Name: חקר מורין מעיים קטנים מכנוסנס של חלקיקים לומינליים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: חקור מעבר חומרים במעי הדק הקטן באמצעות שיטת גאבג' מתקדמת עם צינור הזנה בקוטר 18. שיטה זו מאפשרת ניתוח רזולוציה גבוהה של תנועת חלקיקים לומינליים והבנת מכנורצפטורים מעיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לגברת לינדזי באזבי על הסיוע האדמיניסטרטיבי ולמר ג'ואל פינו על התמיכה התקשורתית. מענקי NIH תמכו בעבודה זו: DK123549, AT010875, DK052766, DK128913, ומרכז מאיו קליניק לאיתות תאי בגסטרואנטרולוגיה (DK084567).

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של מאיו קליניק.
1. התקנה
<ol><li>צמו עכברים בני 8 עד 10 שבועות למשך 4 שעות. ספק לעכברים גישה למים. הערה: אנו משתמשים בעכברי C57BL/6J זכרים מסוג בר עבור כל הניסויים המוצגים כאן, אך ניתן לבצע אותם על עכברים מכל זן, מין וגנוטיפ.</li>
	<li>מצננים 15 מ"ל מים מזוקקים בצינור חרוטי של 50 מ"ל במקרר 4°C.</li>
	<li>מחממים עוד 15 מ"ל של מים מזוקקים בכוס באמצעות צלחת חמה עם מוט ערבוב מגנטי לכ-80-90 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>מדוד 0.5% מתילצלולוז עבור סך של 30 מ"ל (0.15 גרם).</li>
	<li>הוסיפו בעדינות מתילצלולוז ל-15 מ"ל מים חמים כדי שלא יתגבשו. תמיסת המתיל צלולוז תהיה מעוננת במהלך תהליך זה.</li>
	<li>לאחר ההמסה, הסר את הכוס מהצלחת החמה והוסף את 15 מ"ל המים הצוננים לכוס החמה.</li>
	<li>מכניסים למקרר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד שהתמיסה צלולה, כ-15-20 דקות.</li>
	<li>כאשר זה ברור, לשקול 3 מ"ג של רודמין איזותיוציאנט (RITC)-דקסטרן לכל 5 מ"ל של 0.5% מתילצלולוז פתרון ולערבב כדי לשלב. זהו מצב הנוזל במקטע תוצאות מייצגות .<ol><li>לחלופין, שקלו 25 מ"ג של מיקרוספרות פוליאתילן פלואורסצנטיות וערבבו עם 200 מיקרוליטר של תמיסת מתילצלולוז עד לשילוב טוב. שילוב יסודי של מיקרוספרות מובטח על ידי מערבולת לפני גבאג'. על הנסיין לדמיין התפלגות הומוגנית של מיקרוספרות תלויות בתערובת.</li>
		<li>מכיוון שתמיסת RITC-dextran רגישה לאור, יש לקרר את התמיסה. הכינו מראש את תמיסת RITC-dextran ואת תערובת המיקרו-שפרה והשתמשו תוך חודשיים. יש להשעות את תערובת המיקרוספרה לפני השימוש. הערה: מיקרוספרות בגדלים שונים משמשות לחקר טיפול במערכת העיכול בחומרים שונים. בסעיף תוצאות מייצגות , אנו מדגימים את תוצאות השימוש במיקרוספרות קטנות (קוטר: 75-90 מיקרומטר) וגדולות יותר (קוטר: 180-212 מיקרומטר).</li>
	</ol></li>
</ol>2. מעטפת תוכן אינטרלומינלית
<ol><li>הכן את המעטפת על ידי חיבור צינור הזנה של 18 Ga x 50 מ"מ למזרק של 1 מ"ל וציור 200 μL של תמיסת RITC או תמיסת מיקרוספרה.</li>
	<li>לרסן ידנית את החיה הצום באמצעות טכניקת הריסון ביד אחת25. עיין במידע של המוסד על טכניקות ריסון מורין נכונות.</li>
	<li>הכנס בעדינות את צינור ההזנה דרך הפה והוושט של העכבר עד שהוא נכנס לקיבה. הערה: שלב ה-gavage הוא קריטי לניסוי מוצלח. זה דורש ידיים מנוסות שיכולות להכניס את הצינור באופן עקבי בערך באותו מרחק בכל עכבר. שלב זה צריך להיות סטנדרטי על ידי נסיינים המבצעים את הפרוטוקול. אותו נסיינית צריך לגנות את כל קבוצות העכברים שיושוו זו לזו.</li>
	<li>לאט לאט לגרש את תוכן המזרק לתוך הבטן בזהירות להסיר את הצינור מן העכבר.</li>
	<li>לאחר הגבאג', החזירו את העכבר לכלוב.</li>
	<li>יש להשליך את צינור הגבאג'.</li>
	<li>חזרו על התהליך לפי הצורך עבור מספר בעלי החיים הרצוי.</li>
</ol>3. דיסקציה של המעי
<ol><li>לפני תחילת הנתיחות, הפעל את מכשיר ההדמיה in vivo כדי לאפשר לו להגיע לטמפרטורה.</li>
	<li>להקריב את העכבר 30 דקות לאחר gavage. השתמש בשאיפת פחמן דו חמצני כדי להקריב את העכבר, ואחריו פריקת צוואר הרחם כדי להבטיח המתת חסד מוצלחת.</li>
	<li>לאחר אישור המתת חסד מוצלחת, הניחו את העכבר במצב שכיבה על במת דיסקציה והצמידו את ארבעת הנספחים שלו על הבמה כדי לקבל גישה לבטן. הרטיבו את פני הבטן ב-70% אתנול כדי להרטיב את שערות הבטן.</li>
