Name: מודל עכבר הטרוטופי לחקר השתלת גרון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 15 s
Description: חקור השתלת לרינקס הטרוטופית בעכברים לחקר ביולוגיית השתלות ותגובות חיסוניות. מודל זה מאפשר מחקרים אימונולוגיים בעלות נמוכה ובקלות רבה יותר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לרנדל רייש על עזרתו המצוינת בצילום וידאו ובעריכה.

מחקר זה בוצע בהתאם לוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של מאיו קליניק (IACUC). עכברי BalbC (בני 10-12 שבועות) שימשו כתורמים ועכברי C57/BL6 (בני 10-12 שבועות) שימשו כמושתלים מכיוון שקומפלקסי ההיסטו-תאימות העיקריים שלהם, H-2Db ו-H-2Kb, בהתאמה, אינם תואמים מבחינה חיסונית, ולכן ניתן לחקור עוד יותר את התגובה החיסונית לשתל. כל המכשירים ששימשו במהלך הניתוח עברו עיקור (ראו איור משלים S1 ותוספת איור S2), ושדה הניתוח נשמר סטרילי לאורך כל הפרוטוקול לפי הוראות IACUC.
1. ניתוח תורם ורכש השתלות
<ol><li>להזריק לתורם בופרנורפין בשחרור מושהה (3.25 מ"ג/ק"ג משקל גוף תת עורי) 30 דקות לפני תחילת ההליך. הנח את העכבר בתיבת ההרדמה של המכרסם להשראת הרדמה באיזופלוראן 3% המועבר עם זרימה של 1 ליטר/דקה O2 . לאחר הרדמה מלאה של בעל החיים, העבירו את העכבר לאזור הגילוח ותנו איזופלורן 1.5% עם זרימה של 1 ליטר/דקה O2 לשמירה על הרדמה. אשר את עומק ההרדמה עם קמצוץ הבוהן.</li>
	<li>לגלח את החזה והצוואר של העכבר עד לקו הלסת ולמרוח קרם דפילטורי. לאחר 30 שניות, נגבו את הקרם עם כרית גזה סטרילית שהורטבה במים והעבירו את העכבר לאזור הניתוח.</li>
	<li>יש למרוח חומר סיכה לעיניים על עיני העכבר. הניחו את העכבר על כרית חימום משלימה כדי להבטיח טמפרטורת גוף תקינה.</li>
	<li>לשתק את העכבר, להכין את האזור הכירורגי שלוש פעמים עם יוד פובידון ואלכוהול, ולאחר מכן לעטוף את העכבר. הערה: בדוק את עומק ההרדמה על ידי כיווץ בוהן ושמור על הרדמה של 1.5% איזופלוראן וזרימה של 1 ליטר לדקה O2 באמצעות מסכת פנים לאורך כל ההליך.</li>
	<li>בצע חתך אופקי קטן בדיוק עדיף על החריץ העל-סטרנלי. בעזרת מספריים עדינים, יש להגביה את העור באופן דו-צדדי דרך החתך עד למנדיבל. צרו מקטע עור בצורת טרפז וכתוצאה מכך נחשפו לבלוטות הרוק הדו-צדדיות, לשרירי הסטרנומטואידים, לשרירים הדיגסטריים ולהיבט העליון של עצם החזה (איור 2A).</li>
	<li>כריתת בלוטות הרוק הדו-צדדיות באמצעות צריבה בחלק העליון שבו מדמיינים וריד קטן העובר דרך הבלוטה (איור 2A). הערה: אם לא נלקחת בזהירות כדי לצרוב את כלי הדם לפני הסרת הבלוטה, דימום משמעותי יכול להיתקל בשלב זה.</li>
	<li>בעדינות לסגת את רקמות הלימפה והשומן לרוחב כדי לחשוף את שרירי הסטרנומטואידים והרצועה. נתחו את שרירי הסטרנומסטואיד הדו-צדדיים מהרקמות הסובבות אותם ונסוגו מהם לרוחב באמצעות רטרקטורים. הערה: תמרון זה יחשוף באופן מלא את קומפלקס ה-LTE עם שרירי הרצועה ויספק מרחב עבודה נוח לכריתה של עורקי הצוואר (איור 2B).</li>
	<li>בצעו חתך בקו האמצע בין שרירי הרצועה וכרו אותם באופן דו-צדדי, תוך הקפדה שלא לפגוע בבלוטת התריס הבסיסית והשארתה על קומפלקס ה-LTE. הערה: לאחר שלב זה, עורקי הצוואר הדו-צדדיים אמורים להיות גלויים (איור 2C).</li>
	<li>היקף לנתח את עורקי הצוואר המשותפים לרמה של עצם הבריח נחותה לרמה של bifurcation הצוואר מעולה. לנתח את עצב הוואגוס ואת הווריד הג'וגולרי הפנימי מעורקי הצוואר. אין לכלול אותם בשתל הנרכש. הערה: ניתן לראות את עורק בלוטת התריס העליון פשוט עדיף על הביפורקציה הנוסעת באופן מדיאלי. השאירו את החיתולית הדקה המקיפה כלי זה ללא פגע ואל תנסו לנתח אותו בהיקף. כלי זה מספק את זרימת הדם למתחם LTE וישמש כפדיקל לאחר ההשתלה. שימור כלי שיט זה הוא בעל חשיבות עליונה.</li>
	<li>נתחו את עורקי הצוואר הפנימיים והחיצוניים בצורה טובה מספיק כדי להיות מסוגלים להתחלק ולהתחלק. אם יש קושי עם הדמיה של כלי, להשתמש retractor נפרד כדי לסגת השרירים digastric לרוחב. הערה: הימנעו מחיתוך עורק הצוואר החיצוני קרוב יותר לביפורקציה כדי למנוע נזק לעורק בלוטת התריס העליון. בשלב זה ניתן להיתקל בעורק העורפי, המסתעף מהקרוטיד החיצוני ועוקב במקביל לעורק הצוואר הפנימי, ואין לבלבל אותו עם עורק הצוואר הפנימי, שהוא גדול יותר ונמצא עמוק יותר (איור 2D).</li>
	<li>באמצעות 8-0 תפרים ניילון, ligate את עורקי הצוואר הפנימיים 2 עד 3 מ"מ עדיף על bifurcation carotid. Ligate את עורקי הצוואר החיצוניים לפחות 3 מ"מ עדיף על נקודת ההסתעפות של עורק בלוטת התריס העליון. הערה: לאחר קשירה זו, קומפלקס ה-LTE יעבור דרך עורקי בלוטת התריס העליונים אל עורקי הצוואר הדו-צדדיים.</li>
	<li>Ligate את העורקים הצוואריים המשותפים ברמה של עצם החזה לחתוך את כל כלי קשירה דו צדדית. שמור את pedicles כלי הדם על גבי קומפלקס LTE כדי למנוע נזק מקרי במהלך דיסקציה נוספת. כדי למנוע דליפת גז או אובדן בשוגג של הרדמה, יש לוודא שפג תוקפו של בעל החיים לפני ביצוע חתכים כלשהם בדרכי הנשימה.</li>
	<li>מחלקים את השרירים infrahyoid ברמה של היואיד. צור כריתת לוע קדמית פשוט נחותה מההיואיד. יש לשאת את החתך אל החיתולית הפריורטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה מעולה.</li>
	<li>מעבירים את קנה הנשימה מתחת לטבעת קנה הנשימה החמישית ונושאים את החתך דרך הוושט עד לפאשיה הפרברטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה נחותה. לשחרר את קנה הנשימה ואת הוושט מן fascia prevertebral הבסיסית מן הכיוון נחות עדיף. הערה: שמור את pedicles כלי הדם על גבי קומפלקס LTE כדי למנוע נזק מקרי במהלך דיסקציה נוספת.</li>
