הערכה של תגובת גזע המוח השמיעתי באבקועים עופות

פרוטוקול זה משלב מתודולוגיה רלוונטית מבחינה קלינית עם מודל מבוסס היטב של מחקר בבעלי חיים. זה יעזור לענות על שאלות על התפתחות שמיעתית ועידון ושינויים תפקודיים בשמיעה בעקבות מניפולציה גנטית. טכניקה זו אינה פולשנית, ולכן היא אינה דורשת ניתוח וניתן לשלב אותה עם ניסויים נוספים.

כמו כן, זה לוקח רק כשעה להופיע. ניתן להשתמש בשיטה זו על כל מיני ציפורים קטנות. אז פיזיולוגיה השוואתית היא קלה יחסית.

עוף ABR יכול גם להעריך את ההשפעה על שמיעה תפקודית בעקבות מניפולציה גנטית. התחילו ברכישת ביצי עוף לבנות מופרות. לאחר מכן, דגירו את הביצה בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס ולחות של 50% במשך 21 יום לפני מועד הבדיקה הרצוי.

לאחר בקיעת הביצה, שקלו את החיה על ידי הנחתה בעדינות בסירת שקילה גדולה. לאחר הזרקת ההרדמה, מניחים את החיה בחזרה באינקובטור. לאחר מכן בדקו אם הצוואר רפוי וצביטו את הבוהן של החיה באמצעות מלקחיים.

כצעד הבא, לקבוע את מין העוף באמצעות נוצות הכנף שלו. מאוחר יותר, יש למרוח קרם דקפילטורי עם אפליקטור קצה כותנה על אזור הראש והצוואר, במיוחד ליד פתח האוזן עבור הציפור. כעת השתמשו במגבונים אלכוהוליים של 70% איזופרופיל כדי לנגב את הנוצות, כל קרם דפילטורי שנותר ואת העור על הראש והצוואר.

כמו כן, לעקר את האלקטרודות התת-עוריות ואת הבדיקה הרקטלית באמצעות מגבון אלכוהול איזופרופיל של 70%. מקם את החיה בבידוד צלילים ותא מוגן חשמלית, כדי להבטיח שלסביבה יש רעש חשמלי ואקוסטי מינימלי להקלטות הטובות ביותר. השתמשו בכרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של בעלי החיים.

כעת הכנס את הגשושית הרקטלית וקבע את ראש החיה במקומו או הנח את המקור על חפץ כדי למנוע תנועה לא רצויה. לאחר מכן ודא שתא בקרת הטמפרטורה שומר על טמפרטורת החיה בין 37 ל -41 מעלות צלזיוס. השתמש בשלוש אלקטרודות מחט נירוסטה, כסף כלוריד כאלקטרודות ייחוס, פעילות ומשותפות.

מכניסים כל אלקטרודה באופן תת-עורי לשניים עד שלושה מילימטרים לתוך הראש, אך לא עמוק מספיק כדי לחדור לגולגולת, ואז מוציאים את האלקטרודה מהעור, וחושפים את הקצה. לצורך הקלטה של ערוץ יחיד, מקם את האלקטרודה הפעילה מעל הגולגולת בקו האמצע עד לתעלת האוזן. הניחו את אלקטרודת הייחוס מאחורי האוזן במקום שבו יועבר הגירוי, והניחו את אלקטרודת ההארקה מאחורי האוזן הקונטרה-צדדית בצוואר.

עכשיו לבדוק את עכבת האלקטרודה. ודא כי עכבת האלקטרודה הכוללת אינה עולה על חמישה קילו אוהם. כמו כן, שמור על עכבת האינטרלקטרוד מתחת לשלושה קילו אוהם.

עבור הקלטת ABR, בהתאם לחומרת הרכישה ולתוכנה, הקפד לכייל את רמות הצליל הנכונות בתדרי הגירוי שבהם נעשה שימוש. כעת הזיזו את מנגנון מתמר הקול לעבר האוזן הפעילה של החיה והניחו אותה בעומק רדוד של שני מילימטרים בתעלת האוזן. לבסוף, בדקו את בעל החיים במהלך הניסויים.

