אין לסגור את שריר הטרפז ואת דורה מאטר בקו האמצע מכיוון שהם שבירים מכדי להחזיק תפרים. סגור את העור עם 3 תפרים ניילון או פוליפרופילן.גישת cisterna magna מאפשרת למקד את גזע המוח הקאודלי ואת המבנים של חוטי הצוואר העליונים שקשה להגיע אליהם בדרך אחרת באמצעות גישות סטריאוטקסיות סטנדרטיות או שהם מועדים למיקוד לא עקבי. בעכברים, מבנים כגון הגרעין ההיפוגלוסלי, קבוצת הנשימה הגחונית והיווצרות רשתית סמוכה בגזע המוח הקאודלי הותקפו באופן שגרתי באמצעות גישת cisterna magna כפי שהודגם כאן עבור הגרעין ההיפוגלוסלי והמדולה הגחונית. על מנת לקבוע את הדיוק של גישת הציסטרנה מגנה לעומת הגישה הסטנדרטית, נמדד המרחק בין אתרי המטרה המיועדים והממשיים במישורים האנטרופוסטריים, הבינוניים והדורסו-ונטרליים לאזורי הגחון והגב.התוצאות מראות טעויות קטנות משמעותית במישורים האנטרופוסטריים, הבינוניים והדורסו-וונטרליים בהשוואה לגישה הסטנדרטית, מה שמדגיש את הדיוק המשופר של גישת cisterna magna עבור מטרות אלה. כאשר מנסים פרוטוקול זה, חשוב לוודא כי anteroflexion של הראש ואת הגובה של הגוף מבוצעת כמתואר. לאחר מכן, חשוב לזהות ציוני דרך מרכזיים לפני מניפולציה של השריר או הדורה מאטר.אם ציוני דרך אלה לא יוכרו או אם הם אבדו, יהיה מאתגר להישאר מכוונים ולבצע את ההליך כמתוכנן. טכניקה זו סייעה להתמודד עם שאלות מושגיות הקשורות לארגון האנטומי התפקודי בתוך גזע המוח הקאודל וחבל הצוואר העליון.

stereotaxic-surgical-approach-to-microinject-caudal-brainstem-upper

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מקור: Joshi, K., et al. גישה כירורגית סטריאוטקסית להזרקת מיקרו-גזע המוח הזנבי וחוט השדרה הצווארי העליון דרך ה-Cisterna Magna בעכברים. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את הגישה הסטריאוטקסית של ציסטרנה מגנה לאספקה ממוקדת לגזע המוח ולחוט השדרה העליון. על ידי גישה למאגר המים המלא בנוזל השדרה, גישה זו מאפשרת הזרקות מדויקות לאזורים שקשה להגיע אליהם בשיטות סטריאוטקסיות סטנדרטיות.

גישת Stereotaxic Cisterna Magna לאספקה טיפולית במודל עכבר

מקור: Porlan, E., et al. שינוי גנטי יציב ויעיל של תאים בעכבר הבוגר V-SVZ לניתוח השפעות אוטונומיות ולא אוטונומיות של תאי גזע עצביים. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים שינוי גנטי יציב של תאי גזע עצביים (NSCs) באזור הגחון-תת-חדרי (V-SVZ) באמצעות הזרקה סטריאוטקסית של גן טיפולי נושא וירוס במודל עכבר. הנגיף חודר לתאי גזע, עובר שעתוק הפוך, משתלב בגנום ומאפשר שינוי גנטי יציב ויעיל ליישומים נוירותרפיים.

הזרקה סטריאוטקסית של וירוסים לשינוי גנטי יציב במודל עכבר

מקור: Zamboni, M., et al., אינדוקציה של שינוי תאי לפטומנינגיאלי באמצעות הזרקה תוך-ציסטרנלית. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את ההליך של העברת תרופה משרה לבור המים של עכבר מורדם. ההזרקה גורמת באופן סלקטיבי לביטוי סמן פלואורסצנטי בתאי פני המוח הנגישים באמצעות נוזל מוחי שדרתי, שאושר על ידי הדמיה פלואורסצנטית.