	<li>השתמש מלקחיים מיקרו דיסקציה כדי למשוך את העור לרכוש מספריים כירורגיים חדים לעשות חתך רוחבי 1 ס"מ מעל פי הטבעת. כדי לחשוף את החלל intraperitoneal, להמשיך את החתך אנכית במעלה הבטן עד כלוב הצלעות.</li>
	<li>הזיזו בעדינות את הצקום שמאלה עם מלקחיים מיקרו-דיסקציה כדי לחשוף את המעי הגס הדיסטלי.</li>
	<li>חותכים את המעי הגס הדיסטלי עם מספריים מיקרו-דיסקציה רק פרוקסימליים לפי הטבעת.</li>
	<li>יש לפרום בעדינות את המעי הגס, הצקום והמעי הדק על ידי משיכה איטית בכיוון ההפוך. הערה: שמירה על המעיים המנותקים במקטע רציף אחד תיצור את הקלות הרבה ביותר עבור החוקר. קרעים וקרעים לאורך הקטע יגרמו לשלבים הבאים להיות קשים יותר.</li>
	<li>השתמש מספריים מיקרו-דיסקציה כדי לחתוך פרוקסימלי לקיבה.</li>
	<li>השתמשו במלקחיים כדי להעביר את המעיים המנותקים לגיליון המדידה (איור 1). מניחים את הבטן על 0 מ"מ ומסדרים את המעיים לאורך הסרגל עד 200 מ"מ. השתמש מספריים מיקרו-דיסקציה כדי לחתוך ב 200 מ"מ. חזור על תהליך זה של יישור המעיים מ 0 מ"מ ל 200 מ"מ לאורך הסרגלים תוך שמירה על ביטחון כי הכיוון של המעיים לא להתבלבל.<ol><li>היזהרו להימנע ממתיחת המעיים תוך יישור הסרגלים.</li>
	</ol></li>
	<li>לאחר שהרקמה מסודרת על הסרגל, סדרו את הצקום כך שיהיה מקביל לרקמה אך לא במגע ישיר איתה (אם נמצא פלואורסצנטי כלשהו באזור זה, אזי יהיה צורך בהבדל ברור בין הצקום למעיים).</li>
	<li>הניחו את גיליון המדידה עם הרקמה המנותקת באזור חשוך, כך שניתן יהיה לשמר את הפלואורסצנטיות עד שיגיע הזמן לתמונה.</li>
</ol>4. הדמיית אקס-ויוו
<ol><li>פתח את תוכנת ההדמיה in vivo והיכנס.</li>
	<li>אתחל את מכשיר ההדמיה כך שיהיה מוכן לרכישת תמונה.</li>
	<li>הגדר את השדות 'עירור' ו'פליטה' לצבע המתאים המשמש לחרוז או ל- RITC gavage. אדום (נוזלי): עירור 535 ננומטר / פליטה 600 ננומטר. ירוק (מיקרוספרות): עירור 465 ננומטר / פליטה 520 ננומטר.</li>
	<li>הגדירו את החשיפה ל'אוטומטי'.</li>
	<li>בחר את שדה הראייה.</li>
	<li>לפני הכנסת גיליון המדידה למכשיר, ודא שהמעיים לא זזו במהלך ההובלה.</li>
	<li>מקם את גיליון המדידה במכשיר בתוך שדה הראייה.</li>
	<li>סגור היטב את דלת המכשיר ובחר Snapshot כדי לצלם את שדה הראייה.</li>
	<li>שמור את התמונות שנאספו בכונן הבזק לניתוח. שמור צילומים בודדים של תמונות הפלואורסצנט והצילום. שכבת-על של התצלום והפלואורסצנציה מציינת את מיקומו של חומר פלואורסצנטי במערכת העיכול (איור 1). הערה: אנו ממליצים לשמור את הקבצים בתבנית Tag Image File (.tif) לעיבוד במורד הזרם.</li>
</ol>5. ניתוח
<ol><li>פתח את קבצי התמונות הפלואורסצנטיים והתצלומים בתוכנה לעריכת תמונות.</li>
	<li>התאם את גודל הפיקסלים של שתי התמונות כך שיהיו להן מידות זהות בדיוק (המוסכמה שלנו הייתה להגדיר את שתי התמונות ל- 1280 פיקסלים על 850 פיקסלים [גובה x רוחב]).</li>
	<li>סגור את קובץ התצלומים. השלבים הבאים כוללים רק את התמונה הפלואורסצנטית.</li>
	<li>השתמשו בכלי מחק כדי להסיר את הרקע ולהפוך אותו לשקוף. ייתכן שיהיה צורך במחק כדי להסיר טלאים של הרקע הנותר.</li>
	<li>צרו שכבה חדשה. הפוך אותו לרקע שחור לחלוטין לאות הפלואורסצנטי. ניתן להשיג זאת על ידי בחירת מילוי שחור לשכבה וגרירת השכבה כך שתשכב מתחת לשכבה עם התמונה הפלואורסצנטית.</li>
	<li>שמור את התמונה הפלואורסצנטית החדשה, המכילה רק את האות הפלואורסצנטי על רקע שחור, כקובץ .tif חדש.</li>
	<li>פתח את תמונות הפלורסנט החדשות וצלם תמונות ב- ImageJ.</li>
	<li>הפוך כל תמונה לתמונה של 32 סיביות על-ידי בחירה באפשרות 'תמונה' > Type >- 32 סיביות.</li>
	<li>צרו תמונה ממוזגת של שניהם באמצעות בחירה באפשרות 'תמונה' > ' צבע' >'מיזוג ערוצים'. בתיבת הדו-שיח שנפתחת, בחרו בקובץ התצלום של הערוץ האפור ובקובץ הפלואורסצנט שמתחת לערוצים הצבעוניים.</li>
	<li>בטל את קנה המידה של התמונה הממוזגת על-ידי בחירה באפשרות נתח > קבע קנה מידה > לחץ כדי להסיר קנה מידה.</li>
	<li>בחרו בכלי "מלבן" ב-ImageJ.</li>
