Name: שליפת ביציות לפרוסקופיות ושימור בהקפאה במהלך וגינופלסטיקה לטיפול בתסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: למדו שילוב של וגינופלסטיקה לפרוסקופית עם שליפת ביציות והקפאתן לטיפול בתסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר. שיטה זו מצמצמת הליכים פולשניים ומשמרת אפשרויות פוריות עתידיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

לא התקבל מימון ספציפי לעבודה זו.

הוועדה האתית המקומית במרכז ההפניות השלישוני ל-MRKHS (בית החולים האוניברסיטאי IRCCS San Raffaele, מילאנו, איטליה) קיבלה הודעה ואישרה את הפרוטוקול לפני יישומו ביולי 2017. כל המטופלים או האפוטרופוסים נתנו הסכמה מדעת חתומה לשליפת ביציות לפרוסקופיות ושימור בהקפאה במהלך וגינופלסטיקה ולשימוש בנתונים קליניים/מעבדתיים אנונימיים למטרות מדעיות.
1. הרכב הקבוצה
<ol><li>ייעדו צוות ייעודי, המורכב ממנתח לפרוסקופי מנוסה, מנתח נרתיק מנוסה, מומחה לפוריות, פסיכולוג מסור ואחות מחויבת.</li>
	<li>לסייע למטופל כצוות במהלך כל ההתקנה והביצועים של ההליך.</li>
</ol>2. עבודת אבחון וייעוץ
<ol><li>בצע אולטרה-סאונד של האגן והבטן על המטופל לצורך הדמיה של השחלות והערכת ספירת הזקיקים האנטרליים (AFC). הערך את רמות ההורמון האנטי-מולריאן בדם (AMH) כדי למטב את המינון ההתחלתי של גונדוטרופין לגירוי שחלות מבוקר. לבצע בדיקות סרולוגיות למחלות זיהומיות (HIV-Ab, HCV-Ab, HBV-Ab, RPR-TPHA) על פי פרוטוקולים לאומיים/מקומיים להקפאת רקמות/גמטות.</li>
	<li>לייעץ למטופלת הן לגבי ההיבטים המיניים והן לגבי ההיבטים הרבייתיים של MRKHS, כולל וגינופלסטיקה לא כירורגית וכירורגית, העלויות והחקיקה הקשורות לפונדקאות, נקודת המבט של השתלת רחם בהקשר של תוכנית ניסיונית, הגישות השונות הזמינות לשליפת ביציות וביצוע שימור ביציות בהקפאה במונחים של שיעורי ילודה חיה.</li>
	<li>הצע למטופלת הערכה פסיכולוגית שתתמוך בה בהליך ותעריך יציבות רגשית ומחויבות ורצון לאימהות עתידית. קבלת הסכמה חתומה ומדעת לשאיבת ביציות לפרוסקופיות, שימור גמטה ונרתיק לפרוסקופי. במקרה של מטופל קטין, בצע את ההערכות הקליניות בנוכחות ההורים החותמים גם על ההסכמה מדעת של היחסי.</li>
</ol>3. תזמון ההליך הכירורגי וגירוי השחלות המבוקר
<ol><li>תזמן את ההליך של שאיבת ביציות לפרוסקופיות במקביל, שימור גמטה קריופלסטיקה ולפרוסקופית, תוך התחשבות בזמינות הצוות הקליני (ראה לעיל) כמו גם של צוות המעבדה המבצע ויטריפיקציה של ביציות.</li>
	<li>התחל גירוי שחלות מבוקר (COS) ביום -14 מיום הניתוח, תוך התחשבות במשך מתוכנן של COS של n = 12 ימים ואת 36 השעות הדרושות בין הפעלת הביוץ לבין שאיבת ביציות ויטריפיקציה.</li>
	<li>במקרה ש- COS דורש משך זמן שונה מהצפוי, תזמן מחדש את הניתוח בהתאם.</li>
</ol>4. גירוי שחלות מבוקר: מינון התחלתי, התאמות מינון וניטור, טריגר הבשלת ביציות סופית
<ol><li>התחל COS בכל שלב של מחזור השחלות, כפי שנעשה בדרך כלל בהקשר של פרוטוקולי "התחלה אקראית" לשימור פוריות.</li>
	<li>בחר את המינון ההתחלתי של הורמון מגרה זקיק (FSH)/גונדוטרופין גיל המעבר האנושי (hMG) בהתבסס על AFC ו- AMH של המטופל, והורה למטופלת להמשיך בזריקות תת עוריות עצמיות מדי יום. בצעו התאמות מינון מותאמות אישית לאחר מכן על סמך התגובה השחלתית.</li>
	<li>עקוב אחר תגובת השחלות על ידי אולטרסאונד טרנסבדומינלי סדרתי ומדידות מקבילות של E2 ו- P (יום 1, יום 6, יום 8, יום 10 ויום 12).</li>
	<li>טריגר הבשלת ביציות סופית על ידי מתן תת עורי של 0.2 מ"ל של אנלוגי Gn-RH (טריפטורלין).</li>
</ol>5. הליך קליני (לפרוסקופיה): שאיבת ביציות
<ol><li>מקם את המטופל בתנוחת ליתוטומיה גבית שונה, המאפשרת גישה בו זמנית מצוינת לבטן ולפרינאום. לגרום להרדמה כללית ולתת 2 גרם של Cefazolin תוך ורידי בהתאם למניעה אנטיביוטית תוך ניתוחית שגרתית. מקם קטטר פולי תוך-ורידית.</li>
	<li>להקים pneumoperitoneum עם מחט Veress פרי-טבורי, למקם אחד 10 מ"מ טרוקאר טבורי להחדרת לפרוסקופ ושני טרוקארים 5 מ"מ ברביע העליון הימני והשמאלי. תחת ראייה לפרוסקופית, השתמש במחט לומן יחיד של 17 G המחוברת למשאבת שאיפה, כפי שמקובל לשליפה טרנסווגינלית, דרך המכנסיים הימניים והשמאליים לניקוב השחלה הימנית והשמאלית, בהתאמה.</li>
	<li>להרים ולהחזיק את השחלות עם מלקחיים לפרוסקופיים כדי להקל על החשיפה של הזקיקים. כאשר שואפים זקיקים מרובים כי הם אחד קרוב למשנהו, לשמור על קצה המחט בשחלה כדי להפחית את מספר הפעמים כי קליפת השחלות הוא transfixed ואת הסיכון האינהרנטי של דימום.</li>