מתן תרופות ממוקד במודל עכבר באמצעות הזרקת Cisterna Magna

מקור: Xavier, A. L. R., et al. השתלת צינורית בבור המים של מכרסמים. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים את הליך השתלת צינורית בבור המים של עכבר מורדם. הטכניקה כוללת הנחיית צינורית המותקנת על מחט דרך הדורה לתוך הבור המשולש ההפוך ואבטחתה לאספקה ממוקדת לנוזל השדרה.

השתלת צינורית לתוך Cisterna Magna במודל עכבר

בסרטון זה אנו מתארים את ההליך להעברת תאים סרטניים שמקורם בבני אדם לתוך עצם העצם במוחו של עכבר. מודל העכבר האורתוטופי יכול לשמש לחקר התפשטות גרורתית של סרטן לקרומי המוח הגולגולתיים.

הזרקת Cisterna Magna כירורגית: שיטה למתן תאי גידול ישירות למערכת העצבים המרכזית של מודל Murine

מקור: Fricano-Kugler, C. J., et al. תכנון, אריזה ואספקה של CRISPR רטרו ולנטי-וירוסים עם טיטר גבוה באמצעות הזרקה סטריאוטקסית. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הזרקה ויראלית סטריאוטקסית לעריכה מדויקת של גנים עצביים במוח העכבר. הפרוטוקול מבטיח העברת וירוסים מדויקת לבליטה המשוננת, ומאפשר תיוג פלואורסצנטי ונוקאאוט גנים בתיווך CRISPR לחקור מעגלים עצביים, תפקוד גנים ומנגנוני מחלה in vivo.

הזרקה ויראלית סטריאוטקסית לעריכה גנטית עצבית ממוקדת במוח העכבר

וקטורים ויראליים לאפשר למניפולצית גן ממוקדת. אנחנו מדגימים את שיטה לביטוי גנים מותנים או אבלציה בחוט שדרת העכבר, באמצעות הזרקת stereotaxic של וקטור ויראלי לקרן האחורית, אתר בולט של קשר הסינפטי בין afferents החושיים הראשוניים ועצב של מערכת העצבים המרכזית.

הזרקת Stereotaxic של וקטור ויראלי למניפולציה גנטית מותנית בחוט השדרה המאוס

כאן נתאר פרוטוקול לבצע cisterna מגנה תעלות (CMc), דרך פולשנית כדי לספק קליעים נותבים, מצעים, מולקולות איתות לתוך נוזל מוחי שדרתי (CSF). CMc בשילוב עם שיטות הדמיה שונות, מאפשרת המערכת glymphatic CSF dynamics הערכה, וכן משלוח המוח ברוחב של תרכובות שונות.

השרשה בצינורית לתוך המלון Cisterna של מכרסמים

הדמיית סידן in vivo של Miniscope in vivo היא טכניקה רבת עוצמה לחקר דינמיקה עצבית ומיקרו-מעגלים בעכברים המתנהגים בחופשיות. פרוטוקול זה מתאר ביצוע ניתוחי מוח להשגת הדמיית סידן in vivo טובה באמצעות מיניסקופ.

הזרקה נגיפית סטריאוטקסית והשתלת עדשה בעלת אינדקס שיפוע להדמיית סידן עמוקה במוח In Vivo

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אסטרטגיה מעשית לזרז את שלב האימות של קואורדינטות הזרקה סטריאוטקסיות לפני ביצוע מעקב נגיפי באמצעות צבעים ומקטעים קפואים.

אימות ראשוני של קואורדינטות הזרקה סטריאוטקסיות באמצעות קריוסקציה

הפרוטוקול מתאר שיטה להזרקת תאי גידול דרך מסלול הניקוב המלעורי לתוך ציסטרנה מגנה הגורמת בעוצמה לגרורות לפטומנינגיאליות בעכברים, ומפחיתה את הטראומה ואת עומס הגידול החוץ-גולגולתי.

מודל הזרקת Cisterna Magna זעיר פולשני למחקרי גרורות לפטומנינגיאליות בעכברים

למדו גישה כירורגית סטריאוטקסית לגזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון בעכברים דרך הציסטרנה מגנה. שיטה זו מגבירה דיוק בהזרקות ננוליטריות ליעדים מוגבלים ומאפשרת מחקרי נוירואנטומיה מתקדמים.

גישה כירורגית סטריאוטקסית למיקרו-איניג'קט גזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ציסטרנה מגנה בעכברים

גלה סרטונים נוספים