	<li>ציירו מלבן סביב קטע של המעי הדק. שים לב לרוחב של אזור עניין זה (ROI), כפי שהוא צריך להישאר קבוע בין כל ROIs. הערך הנומינלי אינו חיוני, רק שהוא נשמר עקבי בכל ה-ROIs המצוירים בתמונה זו [מאחר שהמעי הדק משתלט על פני מספר שורות, ROIs בודדים יימשכו מעל כל מקטע של המעי הדק בשורה אחרת (איור 1)]. איור 2 מציג את המיקום של ערך הרוחב בסרגל הכלים ImageJ.</li>
	<li>שכפל את החזר ההשקעה על-ידי בחירה באפשרות תמונה > שכפל. בחרו רק את הערוץ המתאים לערוץ הצבעוני.</li>
	<li>השתמשו שוב בכלי מלבן כדי לצייר החזר השקעה על התמונה החדשה.</li>
	<li>אחזר פרופיל של הפלואורסצנציה על-ידי בחירה באפשרות נתח > פרופיל העלילה. הגרף המתקבל מתווה על ציר y את העוצמה הממוצעת עבור כל פיקסל לאורך ההחזר על ההשקעה. זה נבחר בשלב 5.12 להיות אורך החלק המנותח של המעי הדק</li>
	<li>פתח את רשימת הערכים והעתק אותם לתוכנת גיליון אלקטרוני.</li>
	<li>חזור על שלבים 5.12-5.16 עבור כל מקטע של המעי הדק בשורה אחרת בסרגל. המשך להדביק את הערכים באותו קובץ גיליון אלקטרוני באופן מיידי תחת כל קבוצת ערכים קודמת, כך שכל השורות הרציפות בעמודה זו יכילו את ערך העוצמה הממוצע לכל אורך המעי הדק.</li>
	<li>בתוכנת הגיליון האלקטרוני, הכפל כל ערך עוצמה ממוצעת ברוחב הקבוע של מלבן ההחזר על ההשקעה שנוצר בשלב 5.12. זה יניב את ערך העוצמה האמיתי לאורך המעי הדק בכל נקודה. הערה: לבעלי חיים שונים יהיו שינויים קלים באורך המעי הדק. כדי למנוע מהבדלי האורך להשפיע על התוצאות של ניתוח נתונים במורד הזרם, יש לאגד את מחרוזת ערכי העוצמה למספר עקבי של פחים בכל דגימות הניסוי (איור 3, איור 4 ואיור 5 מציגים תוצאות עבור שלושה גדלי סלים).</li>
	<li>חלק את מספר ערכי העוצמה במספר הפחים הרצויים. המנה המתקבלת S קובעת את מספר ערכי העוצמה הכלולים בכל סל.</li>
	<li>קבע את הסל שאליו יעבור כל ערך עוצמה גולמית באמצעות נוסחת עיגול. שלב זה ממקם כל ערך עוצמה גולמית בפח. כל ערך עוצמה גולמי מאונדקס באופן כרונולוגי עם המספר השלם N. המנה N/S קובעת את מספר הסל המוקצה לכל ערך גולמי. נוסחת העיגול אמורה לעגל מנה זו למספר שלם ללא מספרים עשרוניים.</li>
	<li>צור את הערך עבור כל סל באמצעות נוסחת averageif. המטרה היא לממוצע את הערכים הגולמיים שהוקצו לסל מסוים בשלב 5.20. לפיכך, הארגומנטים בנוסחה צריכים להיות: (1) סלים מוקצים שנוצרו בשלב 5.20, (2) מספר סל, (3) ערכי עוצמה גולמית. הערה: הניתוח הראשון שאנו יכולים לבצע על הנתונים המאוגדים הוא ניתוח מרכז גיאומטרי, אשר מכמת עד כמה אנו רואים את עוצמת הפלואורסצנט הגבוהה ביותר לאורך המעי הדק (איור 4).</li>
	<li>נרמל כל ערך עוצמה מעל עוצמת הפלואורסצנט הכוללת. במילים אחרות, חלקו כל ערך עוצמה בסכום כל העוצמות.</li>
	<li>הכפל כל ערך מנורמל במספר הסל. המכפלה משקפת את המשקל היחסי של כל פח, ותורמת לעוצמת הפלואורסצנט הכוללת.</li>
	<li>חיבור כל הערכים הנוצרים בשלב 5.23 מניב את מספר הסל במרכז האות הפלואורסצנטי. חלקו במספר הפחים כדי לבטא את המרכז הגיאומטרי כשחלק המעי הדק נע על ידי המרכז הפלואורסצנטי. הערה: כדי לשקף את ההתפלגות המרחבית של האות, השלב הבא הוא ליצור את ספקטרום ההספק של מערך נתוני העוצמה המשולבת (איור 5).</li>
	<li>פתח אשף התמרת פורייה מהירה (FFT) בתוכנת הגיליון האלקטרוני. בחר את הקלט כערכת הנתונים המאוגדת ואת הפלט כערכה ריקה של אותו מספר שורות כמו סלים.</li>
	<li>חלץ את רכיב הערך האמיתי של ה- FFT.</li>
	<li>העלה כל ערך אמיתי של ה- FFT לכוח השני. זה מניב מערך נתונים של ספקטרום הספק.</li>
	<li>בחר את המחצית הראשונה של ערכת הנתונים של ספקטרום העוצמה והזז אותה כך שהיא תהיה מתחת למחצית השנייה. יש לכך השפעה של מרכוז ספקטרום ההספק סביב התדר המרכזי כאשר הוא מתווה בשלב הבא.</li>
	<li>התווה את ספקטרום העוצמה על ציר y של גרף x-y שבו ערכי ציר ה-x הם הטווח שבין -1 x (מספר הסלים/2) ל-(מספר הסלים/2) -1. במקרה של 1000 סלים, ערכי הציר ינועו בין -500 ל-499.</li>
	<li>יש להשוות את ספקטרום ההספק עבור כל חיה על בסיס התפשטות פסגות שאינן אפס והגבהים של פסגות אלה שאינן אפס.</li>
</ol>

