ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לד"ר אלנה וולמס, מכון האנטסמן לסרטן, אוניברסיטת יוטה, על שסיפקה לנו את הקסנוגרפטים שמקורם בחולה (HCI-010). עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH R01CA205632, R21CA226542, ובחלקה, על ידי מענק מאג'ילנט טכנולוגיות.

המחקר נסקר ונחשב "פטור" על ידי מועצת הביקורת המוסדית של אוניברסיטת ג'ורג'טאון (IRB # 2002-022). רקמות מח עצם שנקטפו זה עתה נאספו ממסנני איסוף מח עצם אנושיים בריאים שהושלכו וזוהו.
1. עיצוב תא חדש (איור 2)
<ol><li>פתח לוחית מנתח תאים דו-תאית חדשה. הניחו בצד את התא העליון עם אלקטרודות.</li>
	<li>באמצעות מכונת כרסום, גילחו 2 מ"מ מהבארות התחתונות בצורת U של לוחית מנתח התאים.</li>
	<li>חברו ממברנת פוליאתרסולפון (PES) בגודל 2 ס"מ על 7 ס"מ עם גודל נקבובית של 0.2 מיקרומטר לתחתית הבארות המגולחות באמצעות דבק שאוצר UV. אפשרו זמן אוצר של 30 דקות כדי לוודא שהדבק נרפא לחלוטין ואינרטי.</li>
	<li>באמצעות מכונת כרסום, חותכים שני חריצים אורכיים (1.5 מ"מ x 5.6 מ"מ) לאורך הצדדים כדי להיצמד לרכסים של החדר השלישי החדש שיוצר.</li>
	<li>באמצעות מכונת כרסום, צור תא פוליקרבונט שלישי המשכפל את הממדים הכוללים של לוח מנתח התאים; 72 מ"מ x 18 מ"מ (טבלת חומרים).</li>
	<li>צור בארות בעומק 4.8 מ"מ ובקוטר של 4.75 מ"מ כדי לשכפל את העיצוב בן 16 הבארות של לוח מנתח התאים. זה מאפשר 90 μL של נפח לכל באר.</li>
	<li>בצדדים, צור שני רכסים משולשים כך שהתא יינעל לתוך החריצים המקוריים שנוצרו בשלב 1.4. החלק האופקי של המשולש הוא 1.5 מ"מ, האנכי הוא 1.4 מ"מ, ואת hypotenuse הוא 2.052 מ"מ.</li>
	<li>צור ידית בצד הקצר שקוטרה 50.8 מ"מ וגובהה 1.397 מ"מ כדי להתאים לחריץ הלוח המקורי (איור 2, אמצע).</li>
	<li>השתמש במכונת כביסה מגומי בעובי 0.9 מ"מ עבור כל באר כדי לספק התאמה אטומה.</li>
</ol>2. תרבית תאים (MDA-MB-231, DCIS, DCIS-Δ4, J2-פיברובלסטים)
<ol><li>שטפו תרביות תאים דביקות (כ-70% מפגש) עם פי 1x מלוחים עם מאגר פוספט (PBS).</li>
	<li>הוסף תמיסת 0.05% טריפסין-EDTA כדי להרים את התאים.</li>
	<li>נטרלו את תמיסת הטריפסין בעזרת מדיה של תרביות תאים המכילה סרום וספרו את התאים באמצעות אליקווט של תרחיף התא. הערה: ניתן למצוא את המדיה הספציפית של תרביות תאים בטבלה 1.</li>
</ol>3. דיסוציאציה של קסנוגרפט שמקורה בחולה
<ol><li>קוצצים חתיכת גידול טרייה (1 ס"מ2) לעיסה עדינה באמצעות אזמל סטרילי.</li>
	<li>מניחים בצינור חרוטי 50 מ"ל עם 20 מ"ל של מדיית DMEM F12 בתוספת 3 מ"ג/מ"ל טריפסין ו-2 מ"ג/מ"ל קולגן.</li>
	<li>דגירה בשייקר תרמי (150 סל"ד) ב-37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.</li>
	<li>סובב את הצינור ב 500 x g במשך 5 דקות; להסיר את supernatant.</li>
	<li>הוסף 20 μL של DMEM F12 + 2% FBS כדי לשטוף את התאים; סובב ב 300 x g במשך 5 דקות ולהסיר את supernatant. יש לחזור על שטיפה פעמיים נוספות.</li>
	<li>בצעו שימוש חוזר ב-1 מ"ל של מדיית PDX (טבלה 1) כדי לספור את התאים.</li>
</ol>4. מיצוי תאי מח עצם
<ol><li>שטפו את מסנן איסוף מח העצם (BM) עם 25 מ"ל של 1x PBS. הערה: במחקר זה, PBS נוסף למסנן איסוף BM משומש מבית החולים כדי לאסוף את ה- BM הנותרים במסנן.</li>
	<li>הוסיפו את ה-BM הסמוק באיטיות לצינור חרוטי של 50 מ"ל עם 25 מ"ל של מדיום שיפוע צפיפות, תוך הקפדה על הפרדה בין השכבות ככל האפשר.</li>
	<li>סובב ב 800 x גרם במשך 20 דקות ב 18 °C (74 °F)</li>
	<li>סיפון את השכבות העליונות לאחר צנטריפוגה (שומן/פלזמה) והעביר 5 מ"ל של השכבה הלבנה מעל לתווך גרדיאנט הצפיפות שיש לו את תאי ה-BM לצינור חרוטי של 15 מ"ל. הערה: לחלופין, יש לטבול פיפטה של 5 מ"ל בשכבה העליונה עד שהיא נוגעת בשכבה האמצעית (BM) ולפטפט את השכבה האמצעית באיטיות רבה מבלי להזיז את הפיפטה.</li>
	<li>מלאו את הצינור החרוטי 15 מ"ל ב-1x PBS (כ-10 מ"ל) וסובבו ב-300 x גרם למשך 15 דקות.</li>
	<li>הסר את הסופרנטנט; הכדור הלבן הנותר הוא ה- BM.</li>
	<li>אם תאי דם אדומים נצפים בכדור, הוסיפו 5 מ"ל של תמיסת RBC lysis (טבלת חומרים) ותנו לה לשבת במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר (RT). סובבו ב-300 x גרם למשך 5 דקות והסירו את ה-supernatant.</li>
	<li>הוסף 10 מ"ל של 1x PBS כדי לשטוף את התאים, לסובב ב 300 x g במשך 5 דקות ולהסיר את supernatant. חזרו על תזת RBC (שלב 4.7) עד שהכדור יהיה לבן.</li>
</ol>5. זריעה והרכבה של תאים
<ol><li>הניחו את כל שלושת התאים הסטריליים במכסה המנוע של תרבית הרקמה.</li>
	<li>אתר את הידית בצד הקצר של החדר התחתון. כוון את החדר התחתון כך שהידית תפנה אל הנסיין.</li>
	<li>הוסף 30,000-50,000 תאים במדיה של 90 μL לכל באר של החדר התחתון. הימנעו מיצירת בועות. אלה הם התאים הסטרומליים שיספקו גורמים מופרשים אך לא יזוהו על ידי האלקטרודות של החדר העליון.</li>
	<li>השתמשו ב-5% מדיה המועברת על ידי תוסף סרום בקר עוברי בשתי בארות של תאים תחתונים כבקרה חיובית לתנועתיות התאים. השתמשו ב-0% מדיה עם תוסף סרום כבקרה שלילית.</li>
	<li>תן לתא התחתון עם התאים לשבת במשך 10-15 דקות במכסה המנוע כדי להתיישב. הערה: שלב זה מומלץ אם התאים דבקים או גדלים בהשעיה.</li>
	<li>סובבו את התא התחתון ב-90° והניחו את החדר האמצעי למעלה כך שהידית בתא התחתון תחליק לתוך החריץ בתא האמצעי. הערה: הידית בתא התחתון והנקודה הכחולה בתא האמצעי נמצאים בקצוות מנוגדים של ההרכבה.</li>
	<li>דחפו אנכית כלפי מטה עד שנשמע צליל לחיצה מכל אחד מהצדדים הארוכים של ההרכבה.</li>
	<li>הוסיפו 160 μL של מדיה ללא סרום לכל הבארות של החדר האמצעי.</li>