</ol>6. הליך קליני (לפרוסקופיה): וגינופלסטיקה
הערה: צעדי Vaginoplasty נשארים ללא שינוי בהשוואה לטכניקת השינוי הלפרוסקופי של Davydov12.
<ol><li>נתחו את הצפק על ידי הרמה וחתך של גדיל הצפק באופן רוחבי בין שתי קרני הרחם הבסיסיות, ולאחר מכן האריכו את החתך קדימה, לרוחב ומאחור.</li>
	<li>התחל תפר מיתר ארנק בפולידיוקסנון סינטטי נספג (PDS) 2-0 מונופילמנט בכל המיפלוויס, מהצפק המגויס מעל שלפוחית השתן, עם טרנספיקסיה רצופה של הרצועה העגולה, איסתמוס החצוצרות, רצועת הרחם ועלה הצפק הצדדי. לאחר מכן, לכלול בשני התפרים את ההיבט הצדדי של mesorectum ואת ההיבט הקדמי של הסרוסה הרקטלית, מיד מתחת לצומת rectosigmoid.</li>
	<li>חושפים את גומת הנרתיק בגישה הפרינאלית ומבצעים חתך בצורת H, ויוצרים חלל ניאו-וגינלי על ידי דיסקציה חדה ובוטה של החלל הווסיקורקטלי. לאחר מכן, משוך את שולי הצפק המנותקים לקצה הפרוזדור הנרתיקי. מיקום תפרים מופרעים ב- PDS 3-0 עבור האנסטומוזיס הצפק-וסטיבולרי. לבסוף, מניחים גזה מצופה פרפין בנאווגינציה המצופה פריטונאום.</li>
</ol>7. מעבדת הפריה חוץ גופית: יום לפני שאיבת הביציות
<ol><li>הכינו 2 עד 5 צינורות בעלי תחתית עגולה עם 9 מ"ל של Quinn's Advantage Medium עם HEPES (בתוספת 5% אלבומין בסרום אנושי [HSA]) בהתאם למספר הזקיקים הצפויים ודגרו אותם למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>הכינו מנה אחת או שתיים עם 4 בארות עם 0.5 מ"ל/באר של מדיום הפריה (בתוספת 5% HSA), מכוסה ב-0.5 מ"ל שמן מינרלי לתרבית עוברים ודגרה עליו למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באווירה מבוקרת (6% CO 2, 5% O2).</li>
	<li>הכינו מנה אחת המכילה 9 (30 מיקרול) טיפות של מדיום בתרבית יחידה רציפה (CSCM) (בתוספת תוסף 10% תחליף סרום [SSS]) מכוסה ב-6 מ"ל שמן מינרלי. לדגום אותו למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה מבוקרת (6% CO 2, 5% O2).</li>
</ol>8. מעבדת הפריה חוץ גופית: הליך שאיבת ביציות
<ol><li>הכינו תמיסה של Quinn's Advantage Medium עם HEPES (בתוספת 5% HSA) עם הפרין בריכוז סופי של 10 IU/mL שבו ייאספו שאיפות פוליקולריות.</li>
	<li>בדומה לשאיבת ביציות טרנסווגינליתשגרתית 13, לאסוף את שאיפות הזקיקים בצינורות 10 מ"ל תחתית עגולה, נשמר חם (37 מעלות צלזיוס) באינקובטור נייד ומועבר מיד למעבדה האמבריולוגית, עם זמן הובלה של כ -10 דקות.</li>
	<li>בחנו את נוזל הזקיקים בצלחת פטרי סטרילית בקוטר 90 מ"מ שחוממה מראש כדי לזהות קומפלקסים של קומולוס-ביציות (COC). לאחר זיהוי COC, שטפו אותו בצלחת מרכזית מלאה ב-1 מ"ל של מדיום היתרון של Quinn's שחומם מראש עם HEPES (בתוספת 5% HSA).</li>
	<li>כאשר כל ה- COCs נאספים, הנח אותם בצלחת 4 בארות המכילה את מדיום ההפריה ותייג את המכסה והתחתית עם נתונים הקשורים לזהות המטופל.</li>
	<li>לדגום אותם ב-37 מעלות צלזיוס באטמוספירה מבוקרת (6% CO 2, 5% O2).</li>
	<li>ודא כי בדיקה כפולה של ההליך מבוצעת על ידי חבר שני של צוות המעבדה.</li>
</ol>9. דנודציית ביציות
<ol><li>יש לבצע הסרת קומולוס/קורונה תוך 38 שעות לאחר טריגר הביוץ.</li>
	<li>הכינו תמיסה של Quinn's Advantage Medium עם HEPES (בתוספת 5% HSA) עם היאלורונידאז בריכוז סופי של 10 IU/mL.</li>
	<li>הכינו מנה מרכזית-טובה עם 1 מ"ל של מדיום היתרון של קווין שחומם מראש עם HEPES (בתוספת 5% HSA) המכיל היאלורונידז ועוד אחד עם 1 מ"ל של מדיום חצוב HEPES שחומם מראש (בתוספת 5% HSA).</li>
	<li>תייג את כלי דנוד הביציות עם נתוני זיהוי המטופל.</li>
	<li>מניחים COCs בבאר המרכזית המכילה את האנזים כדי לפזר את תאי הקומולוס עם פיפטה פסטר זכוכית, תוך פיפטציה עדינה של התמיסה המכילה COCs למעלה ולמטה במשך עד 30 שניות.</li>
	<li>מעבירים את הביציות למנה המרכזית-באר השנייה המכילה רק מדיום HEPES-buffered, תוך הקפדה על עקירת כמות מינימלית של האנזים.</li>
	<li>הסר את תאי הקורונה הנותרים באמצעות פיפטות דנודיות בקטרים פנימיים הולכים ופוחתים (170-140 מיקרומטר).</li>
	<li>להעריך את שלב הבשלת הביציות, להפריד בין ביציות מטאפאזה II (MII), המאופיינות בהבלטה של גוף הקוטב הראשון, לבין ביציות מטאפאזה I (MI) ושלפוחיות נביטה (GV).</li>
	<li>מעבירים את הביציות MII בתרבית IVF 60 מ"מ צלחת פטרי המכילה תשע (30 μL) טיפות של תרבית יחידה רציפה (CSCM) בינונית (בתוספת תוספת של 10% תחליף סרום [SSS]) מכוסה ב-6 מ"ל של שמן מינרלי.</li>
	<li>לדגום אותם ב-37 מעלות צלזיוס באטמוספירה מבוקרת (6% CO 2, 5% O2).</li>
</ol>10. ויטריפיקציה של ביציות