<ol><li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStevens%2C+CE+%22Comparative+Physiology+of+the+Vertebrate+Digestive+System.+2nd+ed%22">Comparative Physiology of the Vertebrate Digestive System. 2nd ed</a>. , Cambridge University Press. (2004).</li>
<li>Bayliss, W. M., Starling, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+movements+and+innervation+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The movements and innervation of the small intestine.</a> The Journal of Physiology. 24 (2), 99-143 (1899).</li>
<li>Husebye, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+patterns+of+small+bowel+motility%3A+physiology+and+implications+in+organic+disease+and+functional+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%22%5BJournal%5D)">The patterns of small bowel motility: physiology and implications in organic disease and functional disorders.</a> Neurogastroenterology and Motility. (11), 141-161 (1999).</li>
<li>Bush, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+alosetron+on+spontaneous+migrating+motor+complexes+in+murine+small+and+large+bowel+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of alosetron on spontaneous migrating motor complexes in murine small and large bowel in vitro.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 281 (4), 974-983 (2001).</li>
<li>Der-Silaphet, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+cells+of+cajal+direct+normal+propulsive+contractile+activity+in+the+mouse+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Interstitial cells of cajal direct normal propulsive contractile activity in the mouse small intestine.</a> Gastroenterology. 114 (4), 724-736 (1998).</li>
<li>Szurszewski, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+migrating+electric+complex+of+the+canine+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A migrating electric complex of the canine small intestine.</a> American Journal of Physiology. 217 (6), 1757-1763 (1969).</li>
<li>Deloose, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+migrating+motor+complex%3A+control+mechanisms+and+its+role+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">The migrating motor complex: control mechanisms and its role in health and disease.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 9 (5), 271-285 (2012).</li>
<li>Johansoon, C., Ekelund, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+between+body+weight+and+the+gastric+and+intestinal+handling+of+an+oral+caloric+load%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Relation between body weight and the gastric and intestinal handling of an oral caloric load.</a> Gut. 17, 456-462 (1976).</li>
<li>Sarna, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+patterns+of+human+jejunal+contractions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal patterns of human jejunal contractions.</a> American Journal of Physiology. 257 (1), 423-432 (1989).</li>
<li>Hall, K. E., El-Sharkawy, T. Y., Diamant, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vagal+control+ofcanine+postprandial+upper+gastrointestinal+motility%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Vagal control ofcanine postprandial upper gastrointestinal motility.</a> American Journal of Physiology. 250, 501-510 (1986).</li>
<li>Mayer, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+feelings%3A+the+emerging+biology+of+gut-brain+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Gut feelings: the emerging biology of gut-brain communication.</a> Nature Reviews Neuroscience. 12 (8), 453-466 (2011).</li>
<li>Alcaino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+population+of+gut+epithelial+enterochromaffin+cells+is+mechanosensitive+and+requires+Piezo2+to+convert+force+into+serotonin+release%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America+Sciences%22%5BJournal%5D)">A population of gut epithelial enterochromaffin cells is mechanosensitive and requires Piezo2 to convert force into serotonin release.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Sciences. 115 (32), 7632-7641 (2018).</li>
<li>Kugler, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+stress+activates+neurites+and+somata+of+myenteric+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanical stress activates neurites and somata of myenteric neurons.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, 342(2015).</li>
<li>Mazzuoli, G., Schemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+enteric+neurons+in+the+myenteric+plexus+of+the+mouse+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive enteric neurons in the myenteric plexus of the mouse intestine.</a> PloS One. 7 (7), 39887(2012).</li>
<li>Won, K. J., Sanders, K. M., Ward, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+cells+of+Cajal+mediate+mechanosensitive+responses+in+the+stomach%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Interstitial cells of Cajal mediate mechanosensitive responses in the stomach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (41), 14913-14918 (2005).</li>
<li>Mao, Y., Wang, B., Kunze, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+myenteric+sensory+neurons+in+the+mouse+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of myenteric sensory neurons in the mouse small intestine.</a> Journal of Neurophysiology. 96 (3), 998-1010 (2006).</li>
<li>McIntyre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bran%2C+ispaghula%2C+and+inert+plastic+particles+on+gastric+emptying+and+small+bowel+transit+in+humans%3A+the+role+of+physical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Effect of bran, ispaghula, and inert plastic particles on gastric emptying and small bowel transit in humans: the role of physical factors.</a> Gut. 40 (2), 223-227 (1997).</li>
<li>Treichel, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+mechanosensory+epithelial+cells+in+mouse+gut+intrinsic+tactile+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Specialized mechanosensory epithelial cells in mouse gut intrinsic tactile sensitivity.</a> Gastroenterology. 162 (2), 535-547 (2022).</li>
<li>Bharucha, A. E., Anderson, B., Bouchoucha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+movement+with+evaluating+colonic+transit+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+and+Motility%22%5BJournal%5D)">More movement with evaluating colonic transit in humans.</a> Neurogastroenterology and Motility. 31 (2), 13541(2019).</li>
<li>Camilleri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+gastric+emptying+and+colonic+filling+of+solids+characterized+by+a+new+method%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Human gastric emptying and colonic filling of solids characterized by a new method.</a> American Journal of Physiology. 257 (2), 284-290 (1989).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-illumination+intestine+projection+imaging+of+intestinal+motility+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Trans-illumination intestine projection imaging of intestinal motility in mice.</a> Nature Communications. 12 (1), 1682(2021).</li>
<li>Woting, A., Blaut, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+intestinal+permeability+and+gut-transit+time+determined+with+low+and+high+molecular+weight+fluorescein+isothiocyanate-dextrans+in+C3H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Small intestinal permeability and gut-transit time determined with low and high molecular weight fluorescein isothiocyanate-dextrans in C3H mice.</a> Nutrients. 10 (6), 685(2018).</li>
<li>Miller, M. S., Galligan, J. J., Burks, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+measurement+of+intestinal+transit+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pharmacologial+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Accurate measurement of intestinal transit in the rat.</a> The Journal of Pharmacologial and Toxicological Methods. 6 (3), 211-217 (1981).</li>
<li>Moore, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhaled+carbon+monoxide+suppresses+the+development+of+postoperative+ileus+in+the+murine+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Inhaled carbon monoxide suppresses the development of postoperative ileus in the murine small intestine.</a> Gastroenterology. 124 (2), 377-391 (2003).</li>
<li>Machholz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e2771(2012).</li>
<li>Baeyens, N., Schwartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanics+of+vascular+mechanosensation+and+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Biomechanics of vascular mechanosensation and remodeling.</a> Molecular Biology of the Cell. 27 (1), 7-11 (2016).</li>
<li>Ye, G. J., Nesmith, A. P., Parker, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mechanotransduction+on+vascular+smooth+muscle+myocytes%27+cytoskeleton+and+contractile+function%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">The role of mechanotransduction on vascular smooth muscle myocytes' cytoskeleton and contractile function.</a> The Anatomical Record (Hoboken). 297 (9), 1758-1769 (2014).</li>
<li>Mercado-Perez, A., Beyder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+feelings%3A+mechanosensing+in+the+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+%26+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gut feelings: mechanosensing in the gastrointestinal tract.</a> Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology. , 1-14 (2022).</li>
<li>Brierley, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splanchnic+and+pelvic+mechanosensory+afferents+signal+different+qualities+of+colonic+stimuli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice.</a> Gastroenterology. 127 (1), 166-178 (2004).</li>
<li>Inoue, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet+and+abdominal+autofluorescence+detected+by+in+vivo+fluorescence+imaging+of+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Diet and abdominal autofluorescence detected by in vivo fluorescence imaging of living mice.</a> Molecular Imaging. 7 (1), 21-27 (2008).</li>
<li>Szarka, L. A., Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+assessment+of+small-bowel+and+colonic+transit%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Methods for the assessment of small-bowel and colonic transit.</a> Seminars in Nuclear Medicine. 42 (2), 113-123 (2012).</li>
<li>Padmanabhan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+transit+measurements+in+mice+with+99mTc-DTPA-labeled+activated+charcoal+using+NanoSPECT-CT%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal transit measurements in mice with 99mTc-DTPA-labeled activated charcoal using NanoSPECT-CT.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 3 (1), 1-8 (2013).</li>
<li>Jang, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+discrimination+in+rat+and+mouse+gastric+emptying%5BTitle%5D)+AND+%22Biopharmaceutics+and+Drug+Disposition%22%5BJournal%5D)">Size discrimination in rat and mouse gastric emptying.</a> Biopharmaceutics and Drug Disposition. 34 (2), 107-124 (2013).</li>
<li>Zhu, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enteric+sensory+neurons+communicate+with+interstitial+cells+of+Cajal+to+affect+pacemaker+activity+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Pfl%C3%BCgers+Archiv%3A+European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enteric sensory neurons communicate with interstitial cells of Cajal to affect pacemaker activity in the small intestine.</a> Pflügers Archiv: European Journal of Physiology. 446 (7), 1467-1475 (2014).</li>
<li>Treichel, A. J., Farrugia, G., Beyder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+touchy+business+of+gastrointestinal+%28GI%29+mechanosensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The touchy business of gastrointestinal (GI) mechanosensitivity.</a> Brain Research. 1693, 197-200 (2018).</li>
</ol>