	<li>ודא שמניסקוס בצורת כיפה נראה לאחר מילוי בארות; אחרת, התאם את עוצמת הקול הסופית בהתבסס על כיול הפיפטה. הימנעו מיצירת בועות.</li>
	<li>מקם את התא העליון עם אלקטרודות הפונות כלפי מטה אל החדר האמצעי תוך הקפדה ליישר את הנקודות הכחולות בתאים האמצעיים והעליון.</li>
	<li>דחפו אנכית כלפי מטה עד שנשמע צליל לחיצה מכל אחד מהצדדים הארוכים של ההרכבה.</li>
	<li>הוסיפו 25-50 μL של מדיה ללא סרום לתא העליון.</li>
	<li>הרכיבו את ההרכבה על מנתח התאים הדו-תכליתי באינקובטור תרביות הרקמה והמתינו 30 דקות לפני מדידת הרקע. הערה: זמן זה נחוץ כדי לאזן את המערך וניתן להשתמש בו כדי להכין את קווי התאים שיתווספו לתא העליון.</li>
	<li>מדוד את הרקע (ראה סעיף 6) והחזיר את ההרכבה למכסה המנוע של תרבית הרקמה.</li>
	<li>הוסף 30,000-50,000 תאים ב-100 μL של מדיה ללא סרום לכל באר של החדר העליון. אלה הם התאים שהאלקטרודה תזהה ברגע שהם יעברו בהצלחה דרך הממברנה. הערה: כדי להשיג תגובה מקסימלית, מומלץ לגדל תאים במדיה נטולת סרום או נמוכה בסרום למשך 6-18 שעות לפני ביצוע הבדיקה.</li>
	<li>תנו להרכבה לעמוד במכסה המנוע במשך 30 דקות לפני שתרכיבו על מנתח התאים הדו-תכליתי למדידת עכבה.</li>
</ol>6. מדידת רקע ועכבה
<ol><li>מקם את המערך לתוך העריסה במכשיר מנתח התאים הדו-תכליתי.</li>
	<li>פתח את תוכנת מנתח התאים ובחר את העריסה לשימוש.</li>
	<li>לחץ על הכרטיסיה הודעה וודא שכתוב בה חיבורים בסדר כדי לוודא שהמערך ממוקם היטב בעריסה והאלקטרודות מיושרות היטב עם החיישנים.</li>
	<li>לחץ על הכרטיסיה הערות ניסוי ומלא מידע רב ככל האפשר על הניסוי.</li>
	<li>לחץ על הכרטיסיה פריסה ומלא את התיאור של פריסת המערך.</li>
	<li>לחץ על הכרטיסיה תזמון והוסף שני שלבים מתפריט השלבים ; שלב רקע (טאטוא אחד) ושלב בדיקה עם 100 מטאטאים - מטאטא כל 15 דקות, בסך הכל 25 שעות.</li>
	<li>לאחר שהמערך נמצא באינקובטור מנתח התאים הדו-תכליתי במשך 30 דקות, לחץ על לחצן הפעל כדי להתחיל במדידת הרקע. חלון המבקש לבחור את התיקיה לשמירת הנתונים יופיע.</li>
	<li>לאחר סיום מדידת הרקע, הסר את המערך מהעריסה והנח אותו בחזרה במכסה המנוע של תרבית התאים.</li>
	<li>הוסיפו תאים לתא העליון כמתואר בשלב 5.13, ושמרו על ההרכבה במכסה המנוע של תרבית הרקמה למשך 30 דקות כדי שהתאים יתיישבו.</li>
	<li>מקם את המערך בחזרה למנתח התאים הדו-תכליתי ובדוק את הכרטיסיה הודעה עבור ההודעה 'חיבורים אישור '.</li>
	<li>לחץ על לחצן הפעל כדי להתחיל במדידת עכבה.</li>
	<li>לחץ על הכרטיסיה תרשים כדי לעקוב אחר התקדמות האות.</li>
	<li>אם נקודת הקצה מגיעה לפני 25 שעות, לחץ על השלב ביטול מהתפריט הנפתח הפעל .</li>
	<li>כדי לייצא נתונים, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על הגרף, בחר העתק בתבנית הרשימה ולאחר מכן הדבק את הנתונים בגיליון אלקטרוני. הערה: ניתן לייצא את הנתונים כאינדקס תאים או אינדקס תאי דלתא. ניתן גם לבחור פרטי גרף ו/או פריסה לייצוא.</li>
</ol>7. ניתוק ואיסוף תאים
<ol><li>עקוב אחר קצב ההעברה בזמן אמת על מנתח התאים הדו-תכליתי כדי לקבוע את נקודת העצירה של העניין (6-18 שעות). הערה: נקודת העצירה תלויה בקצב הפלישה של התא וכאשר מושג אות פלישה מובחן מהשליטה השלילית.</li>
	<li>לאחר שהושגה, שחררו את ההרכבה ממנתח התאים הדו-תכליתי והניחו אותו במכסה המנוע של תרבית הרקמה.</li>
	<li>הכן מספר מתאים של 1.5 מ"ל צינורות microcentrifuge כדי לאסוף את התאים מבארות העניין.</li>
	<li>מניחים את ההרכבה בצלחת של 10 ס"מ כדי להכיל נוזלים כאשר התאים מתנתקים.</li>
	<li>דחפו את קצוות ההצמדה הגמישים בצד הארוך של החדר האמצעי פנימה עד שנשמע צליל לחיצה.</li>
	<li>פרקו את החדר העליון והפכו אותו למנה חדשה של 10 ס"מ.</li>
	<li>השתמשו במרים תא עם להב של 13 מ"מ כדי לאסוף את התאים מכל הבארות הנושאות את אותו מצב ניסיוני (כלומר, סוג תא, טיפול תרופתי וכו'). הערה: תכנן את ההגדרה כך שיהיו לפחות שתי בארות עבור כל מצב ניסיוני כדי להשיג שינוי מובהק סטטיסטית מפקדים שליליים.</li>
	<li>יש לשטוף או לטבול את הלהב בתמיסת מלח 1x 1x דחוסה בפוספט כדי לאסוף את התאים בצינורות מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מ"ל.</li>
	<li>סובבו את התאים ב-500 x גרם למשך 5 דקות.</li>
	<li>להפיץ את התאים שנאספו (ראה סעיף 8) או לבצע ניתוח נקודות קצה כגון RNA-seq חד-תאי. הערה: עבור RNA-seq בתפזורת, השתמש בערכת מיצוי RNA של מספר תאים נמוך.</li>
</ol>8.3D ריבוי ואחזור תאים
הערה: בשל המספר הקטן של תאים שנאספו, זרעו את התאים בתלת-ממד באמצעות מטריצה חוץ-תאית (ECM) כדי לשפר את הכדאיות. עם זאת, תרבית דו-ממדית היא גם אופציה בשלב זה, במיוחד אם התאים שבהם נעשה שימוש הם מקווי תאים מבוססים.
<ol><li>להפשיר אליקוט של מטריצת קרום המרתף ב 4 מעלות צלזיוס בלילה. שמור את מטריצת קרום המרתף על קרח עד שיהיה מוכן לשימוש.</li>
	<li>מוסיפים 25 μL של מטריצת קרום מרתף קר לכדור של תאים חיים שנאספו ומקטרים בעדינות למעלה ולמטה כדי לערבב. הימנעו מיצירת בועות.</li>
	<li>הוסיפו את תערובת המטריצה של קרום מרתף התאים לתחתית של באר תרבית רקמה קטנה (כלומר, בצלחת של 96 בארות), ויצרו כיפה. נסו לא לגעת בקירות הבאר. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות לפני שתוסיפו בעדינות 100 μL של מדיה טיפה.</li>
	<li>כדי לאחזר תאים, שאפו למדיה והוסיפו 100 μL של dispase לכל באר.</li>
	<li>דגירה ב- RT במשך 10 דקות, מקטרת למעלה ולמטה מדי פעם.</li>
	<li>העבירו את התאים ואת מטריצת קרום המרתף המומסת לצינור מיקרו-צנטריפוג' של 1.5 מ"ל. הוסף 1 מ"ל של 1x PBS, סובב ב 300 x g במשך 5 דקות והסר את supernatant. חזור על הכביסה פעם אחת.</li>
	<li>לשאוף את הסופרנאטנט. לפצל את התאים בכדור או לבצע ניתוח נקודות קצה.</li>
</ol>