<ol><li>יש לבצע ויטריפיקציה של ביציות MII מיד לאחר דנוידת הביציות, בהתאם לפרוטוקול המסופק על ידי יצרן ערכת הוויטריפיקציה.</li>
	<li>הביאו לטמפרטורת החדר (25-27 מעלות צלזיוס): תמיסת שיווי המשקל (ES), תמיסת הוויטריפיקציה (VS) ותמיסת הכביסה (WS), כמעט 30 דקות לפני ההליך. הערה: כפי שדווח על ידי היצרנים, ES מכיל 7.5% DMSO, 7.5% אתילן גליקול, 20% תוסף סרום דקסטרן (DSS), Gentamicin במדיום באגירה M-199 HEPES; VS מכיל 15% DMSO, 15% אתילן גליקול, 0.5 M סוכרוז, 20% DSS, ג'נטמיצין במדיום בעל מאגר M-199 HEPES, ו-WS מכיל 20% DSS, גנטמיצין במדיום בעל מאגר M-199 HEPES.</li>
	<li>עבור קריומד, השתמש Cryotop המורכב רצועה עדינה של סרט שקוף מחובר לידית פלסטיק.</li>
	<li>תייג את הקריואידים עם שם המטופלת, תאריך הלידה, תעודת הזהות, תאריך ההקפאה ומספר הביציות הטעונות על כל מכשיר בודד.</li>
	<li>תייג את צלחת הוויטריפיקציה עם שם המטופל ותעודת הזהות שלו.</li>
	<li>ודא שמפעיל עדים בודק את נתוני המטופל הנכונים על הקריינות והצלחת.</li>
	<li>ממלאים קופסת קירור עד למעלה בחנקן נוזלי טרי ומכסים עד לשימוש כדי למזער את הפיזור והאידוי.</li>
	<li>השתמש פיפטה חשפנית עם קוטר פנימי של 170 מיקרומטר כדי למנוע נזק לביציות במהלך מניפולציה.</li>
	<li>יש לנער בעדינות כל בקבוקון של ES, VS ו-WS כדי לערבב את התוכן לפני השימוש.</li>
	<li>הכינו את המכסה של צלחת פטרי בקוטר 60 מ"מ עם טיפה אחת של 50 מיקרוגרם של WS1 (איור 1A).</li>
	<li>יש להניח טיפות ממש לפני השימוש כדי להגביל אידוי בינוני.</li>
	<li>לוקחים את צלחת הביציות מהאינקובטור ומעבירים את הביציות MII (עד 3 בכל פעם) עם נפח מינימלי של מדיום ממנת התרבית לתוך 50 μL של WS.</li>
	<li>חלקו 50 טיפות μL של WS2, ES1 ו-ES2 בסמיכות והעבירו ביציות מטיפה WS1 לטיפה WS2 (איור 1B).</li>
	<li>מזג את הטיפה של ES1 ל- WS2 והמתן 2 דקות לערבוב ספונטני של שני הפתרונות.</li>
	<li>לאחר מכן, מזג את הטיפה של ES2 לטיפות שמוזגו בעבר והשאיר למשך 2 דקות נוספות.</li>
	<li>לבסוף, מזגו טיפה חדשה של 100 μL של ES3 לטיפות שמוזגו בעבר והשאירו למשך דקה אחת נוספת.</li>
	<li>הכניסו את הביציות לטיפה של 100 μL של ES4 למשך 10 דקות (איור 1C).</li>
	<li>יש לטפטף שתי טיפות של 50 μL של VS ואחת של 100 μL של VS (איור 1D).</li>
	<li>מעבירים את הביציות ברצף לשלוש הטיפות של VS במשך 60 שניות, כך שהביציות נשארות בכל טיפה במשך ~ 20 שניות.</li>
	<li>כאשר נותרו כ-10 שניות לפני סוף 60 שניות הדגירה, הניחו את הקריומד מתחת למיקרוסקופ.</li>
	<li>לשאת את הביציות בקצה הפיפטה ולהניח אותם על cryodevice עם כמות מינימלית של VS.</li>
	<li>לשאוף את עודף של VS, משאיר את הביציות מכוסה על ידי שכבה דקה של VS.</li>
	<li>צללו את הקריומד ישירות לתוך חנקן נוזלי והזיזו אותו במהירות. שמור את המכשיר בחנקן נוזלי וכסה אותו במכסה המגן.</li>
	<li>אחסנו את מכשיר ה-cryodevice במערכת אחסון (לדוגמה, visiotube) והניחו אותו במיכל הקריוגני. תעד את נתוני ההקפאה במסד הנתונים ובגיליון המעבדה.</li>
</ol>11. אשפוז לאחר הניתוח
<ol><li>הסר את קטטר השתן ואת גזה מצופה פרפין בנרתיק 48 שעות לאחר הניתוח.</li>
	<li>לחקור באופן דיגיטלי את הניאו-וואגינה של המטופלים לאחר ההסרה ולהדריך את המטופל כיצד לבצע את החקירה הדיגיטלית. לאחר מכן, מצפים עובש נרתיקי (9 ס"מ אורך ו 2 ס"מ קוטר) עם ג'ל אסטרוגן (לטובת אפיתליזציה) ולהנחות את המטופל כיצד להחדיר ולתחזק את התבנית.</li>
	<li>החל מהיום השלישי לאחר הניתוח ובכל יום למחרת, הדריכו את המטופל כיצד למקם את התבנית ולשמור אותה במקומה למשך שעתיים לפחות ביום.</li>
	<li>אם לא מתרחשים סיבוכים, שחררו את המטופל ביום 5-6 לאחר הניתוח.</li>
</ol>12. אשפוז לאחר הניתוח
<ol><li>להנחות את המטופל כיצד לבצע התרחבות neovaginal במשך 2 חודשים עם אותה תבנית (9 ס"מ אורך ו 2 ס"מ קוטר) המשמש במהלך השהייה בבית החולים, ולאחר מכן אחד גדול יותר (11 ס"מ אורך ו 2.5 ס"מ קוטר).</li>
	<li>לאחר הביקור של 3 חודשים, לאפשר למטופלת להתחיל בפעילות מינית ולהודיע לה להמשיך להשתמש בתבניות בימים שבהם אין יחסי מין.</li>
</ol>13. מעקב
<ol><li>קבעו ביקורי מעקב בגיל 1, 3, 6 ו-12 חודשים לאחר ההליך.</li>
	<li>בכל ביקור מעקב יש להעריך את הציות לתרגילי התרחבות ולשאול את המטופל האם הוא חווה מגבלה כלשהי בפעילויות חיי היומיום שלו, כאבים, תסמינים במתן שתן או הפרעה בתפקוד המיני (נכון לביקור לאחר החודש השלישי לאחר הניתוח). בצע בדיקה גינקולוגית בכל ביקור מעקב כדי למדוד את רוחב הנרתיק, אורך, תרחיף וניידות של adnexa.</li>
</ol>