מערכת העיכול, כמו איברים צינוריים אחרים, כגון כלי דם, דורשת חיישנים מכניים ואפקטים כדי לשמור על הומאוסטזיס26,27,28. עם זאת, מערכת העיכול ייחודית בכך שהתכונות הפיזיקליות של החומרים החוצים אותה אינן קבועות לאורך ארוחות. תכולה תוך-גופית בעלת תכונות פיזיקליות שונות (מוצק, נוזל וגז) עוברת במעיים, ומייצרת תשומות מכניות שונות למכנורצפטורים של מערכת העיכול. ואכן, גירויים מכניים שונים במעי הגס חשים ומועברים על ידי מסלולים שונים<sup class...

מערכת העיכול האנושית (GI) היא מערכת איברים באורך של מספר מטרים, בערך כמו צינור בעל ממדים שונים ותכונות פיזיות1. כאשר התכולה נעה לאורכה, תפקידה העיקרי של מערכת העיכול הוא לספוג חומרים חיוניים לחיים. המעי הדק אחראי באופן ספציפי לספיגת חומרים מזינים. המעבר במעי הדק מווסת באופן הדוק כדי להתאים לתפקודי העיכול והספיגה, וכתוצאה מכך נוצרים דפוסי תנועתיות שונים. בייליס וסטארלינג תיארו את "חוק המעי"2 בשנת 1899, והראו את תוכנית ההנעה ההתכווצותית במעי הידועה כיום כרפלקס פריסטלטי; הקטע הפרוקסימלי לבולוס המזון מתכווץ כדי להניע אותו קדימה, והקטע הדיסטלי נרגע לקבל אותו. בתיאוריה, תבנית זו לבדה יכולה להספיק כדי להעביר חומר באופן תמוה, אך למעלה ממאה שנים של מחקר ציירו תמונה מורכבת יותר של פעילות התכווצות במערכת העיכול. שלוש תקופות תנועתיות של המעי הדק מוכרות בבני אדם: קומפלקס המנועים הנודדים (MMC), תקופת הצום והתקופה שלאחר הלידה3. אותם דפוסים דווחו בעכברים 4,5. ה-MMC הוא תבנית מוטורית מחזורית הנשמרת ברוב היונקים 6,7. ל- MMC דפוס אופייני בן ארבעה שלבים המשמש סמן קליני שימושי בהפרעות GI תפקודיות7. ארבעת השלבים, לפי סדר ההתרחשות, הם (I) התכווצויות, (II) התכווצויות לא סדירות, משרעת נמוכה, (III) התכווצויות משרעת גבוהה רגילות, ו-(IV) תקופתירידה בפעילות 7. ה- MMC מסמן את התבנית המוטורית העיקרית של תקופת הצום3. MMCs של תקופת הצום לנקות את התוכן של המעי הדק לקראת הארוחה הבאה.
הדפוסים המוטוריים של התקופה שלאחר הלידה מותאמים לתפקודי העיכול והספיגה3. ללא קשר להרכב הקלורי, המעבר הראשוני מהיר לאורך המעי הדק, התוכן מתפשט לאורך המעי, והמעבר מאט לאחר מכן8. הספיגה ממוטבת על ידי הגדלת שטח הפנים במגע והאטתו כדי להאריך את זמן המגורים. ברגע שהחומרים המזינים נמצאים בתוך הלומן, התבנית הדומיננטית מורכבת מהתכווצויות קרובות (<2 ס"מ זו מזו) לא מתואמות (התכווצויות פילוח), עם כמה התכווצויות על גבי משרעת גדולה המשתרעות לכל אורך המעי הדק (התכווצויות פריסטלטיות)9. התכווצויות פילוח מערבבות את התכולה התוך-לומינלית במקום. התכווצויות פריסטלטיות גדולות מדי פעם מניעות את התוכן לכיוון המעי הגס.
עיתוי המעבר חזרה ל-MMCs תלוי בנפח המזון ובהרכב הקלורי10. לפיכך, המעי הדק דוגם רמזים לומינליים כדי לווסת מתי לעבור בין תקופות תנועתיות. רמזים מכניים, כגון תכונות פיזיקליות של תכולה לומינלית11, נפח לומינלי ומתח דופן, מעסיקים תאים מכנורצפטורים בקיר מערכת העיכול 12,13,14,15,16. ואכן, הגדלת המרכיב המוצק בארוחה מובילה לעלייה במעבר המעי הדק17. אנו משערים כי תכונות פיזיקליות, כגון המצב הנוזלי או המוצק של תוכן תוך-לומינלי, חייבות להעסיק מכנורצפטורים שונים בשל הכוחות השונים שהם מייצרים על קיר מערכת העיכול18.
תקן הזהב למדידת מעבר in vivo GI בבני אדם, כמו בעכברים, הוא השימוש בעוקבים רדיואקטיביים הנמדדים על ידי scintigraphy כשהם יוצאים מהקיבה או עוברים לאורך המעי הגס 19,20. ביונקים, לולאות המעי הדק בדרכים בלתי צפויות מה שמקשה על הדמיית in vivo באופן אמין, אך ההתקדמות נעשית21. יתר על כן, כיום חסרים כלים לכימות האופן שבו המעי הדק מטפל בחלקיקים בעלי תכונות וגדלים שונים. נקודת המוצא כאן הייתה טכניקה של תקן זהב שמתקננת את המחקר של מעבר מעי דק 22,23,24 ותפקוד מחסום 22. הוא מורכב מגידול עכברים עם חומר פלואורסצנטי, המתנה לתנועתיות של מערכת העיכול כדי להעביר את החומר, כריתת מערכת העיכול, פילוחו למספר חלקים מהקיבה ועד המעי הגס, חתך, והומוגניות של תוכן תוך-לומינלי לכימות פלואורסצנטי. עשינו שני שיפורים. ראשית, שינינו את ההרכב של תכולת ה-gavaged כך שיכלול חרוזים מיקרוסקופיים פלואורסצנטיים כדי לקבוע כיצד המעי הדק מפיץ חלקיקים פיזיים. שנית, שיפרנו את הרזולוציה המרחבית על ידי הדמיה של כל מערכת העיכול מהקיבה ועד המעי הגס, והשתמשנו בבינוי בגודל משתנה כדי לתקנן את הניתוח שלנו בין בעלי חיים. אנו מניחים כי זה חושף תובנות חדשות על האיזון של התכווצויות הנעה לעומת פילוח בשלב שלאחר הלידה.