<ol><li>Friedl, P., Gilmour, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+cell+migration+in+morphogenesis%2C+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Collective cell migration in morphogenesis, regeneration and cancer.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10 (7), 445-457 (2009).</li>
<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115 (3), 453-466 (1962).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+impedance+measurements+of+whole+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">A review of impedance measurements of whole cells.</a> Biosensors & Bioelectronics. 77, 824-836 (2016).</li>
<li>Stylianou, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+single-chain+antibody+targeting+of+the+ligand-binding+domain+in+the+anaplastic+lymphoma+kinase+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Effect of single-chain antibody targeting of the ligand-binding domain in the anaplastic lymphoma kinase receptor.</a> Oncogene. 28 (37), 3296-3306 (2009).</li>
<li>Abassi, Y. A., Wang, X., Xu, X. Real time electronic cell sensing system and applications for cytotoxcity profiling and compound assays. United States Patent. , 20050213374 1-88 (2013).</li>
<li>Abassi, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free%2C+real-time+monitoring+of+IgE-mediated+mast+cell+activation+on+microelectronic+cell+sensor+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Label-free, real-time monitoring of IgE-mediated mast cell activation on microelectronic cell sensor arrays.</a> Journal of Immunological Methods. 292 (1-2), 195-205 (2004).</li>
<li>Morton, C. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+human+tumor+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Establishment of human tumor xenografts in immunodeficient mice.</a> Nature Protocols. 2 (2), 247-250 (2007).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+grafts+derived+from+women+with+breast+cancer+authentically+reflect+tumor+pathology%2C+growth%2C+metastasis+and+disease+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes.</a> Nature Medicine. 17 (11), 1514-1520 (2011).</li>
<li>Sharif, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+AIB1+isoform+alters+enhancer+access+and+enables+progression+of+early-stage+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">An AIB1 isoform alters enhancer access and enables progression of early-stage triple-negative breast cancer.</a> Cancer Research. 81 (16), 4230-4241 (2021).</li>
<li>Caileau, R., Olive, M., Cruciger, Q. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+human+breast+carcinoma+cell+lines+of+metastatic+origin%3A+preliminary+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Long-term human breast carcinoma cell lines of metastatic origin: preliminary characterization.</a> In Vitro. 14 (11), 911-915 (1978).</li>
<li>Sharif, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+growth+density+modulates+cancer+cell+vascular+invasion+via+Hippo+pathway+activity+and+CXCR2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Cell growth density modulates cancer cell vascular invasion via Hippo pathway activity and CXCR2 signaling.</a> Oncogene. 34 (48), 5879-5889 (2015).</li>
<li>Miller, F. R., Santner, S. J., Tait, L., Dawson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MCF10DCIS.com+xenograft+model+of+human+comedo+ductal+carcinoma+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">MCF10DCIS.com xenograft model of human comedo ductal carcinoma in situ.</a> Journal of the National Cancer Institute. 92 (14), 1185-1186 (2000).</li>
<li>Winkler, J., Abisoye-Ogunniyan, A., Metcalf, K. J., zenaa, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concepts+of+extracellular+matrix+remodelling+in+tumour+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Concepts of extracellular matrix remodelling in tumour progression and metastasis.</a> Nature Communications. 11 (1), 1-19 (2020).</li>
<li>Nkosi, D., Sun, L., Duke, L. C., Meckes, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epstein-Barr+virus+LMP1+manipulates+the+content+and+functions+of+extracellular+vesicles+to+enhance+metastatic+potential+of+recipient+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Epstein-Barr virus LMP1 manipulates the content and functions of extracellular vesicles to enhance metastatic potential of recipient cells.</a> PLoS Pathogens. 16 (12), 1009023(2020).</li>
<li>Eisenberg, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+modeling+of+the+effects+of+myoferlin+on+tumor+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mechanistic modeling of the effects of myoferlin on tumor cell invasion.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (50), 20078-20083 (2011).</li>
</ol>