<ol><li>Committee on Adolescent Health Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACOG+Committee+Opinion+No.+728%3A+M%C3%BCllerian+Agenesis%3A+Diagnosis%2C+Management%2C+And+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">ACOG Committee Opinion No. 728: Müllerian Agenesis: Diagnosis, Management, And Treatment.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (1), 35-42 (2018).</li>
<li>Reichman, D. E., Laufer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%3A+Fertility+counseling+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome: Fertility counseling and treatment.</a> Fertility and Sterility. 94 (5), 1941-1943 (2010).</li>
<li>Ben-Rafael, Z., Bar-Hava, I., Levy, T., Orvieto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplifying+ovulation+induction+for+surrogacy+in+women+with+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Simplifying ovulation induction for surrogacy in women with Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 13 (6), 1470-1471 (1998).</li>
<li>Beski, S., Gorgy, A., Venkat, G., Craft, I. L., Edmonds, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+surrogacy%3A+a+feasible+option+for+patients+with+Rokitansky+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Gestational surrogacy: a feasible option for patients with Rokitansky syndrome.</a> Human Reproduction. 15 (11), 2326-2328 (2000).</li>
<li>Brännström, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livebirth+after+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Livebirth after uterus transplantation.</a> Lancet. 385 (9968), 607-616 (2015).</li>
<li>Sreenivas, K., Campo-Engelstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Domestic+and+international+surrogacy+laws%3A+implications+for+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+and+Research%22%5BJournal%5D)">Domestic and international surrogacy laws: implications for cancer survivors.</a> Cancer Treatment and Research. 156, 135-152 (2010).</li>
<li>Soderstrom-Anttila, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogacy%3A+outcomes+for+surrogate+mothers%2C+children+and+the+resulting+families-a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproductive+Update%22%5BJournal%5D)">Surrogacy: outcomes for surrogate mothers, children and the resulting families-a systematic review.</a> Human Reproductive Update. 22 (2), 260-276 (2016).</li>
<li>Wood, E. G., Batzer, F. R., Corson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+response+to+gonadotrophins%2C+optimal+method+for+oocyte+retrieval+and+pregnancy+outcome+in+patients+with+vaginal+agenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Ovarian response to gonadotrophins, optimal method for oocyte retrieval and pregnancy outcome in patients with vaginal agenesis.</a> Human Reproduction. 14 (5), 1178-1181 (1999).</li>
<li>Raziel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+in+vitro+fertilization+outcome+in+typical+and+atypical+forms+of+Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Surrogate in vitro fertilization outcome in typical and atypical forms of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser syndrome.</a> Human Reproduction. 27 (1), 126-130 (2012).</li>
<li>Egarter, C., Huber, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+stimulation+and+retrieval+of+oocytes+in+patient+with+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Successful stimulation and retrieval of oocytes in patient with Mayer-Rokitansky-Küster syndrome.</a> Lancet. 1 (8597), 1283(1988).</li>
<li>Candiani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+retrieval+during+laparoscopic+vaginoplasty+to+reduce+invasiveness+in+the+treatment+of+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Minimally+Invasive+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Oocyte retrieval during laparoscopic vaginoplasty to reduce invasiveness in the treatment of Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 27 (1), 74-79 (2020).</li>
<li>Fedele, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+a+neovagina+by+Davydov%27s+laparoscopic+modified+technique+in+patients+with+Rokitansky+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Creation of a neovagina by Davydov's laparoscopic modified technique in patients with Rokitansky syndrome.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 202 (1), 1-6 (2010).</li>
<li>ESHRE Working Group on Ultrasound in ART et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+good+practice+in+ultrasound%3A+oocyte+pick+up%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Open%22%5BJournal%5D)">Recommendations for good practice in ultrasound: oocyte pick up.</a> Human Reproduction Open. 2019 (4), (2019).</li>
<li>Callens, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+surgical+and+non-surgical+treatments+for+vaginal+hypoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproductive+Update%22%5BJournal%5D)">An update on surgical and non-surgical treatments for vaginal hypoplasia.</a> Human Reproductive Update. 20 (5), 775-801 (2014).</li>
<li>Sönmezer, M., Gülümser, Ç, Sönmezer, M., Sükür, Y. E., Atabekoğlu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+ultrasound+guided+oocyte+retrieval+using+vaginal+ultrasound+probe%3A+Definition+of+the+technique%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology+Research%22%5BJournal%5D)">Transabdominal ultrasound guided oocyte retrieval using vaginal ultrasound probe: Definition of the technique.</a> The Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 47 (2), 800-806 (2021).</li>
<li>Raju, G. A., Haranath, G. B., Krishna, K. M., Prakash, G. J., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+pregnancy+with+laparoscopic+oocyte+retrieval+and+in+vitro+fertilization+in+Mullerian+agenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Singapore+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Successful pregnancy with laparoscopic oocyte retrieval and in vitro fertilization in Mullerian agenesis.</a> Singapore Medicine Journal. 47 (4), 329-331 (2006).</li>
<li>Liszewska-Kapłon, M., Strózik, M., Kotarski, Ł, Bagłaj, M., Hirnle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome+as+an+interdisciplinary+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Clinical+and+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome as an interdisciplinary problem.</a> Advances in Clinical and Experimental Medicine. 29 (4), 505-511 (2020).</li>
<li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+management+during+the+adolescent+transition+period+of+girls+and+young+women+with+Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome+%28MRKHS%29%3A+A+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+Journal+of+Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Treatment management during the adolescent transition period of girls and young women with Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome (MRKHS): A systematic literature review.</a> Orphanet Journal of Rare Diseases. 11 (1), 152(2016).</li>
<li>Bean, E. J., Mazur, T., Robinson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mayer-Rokitansky-K%C3%BCster-Hauser+syndrome%3A+sexuality%2C+psychological+effects%2C+and+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+and+Adolescent+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome: sexuality, psychological effects, and quality of life.</a> Journal of Pediatric and Adolescent Gynecology. 22 (6), 339-346 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