אם התוצאות נראות לא תקינות או נעדרות, מקם מחדש את מתמר הקול בתעלת האוזן. ראשית, פתח את התוכנה לרכישת הקלטות ABR. הגדר את הגבולות העליונים והתחתונים של דחיית הממצא לכ-25 מיקרו-וולט, כך שחיה, תנועה או רעש במהלך מטאטא לא יכללו את הטאטוא הזה מהניתוח.

אספו לפחות 1024 מטאטאים כדי לקבל תשובה ממוצעת מפוארת שניתן לעשות בשתי הקלטות של 512 מטאטאים כל אחת. זה מבטיח כי התגובה היא גירוי מעורר וניתן לחזור על עצמו. בהגדרות המגבר של התוכנה, הגדר את הרווח ל-100, 000, את מסנן המעבר הנמוך ל-3, 000 הרץ, ואת מסנן המעבר הגבוה ל-100 הרץ.

הגדר את קצב הצגת הגירוי בין 10 ל-20 גירויים בשנייה, ואת משך הזמן של גירוי הלחיצה ל-100 מיקרו-שניות. לאחר מכן, הגדר את קצב הדגימה ל-40 קילוהרץ, 25 מיקרו-שניות לנתוני הרזולוציה הטובים ביותר והגדר את קיטוב הגירוי להחלפה. אם מקליטים 512 מטאטאים, שלבו שני מבחנים נפרדים כדי ליצור ממוצע טאטוא של 1, 024, והמשיכו להקליט בעוצמות נמוכות יותר ויותר עד שלא ניתן יהיה עוד לזהות את הפוטנציאל המעורר.

הנמיכו את עוצמת הגירוי בשלבים של רמת לחץ קול של חמישה דציבלים כדי למצוא את עוצמת הגירוי הנמוכה ביותר שמעוררת תגובה מעוררת. הגדר סף ABR כעוצמת הגירוי הנמוכה ביותר המעוררת תגובה מעוררת הניתנת לזיהוי. לאחר המתת חסד ועריפת החיה והניסוי על ידי ניקוי כרית החימום, הגשושית הרקטלית ואלקטרודות כסף כלוריד עם 70% מגבוני אלכוהול איזופרופיל, וודאו שכל העקבות שנרכשו נשמרו.

נתון זה מייצג את הלחיצה ABR. השהיית השיא של גל I גדלה בכ-0.3 אלפיות השנייה עבור כל ירידה של 20 דציבלים בעוצמת הגירוי. גל I הציג גם את משרעת השיא הגדולה ביותר ואת השתנות ההשהיה הנמוכה ביותר מבין כל פסגות צורת הגלים.

הגרף מראה את פרץ הטון המעורר ABR. התגובה הטובה ביותר נראתה ב 1, 000 הרץ. האיור מדגים כי אם טמפרטורת הגוף אינה נשמרת, תפקודי עוצמת ההשהיה של ה-ABR משתנים מאוד ולעתים קרובות אינם מדויקים.

האיור מראה כי ABRs שנרשמו מתוך אבקועים בני פחות משלוש שעות, המסומנים כ-P1, הם בעלי חריגות שיא ממושכות באופן משמעותי ואמפליטודות שיא מופחתות בהשוואה לאבקועים ישנים יותר, המסומנים כ-P2. האיור משווה 75 עקבות לחץ על לחץ קול ברמת לחץ הדציבלים באותה חיה עם מיקומי אלקטרודות ייחוס שונים. משרעת השיא של גל II למיקום המסטואידים התרחשה אלפית השנייה לאחר שיא הגל II למיקום הצוואר. הפרש זמן זה משקף ככל הנראה את האתרים של יצירת עצבי ABR ביחס למיקום האלקטרודות.

התגובות בין שתי האוזניים היו דומות עם שינויים קלים באמפליטודות שיא ככל הנראה עקב מיקום האוזניות. ההשהיה של האוזן השמאלית והימנית המקבילה תומכת בתפקוד הבריא באותה מידה של שתי האוזניים ושל ההמיספרות של גזע המוח בעוף האבקוע. מיקום נכון של מתמר קול יכול להבחין בין תוצאות טובות ללא תוצאות.

ABR העוף צריך להיות חזק עם יחס אות לרעש טוב. כל השאלות אליהן מתייחסים מחקרי ABR במיני עופות אחרים יכולות להיות מיושמות על העוף. כמו כן, מחקר פיזיולוגי מולקולרי בעוף עוברי יכול לשלב את מתודולוגיית in vivo זו.