אוניברסיטת ג'ורג'טאון הגישה פטנט הקשור לכמה מהגישות המתוארות בכתב יד זה. G.M.S, A.W, L.D ו- M.P נקראים כממציאים ביישום זה ומצהירים כי כניגוד עניינים פוטנציאלי.

שינינו את העיצוב של מערך דו-תאי כך שיכלול תא שלישי לניטור פלישת תאים בזמן אמת בנוכחות תאים סטרומליים. ראינו השפעות ברורות של פיברובלסטים בתרבית משותפת על תאים סרטניים פולשניים ולא פולשניים, מה שמצביע על כך שניתן להשתמש במערך כדי להבחין בין תת-אוכלוסיות של תאים סרטניים המגיבים באופן שונה לגורמים המיוצרים על ידי תאים סטרומליים בתרבית משותפת. המערך שימש גם לניטור פלישת תאי האנדותל לרקמות סטרומליות, צעד קריטי במהלך כלי הדם הנובטים לעבר גירוי אנגיוגני בנוכחות תאים סרטניים בעלי פוטנציאל פולשני משתנה. ניסויים אלה מראים את השימו...

פלישת תאים היא תהליך חשוב המאפשר לתאים לחצות מחסומים של קרום מרתף בתגובה לרמזים סביבתיים המסופקים על ידי תאים סטרומליים. זהו שלב מכריע במהלך מספר שלבים של התפתחות לתגובות חיסוניות, ריפוי פצעים, תיקון רקמות וממאירויות שיכולות להתקדם מנגעים מקומיים לסרטן פולשני וגרורות1. מבחנים שפותחו בשלב מוקדם כדי למדוד את הפוטנציאל הפולשני של אוכלוסיות תאים מייצרים בדרך כלל מדידה של נקודת קצה אחת או דורשים תיוג מראש של תאים פולשים2. השילוב של מיקרו-אלקטרוניקה וטכניקות של מיקרופלואידיקה פותח כעת כדי לזהות היבטים שונים של הביולוגיה של התא, כגון כדאיות, תנועה והתקשרות באמצעות העכבה החשמלית של תאים חיים על מיקרו-אלקטרוניקה 3,4. מדידת עכבה מאפשרת הערכה נטולת תוויות, לא פולשנית וכמותית של מצב התא3. כאן אנו מתארים מערך בעל שלושה תאים המבוסס על תכנון מערכת האנליזה התאית בזמן אמת (RTCA) שפותחה על ידי Abassi et al.5. המערך בעל שלושת התאים מאפשר הערכה של תאים בתרבית משותפת על פלישה תאית והתאוששות של תאים פולשים לצורך ניתוחים או התפשטות נוספים.
במערכת מנתחי התאים, תאים פולשים דרך מטריצה חוץ-תאית המצופה על ממברנה נקבובית ומגיעים למערך אלקטרודות משולב הממוקם בצד הנגדי של המחסום. כאשר התאים הפולשים ממשיכים להתחבר ולתפוס את מערך האלקטרודות הזה לאורך זמן, העכבה החשמלית משתנה במקביל. המערכת הנוכחית כוללת צלחת 16 בארות פלישה והגירה של תאים (CIM) עם שני תאים. מכשיר RTCA-DP (דו-תכליתי) (הנקרא מנתח תאים דו-תכליתי) מכיל חיישנים למדידת עכבה ותוכנה משולבת לניתוח ועיבוד נתוני העכבה. ערכי העכבה בנקודת ההתחלה תלויים בחוזק היוני של המדיה בבארות ומשתנים כאשר התאים נצמדים לאלקטרודות. שינויי העכבה תלויים במספר התאים, במורפולוגיה שלהם ובמידה שבה התאים מתחברים לאלקטרודות. מדידה של הבארות עם המדיה לפני הוספת התאים נחשבת לאות הרקע. הרקע מופחת ממדידות עכבה לאחר שהגיע לשיווי משקל כאשר תאים מתחברים ומתפשטים על האלקטרודות. פרמטר ללא יחידה של מצב התאים על אלקטרודה המכונה אינדקס תאים (CI) מחושב כדלקמן: CI = (עכבה לאחר שיווי משקל - עכבה בהיעדר תאים) / ערך עכבהנומינלית 6. כאשר משווים את שיעורי ההעברה של קווי תאים שונים, ניתן להשתמש ב- Delta CI כדי להשוות את מצב התא ללא קשר להבדל בהיצמדות המיוצג במדידות הראשונות.
המערך התלת-תאי החדש שתוכנן מתבסס על העיצוב הקיים ומשתמש בתא העליון ממערכת מנתח התאים הדו-תכליתית המכילה את האלקטרודות. התאים האמצעיים והתחתונים שהשתנו מותאמים כדי להתאים את ההרכבה למנתח התאים הדו-תכליתי למדידת עכבה וניתוח באמצעות התוכנה המשולבת. שתי ההתפתחויות העיקריות שהתכנון החדש מספק על פני לוחית ה-CIM הדו-תאית הקיימת (הנקראת מעתה צלחת מנתחת תאים) הן: 1) היכולת להתאושש, ולאחר מכן לנתח תת-אוכלוסיות של תאים פולשניים הנמצאים בתערובות תאים הטרוגניות, ו-ב) האפשרות להעריך את ההשפעה של גורמים מופרשים מתאים סטרומליים או חיסוניים בתרבית משותפת על פלישת תאים (איור 1).
טכנולוגיה זו יכולה להיות שימושית בחקר תת-האוכלוסיות של תאים בעלי יכולות פולשניות שונות. זה כולל (א) תאים סרטניים פולשים הפולשים לרקמות הסובבות או לדם ולכלי הלימפה או מתרבים באתרי זריעה גרורתיים באיברים מרוחקים, (ב) תאים ממערכת החיסון הפולשים לרקמות כדי להתמודד עם פתוגנים או תאים חולים, (ג) תאי אנדותל הפולשים לרקמות ויוצרים כלי דם חדשים במהלך ארגון מחדש של רקמות או ריפוי פצעים, כמו גם (ד) תאים סטרומליים מהמיקרו-סביבה של הגידול התומכים ופולשים יחד עם תאים סרטניים. הגישה מאפשרת הכללה של דיבורים צולבים סטרומליים שיכולים לווסת את תנועתיות התא ואת הפלישה. מחקרי ההיתכנות המוצגים כאן משתמשים במערך שונה זה המתמקד בפלישה לתאים סרטניים ובאינטראקציה עם הסטרומה כמערכת מודל, כולל פלישת אנדותל בתגובה לאותות דיפרנציאליים מתאי הסרטן. ניתן לבצע אקסטרפולציה של הגישה כדי לבודד תאים סרטניים וסוגי תאים אחרים כגון תת-אוכלוסיות של תאי מערכת החיסון, פיברובלסטים או תאי אנדותל. בדקנו קווי תאי סרטן שד פולשניים ולא פולשניים מבוססים כהוכחה עקרונית. השתמשנו גם בתאים מפלישה של קסנוגרפט (PDX) שמקורו בחולה בתגובה לתאי מערכת החיסון ממח העצם האנושי כדי להראות היתכנות לשימוש עתידי גם במסגרות אבחון קליניות. PDX הן רקמות גידול של מטופלים המושתלות במודל עכברים מדוכאי חיסון או הומניזציה כדי לאפשר לימוד של אפשרויות גדילה, התקדמות וטיפול בחולה המקורי 7,8.