פרוטוקול זה מפחית את הפולשנות בטיפול ב- MRKHS על ידי שילוב ההליכים של vaginoplasty ושליפת ביציות. למטרה זו, חיוני כי צוות ייעודי מיועד כדי להבטיח כי העיתוי של COS, ההליך הכירורגי, ואת vitrification ביציות מתוזמנים ביעילות.
מטופלות MRKHS שעבורן שיטה לפרוסקופית משולבת זו צפויה להיות מועילה ביותר הן אלה שבהן שליפה טרנסווגינלית תיחשב מאתגרת מבחינה טכנית או בלתי אפשרית בשל שחלות חוץ-אגני הממוקמות לרוחב לאורך קירות האגן14 או בקרבת איברים כגון הכבד וכיס המרה9...

עם שכיחות של כ-1 מתוך 4-10,000 נשים, MRKHS הוא הגורם ל-15% ממקרי אמנוריאה ראשוניים. MRKHS מאופיין בהיעדר מולד של החלק העליון של הנרתיק והרחם, ואילו אנומליות בדרכי השתן והשלד קשורות באופן משתנה. ליתר דיוק, קמרון הנרתיק עם עומק של 1-2 ס"מ הוא בדרך כלל נוכח, ושתי קרניים הרחם הבסיסיות ניתן למצוא1.
בעבר, העניין הרפואי העיקרי ב- MRKHS היה לאפשר יחסי מין תקינים, אשר בדרך כלל דורשים בניית ניאוווגינה על ידי גישות לא כירורגיות או כירורגיות2. עם זאת, ההתקדמות ברפואת הרבייה מאפשרת כיום אימהות גנטית במטופלות MRKHS, על ידי פונדקאות 3,4 או לאחרונה השתלת רחם5. בעוד שהשתלת רחם היא עדיין הליך ניסיוני, פונדקאות זמינה במדינות רבות ברחבי העולם6, והתוצאות המיילדותיות והפסיכו-סוציאליות המדווחות דומות לאלה של הפריה חוץ גופית סטנדרטיתותרומת ביציות 7.
גם פונדקאות וגם השתלת רחם דורשות שאיבת ביציות והפריה חוץ גופית, אך לא קיים קונצנזוס לגבי אופן ביצוע איסוף הביציות במטופלות עם MRKHS. גישה טרנסווגינלית יכולה להיות בלתי אפשרית בגלל גמישות נרתיקית לא מספקת8 גם לאחר וגינופלסטיקה, מיקום לא טיפוסי של השחלות9, או מרחק מוגזם בין השחלות לשרוול הנרתיק 4,10. במקרים אלה, שאיבת ביציות לפרוסקופית מייצגת את הגישה האופטימלית מבחינת גישה כירורגית. עם זאת, מכיוון שרוב מטופלות MRKHS עוברות כיום ניאו-וגינופלסטיקה לפרוסקופית, אנו מציעים לבצע שאיבת ביציות לפרוסקופית בזמן הניתוח עבור vaginoplasty11, ולאחר מכן שימור ביציות בהקפאה לשימוש עתידי, ובכך למזער את הפולשנות תוך שילוב הטיפול בתפקוד המיני והרבייה של מטופלות MRKHS.
נתונים דמוגרפיים של חולים 23 חולי MRKH עברו טיפול בפרוטוקול זה עד כה. ממצאים אנמנסטיים, אינסטרומנטליים ומעבדתיים של מטופלים מסוכמים בטבלה 1. אלא אם כן צוין בטבלה 1, לא נמצאו אנומליות מולדות קשורות.

<table><tbody><tr><td>הליך אחזור ביציות</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ציוד</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 O2 Incubator</td><td>Sanyo Incubator</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>Cooper Surgical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חממה ניידת</td> קופר סטריאומיקרוסקופ <td>כירורגי</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Consumables</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>14 מ"ל פוליסטירן צינור עגול תחתון</td><td>בז</td><td>352057</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 4 בארות</td><td>Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 60 מ"מ Nunc</td><td></td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>90 מ"מ פטרי צלחת</td><td>Nunc</td><td>FA9150360</td><td></td></tr><tr><td>סרום אנושי אלבומין 100 מ"ג/מ"ל במי מלח רגילים (5%)</td><td>Origio</td><td>3001</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי לתרבית עוברים</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>One Well Dish</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s יתרון מדיום הפריה SAGE</td><td>Origio</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s יתרון בינוני עם HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטור זכוכית סטריליות<חזקות</td><td></td><td></td><td></td></tr>>ביציות<tr><td></חזקות></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ציוד</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 O2 Incubator</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet ידית מתכווננת סט</td><td>קוק</td><td>G18674</td><td></td></tr><tr><td>חממה</td><td>תרמו מדעי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>למינרי זרימה קולט אדים</td> קופר סטריאומיקרוסקופ <td>כירורגי</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Consumables</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 בארות</td><td>צלחת Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>CSCM (Continuos Single Culture) בינוני</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>90165</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין אנושי 100 מ"ג/מ"ל במי מלח רגילים (5%)</td><td>Origio</td><td>3001</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td></td></tr><tr><td>תרבית IVF 60 מ"מ צלחת פטרי</td><td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>שמן מינרלי לתרבית עוברים</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>One Well</td><td>Dish Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>קווין s Advantage בינוני עם HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>תוסף תחליף סרום</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>99193</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות פסטר זכוכית סטריליות הפשטת</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטות (140 &mu; m)</td> <td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td>הפשטת קצות פיפטה (170 &mu; m)</td> <td>טבח</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td><חזק>זיגוג ביציות</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ צלחת פטרי</td><td>NUNC</td><td>150255</td><td></td></tr><tr><td>60 מ"מ צלחת פטרי</td><td>NUNC</td><td>150270</td><td></td></tr><tr><td>90 מ"מ צלחת פטרי</td><td>NUNC</td><td>150360</td><td></td></tr><tr><td>מיכל לקירור מתלה</td><td>Kitazato</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryodevice/cryotop</td><td>Kitazato</td><td>81111</td><td></td></tr><tr><td>טיימר</td><td></td><td></td><td></td>אלקטרוני</tr><tr><td>Flexipet</td><td>COOK</td><td>K- 1000</td><td></td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>מדפסת מעבדה LabXpert</td><td>Brady</td><td>XSL-86-461</td><td></td></tr><tr><td>טיפים 20-200 ומיקרו; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2160G</td><td></td></tr><tr><td>טיפים 2-20 ומיקרו; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2139-HR</td><td></td></tr><tr><td>Visotubes</td><td>Cryo Bio System</td><td>20</td><td></td></tr><tr><td>ערכת הקפאת ויטריפיקציה</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90133-SO</td><td></td></tr><tr><td>ערכת הפשרת ויטריפיקציה</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90137-SO</td><td></td></tr></tbody></table>