	<li>צור כריתת לוע קדמית פשוט נחותה מההיואיד. יש לשאת את החתך אל החיתולית הפריורטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה מעולה. חלקו את כל חיבורי הלימפה או רקמת החיבור שנותרו בין קומפלקס ה-LTE לרקמה הסובבת אותו. הסר את השתל. הערה: השתל מכיל את הגרון התורם, קנה הנשימה, בלוטות בלוטת התריס, בלוטות יותרת התריס, הוושט ושרירי הגרון כיחידה מורכבת (איור 2E).</li>
</ol>2. הכנת שתלים
<ol><li>מניחים את השתל שנרכש בצלחת פטרי סטרילית ושוטפים אותו במי מלח רגילים כדי להיפטר מכל קרישי הדם. באמצעות מיקרו מלקחיים, חלבו בעדינות את הדם והקרישים מתוך עורקי הצוואר הדו-צדדיים. להרחיב את עורקי הצוואר הדו-צדדיים באמצעות מיקרו-מרחיבים בקוטר 1 מ"מ.</li>
	<li>באמצעות מחט 30 גרם קהה, להזריק כ 2 מ"ל של מלח heparinized בכל עורק הצוואר כדי לשטוף את השתל. הערה: ניתן לראות דם ומלח נשטפים מתוך עורק הצוואר הנגדי וקצות כלי הדם הקטנים והחופשיים, מה שמאשר את עורקי בלוטת התריס העליונים שלמים.</li>
	<li>הבלו את האדוונטיטיה הרחק מקצות העורקים כך שיהיו להם קצוות נקיים לאנסטומזה. הערה: ניתן להשאיר את השתל במי מלח שעברו הפרין וניתן לקחת הפסקה קצרה של עד 3 שעות לפני השתלתו במושתל9.</li>
</ol>3. ניתוח מושתל ואנסטומוזיס של כלי הדם
<ol><li>הכן את העכבר המקבל באותו אופן שתואר עבור התורם לאחר שלבי ההרדמה, הגילוח וההכנה הכירורגית. להזריק לעכבר המושתל משכך כאבים בשחרור מורחב תת עורית 30 דקות לפני תחילת הניתוח.</li>
	<li>באמצעות אזמל יש לבצע חתך בצוואר בקו האמצע המשתרע מקו הלסת בצורה עדיפה עד לעצם החזה. הרם את העור בצד שמאל וחזור בו לרוחב.</li>
	<li>הבלו את בלוטת הרוק השמאלית, cauterizing את כלי מעולה כפי שתואר לעיל. כלו את רקמת השומן והלימפה על-ידי חלוקת כל כלי הדם הנראה לעין עם צריבה בטמפרטורה נמוכה, תוך הקפדה שלא לפגוע בווריד הג'וגולרי החיצוני שמתחתיו (איור 3A).</li>
	<li>לנתח את הווריד הג'וגולרי החיצוני בהיקף. השתמש לפחות 5 מ"מ של אורך ברור של כלי עבור anastomosis. יש להשתמש בצריבה בטמפרטורה נמוכה או בליגייט ולחלק את כל הוורידים הגדולים יחסית המסתעפים מהווריד הג'וגולרי.</li>
	<li>לנתח את שריר הסטרנומסטואיד ולחזור בו לרוחב. שמור על הווריד המנותק מוגן מאחורי השריר כדי למנוע מגע ישיר עם retractor.</li>
	<li>כלו את שרירי הרצועה השמאלית כדי לקבל גישה לעורק הצוואר של הנמען. נתחו באופן היקפי את עורק הצוואר המשותף מעצם הבריח באופן נחות עד לביפורקציה של הקרוטיד בצורה מעולה (איור 3B).</li>
	<li>מעבירים את חומר הרקע מתחת לווריד הג'וגולרי החיצוני ומפעילים את מהדקי כלי ה-V3 בקירוב הכפול.</li>
	<li>מניחים תפר ניילון 10-0 דרך הדופן הקדמית של הווריד הג'וגולרי החיצוני במיקום של הוורידיות הרצויה ומשתמשים בתפר זה כדי למשוך קדמית ולאוהל את הכלי.</li>
	<li>חותכים לתפר עם מיקרו-סקיסורים עמוקים מספיק כדי ליצור את הוונוטומיה בגודל המתאים של חריץ יחיד ולוודא שהחתך הוא לגמרי דרך הדופן הוורידית.</li>
	<li>באמצעות מחט 30 גרם קהה, לשטוף את החלק הפנימי של הווריד עם מלח heparinized.</li>
	<li>מניחים את קומפלקס ה- LTE התורם בין עורק הצוואר השמאלי המקבל לבין וריד הג'וגולרי החיצוני השמאלי. יישרו את הקצה החופשי של עורק הצוואר השמאלי של התורם לכיוון הווריד החיצוני השמאלי של המקבל ושיפרו את קצות כלי הדם במספריים חדים.</li>
	<li>באמצעות ארבעה תפרים מניילון 10-0 שנפרעו, אנסטומוז את עורק הצוואר השמאלי של התורם ואת הווריד הג'וגולרי החיצוני השמאלי המקבל בצורה מקצה לצד.</li>
	<li>החליקו את חומר הרקע מתחת לעורק הצוואר המשותף של המקבל והניחו את מהדקי כלי הדם הכפולים בקירוב A3 על עורק הצוואר המשותף של המקבל. צור ארטריוטומיה באותו אופן כמו הוונוטומיה. הערה: ודא כי העורק הוא באותו גודל כמו לומן של עורק הצוואר התורם. אם הוא גדול מדי, דימום רב יתרחש לאחר הסרת המהדקים. אם הוא קטן מדי, זרימת הדם לשתל תיחסם.</li>
	<li>Anastomose עורק הצוואר הימני התורם לעורק הצוואר השמאלי המקבל באופן מקצה לצד באמצעות שישה תפרים 10-0 ניילון מופרעים. הערה: יש לכבד טכניקה מיקרו-וסקולרית נכונה בכל כלי הדם. מעבר דרך הדופן האחורית גורם לזרימת דם מכווצת במידה ניכרת, מה שמסכן את הישרדותו של השתל. בשל גודלם הקטן של כלי השיט, קשה מאוד לנסות לבצע מחדש את התפרים.</li>
	<li>הסר את המהדקים בצד הוורידי. אם נתקלים בדימום, הפעילו לחץ עדין עם קצוות כותנה.</li>
	<li>הסר את מלחציים על העורק ומיד להפעיל לחץ עדין עם קצוות כותנה. הערה: דימום מסוים צפוי בשלב זה, אשר בדרך כלל מפסיק לאחר 1 דקה עם לחץ עדין.</li>
	<li>בדוק את שלמות זרימת הדם בעורק והווריד. הערה: עם זרימה עורקית שלמה, פעימה של עורק הצוואר התורם נראית בדרך כלל, ובלוטת התריס התורמת משתנה מהצבע השקוף הסמוק שלה בחזרה לצבע האדמדם המקורי שלה. צבע אדום של כלי קטן על קומפלקס LTE ניתן גם לראות.</li>
	<li>להשקות את השדה הניתוחי עם תמיסת מלח heparinized ולסגור את החתך בעור עם תפר מונופילמנט 5-0 בצורה רצה. יש למרוח משחה אנטיביוטית או דבק עור על החתך.</li>
	<li>להזריק 1 מ"ל של מלח חם תת עורית כדי להסביר את אובדן הנוזלים במהלך הניתוח.</li>
	<li>עצור את ההרדמה והעבר את העכבר לכלוב התאוששות. התבונן בעכבר על כרית חימום עד שהוא ער לחלוטין כדי למנוע היפותרמיה.</li>
</ol>