<table><tbody><tr><td>0.05% Trypsin-EDTA</td><td>Thermofisher</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>דבק</td><td>נורלנד דבק אופטי</td><td>NOA63</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>מרים תאים</td><td>Sarstedt</td><td>83.1832</td><td></td></tr><tr><td>רעלן כולרה מ-Vibrio cholerae</td><td>Thermofisher</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>CIM-plate</td><td></td><td>צלחת מנתח תאי</td><td>5665817001</td> Agilent</tr><tr><td>קולגנאז מ- Clostridium histolyticum</td><td>Sigma</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>StemCell</td><td>7913</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermofisher</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Thermofisher</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS), אומגה מדעית מומתת בחום</td><td></td><td>FB-12</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Thermofisher</td><td>15630106</td><td></td></tr><tr><td>סרום סוסים (HS)</td><td>Gibco</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>אנושי</td><td>EGF Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>תאי אנדותל וריד טבורי אנושי (HUVEC)</td><td>LONZA (RRID:CVCL_2959)</td><td>C-2517A</td><td></td></tr><tr><td>מדיה HUVEC</td><td>LONZA</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>סיגמא</td><td>H4001</td><td></td></tr><tr><td>Insulin Transferrin סלניום אתנולמין (ITSX) (100x)</td> אינסולין <td>Thermofisher</td><td>51500056</td><td></td></tr><tr><td>, Human Recombinant, תמיסת אבץ</td><td>Sigma</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td>J2 Fibroblasts</td><td>Stemcell (RRID:CVCL_W667)</td><td>100-0353</td><td></td></tr><tr><td>LymphoPrep</td><td>Stemcell</td><td>7851</td><td>מדיום שיפוע צפיפות לבידוד תאים חד-גרעיניים</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>תאי MCFDCIS.com מטריצת ממברנת מרתף</td></tr><tr><td>(DCIS)</td><td>RRID:CVCL_5552</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תאי MDA-MB-231</td><td>RRID:CVCL_0062</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מכונת</td><td></td><td></td> כרסום <td>Bridgeport Series 1 מלח אנכי</td></tr><tr><td>חוצץ פוספט (1x)</td><td>Thermofisher</td><td>10010049</td><td></td></tr><tr><td>Polyethersulfone ( PES) ממברנה</td><td>Sterlitech</td><td>PCTF029030</td><td></td></tr><tr><td>RBC תמיסת ליזה</td><td>תא גזע</td><td>7800</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Micro Kit</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td></td></tr><tr><td>RTCA DP מנתח</td><td>Agilent</td><td>3X16</td><td>מנתח תאים דו-תכליתי</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma</td><td>T4799</td><td></td></tr></tbody></table>