<table><tbody><tr><td>עכברי C57BL/6J</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>664</td><td>עכברים אחרים יכולים לשמש עם פרוטוקול זה</td></tr><tr><td>כלי דיסקציה</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת Excel</td><td>מיקרוסופט</td><td>n/a</td><td>המשמשת לניתוח גיליונות אלקטרוניים</td></tr><tr><td>פוליאתילן ירוק פלואורסצנטי מיקרוספירות 1.00 גרם/סמ"ק 75-90um - 10 גרם</td><td>UVPMS-BG-1.00 75-90um - 10 גרם</td><td></td> <td>"חרוזים קטנים יותר" ב כתב יד</td></tr><tr><td>פוליאתילן ירוק פלואורסצנטי מיקרוספירות 1.00 גרם/סמ"ק 180-212um - 10 גרם</td><td>קוספרי</td><td>UVPMS-BG-1.00 180-212um - 10 גרם</td> <td>"חרוזים גדולים יותר" בכתב היד</td></tr><tr><td>מחטי Gavage</td><td>Instech</td><td>FTP-18-50-50</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת ImageJ</td><td>n/</td><td>a n/a</td><td>המשמשת לחילוץ פרופיל פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>נייר סרגל למינציה (מוכן בבית)</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>מתיל צלולוז (צמיגות: 400 cP)</td><td>Sigma</td><td>M0262</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת פוטושופ</td><td>Adobe</td><td>n/a</td><td>המשמשת לעיבוד תמונה</td></tr><tr><td>Rhodamine B isothiocyanate-Dextran</td><td>Sigma</td><td>r8881-100mg</td> <td>מצב "נוזלי" בכתב היד</td></tr><tr><td>Xenogen IVIS 200</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>מערכת הדמיה In vivo</td></tr></tbody></table>