<ol><li>Strome, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laryngeal+transplantation+and+40-month+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Laryngeal transplantation and 40-month follow-up.</a> The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).</li>
<li>Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+psychosocial+consequences+of+total+laryngectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Physical and psychosocial consequences of total laryngectomy.</a> Clinical Otolaryngology. 15 (5), 421-425 (1990).</li>
<li>Heyes, R., Iarocci, A., Tchoukalova, Y., Lott, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+role+of+mesenchymal+stem+cell+therapy+in+vascularized+composite+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory role of mesenchymal stem cell therapy in vascularized composite allotransplantation.</a> Journal of Transplantation. 2016, (2016).</li>
<li>Kluyskens, P., Ringoir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follow-up+of+a+human+larynx+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Follow-up of a human larynx transplantation.</a> Laryngoscope. 80 (8), 1244-1250 (1970).</li>
<li>Krishnan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+current+status+of+human+laryngeal+transplantation+in+2017%3A+A+state+of+the+field+review%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">The current status of human laryngeal transplantation in 2017: A state of the field review.</a> Laryngoscope. 127 (8), 1861-1868 (2017).</li>
<li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 101 (11), 950-953 (1992).</li>
<li>Lorenz, R. R., Dan, O., Nelson, M., Fritz, M. A., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+laryngeal+transplant+model%3A+technical+advancements+and+a+redefined+rejection+grading+system%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Rat laryngeal transplant model: technical advancements and a redefined rejection grading system.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 111 (12), 1120-1127 (2002).</li>
<li>Shipchandler, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+mouse+model+for+studying+laryngeal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">New mouse model for studying laryngeal transplantation.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 118 (6), 465-468 (2009).</li>
<li>Strome, M., Wu, J., Strome, S., Brodsky, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+preservation+techniques+in+a+vascularized+rat+laryngeal+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">A comparison of preservation techniques in a vascularized rat laryngeal transplant model.</a> The Laryngoscope. 104 (6), 666-668 (1994).</li>
<li>Nocini, R., Molteni, G., Mattiuzzi, C., Lippi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Updates+on+larynx+cancer+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Updates on larynx cancer epidemiology.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 32 (1), 18-25 (2020).</li>
<li>Strome, S., Sloman-Moll, E., Wu, J., Samonte, B. R., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+for+a+vascularized+laryngeal+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Rat model for a vascularized laryngeal allograft.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 101 (11), (1992).</li>
<li>Work, W. P., Boles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larynx%3A+Replantation+in+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Otolaryngology-Head+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Larynx: Replantation in the dog.</a> Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 82 (4), 401-402 (1965).</li>
<li>Birchall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+for+experimental+revascularized+laryngeal+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Model for experimental revascularized laryngeal allotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 89 (11), 1470-1475 (2002).</li>
<li>Nakai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+laryngeal+transplantation+with+normal+circulation+maintained+by+combination+with+the+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Rat model of laryngeal transplantation with normal circulation maintained by combination with the tongue.</a> Microsurgery. 23 (2), 135-140 (2003).</li>
<li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+laryngeal+allograft+survival+using+low-dose+everolimus%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngology-Head+and+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Long-term laryngeal allograft survival using low-dose everolimus.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 142 (1), 72-78 (2010).</li>
<li>Lott, D. G., Russell, J. O., Khariwala, S. S., Dan, O., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ten-month+laryngeal+allograft+survival+with+use+of+pulsed+everolimus+and+anti-%CE%B1%CE%B2+T-cell+receptor+antibody+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Otology%2C+Rhinology+%26+Laryngology%22%5BJournal%5D)">Ten-month laryngeal allograft survival with use of pulsed everolimus and anti-αβ T-cell receptor antibody immunosuppression.</a> Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 120 (2), 131-136 (2011).</li>
<li>Lott, D. G., Dan, O., Lu, L., Strome, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoy+NF-%CE%BAB+fortified+immature+dendritic+cells+maintain+laryngeal+allograft+integrity+and+provide+enhancement+of+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Decoy NF-κB fortified immature dendritic cells maintain laryngeal allograft integrity and provide enhancement of regulatory T cells.</a> The Laryngoscope. 120 (1), 44-52 (2010).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים. הוצאות הנסיעה והמחיה של אגהאן סלפצ'י למחקר מומנו על ידי המועצה למחקר מדעי וטכנולוגי של טורקיה (TUBITAK).