שליפת ביציות לפרוסקופיות ושימור בהקפאה במהלך וגינופלסטיקה לטיפול בתסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר

Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

בחולי תסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר (MRKHS) המתוכננים לווגינופלסטיקה לפרוסקופית ויש להם רצון לאימהות ביולוגית, אנו מציעים כי תבוצע שאיבת ביציות לפרוסקופית במקביל לשימור בהקפאה. שאיבת ביציות מתבצעת בתחילת הלפרוסקופיה. ימין ושמאל 5 מ"מ trocars ממוקמים, שדרכו מחט שאיפת ביצית 17 G משמש לנקב של השחלות הימנית והשמאלית, בהתאמה. כדי להקל על החשיפה של הזקיקים, השחלות מגויסות ומוחזקות עם מלקחיים לפרוסקופיים.
כאשר שואפים זקיקים מרובים זה ליד זה, קצה המחט נשמר בשחלה כדי להפחית את מספר הפעמים כי קליפת השחלות הוא transfixed ובשל הסיכון האינהרנטי של דימום. הצעדים הבאים אינם משתנים בהשוואה לטכניקה הלפרוסקופית של Davydov עבור vaginoplasty. לפני הניתוח, גירוי שחלות מבוקר מבוצע עם פרוטוקול אנטגוניסט הורמון משחרר הורמונים גונדוטרופין (Gn-RH), וההליך המקביל של שאיבת ביציות ו vaginoplasty מתוכנן 36 שעות לאחר טריגר ההבשלה הסופי של הזקיק. נוזל פוליקולרי נאסף באותם צינורות סטריליים של 10 מ"ל המשמשים במהלך שאיבת ביציות טרנסווגינליות ומועבר בבלוק התחממות (37 מעלות צלזיוס) למעבדת הרבייה בסיוע, שם ביציות בוגרות (metaphase II) הן vitrified.
במקרה זה, סדרה של 23 נשים עם MRKH, ביציות הוחזרו בהצלחה בהקפאה בכל החולים; Vaginoplasty נערך לאחר מכן ללא שינויים, והטיפול באשפוז ובאשפוז לאחר הניתוח (יום הסרת קטטר שתן, יום שחרור מבית החולים, שימוש מרחיב ונוחות במעקב) נותר ללא השפעה. סיבוך אחד לאחר הניתוח התרחש בחולה אחד (חום שהתפתח ביום 5 לאחר הניתוח וזיהוי נוזלים תוך צפקיים באולטרסאונד טרנסבדומינלי) ונפתר לאחר טיפול שמרני. במקום לבצע וגינופלסטיקה כירורגית ולעכב את שאיבת הביציות בחולי MRKH, גישה זו משלבת את שני ההליכים בלפרוסקופיה אחת, ובכך ממזערת את הפולשנות הניתוחית ואת הסיכונים ההרדמה.

טבלה 2 כוללת נתוני גירוי שחלתי של המטופלות, ואילו התוצאות הניתוחיות והתפקודיות העיקריות מתוארות בטבלה 3. ההליכים הלפרוסקופיים במקביל של שאיבת ביציות ו vaginoplasty שולבו בהצלחה בכל החולים. 11.4 ± 5.4 (ממוצע ± SD) ביציות הוחזרו, ו-9.6 ± 4.3 MII ביציות הוקפאו (טבלה 3). מניסיוננו עם שימור ביציות בהקפאה בחולים שעברו ART, שיעור ההישרדות של ביציות לאחר חימום בעקבות פרוטוקול ויטריפיקציה זה - המוגדר כשיעור הביציות השלמות מבחינה מורפולוגית בזמן הזרקת זרע תוך-ציטופלסמי - היה 84.5 ...

צוות ייעודי יכול להציע למטופלות מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר את האפשרות לבצע גירוי שחלות מבוקר ושימור ביציות בהקפאת בזמן הווגינופלסטיקה הלפרוסקופית.