חקר מורין מעיים קטנים מכנוסנס של חלקיקים לומינליים

Studying Murine Small Bowel Mechanosensing of Luminal Particulates

תנועתיות במערכת העיכול (GI) חיונית לעיכול ולספיגה תקינים. במעי הדק, אשר סופג חומרים מזינים, תנועתיות מייעלת את העיכול והספיגה. מסיבה זו, חלק מדפוסי התנועתיות במעי הדק כוללים סגמנטציה לערבוב של תוכן לומינלי ופריסטלטיקה להנעתם. תכונות פיזיקליות של תוכן לומינלי מווסתות את דפוסי תנועתיות המעי הדק. הגירוי המכני של מעגלים מכנו-חושיים במערכת העיכול על ידי מעבר תוכן לומינלי ותנועתיות מעיים בסיסית יוזמים ומווסתים תבניות מוטוריות מורכבות של GI. עם זאת, המנגנונים המכנו-חושיים המניעים את התהליך הזה עדיין אינם מובנים כהלכה. זה נובע בעיקר ממחסור בכלים לנתח כיצד המעי הדק מטפל בחומרים בעלי תכונות פיזיקליות שונות. כדי לחקור כיצד המעי הדק מטפל בחלקיקים בגדלים שונים, שינינו שיטת in vivo מבוססת כדי לקבוע את המעבר במעי הדק. אנו מגדלים עכברים חיים עם נוזל פלואורסצנטי או חרוזים פלואורסצנטיים זעירים. לאחר 30 דקות, אנו מנתחים את המעיים כדי לדמות את התפלגות התוכן הפלואורסצנטי על פני כל מערכת העיכול. בנוסף למדידות ברזולוציה גבוהה של המרכז הגיאומטרי, אנו משתמשים במדידות בגדלים משתנים ובאנליזה ספקטרלית כדי לקבוע כיצד חומרים שונים משפיעים על מעבר המעי הדק. בחנו כיצד מנגנון "מגע במעיים" שהתגלה לאחרונה משפיע על תנועתיות המעי הדק בגישה זו.