זיהוי ולכידה בזמן אמת של תת-אוכלוסיות תאים פולשניות מתרביות משותפות

Real-Time Detection and Capture of Invasive Cell Subpopulations from Co-Cultures

פלישה והתפשטות גרורתית של תאים סרטניים הם הגורם העיקרי למוות מסרטן. מבחנים שפותחו בשלב מוקדם כדי למדוד את הפוטנציאל הפולשני של אוכלוסיות תאים סרטניים מייצרים בדרך כלל מדידה של נקודת קצה אחת שאינה מבחינה בין תת-אוכלוסיות של תאים סרטניים עם פוטנציאל פולשני שונה. כמו כן, המיקרו-סביבה של הגידול מורכבת מתאים סטרומליים וחיסון שונים, המשנים את ההתנהגות הפולשנית של תאים סרטניים ומשתתפים בהם. פלישה לרקמות ממלאת גם תפקיד בתת-אוכלוסיות של תאי מערכת החיסון הנלחמות במיקרואורגניזמים או בסילוק תאים חולים מתאי הפרנכימה והאנדותל במהלך שיפוץ רקמות ואנגיוגנזה. אנליזה תאית בזמן אמת (RTCA) המשתמשת בביו-סנסורים של עכבה כדי לנטר את פלישת התאים הייתה צעד גדול קדימה מעבר למדידת נקודת הקצה של הפלישה: זו מספקת מדידות רציפות לאורך זמן ובכך יכולה לחשוף הבדלים בשיעורי הפלישה שאבדו במבחן נקודות הקצה. באמצעות טכנולוגיית RTCA הנוכחית, הרחבנו מערכים דו-תאיים על ידי הוספת תא נוסף שיכול להכיל תאים סטרומליים ו/או חיסוניים ומאפשר למדוד את קצב הפלישה בהשפעת גורמים מופרשים מתאי סטרומל או מערכת החיסון בתרבית משותפת לאורך זמן. מעבר לכך, העיצוב הייחודי מאפשר ניתוק תאים בכל עת ובידוד של התא הסרטני הפולשני ביותר, או תת-אוכלוסיות תאים אחרות הנמצאות בתערובות הטרוגניות של מבודדי גידול שנבדקו. תאים סרטניים פולשניים אלה ותת-אוכלוסיות תאים אחרות מניעים התקדמות ממאירה למחלות גרורתיות, ומאפייניהן המולקולריים חשובים למחקרים מכניסטיים מעמיקים, לפיתוח בדיקות אבחון לגילוין ולהערכת פגיעויות. לפיכך, ניתן להשתמש בהכללה של תרופות בעלות מולקולות קטנות או גדולות כדי לבחון את הפוטנציאל של טיפולים המכוונים לסרטן ו/או לתת-אוכלוסיות של תאים סטרומליים במטרה לעכב (למשל, תאים סרטניים) או לשפר (למשל, תאי מערכת החיסון) התנהגות פולשנית.

באמצעות מערך שלושת התאים שתוכנן לאחרונה, פלישה של התאים נבדקה בנוכחות או בהיעדר תאים סטרומליים כגון פיברובלסטים. פלישת תאי MDA-MB-231 שופרה כאשר פיברובלסטים שוויצריים מוקרנים 3T3 (זן J2) נזרעו בתא התחתון, מה שאפשר חילופי גורמים בין שני קווי התאים. באופן מעניין, הפלישה ל-MDA-MB-231 גדלה כאשר מספרם של תאי 3T3-J2 הוכפל (איור 3A). מצד שני, נראה שקצב הפלישה של שיבוט פולשני של תאי MCFDCIS (DCIS-Δ4)9 מעוכב על-ידי השיחה הצולבת עם תאי 3T3-J2 (איור 3B</stro...

אנו מתארים גישה לאיתור ולכידת תת-אוכלוסיות של תאים פולשניים בזמן אמת. התכנון הניסויי משתמש באנליזה תאית בזמן אמת על ידי ניטור שינויים בעכבה החשמלית של תאים. סרטן פולשני, תאי חיסון, אנדותל או סטרומל ברקמות מורכבות יכולים להיתפס, וניתן להעריך את ההשפעה של תרביות משותפות.

Invasion and metastatic spread of cancer cells are the major cause of death from cancer. Assays developed early on to measure the invasive potential of ...