השכיחות והשכיחות של סרטן הגרון עלו ב -12% ו -24%, בהתאמה, במהלך שלושת העשורים האחרונים, ורבים מהחולים הללו עוברים כריתת גרוןלטיפול 10. הליך זה מחמיר באופן משמעותי את איכות חייו של האדם, ולכן רצוי טיפול חלופי. allotransplantation מרוכב וסקולרי של הגרון יכול לשפר את יכולתו של המטופל לנשום ולדבר; עם זאת, עדיין נדרש מחקר לפני שניתן יהיה להשתמש בטכניקה זו באופן קליני עבור אוכלוסיית מטופלים זו. מאמר זה מציע מודל עכבר חסכוני של השתלת גרון שיכול לאפשר חקירה של משטרים מדכאי חיסון שונים.
<p class="jove_...

עבור חולים הסובלים מנזק בלתי הפיך לגרון או מסרטן הגרון, כריתת גרון כוללת היא לעתים קרובות האפשרות היחידה1. כריתת גרון כוללת משאירה את המטופלים ללא יכולת לנשום ולדבר בכוחות עצמם, בנוסף לחוות מצוקה חברתית ופסיכולוגית2. חולים עם סרטן הגרון הזקוקים לכריתת גרון כוללת הם מועמדים פוטנציאליים מצוינים להשתלת גרון. בעוד השתלת הגרון האנושי בסביבה של נזק בלתי הפיך לגרון בוצעה, allotransplantation של הגרון נמנע כיום בחולים אלה בשל החשש מהישנות הגידול, את האפשרות של דחייה כרונית, וזיהומים שמקורם בתורם3. דיכוי חיסוני הוא הגורם העיקרי לחששות אלה. האובדן הדרמטי של החולה הראשון שעבר השתלת גרון חלקית עקב הישנות הגידול לאחר טיפול חיסוני קונבנציונלי הוא עדות לכך שיש להמציא משטר דיכוי חיסוני מתאים לפני שיבוצעו ניסיונות נוספים להשתלה בחולי סרטן הגרון 4,5.
כדי להבין טוב יותר את התגובה החיסונית של המארח לגרון מושתל, מודל השתלת הגרון הראשון בחולדות פותח בשנת 1992 על ידי Strome, ושיפורים בטכניקה הניתוחית נעשו בשנת 2002 6,7. למרות שמודל זה יעיל לחקר השתלת גרון, המחסור בחומרים חיסוניים ספציפיים לחולדה והעלות הגבוהה יותר הכרוכה במודלים של חולדות הובילו לפיתוח מודל עכברים חדש לחקר השתלת גרון בשנת 20098.
היישום העיקרי של הטכניקה המתוארת הוא ללמוד משטרי תרופות אימונוסופרסיביים שונים בהשתלת גרון. שיפור הטיפולים האימונוסופרסיביים הנוכחיים עשוי להרחיב את מאגר המועמדים ולהוביל להשתלה בטוחה בחולי סרטן. היתרונות של מודל עכבר זה הם העלות-תועלת שלו והזמינות הרחבה של נתונים אימונולוגיים וריאגנטים.
צוותים העובדים על משטרי טיפול מדכאי חיסון להשתלת גרון יכולים להשתמש בשיטה זו כדי לאסוף נפח גדול של נתונים אימונולוגיים, וניתן לבדוק ולהשוות במהירות משטרי תרופות שונים. שיטות טיפול פוטנציאליות אחרות שיכולות לווסת את התגובה החיסונית להשתלה, כגון זריקות תאי גזע, ניתנות לבדיקה גם באמצעות מודל זה. לבסוף, ניתן להמציא ניסויים כדי לבחון השפעות מערכתיות ארוכות טווח של השתלת גרון על ידי הארכת תקופת המעקב.
הטכניקה המתוארת כאן משתמשת באנסטומוזות מקצה לצד כדי לספק זרימה עורקית וורידית לשתל גרון הטרוטופי. השתל הוא קומפלקס לרינגוטרכאו-ושט (LTE) הכולל את הגרון, בלוטות התריס, בלוטות יותרת התריס, קנה הנשימה והוושט של התורם, עם עורקי קרוטיד דו-צדדיים ופדיקלים שלמים. עורק הצוואר של תורם אחד עובר אנסטומוס לעורק הצוואר המקבל ומספק זרימת דם עורקית, בעוד שעורק הצוואר של התורם השני משוקע לווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל ומספק זרימת דם ורידית (איור 1).
מספר שינויים נעשו בטכניקה הכירורגית של מודל החולדה כדי להבטיח הצלחה במודל העכבר. לדוגמה, נעשה שימוש בחומר הרדמה בשאיפה במקום בחומר הזרקה כדי להגביר את השליטה על עומק ההרדמה ולהפחית את הסיבוכים. תפירה רציפה משמשת באנסטומוזיס עורקי-עורקי בחולדות; עם זאת, בשל גודל קטן יותר של כלי עכבר, זה קשה מבחינה טכנית יכול לגרום להיצרות של כלי לומן7. כתוצאה מכך, תפרים מופרעים משמשים במודל העכבר ומביאים לפטנטיות כלי משופרת. בנוסף, במודל החולדה, פדיקל עורק בלוטת התריס העליון (STA) מנותח החוצה ומדמיין. בהתחשב בגודלו הקטן יותר של ה-STA בעכברים, דיסקציה זו עלולה לגרום לנזק ואף להעברה של ה-STA. כתוצאה מכך, הוא אינו מנותח במודל העכבר. במקום זאת, החיתולית הסמוכה נשמרת כדי להבטיח שה-STA יישאר שלם.
המלכודות הפוטנציאליות העיקריות של טכניקה זו כוללות פגיעה בפדיקלים המורכבים של LTE התורם, ביצוע כריתת עורקים או כריתת כלי דם בגודל שגוי, חסימת כלי דם באתרי האנסטומוזה או השארת רווחים באתרי האנסטומוזיס שעלולים לגרום לדימום. כדי להימנע מטעויות אלה, יש לנקוט בזהירות בעת רכישת השתל התורם על ידי השארת שרוול של רקמה סביב פדיקל STA. העורקים והוונוטומיות צריכים להיות גדולים מספיק כדי לאפשר זרימת דם, אך קטנים מספיק כדי למנוע דליפה. יש להשתמש במספר מתאים של תפרים עבור anastomoses כדי לסגור את כל הפערים, אבל לא יותר מדי כדי להסתיר את כלי.
אם היכרות עם טכניקות microsurgical מתקבל, הליך זה יכול להתבצע כ 3 שעות. מודל השתלת הגרון הזה יכול להתבצע באופן אמין בעכברים ולהשתמש בו כדי לחקור את התגובה החיסונית של המארח לאחר allotransplantation מרוכב וסקולרי.