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

הגישה שלנו מאפשרת למזער את המחלה הפולשנית בטיפול בתסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר על ידי שילוב של וגינופלסטיקה לפרוסקופית ושאיבת ביציות לטיפולי פוריות עתידיים. היתרונות העיקריים של הגישה שלנו הם הדרישה להרדמה אחת והתגברות על חוסר ההיתכנות של שאיבת ביציות טרנסווגינלית בחולי רוקיטנסקי צעירים יותר. ההליך יודגם על ידי דיאנה דלפרטו, גינקולוגית בכירה ביחידת הפוריות שלנו ועל ידי אלסנדרה אלטרי וגרטה קרמיסוני, שתי אמבריולוגיות קליניות בכירות ממעבדת הרבייה בסיוע שלנו.התחל גירוי שחלות מבוקר ביום 14 מיום הניתוח. עקוב אחר תגובת השחלות על ידי אולטרסאונד טרנסבדומינלי סדרתי ומדידות במקביל של אסטרדיול ופרוגסטרון. להקים פנאומופריטונאום עם טכניקה פתוחה.מקם טרוקאר טבורי אחד בקוטר 10 מילימטרים להחדרת הלפרוסקופ ושלושה טרוקארים של חמישה מילימטרים ברביע התחתון המרכזי, הימני והשמאלי. תחת ראייה לפרוסקופית, השתמש במחט לומן יחיד בעלת 17 מדים המחוברת למשאבת שאיפה, כפי שנהוג להשתמש לשליפה טרנסווגינלית דרך המכנסיים המרכזיים והשמאליים לניקוב השחלה הימנית והשמאלית, בהתאמה. להרים ולהחזיק את השחלות עם מלקחיים לפרוסקופיים כדי להקל על החשיפה של הזקיקים.כאשר שואפים זקיקים מרובים כי הם אחד קרוב למשנהו, לשמור על קצה המחט בשחלה כדי להפחית את מספר הפעמים כי קליפת השחלות הוא transfixed ואת הסיכון האינהרנטי של דימום. נתחו את הצפק על ידי הרמה וחתך של גדיל הצפק באופן רוחבי בין שתי קרני הרחם הבסיסיות, ולאחר מכן, הרחבת החתך לרוחב, קדמית ואחורית. חשוף את גומת הנרתיק בגישה הפרינאלית ובצע חתך בצורת H וצור חלל ניאו-נרתיקי על ידי דיסקציה חדה ובוטה של החלל הווסיקורקטלי.לאחר מכן, משוך את שולי הצפק המנותקים לקצה הפרוזדור הנרתיקי. מקם תפרים מופרעים בפולידיוקסנון סינטטי נספג 3-0 עבור אנסטומוזיס שיווי המשקל הצפקי. התחל תפר חוט ארנק בפולידיוקסנון סינטטי נספג 2-0 מונופילמנט בכל ההמיפלוויס מהצפק המגויס מעל שלפוחית השתן עם טרנספיקסיון חיבור של הרצועה העגולה, איסתמוס החצוצרות, רצועת הרחם-שחלות, ועלה הצפק הצדדי.לאחר מכן, לכלול בשני התפרים את ההיבט הצדדי של mesorectum ואת ההיבט הקדמי של סרוזה רקטלית מיד מתחת לצומת rectosigmoid. לבסוף, מניחים גזה מצופה פרפין בנאוווגינה המצופה פריטונאום. לאסוף את הזקיקים שפופרות 10 מ"מ תחתית עגולה נשמר חם באינקובטור נייד ומיד להעביר אותם למעבדה האמבריולוגיה עם זמן הובלה של כ 10 דקות.כאשר כל קומפלקסי הביציות של קומולוס נאספים, הכניסו אותם לתוך צלחת ארבע הבארות המכילה את מדיום ההפריה ותייגו את המכסה והתחתון עם נתונים הנוגעים לזהות המטופלת. לדגום אותם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספרה מבוקרת המכילה 6% פחמן דו חמצני ו-5% חמצן. ודא כי בדיקה כפולה של ההליך מבוצעת על ידי חבר שני של צוות המעבדה.יש לבצע הסרת תאי קומולוס קורונה תוך 38 שעות לאחר טריגר הביוץ. מניחים קומפלקסים של ביציות קומולוס בבאר המרכזית המכילה את האנזים כדי לפזר את תאי הקומולוס עם פיפטה פסטר זכוכית, תוך פיפטציה עדינה של התמיסה המכילה קומפלקסים של ביציות קומולוס למעלה ולמטה למשך עד 30 שניות. מעבירים את הביציות לבאר המרכזית השנייה המכילה רק מדיום חצוב HEPES, תוך הקפדה על עקירת כמות מינימלית של האנזים.הסר את תאי הקורונה הנותרים באמצעות פיפטות דנודיות עם קטרים פנימיים הולכים ופוחתים. להעריך את השלב של הבשלת ביציות, הפרדת metaphase II ביציות. מעבירים את הביציות מהמטאפאזה II בצלחת פטרי 60 מילימטר של תרבית IVF המכילה תשע טיפות של מדיום תרבית יחיד רציף המכוסה בשישה מילימטרים של שמן מינרלי.לדגום אותם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספרה מבוקרת המכילה 6% פחמן דו חמצני ו-5% חמצן. ממלאים קופסת קירור עד למעלה בחנקן נוזלי טרי ומכסים עד לשימוש כדי למזער את הפיזור והאידוי. השתמש פיפטה חשפנית עם קוטר פנימי של 170 מיקרומטר כדי למנוע נזק לביציות במהלך מניפולציה.יש לנער בעדינות כל בקבוקון של תמיסת שיווי משקל, תמיסת ויטריפיקציה ותמיסת כביסה כדי לערבב את התכולה לפני השימוש. הכינו את המכסה של צלחת פטרי 60 מיליליטר עם טיפה אחת של 50 מיקרוליטר של תמיסת כביסה אחת. יש להניח טיפות ממש לפני השימוש כדי להגביל אידוי בינוני.קח את צלחת הביציות מהאינקובטור והעבר את הביציות metaphase II עם נפח מינימלי של מדיום מצלחת התרבית לתוך 50 microliters של תמיסת כביסה. יש לטפטף 50-מיקרוליטר טיפות של תמיסת כביסה שתיים, תמיסת שיווי משקל אחת ותמיסת שיווי משקל שתיים בסמיכות ולהעביר ביציות מתמיסת שטיפת טיפות אחת לתמיסת שטיפת טיפות שתיים. מזגו את טיפת תמיסת שיווי המשקל אחת לתמיסת הכביסה שתיים והמתינו שתי דקות לערבוב הספונטני של שני התמיסות.לאחר מכן, מזג את טיפת תמיסת שיווי המשקל שתיים לטיפות שמוזגו בעבר והשאר לשתי דקות נוספות. לבסוף, למזג טיפה חדשה של 100 מיקרוליטר של תמיסת שיווי משקל שלוש לטיפות שמוזגו בעבר ולהשאיר לדקה אחת נוספת. מכניסים את הביציות לתמיסת שיווי משקל של 100 מיקרוליטר למשך 10 דקות.יש לטפטף שתי טיפות של 50 מיקרוליטר של תמיסת ויטריפיקציה ואחת של 100 מיקרוליטר של תמיסת ויטריפיקציה. מעבירים את הביציות ברצף לתוך שלוש טיפות של תמיסת ויטריפיקציה למשך 60 שניות, כך שהביציות נשארות בכל טיפה במשך כ-20 שניות. כאשר נותרות כ-10 שניות לפני תום 60 שניות הדגירה, מניחים את הקריומד מתחת למיקרוסקופ.לשאת את הביציות בקצה פיפטה ומניחים אותם על cryodevice עם כמות מינימלית של תמיסת vitrification. שאפו את תמיסת הוויטריפיקציה העודפת, והותירו את הביציות מכוסות בשכבה דקה של תמיסת ויטריפיקציה. צללו את הקריומד ישירות לתוך חנקן נוזלי והזיזו אותו במהירות.שמור את המכשיר בחנקן נוזלי וכסה אותו במכסה מגן. ההליכים הלפרוסקופיים במקביל של שאיבת ביציות ו vaginoplasty שולבו בהצלחה בכל החולים. בממוצע נלקחו 11.4 5.4 ביציות ו-9.6 4.3 ביציות M2 השתמרו בקריו.הזמן הניתוחי הממוצע הכולל היה 114 17 דקות. איבוד דם תוך ניתוחי לא היה משמעותי בכל החולים ולא נצפו תופעות לוואי תוך ניתוחיות. ביום השלישי שלאחר הניתוח, המטופלים החלו בשימוש יומיומי במרחיבים ושוחררו ביום 6.0 1.0.מומלץ לבצע שאיפה זהירה של זקיקים בתוך השחלה, תוך מתן תשומת לב ראויה לניוד האוטומטי של השחלות על מנת להבטיח גישה ושליפה אופטימליות.