טכניקה זו מאפשרת זיהוי של התאים בעלי יכולות פולשניות שונות בהשפעת גורמים מופרשים מתאים סטרומליים בתרבית משותפת. הטכניקה מעריכה את ההשפעה של גורמים מופרשים מתאים סטרומליים או חיסוניים בתרבית משותפת על פלישת התאים. זה גם מאפשר התאוששות וניתוח של תת-אוכלוסיות תאים פולשניות הנמצאות בתערובות תאים הטרוגניות.הטכניקה יכולה לקבוע אילו גידולים מכילים תת-אוכלוסיות של תאים פולשניים שמובילים לגרורות. לכידה וניתוח של תאים סרטניים פולשניים עשויים לקבל החלטות טיפוליות מושכלות. כדי להתחיל את תרבית התאים, שטפו את תרביות תאי ההדבקה במפגש של כ-70% עם מלח 1X חסום פוספט.לאחר מכן הוסף תמיסת 0.05% טריפסין ו- EDTA כדי להרים את התאים. נטרלו את תמיסת הטריפסין בעזרת מדיה של תרביות תאים המכילה סרום וספרו את התאים באמצעות אליקווט של תרחיף התא. הניחו את כל שלושת התאים הסטריליים במכסה המנוע של תרבית הרקמה.אתרו את הידית בצד הקצר של החדר התחתון וכיוונו את התא התחתון כך שהידית תפנה אל הנסיין. הוסף 30, 000 עד 50, 000 תאים ב-90 מיקרוליטרים של מדיה לכל באר מהתא התחתון מבלי ליצור בועות. השתמשו ב-5% מהתוספים של סרום בקר עוברי בשני תאים תחתונים כבקרה חיובית לתנועתיות התאים, והשתמשו ב-0% במדיה של תוספי סרום כבקרה שלילית.סובבו את התא התחתון ב-90 מעלות לאחר שנתנו לו להסתפק במשך 10 עד 15 דקות במכסה המנוע. לאחר מכן הניחו את החדר האמצעי למעלה כך שהידית בתא התחתון תחליק לתוך החריץ שבחדר האמצעי. דחפו את התא אנכית כלפי מטה עד שנשמע קליק מכל אחד מהצדדים הארוכים של ההרכבה.הוסיפו 160 מיקרוליטרים של מדיה ללא סרום לכל הבארות של החדר האמצעי. ודאו שמניסקוס בצורת כיפה נראה לעין לאחר מילוי בארות והניחו את התא העליון עם אלקטרודות הפונות כלפי מטה אל החדר האמצעי כדי ליישר את הנקודות הכחולות בתאים האמצעיים והעליונים. דחפו את התא אנכית כלפי מטה עד שנשמע צליל לחיצה מכל אחד מהצדדים הארוכים של ההרכבה.הוסיפו 20 עד 50 מיקרוליטרים של מדיה ללא סרום לתא העליון. הרכיבו את ההרכבה על מנתח התאים הדו-תכליתי באינקובטור תרביות הרקמה והמתינו 30 דקות לפני מדידת הרקע. פתח את תוכנת מנתח התאים, לאחר מכן בחר את העריסה לשימוש, ולאחר מכן לחץ על לשונית ההודעה, וודא שכתוב עליה חיבורים בסדר "כדי להבטיח שהמערך ממוקם היטב בעריסה והאלקטרודות מיושרות היטב עם החיישנים.לחץ על לשונית הערות הניסוי ומלא את כל המידע האפשרי על הניסוי. לאחר מכן לחץ על כרטיסיית הפריסה ומלא את התיאור של פריסת המערך. לאחר מכן לחץ על הכרטיסייה לוח זמנים והוסף שני שלבים מתפריט השלבים, שלב רקע עם טאטוא אחד ושלב בדיקה עם 100 טאטואים.לאחר שהמערך נמצא באינקובטור מנתח התאים הדו-תכליתי במשך 30 דקות, לחץ על כפתור ההפעלה כדי להתחיל במדידת הרקע. לאחר סיום מדידת הרקע, הסר את המערך מהעריסה והנח אותו בחזרה במכסה המנוע של תרבית התאים. לאחר מכן הוסיפו 30, 000 עד 50, 000 תאים ב-100 מיקרוליטרים של מדיה ללא סרום לכל באר של החדר העליון.אלה הם התאים שהאלקטרודה תזהה ברגע שהם יעברו בהצלחה דרך הממברנה. תנו למכלול לעמוד במכסה המנוע במשך 30 דקות לפני ההרכבה על מנתח התאים הדו-תכליתי למדידת עכבה. מקם את המערך בחזרה למנתח התאים הדו-תכליתי ובדוק את לשונית ההודעה עבור ההודעה 'חיבורים בסדר'.לחץ על כפתור ההפעלה כדי להתחיל מדידת עכבה ולאחר מכן לחץ על כרטיסיית העלילה כדי לעקוב אחר התקדמות האות. אם נקודת הקצה מגיעה לפני 25 שעות, לחץ על שלב הביטול מהתפריט הנפתח 'הפעל'. כדי לייצא נתונים, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על הגרף, בחר העתק בתבנית הרשימה ולאחר מכן הדבק את הנתונים בגיליון אלקטרוני.עקוב אחר קצב ההעברה בזמן אמת על מנתח התאים הדו-תכליתי כדי לקבוע את נקודת העצירה של העניין. לאחר שהושגו, שחררו את ההרכבה ממנתח התאים הדו-תכליתי והניחו אותו במכסה המנוע של תרבית הרקמה. הכן מספר מתאים של 1.5 מיליליטרים של צינורות microcentrifuge כדי לאסוף את התאים מבארות העניין.מניחים את המכלול בצלחת של 10 ס"מ כדי להכיל נוזלים כאשר התאים מתנתקים. דוחפים את קצוות ההצמדה הגמישים בצד הארוך של החדר האמצעי פנימה עד שנשמע צליל לחיצה, ולאחר מכן מפרקים את התא העליון והופכים אותו לתבשיל חדש של 10 סנטימטרים. השתמשו במרים תאים עם להב של 13 מילימטר כדי לאסוף את התאים מכל הבארות עם אותו מצב ניסיוני.יש לשטוף או לטבול את הלהב בתמיסת מלח 1X דחוסה בפוספט כדי לאסוף את התאים בצינורות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר. לאחר מכן סובבו את התאים ב-500 פעמים G למשך חמש דקות והפיצו את התאים שנאספו או בצעו ניתוח נקודות קצה כגון ריצוף RNA חד-תאי. הערכה של פלישה לתאים בנוכחותם או בהיעדרם של תאים סטרומליים הראתה כי פלישת תאי MDA-MB-231 שופרה כאשר זן הפיברובלסטים של Swiss-3T3 המוקרן J2 ישב בתא התחתון לצורך החלפת גורמים בין שני קווי התאים.באופן מעניין, הפלישה ל-MDA-MB-231 גדלה כאשר מספרם של תאי 3T3 J2 הוכפל. מצד שני, נראה כי קצב הפלישה של שיבוט פולשני של תאי MCFDCIS, DCIS-Delta Four, מעוכב על ידי הצלבה עם תאי 3T3 J2, מה שמרמז על יישום רב ערך של מערך שלושת התאים למדידת השפעות משתנות של הסטרומה. במקרה זה, פיברובלסטים על פלישת תאים.תאי האנדותל של וריד הטבור האנושי היו פולשניים יותר בתגובה לגורמים המופרשים על ידי תאי MDA-MB-231, בניגוד לאלה שהופרשו על ידי תאי DCIS, מה שעולה בקנה אחד עם יכולתם של גידולים פולשניים לגייס תאי אנדותל להיווצרות כלי דם ולהפצה מאוחרת יותר למחזור הדם. פלישת תאי קסנוגרפט שמקורם בחולה מהתא העליון גדלה בתגובה לתאי חיסון של מח עצם אנושי בתרבית משותפת. באופן מעניין, נוכחות של 2% סרום בתא התחתון עם תאי החיסון של מח העצם האנושי הייתה חיונית לפלישה של קסנוגרפטים שמקורם בחולים.ניתן לצפות את הבארות במטריצה חוץ-תאית כדי לחקות את מחסום קרום המרתף. ניתן להוסיף סוכנים טיפוליים לתקשורת בבארות כדי לעקוב אחר השפעתם על הפלישה.

real-time-detection-capture-invasive-cell-subpopulations-from-co

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מתאר את התרבית המשותפת התלת-ממדית של תאי סרטן השד עם מונוציטים כדי לחקור את האינטראקציה שלהם בסביבה מבוססת תמצית מטריצה חוץ-תאית (ECME). השיטה הזו עוזרת לחקור מאפיינים ספציפיים כמו פירוק קולגן, גיוס תאי מערכת החיסון ופלישה לתאים.

