בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות על מצב יעיל או מוטיבציה של בעלי חיים בתנאי כאב שונים. זהו צעד חשוב בשיפור התרגום של המחקר הפרה-קליני. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מהירה וקלה יחסית לביצוע, אך עדיין מעריכה מניעים מורכבים המשפיעים על התנהגות הקשורה לכאב.

התחילו בבניית הדפנות, הרצפה והתקרה של החדר הראשון באמצעות אקריליק לבן אטום בעובי שלושה מילימטרים. עבור הקיר הפונה לחזית, השתמש באקריליק שקוף בעובי שלושה מילימטרים. חברו את המכסה של החדר עם ציר, כך שניתן יהיה להכניס עכברים בקלות לתוכה ולאחזר אותם מהתא.

לאחר מכן חברו סרט דיודה פולט אור דבק עצמי למשטח הפנימי של המכסה כדי לספק תאורה של כ-4, 800 לוקס. החלק יריעת אקריליק אטומה לתוך ומחוץ למקומה כדי לסגור את תא אחד משאר מכשיר ה- MCA. לאחר מכן, בנו תא לא מואר באורך 270 מ"מ, תא הבדיקה MCA, תוך שימוש באקריליק אדום כהה שקוף מכל הצדדים עם מכסה צירי למעלה.

לאחר מכן מניחים רשת בגודל 13 על 31 עם שני חורים מילימטרים על רצפת התא שדרכם יכול לבלוט מערך של בדיקות קהות עם קצוות בקוטר 0.5 מילימטר. התאימו את גובה הגשושיות על ידי הצבת יריעות אקריליות נוספות מתחת ללוח הבסיס של הגשושית. באמצעות גישה זו, הגדר את המכשיר בגבהי בדיקה אפס, שניים וחמישה מילימטרים.

כחלופה לסיכות מפה קהות או חומרים דומים, השתמש בקבצי המדפסת התלת-ממדית כדי להדפיס את רצפת החדר השני ואת לוחית הבדיקה עם חומר רחיץ וניתן להתאמה ביולוגית כגון ניילון 12 פלסטיק. לבסוף, בנו תא כהה שלושה באמצעות אקריליק אדום כהה שקוף מכל הצדדים עם מכסה ציר הדומה לתאים אחד ושניים. הניחו אותו בקצה הנגדי של תא אחד כדי שישמש כאזור מילוט חשוך מהגשושיות המכניות בתא השני.

יום אחד לפני תזמון הבדיקה הבסיסית, התאקלמו בעכברים ליחידת ה-MCA למשך 5 עד 15 דקות עם חבריהם לכלוב כדי להקל על חקירה חברתית של המכשיר כולו. יש לוודא כי נוריות ה- LED בתא אחד כבויות, המחסום בין תאים אחד ושניים נשאר פתוח והגששים אינם בולטים דרך רצפת התא השני. לאחר מכן, הגדר מצלמת וידאו המסוגלת להקליט קטעי וידאו של 1080 פיקסלים על חצובה עם מבט פונה הצידה של כל מכשיר ה- MCA.

התאם את שדה הראייה כך שה- MCA ימלא את התמונה המוקלטת. לאחר תחילת ההקלטה, החזיקו לוח מחיק יבש כף יד בתצוגת השדה של המצלמה כדי לתייג את תחילת הסרטון במידע מזהה על ריצת הניסוי של החיה. בהפעלה הראשונה, הגדר את גובה הגשושית לאפס והעביר את העכבר לבדיקה מהכלוב הביתי שלו לתא אחד עם דלת המחסום במקומה.

הפעילו טיימר שנראה לעין בקטעים המוקלטים. לאחר 10 שניות, הפעל את התא נוריות LED אחד. לאחר שהעכבר נמצא בתא המואר במשך 20 שניות, משכו את המחסום בין תאים אחד ושניים.

התבוננו בבעל החיים במשך שתי דקות ומדדו את העיכובים או את זמני השהייה באמצעות שעון עצר בזמן שהבדיקה נמשכת. רשמו את ההשהיה לכניסה הראשונה לתא השני, את ההשהיה לחצות יותר ממחצית הדרך על פני תא שני, את זמן השהייה הכולל בתא השני, את ההשהיה כדי להגיע לתא השלישי ואת זמן השהייה הכולל בכל תא תוך שתי דקות ולהמיר אותם לפרופורציות. לאחר השלמת הבדיקה, החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו.

נקו את תאי ה-MCA עם 70% אתנול ואפשרו לו להתייבש לחלוטין. לאחר הרצת כל העכברים בקבוצה כאשר גובה הבדיקה נקבע לאפס, הכנס יריעה של שלושה מילימטרים של אקריליק מתחת ללוחית הבסיס של הגשושית המכנית וחזור על הריצה עם גובה בדיקה של שני מילימטרים. לאחר הפעלת כל העכברים עם גובה הגשושית המוגדר לשני מילימטרים, הכניסו עוד יריעת אקריליק של שלושה מילימטרים מתחת ללוח הבסיס של הגשושית וחזור על הריצה עם גובה בדיקה של חמישה מילימטרים.

בצעו ניקוי סופי עם חומר חיטוי בסוף הבדיקה. במודל הכאב הדלקתי השלם של פרוינד המושרה על ידי אדג'ובנט, הזרקה מלוחה אינה משנה את חביון הבריחה בהשוואה לנקודת ההתחלה. עכברים שהוזרק להם האדג'ובנט הראו עלייה משמעותית בהשהיית מילוט ארבעה ימים לאחר ההזרקה, אך רק כאשר גובה הגשושית הועלה לחמישה מילימטרים.

ההשהיה המוגברת הזו לא נראתה בעכברים שקיבלו קרפרופן 90 דקות לפני תחילת הבדיקה. מודל הפגיעה העצבית שנחסך של כאב נוירופתי הגדיל משמעותית את ההשהיה כדי לברוח לעומת קו הבסיס כאשר גובה הבדיקה נקבע לחמישה מילימטרים. עלייה זו נמנעה על ידי מתן של בופרנורפין משכך כאבים אופיואידי 90 דקות לפני הבדיקה.

חביון מילוט מוגבר נצפה גם בעכברים שלא עברו סבב בסיסי של בדיקות MCA לפני פגיעה עצבית. ההשהיה המוגברת של הבריחה בעכברים שנחסכו מפגיעה עצבית בחמישה מילימטרים נמנעה על ידי גאבאפנטין שניתן 90 דקות לפני הבדיקה. במודל השבר או היציקה, ההשהיה לברוח מתא אחד עלתה באופן פרופורציונלי לגובה הגשושית לפני הפציעה.

לאחר הפציעה, ההשהיה נותרה ללא שינוי ברמה של אפס מילימטרים, אך עלתה משמעותית בגובה הגשושית של שני מילימטר וחמישה מילימטרים לזכרים ובגובה הגשושית חמישה מילימטרים לנקבות בהשוואה לקו הבסיס. הדבר החשוב ביותר שיש לזכור כאשר מנסים הליך זה הוא לוודא שכל העכברים מורגלים למכשיר MCA, ולשמור על אקראיות וסנוור נאותים לאורך כל המחקר. ניתן להשתמש בשיטה זו לצד מדדים אחרים של רגישות לכאב, כולל פון פריי או העדפת מקום מותנית.