laparoscopic-oocyte-retrieval-cryopreservation-during-vaginoplasty

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

התבגרות חוץ גופית (IVM) לפני ניתוח גינקולוגי (OP-IVM) משלב IVM לאחר אחזור ביציות עם ניתוח גינקולוגי שגרתי ומשמש כהרחבה של יישומי IVM קונבנציונליים לשימור פוריות.

OP-IVM: שילוב של התבגרות במבחנה לאחר אחזור אוציט עם ניתוח גינקולוגי

שימור קריופרציה של Oocyte מוכר על ידי מספר חברות מדעיות בינלאומיות כסטנדרט הזהב לשימור פוריות אצל נשים לאחר הפוסט-פוסט-פוריות. אסטרטגיות קליניות ומעבדות מתאימות מבטיחות יעילות מרבית, יעילות ובטיחות של טיפולי שימור פוריות.

שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

אנו מציגים פרטים של נהלי מעבדה להפעלה במבחנה ללא סמים (IVA) של זקיקי השחלות לחולים עם תפקוד לקוי של השחלות חמורות. שיטה זו יכולה להגדיל את מספר ביציות לאחזור לכל hyperstimulation השחלות לטובת שימור פוריות עבור חולים אלה.

שימור פוריות בחולים עם תפקוד לקוי של השחלות חמורות

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה להערכת רזרבה שחלתית במטופלות מתחת לגיל 25 הזקוקות לשימור פוריות באמצעות שימור בהקפאה של רקמת השחלה. שיטה זו כוללת: (1) הערכה היסטולוגית של רזרבה שחלתית בדגימות קליפת המוח, (2) השוואה למערך נתוני ייחוס, ו-(3) חישוב ציוני Z.

ציוני Z להערכת רזרבה שחלתית בחולות צעירות העוברות שימור פוריות

מוצג פרוטוקול לוויטריפיקציה של רקמת השחלה, כשיטת שימור הקפאה חלופית להקפאה איטית הנפוצה.

ויטריפיקציה של רקמת קליפת המוח השחלתית להשגת מצב זגוגי של צבירה

כאן, אנו מציגים שיטה אופטימלית להסרה מיידית של חלק מקומפלקסי קומולוס-ביציות לאחר שאיבת ביציות כדי לזרז את תהליך התצפית על הפריה חוץ גופית, להפחית את הזמן הנדרש להסרת תאי גרנולוזה, למזער את חשיפת הביציות לאלמנטים חיצוניים, ואינה מעכבת את התפתחות העובר, ובסופו של דבר משפרת את היעילות של הליכי מעבדה IVF.

הסרה חלקית מיידית של קומפלקסים קומולוס-ביציות: גישה מעודנת לתצפית מהירה על הפריה חוץ גופית

אנו מתארים פרוטוקול לבידוד ותרבית תאי אפיתל מי שפיר אנושיים (hAECs) באמצעות ריאגנטים ללא מוצרים מן החי בהתאם להנחיות הנוכחיות של תנאי ייצור נאותים (cGMP).

בידוד, Cryopreservation ותרבות של תאי אפיתל amnion אדם ליישומים קליניים

פרוטוקול זה מתאר הליך למעקב אחר האבולוציה של מדדי רשת מזיאליים בחולי אפילפסיה של האונה הטמפורלית (TLE). הוא מבוסס על שילוב של הקלטות תוך גולגולתיות עם טכניקה נומרית חדשה לניתוח נתונים. באופן ספציפי, אנו מציגים פרוטוקול לניתוחי רשת של רישומי הנקב הסגלגל.

ניתוח רשת של הקלטות אלקטרודה foramen ovale בחולים עמידים בפני תרופות Temporal Lobe אפילפסיה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של כריתה transaxillary של הצלע הראשונה לטיפול בתסמונת מוצא החזה הנגרמת על ידי דחיסה של מקלעת הזרוע, וריד subclavian ועורק.

כריתת צלע ראשונה בבית השחי לטיפול בתסמונת מוצא בית החזה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להגדיל את השדה הכירורגי של הראייה ולהפחית את הקושי של הניתוח הכולל של ההמרה הכוללת של כריתת הטבור לפני הטיפול מעבר לרצועה.

שינוי טכני של מסוף המעבר במהלך ההמרה הכוללת של מערכת השתן העליונה של סרטן המעי העליון

למדו שילוב של וגינופלסטיקה לפרוסקופית עם שליפת ביציות והקפאתן לטיפול בתסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר. שיטה זו מצמצמת הליכים פולשניים ומשמרת אפשרויות פוריות עתידיות.

שליפת ביציות לפרוסקופיות ושימור בהקפאה במהלך וגינופלסטיקה לטיפול בתסמונת מאייר-רוקיטנסקי-קוסטר-האוזר

גלה סרטונים נוספים