תרבית משותפת תלת-ממדית עם אינטראקציה ישירה: טיפוח משותף של תאים סרטניים עם מונוציטים כדי לחקור את האינטראקציה שלהם

סרטון זה מתאר שיטה להפרדה מרחבית של שלוש תת-אוכלוסיות של תאים לוקמיים: תאי לוקמיה מרחפים המרחפים בחופשיות במדיה, תאי לוקמיה בהירי פאזה שנצמדו לפני השטח של חד-שכבה של תאי סטרומה מזנכימליים, ותאי לוקמיה עמומים בפאזה שנדדו מתחת לחד-שכבה של תאי סטרומה מזנכימליים מתרבית דו-ממדית.

קציר תת-אוכלוסיות לוקמי: שיטה להפרדה מרחבית של תת-אוכלוסיות תאים לוקמיים מתרבית משותפת דו-ממדית

חיידקים מייצרים תרכובות מופרשות שיש לו את הפוטנציאל להשפיע על הפיסיולוגיה של חיידקי השכנים שלהם. כאן אנו מתארים מסך coculture המאפשר זיהוי של אינטראקציות כאלה interspecies תיווך כימי על ידי ערבוב של חיידקים אדמה עם זני כתב תעתיק ניאון של Bacillus subtilis על תקשורת מוצקה.

שימוש Coculture לזהות אינטראקציות interspecies המתווכת כימית

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד ותרבות תאים בודדים עם פלטפורמה מיקרופלואידית, המשתמשת בתפיסת עיצוב מיקרו-באר חדשה כדי לאפשר בידוד תא בודד ביעילות גבוהה ותרבית משובטת לטווח ארוך.

פלטפורמת Microfluidic עבור בידוד תפוקה גבוהה מתא בודד ותרבות

צילום אופטי במכשיר מיקרוסקופ באתרו פותחה כדי לפקח על גודל של תאים בודדים ישירות בתא ההשעיה. מדידה בזמן אמת מתבצעת על ידי צימוד sterilizable הבדיקה צילום אופטי לניתוח תמונה אוטומטית. שינויים מורפולוגיים מופיעים בתלות במצב הגדילה ובתנאי הטיפוח.

באתרו מיקרוסקופיה לקביעת בזמן אמת של מורפולוגיה תא חד בBioprocesses

דוח זה מתאר שיטה מבוססת שבב מיקרופלואידיג כדי להגדיר ניסוי של תרבות תא בודדת שבה ניתן להשיג שיוך ביעילות גבוהה וניתוח מיקרוסקופי של תאים בודדים מרובים.

הקמת תרבויות בודדות מבוססות-משותפות באופן דטרמיניסטי עם שבב מיקרופלואידיסי

סרטן היא מחלה קטלנית בשל יכולתה לעבור גרורות לאיברים שונים. קביעת היכולת של תאים סרטניים להגר ולפלוש תחת תנאי טיפול שונים חיונית להערכת אסטרטגיות טיפוליות. פרוטוקול זה מציג שיטה להעריך את היכולות גרורתית בזמן אמת של קו הסרטן הגלינובלסטומה.

עכבה מבוססי מדידה בזמן אמת של סרטן הגירה תאים ופלישה

פרוטוקול הדמיה זה של תאים חיידקיים חיים מאפשר הדמיה של אינטראקציות בין מינים חיידקיים מרובים ברמת תא יחיד לאורך זמן. הדמיה של זמן-לשגות מאפשרת להתבוננות של כל מין חיידקי במונוקולטורה או coculture לחקור אינטראקציות בין מינים בקהילות חיידקים מרובי מינים, כולל תנוענות תאים בודדים וכדאיות.

הדמיה קינטית של אינטראקציות חיידקים בין-מינים חד-תאיים

הגישה המוצגת בו זמנית מעריך פלישה לתאים סרטניים באסה 3D spheroid ו cytotoxicity T-cell. ספרואידים נוצרים בהצללת אגרוז מרובת מיקרווול ללא פיגומים. תרבות וטביעה בסוג אני מטריצת קולגן מבוצעים בתוך אותו מכשיר המאפשר לפקח על פלישת תאים סרטניים וcytotoxicity בתיווך T-cell.

ניטור פלישת תאים סרטניים וcytotoxicity T-Cell בתרבות 3D

בעידן האימונותרפיה והפרופיל הגנומי של התא הבודד, ביולוגיה של סרטן דורשת כלים חדשניים במבחנה וחישוביים לחקר הממשק הגידולי-חיסוני בהקשר מרחבי-זמני נכון. אנו מתארים פרוטוקולים לניצול תרביות מיקרופלואידיות מיקרופלואידיות של גידולים חיסוניים בסביבות דו-ממדיות ותלת-ממדיות, התואמים לניטור דינמי ורב-פרמטרי של תפקודים תאיים.

מודלים של תרבית משותפת מיקרופלואידית לניתוח התגובה החיסונית במיקרו-סביבות גידוליות במבחנה

כאן, אנו מפרטים פרוטוקול פשוט, מהיר ואמין של זרימה רב-פרמטרית בסיוע ציטומטריה וגידול על שבב כדי לנטר ולאפיין את השלבים המרכיבים את מחזור החיסון לסרטן. ואכן, הבנה מעמיקה של יחסי הגומלין בין סרטן לתאי מערכת החיסון מספקת תובנות קריטיות כדי להערים על גידולים ולהנחות את הטיפול הקליני.

תרבות משותפת במערכות מבחנה כדי לשחזר את מחזור החיסון לסרטן

למד לזהות וללכוד תת-אוכלוסיות תאים פולשניות בזמן אמת מתרביות משותפות של תאי סרטן עם תאי סטרומה או חיסון. השיטה משתמשת בניתוח חשמלי להערכת השפעת גורמים מופרשים על פלישה תאית ומאפשרת אבחון מטסטזה לצורך קבלת החלטות טיפוליות.

זיהוי ולכידה בזמן אמת של תת-אוכלוסיות תאים פולשניות מתרביות משותפות

גלה סרטונים נוספים