<table><tbody><tr><td>#1 מהדקי נייר</td><td>מהדקים</td><td>OP-7404</td><td>מהדקים מעוצבים באופן ידני לשימוש כמחזירים</td></tr><tr><td>מזרקי אינסולין 1 סמ"ק&nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td>329412</td><td>27 גרם 5/8</td></tr><tr><td>10-0 אתילון ניילון תפר</td><td>אתיקון</td><td>2870G</td><td></td></tr><tr><td>25 גרם מחט גלישה מדויקת</td><td>BD&nbsp;</td><td>305125</td><td>1</td></tr><tr><td>ב-3 מ"ל מזרק קצה Luer-Lok</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>309657</tr><tr><td>30 גרם סטרילי סטנדרטי מחטים</td><td>קהות Cellink</td><td></td> NZ5300505001 <td></td></tr><tr><td>5-0 תפר מונוקריל</td><td>Ethicon</td><td>Y822G</td><td></td></tr><tr><td>8-0 אתילון ניילון תפר Ethicon</td><td></td><td>2815G</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים אדסון</td> כלים <td>מדעיים עדינים</td><td>11027-12</td><td>ישר, 1 x 2 שיניים</td></tr><tr><td>מספריים אדוונטיטיה</td><td>S& T</td><td>SAS-10</td><td>19 מ"מ, 10 ס"מ,</td></tr><tr><td>מלקחיים בזווית</td><td>ישרה Fine Science</td><td>Tools 00109-11</td><td>45/11 ס"מ</td></tr><tr><td>דמעות מלאכותיות חומר סיכה משחה אופטלמית</td><td>Akorn Animal Health</td><td>59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>בד פלסטר קצה האצבע</td><td>Cardinal Healthcare</td><td>299399</td><td></td></tr><tr><td>Betadine Solution Swabsticks</td><td>Purdue Products</td><td>67618-153-01</td><td></td></tr><tr><td>הזרקת בופרנקס</td><td>CIII</td><td>12495-0757-1</td><td>0.3 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>מהדק מריחת מלקחיים ללא נעילה</td><td>מדויק כירורגי & מכשירים מדעיים</td><td>ASSI. CAF5</td><td>14 ס"מ</td></tr><tr><td>צמר גפן</td><td>פוריטן</td><td>10806-001-PK</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td></td><td></td><td></td>DeBakey</tr><tr><td>Dermabond Mini</td><td>Cardinal Healthcare</td><td>315999</td><td></td></tr><tr><td>לוחות ניתוח</td><td>Mopec</td><td>22-444-314</td><td></td></tr><tr><td>פלקון סטרילי חד פעמי צלחת פטרי חד פעמית&nbsp;</td><td>Corning</td><td>25373-041</td><td>35 מ"מ</td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14029-10</td> קוצץ להב 2 מהירויות זהב <td>A5 מעוגל 10 ס"מ</td></tr>&<tr><td>nbsp;</td><td>Oster</td><td>008OST-78005-140</td><td>#10</td></tr><tr><td>מסיר שיער פורמולה לרגישות</td><td>Nair</td><td>2260000033</td><td></td></tr><tr><td>הפרין&nbsp;</td><td>Meitheal Pharmaceuticals</td><td>71288-4O2-10</td><td>10,000 יחידות USP לכל 10 מ"ל</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>66794-013-25</td><td></td></tr><tr><td>בטמפ' נמוכה מיקרו קצה עדין Cautery</td><td>Bovie Medical</td><td>AA90</td><td></td></tr><tr><td>Mercian נראות חומר רקע</td><td>סינוביס מיקרו חברות</td><td>VB3</td><td>ירוק</td></tr><tr><td>מיקרו-וסקולרי מהדק קירוב ללא מסגרת</td><td>מדויק כירורגי & המגבר; מכשירים מדעיים</td><td>ASSI. ABB11V</td><td>0.4-1 מ"מ ערכת</td></tr><tr><td>מסכת פנים עכבר</td> בקוטר כלי <td>Xenotec</td><td>XRK-S</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td> קטנה <td>S& T</td><td>C-14 W</td><td>5.5 אינץ', 8 מ"מ, 0.4 מ"מ</td></tr><tr><td>Press n' Seal</td><td>Glad</td><td>70441</td><td></td></tr><tr><td>אזמל</td><td>בראון</td><td>BA210</td><td>10 להב</td></tr><tr><td>יחיד מיני כלי מהדק</td><td>מדויק כירורגי & מכשירים מדעיים</td><td>ASSI. ABB11M.31</td> <td>(8 מ"מ), 3 x 1 מ"מ Rnd. Bl., זוג שחור</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול סטריליות</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>יריעות וילונות חד פעמיות סטריליות</td><td>Dynarex</td><td>DYN4410-CASE</td><td></td></tr><tr><td>רפידות גזה סטריליות</td><td>Dukal</td><td>1212</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח סטריליים&nbsp;</td><td>Hospira</td><td>236173</td><td>NaCl 0.9%</td></tr> <tr><td>כפפות כירורגיות סטריליות</td><td>Gammex</td><td>851_A</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים ישרים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>00108-11</td><td>11 ס"מ</td></tr><tr><td>מלקחיים רקמות</td><td>מדויקים כירורגיים & מכשירים מדעיים</td><td>ASSI. JFLP3</td><td>13.5 ס"מ, 8 מ"מ, 0.3 מ"מ</td></tr><tr><td>מספריים דפוס Vannas&nbsp;</td><td>כירורגי מדויק & מכשירים מדעיים</td><td>ASSI. SDC15RV</td><td>15 ס"מ, 8 מ"מ, להב מעוקל 7 מ"מ</td></tr><tr><td>Vannas מספריים קפיצים</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td>3 מ"מ קצה חיתוך,</td></tr><tr><td>קצה מרחיב כלי מעוקל&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>00126-11</td><td>קוטר 0.1 מ"מ/זווית 10/11 ס"מ</td></tr><tr><td>מרחיב כלים, קו קלאסי</td><td>S& T</td><td>D-5a.3 רוחב</td><td>9 מ"מ, 0.3 מ"מ, זוויתי 10</td></tr></tbody></table>

מודל עכבר הטרוטופי לחקר השתלת גרון

A Heterotopic Mouse Model for Studying Laryngeal Transplantation

השתלה הטרוטופית של הגרון, למרות שהיא הליך מאתגר מבחינה טכנית, מציעה ניתוח מדעי יותר ויתרונות עלות בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים. למרות שתואר לראשונה על ידי Shipchandler et al. בשנת 2009, טכניקה זו אינה בשימוש נרחב, אולי בשל הקשיים בלמידת הטכניקה המיקרו-כירורגית והזמן הנדרש כדי לשלוט בה. מאמר זה מתאר את הצעדים הכירורגיים בפירוט, כמו גם מכשולים פוטנציאליים שיש להימנע מהם, על מנת לעודד שימוש יעיל בטכניקה זו.
במודל זה, עורקי הצוואר הדו-צדדיים של הגרון התורם עוברים אנסטומוס לעורק הצוואר המקבל ולווריד הג'וגולרי החיצוני, מה שמאפשר זרימת דם דרך השתל. זרימת הדם יכולה להיות מאושרת תוך ניתוחית על ידי הדמיה של מילוי דם בעורקי הצוואר הדו-צדדיים של השתל, אדמומיות של בלוטות התריס של השתל, ודימום מכלי מיקרו בשתל. המרכיבים החיוניים להצלחה כוללים שימור עדין של כלי השתל, ביצוע כריתת עורקים ווונוטומיה בגודל הנכון, ושימוש במספר המתאים של תפרים על האנסטומוזים העורקיים-עורקיים והעורקים-ורידיים כדי לאבטח כלי דם ללא דליפה ולמנוע חסימה. 
כל אחד יכול להיות מיומן במודל זה עם הכשרה מספקת ולבצע את ההליך בערך 3 שעות. אם מבוצע בהצלחה, מודל זה מאפשר לבצע מחקרים אימונולוגיים בקלות ובעלות נמוכה.

אישור השתלה מוצלחת באמצעות הפרוטוקול שתואר לעיל, ניתן להעריך את זרימת הדם למתחם LTE על ידי התבוננות בפעימה של עורק הצוואר התורם לאחר הסרת מלחציים כלי הדם. הפעימה נראית בדרך כלל, וצבע אדום מיידי של עורק התורם מאשר זרימת דם פעילה (איור 4A). אם האנסטומוזיס אינו יעיל, לעורק לא תהיה פעימה, ייראה מכווץ חלקית ויהיה חיוור בצבעם (איור 4B).
טכניקה נוספת כדי לאשר את הפטנט העורקי היא לחפש שינוי צבע על בלוטת התריס התורם לאחר מה...

מטרתו של כתב יד זה היא לתאר את הצעדים המיקרו-כירורגיים הנדרשים לביצוע השתלת גרון הטרוטופית בעכברים. היתרונות של מודל עכבר זה בהשוואה למודלים אחרים של בעלי חיים של השתלת גרון הם עלות-תועלת שלו ואת הזמינות של בדיקות אימונולוגיות ונתונים.

Laryngeal heterotopic transplantation, although a technically challenging procedure, offers more scientific analysis and cost benefits compared to other ...

מודלים של השתלת גרון תוארו בעכברים ובחולדות. עבודתו הקודמת של סניור אלטר התמקדה במציאת שיטה יעילה יותר באמצעות עורקי הצוואר התורמים לאנסטומזה, תוך מייתר את הצורך לנתח את עורקי בלוטת התריס העליונים. בסרטון זה, תיארנו הליך זה בעכברים.מודל השתלת גרון עכבר זה מאפשר לבצע מחקרים אימונולוגיים בקלות ובעלות נמוכה. למרות שמבחינה טכנית מאתגר יותר בשל גודלם הקטן יותר של כלי הדם בהשוואה למודל חולדה, ניתן לבצע הליך זה תוך כשלוש שעות אם מתקבלת היכרות עם הצעדים הכירורגיים. לאחר הרדמה מלאה של בעל החיים, העבירו את העכבר לאזור הגילוח שם יועברו 1.5% איזופלוראן עם זרימת חמצן של ליטר לדקה באמצעות מסכת פנים לתחזוקת הרדמה.אשר את עומק ההרדמה עם קמצוץ הבוהן. יש לגלח את החזה והצוואר של העכבר עד לקו הלסת ולמרוח קרם להסרת שיער. ואחרי 30 שניות, נגבו את הקרם והעבירו את העכבר לאזור הניתוח.לשתק את העכבר ולהכין את אזור הניתוח שלוש פעמים עם פובידון-יוד ואלכוהול, ולאחר מכן עטוף את העכבר. בצע חתך אופקי קטן בדיוק עדיף על החריץ העל-סטרנלי. בעזרת מספריים עדינים, מרימים את העור באופן דו-צדדי דרך החתך עד למנדיבל ומוציאים מקטע עור בצורת טרפז.הבלו את בלוטות הרוק הדו-צדדיות באמצעות צריבה בחלק העליון שבו מדמיין וריד קטן העובר דרך הבלוטה. לנתח את השרירים החזה הדו-צדדיים מהרקמות הסובבות אותם ולסגת אותם לרוחב. בצע חתך בקו האמצע בשרירי הרצועה וכרת אותם באופן דו-צדדי תוך הקפדה שלא לפגוע בבלוטת התריס הבסיסית והשארתה על קומפלקס הוושט או ה-LTE של הגרון.לאחר שלב זה, עורקי הצוואר הדו-צדדיים נראים לעין. היקף לנתח את עורקי הצוואר המשותפים לרמה של עצם הבריח נחותה לרמה של bifurcation הצוואר מעולה. עצב התועה ווריד הג'וגולרי הפנימי מנותקים ללא עורקי הצוואר ואינם כלולים בשתל הנרכש.נתחו את עורקי הצוואר הפנימיים והחיצוניים בצורה טובה מספיק כדי להיות מסוגלים להתחלק ולהתחלק. באמצעות תפרים מניילון 10-0, ליגייט את עורקי הצוואר הפנימיים שניים עד שלושה מילימטרים עדיפים על ביפורקציה הצווארית. ליגייט את עורקי הצוואר החיצוניים לפחות שלושה מילימטרים עדיפים על נקודת ההסתעפות של עורק בלוטת התריס העליון וליגייט את עורקי הצוואר המשותפים ברמת עצם החזה.חותכים את כל כלי הליגייט באופן דו-צדדי. שמור את pedicles כלי הדם על גבי קומפלקס LTE כדי למנוע נזק מקרי במהלך דיסקציה נוספת. כדי למנוע דליפת גז או אובדן בשוגג של הרדמה, יש לוודא שפג תוקפו של בעל החיים לפני ביצוע חתכים כלשהם בדרכי הנשימה.מעבירים את קנה הנשימה מתחת לטבעת קנה הנשימה החמישית ונושאים את החתך דרך הוושט עד לפאשיה הפרברטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה נחותה. לשחרר את קנה הנשימה ואת הוושט מן fascia prevertebral הבסיסית נחות כדי מעולה. צור כריתת הלוע הקדמית פשוט נחותה מההיואיד.יש לשאת את החתך אל החיתולית הפריורטברלית כדי לשחרר את קומפלקס ה-LTE בצורה מעולה. חלקו את כל חיבורי הלימפה או רקמת החיבור שנותרו בין קומפלקס ה-LTE לרקמה הסובבת אותו. ולבסוף, להסיר את השתל.מניחים את השתל שנרכש בצלחת פטרי סטרילית ושוטפים במי מלח רגילים כדי להיפטר מכל קרישי הדם. מרחיבים את עורקי הצוואר הדו-צדדיים באמצעות מיקרו-מרחיבים של מילימטר אחד. באמצעות מחט קהה בעלת 30 מדים, יש להזריק כשני מיליליטר של מלח הפריני בכל עורק קרוטיד כדי לשטוף את השתל.דם ותמלחות ייראו נשטפים מתוך עורק הצוואר הנגדי וקצוות כלי הדם הקטנים והחופשיים המאשרים את עורקי בלוטת התריס העליונים שלמים. ניתן להשאיר את השתל במי מלח שעברו הפרין וניתן לקחת הפסקה קצרה עד שלוש שעות לפני השתלתו במושתל. הכן את העכבר המקבל בדיוק באותו אופן כפי שתואר עבור התורם לאחר השראת הרדמה, גילוח ושלבי הכנה לניתוח.להזריק לעכבר המושתל משכך כאבים בשחרור מורחב תת עורית 30 דקות לפני תחילת הניתוח. באמצעות אזמל יש לבצע חתך בצוואר בקו האמצע המשתרע מקו הלסת בצורה עדיפה עד לעצם החזה. הרם את העור בצד שמאל וחזור בו לרוחב.הבלו את בלוטת הרוק השמאלית cauterizing כלי מעולה כפי שתואר לעיל. הבלו את רקמת השומן והלימפה על ידי חלוקת כל כלי גלוי עם צריבה בטמפרטורה נמוכה. נזהר שלא לפגוע בווריד הג'וגולרי החיצוני הבסיסי.לנתח את הווריד הג'וגולרי החיצוני בהיקף. השתמש לפחות חמישה מילימטרים של אורך ברור של כלי עבור anastomosis. לנתח את שריר הסטרנומסטואיד ולחזור בו לרוחב.יש לנתח את עורק הצוואר המשותף מעצם הבריח באופן נחות עד לביפורקציה של הצוואר בצורה מעולה. מעבירים את חומר הרקע מתחת לווריד הג'וגולרי החיצוני ומפעילים את מהדקי כלי השיט B-3 המשוערים הכפולים. מניחים תפר ניילון 10-0 דרך הדופן הקדמית של הווריד הג'וגולרי החיצוני במיקום המונוטומיה הרצויה, ומשתמשים בתפר כדי למשוך כוונה קדמית לכלי.חותכים רק עמוק לתפר עם מיקרו מספריים כדי להקל על יצירת venotomy חריץ יחיד בגודל הנכון, וכדי להבטיח את החיתוך הוא לחלוטין דרך הדופן הוורידית. בעזרת מחט קהה בעלת 30 מדים, יש לשטוף את החלק הפנימי של הווריד במי מלח שעברו הפרינה. מקם את קומפלקס ה- LTE התורם בין עורק הצוואר השמאלי המקבל לבין וריד הג'וגולרי החיצוני השמאלי.יישרו את הקצה החופשי של עורק הצוואר השמאלי של התורם לכיוון הווריד החיצוני החיצוני השמאלי של המקבל ושיפרו את הקצה באמצעות מספריים חדים. באמצעות ארבעה תפרים מניילון 10-0 שנפרעו, אנסטומוז את עורק הצוואר השמאלי של התורם ואת הווריד הג'וגולרי החיצוני השמאלי המקבל בצורה מקצה לצד. החליקו את חומר הרקע מתחת לעורק הצוואר המשותף של הנמען והניחו את מהדקי כלי הדם הכפולים בקירוב A-3.צור ארטריוטומיה באותו אופן כמו הוונוטומיה. Anastomose התורם עורק הצוואר הימני לעורק הצוואר השמאלי המקבל באופן מקצה לצד. שימוש בשישה תפרים מופרעים עם ניילון 10-0 הוא אידיאלי עבור anastomosis העורק.הסר את המהדקים בצד הוורידי. אם דימום הוא נתקל, להחיל לחץ עדין עם קצוות כותנה. הסר את מלחציים על העורק ומיד להפעיל לחץ עדין עם קצוות כותנה.צפוי דימום מסוים בשלב אשר בדרך כלל מפסיק לאחר דקה אחת בלחץ עדין. בדוק את שלמות זרימת הדם בעורק בווריד. עם זרימה עורקית שלמה, פעימה של עורק הצוואר התורם נראית בדרך כלל ובלוטת התריס התורמת תשתנה מצבעה השקוף הסמוק בחזרה לצבעה האדמדם המקורי.צבע אדום של כלי קטן על קומפלקס LTE ניתן גם לראות. סגרו את החתך בעור עם תפר מונופילמנט 5-0 בצורה רצה. יש למרוח דבק עור על החתך.להזריק מיליליטר אחד של מלח חם תת עורית כדי להסביר את אובדן הנוזלים במהלך הניתוח. עצור את ההרדמה והעבר את העכבר לכלוב התאוששות. התבונן בעכבר על כרית חימום עד שהוא ער לחלוטין כדי למנוע היפותרמיה.הצלחה כירורגית ניתן להעריך מיד לאחר הסרת מלחציים כלי. איור A מייצג ניתוח מוצלח מכיוון שניתן לדמיין את זרימת הדם בעורקי הצוואר של הגרון התורם ובלוטות התריס הפכו לאדומות. איור B מייצג ניתוח שלא צלח מכיוון שלא ניתן לדמיין את זרימת הדם בעורקי הצוואר של הגרון התורם ובלוטות התריס נותרו חיוורות.לאחר 15 יום בהיעדר דיכוי חיסוני, לרוב המושתלים אין זרימת דם להשתלה. ניתן להעריך את הפטנטיות של העורק באופן מקרוסקופי על ידי ניתוח קומפלקס laryngotracheal ללא רקמת המקבל שמסביב והדמיה של אנסטומוזיס מקצה לצד. תודה. לאחר צפייה בסרטון זה, עליך להבין כיצד להשתיל באופן הטרוטופי קומפלקס קנה הנשימה בגרון מעכבר אחד למשנהו תוך כשלוש שעות.מודל אפשרי וזול יחסית זה מציע פוטנציאל משמעותי בחקר תפקידה של מערכת החיסון בדחיית קומפלקס הגרון, ובכך מציע פוטנציאל לטיפולים חדשים בהשתלת איברים.

a-heterotopic-mouse-model-for-studying-laryngeal-transplantation

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

וידאו זה מציג ומשווה שני דגמים ניסיוניים ללמוד על התפתחות המחלה בדרכי הנשימה סותם (OAD) בעכברים, במודל heterotopic ו orthotopic השתלת קנה הנשימה.

השתלת קנה הנשימה Heterotopic ו orthotopic ב עכברים משמשים מודלים לחקר התפתחות המחלה Airway סותם

Bronchiolitis סותם היא הפגיעה המפתח להישרדות ארוכת טווח של השתלת ריאה וחוסר מודל קליני חזק מונע בחינת immunopathogenesis bronchiolitis סותם. שלא כמו אחרים השתלות איברים מוצקים, vascularized העכבר השתלת ריאות יש רק לאחרונה פותחו. כאן אנו מציגים מודל שפותח באופן עצמאי שלנו bronchiolitis סותם לאחר ההשתלה Murine אחת הריאות orthotopic.

פיתוח Bronchiolitis סותם במודל Murine של השתלת ריאות Orthotopic

מודל השתלת לב בצוואר הרחם העכברי הוא גם מתאים חיסוני, כמו גם מחקרי פציעת reperfusion איסכמיה. שינינו את התהליך תוך שימוש בטכניקת שרוול שאינו תפר וביצעו יותר מ 1,000 השתלות מוצלחות עם גישה זו.  במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

היצרות השתל מהווה מכשול קריטי החלפת רקמות מהונדסים דרכי הנשימה. כדי לחקור את המנגנונים התאיים המשמשים כבסיס היצרות, אנו מנצלים את מודל מאתר של החלפת רקמות מהונדסים והכו אותי עם תאי תאי מח עצם הזריעה (מוניטור-MNC). כאן, אנו מפרטים פרוטוקול שלנו, כולל ייצור לגרדום, מוניטור-MNC בידוד, שתל זריעה השרשה.

Seeding, השרשת biosynthetic הוחלף נגזר רקמות מהונדסים בקנה הנשימה השתלה במודל של עכברים

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

מודל השתלת קנה הנשימה התוך-ריאתי (IPTT) הוא בעל ערך לחקר מחלת דרכי הנשימה לאחר השתלת ריאות. הוא מציע תובנות לגבי התנהגות אימונולוגית ואנגיוגנית ספציפית לריאות במחיקת דרכי הנשימה לאחר השתלה עם יכולת שחזור גבוהה. כאן, אנו מתארים את הליך IPTT ואת התוצאות הצפויות שלו.

השתלת קנה נשימה תוך ריאתי: מודל לחקר מחלת דרכי הנשימה לאחר השתלת ריאות

פרוטוקול זה מציג טכניקת השתלת לב הטרוטופית צווארית ללא אזיק, מבוססת תפרים בעכברים, שנועדה לאפשר מיקום אמין של שתל לב הטרוטופי שני להערכת סבילות חיסונית ייחודית לתורם בתנאים פיזיולוגיים עם מינימום הפרעה מחומר זר.

מודל צוואר הרחם המבוסס על תפרים ללא שרוול להשתלת לב הטרוטופית משנית להערכת סבילות חיסונית ייחודית לתורם בעכברים

אנו מציגים מודל עכבר שניתן לשחזור של אלוטרנסלנטציה מורכבת של גפיים אחוריות לצוואר הטרוטופית. פרוטוקול סופר-מיקרוכירורגי זה, הכולל אנסטומוזות כלי דם בקוטר 0.3-0.5 מ"מ, משלב הנחיית חוטי ניילון ושרוול ורידי. הוא מספק פלטפורמה אמינה למחקרים תרגומיים על סבילות, פגיעות איסכמיה-רפווזיה, ומנגנונים אימונולוגיים באלוטרנסרפלנטציה של כלי דם מרוכב.

השתלת גפה אחורית לצוואר הטרוטופית בעכבר: מודל סופר-מיקרוכירורגי של אלוטרנספלינצ'נציה מורכבת וסקולרית

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

חקור השתלת לרינקס הטרוטופית בעכברים לחקר ביולוגיית השתלות ותגובות חיסוניות. מודל זה מאפשר מחקרים אימונולוגיים בעלות נמוכה ובקלות רבה יותר.

מודל עכבר הטרוטופי לחקר השתלת גרון

גלה סרטונים נוספים