אנו מציגים תוצאות מייצגות משלב 3 ואילך. איור 1 מראה את המעיים המושתלים השלמים, עם מדידות פלואורסצנטיות מעליהן. הקיבה (סגולה) מונחת לאורך אותו ציר כמו המעי הדק (כתום), אך אנו מעדיפים להזיז את הצקום (כחול) לצד כדי למנוע חפיפה עם המעי הגס (כתום). כפי שמעידים בלוח השמאלי, זה לא תמיד אפשרי בגלל גודל האיבר. אנחנו חותכים את המעי הדק ב~200 מ"מ כדי למקסם את הכיסוי של מקטעים רציפים, אבל זה לא תמיד אפשרי בגלל מזנטריה המגבילה את היכולת לפתוח את המעיים, ואת ההעדפה שלנו לא לחתוך דרך מבנים כמו גלולות פלואו...

כדי לחקור כיצד המעי הדק מטפל בחלקיקים בגדלים שונים, שינינו שיטת in vivo מבוססת כדי לקבוע את המעבר במעי הדק.

Gastrointestinal (GI) motility is critical for normal digestion and absorption. In the small bowel, which absorbs nutrients, motility optimizes digestion ...

זהו פרוטוקול החוקר כיצד המעי הדק מטפל בחומרים בעלי תכונות פיזיקליות שונות וכיצד הוא מפיץ חומרים אלה בחלל. זהו כלי משלים במחקר שלנו על רגישות למעיים. היתרונות העיקריים של פרוטוקול זה הם כי ניתן להשתמש בו כדי ללמוד חומרים או תערובות עם תכונות פיזיות שונות וכי הפתרון מאפשר לנו לפתור מעברים אזוריים על פני קטעי מעיים קצרים.טכניקה זו מוסיפה להבנתנו את הרגישות של המעי האנושי. זה עוזר לנו להבין כיצד המעי הדק מקבל החלטות מעבר על סמך הרמזים המכניים שהוא מקבל מהתוכן התוך-לומינלי. כדי להתחיל, הכינו את ה-gavage על ידי חיבור צינור הזנה בעובי של 18 מדים ובאורך 50 מילימטרים למזרק של 1 מיליליטר ושואבים 200 מיקרוליטרים של תמיסת RITC או תמיסת מיקרוספרה.לאחר מכן, לרסן ידנית את החיה בצום באמצעות טכניקת ריסון ביד אחת, ולאחר מכן בעדינות להכניס את צינור ההזנה דרך הפה והוושט של העכבר עד שהוא נכנס לקיבה. לאחר ההחדרה, לאט לגרש את תוכן המזרק לתוך הבטן בזהירות להסיר את הצינור מן העכבר. לאחר הגבאג', החזירו את העכבר לכלוב.לפני תחילת הניתוחים, הפעל את מכשיר ההדמיה in vivo כדי שיגיע לטמפרטורה הרצויה. לאחר המתת חסד, הניחו את העכבר בתנוחת שכיבה על במת דיסקציה והצמידו את ארבעת הנספחים שלו על הבמה כדי לגשת לבטן. לאחר מכן, להרטיב את פני השטח של הבטן עם 70% אתנול.לאחר מכן, השתמש מלקחיים מיקרו דיסקציה כדי למשוך את העור ו

studying-murine-small-bowel-mechanosensing-of-luminal-particulates

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ileus לאחר הניתוח (POI) הוא סיבוך של ניתוח בטן מוביל לתחלואה ואשפוז ממושך. בגלל אסטרטגיות מניעות או טיפול חסרות מחקר התעצם הוא הכרחי. לכן הקמנו מודל עכבר סטנדרטי וריאלי כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של POI וללמוד אפשרויות טיפוליות פוטנציאליות.

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

סרטון זה מדגים את יצירתו של מודל לולאה איליאלית לחקר חדירות המעי במודל עכבר. שיטה זו מספקת מודל חי להבנת תפקוד מחסום האפיתל והתגובה החיסונית הנובעת ממנו.

מודל Mouse Ileal Loop: מודל כירורגי לחקר חדירות המעי בעכבר

בסרטון זה, אנו מתארים הליך כירורגי ליצירת לולאת מעי גס פרוקסימלית של עכבר או קטע pcLoop ואחריו הזרקה intraluminal של סמנים פלואורסצנטיים לתוך קטע כדי לחקור את חדירות אפיתל המעי.

יצירת מודל לולאת מעי גס פרוקסימלי של עכבר: הליך כירורגי ליצירת לולאת מעי גס פרוקסימלית ומדידת חדירות המעי על ידי זיהוי סמנים פלואורסצנטיים בסרום לאחר הזרקה תוך לומינלית

המדידה in vivo של התכווצויות שרירים חלקים לאורך מערכת העיכול של חיות מעבדה נותרה טכניקה רבת עוצמה, אם כי לא מנוצלת כראוי. מדי מתח גמישים עם שני אלמנטים אינם זמינים מסחרית ודורשים ייצור. פרוטוקול זה מתאר בניית מדי מתח אמינים וזולים להשתלה חריפה או כרונית במכרסמים.

ייצור והשרשה של מדי עיבור Dual-אלמנט הזעיר למדידה<em&gt; בVivo</em&gt; במערכת העיכול התכווצויות במכרסמים.

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בתכשירי רקמת מעיים שנכרתו או "שקי מעיים" כמודל ex vivo של תפקוד מחסום המעי. מודל זה עשוי לשמש להערכת שלמות מחסום האפיתל ושכבת הג'ל הרירית באתרי מעיים ספציפיים במודלים של מחלות עיכול בבעלי חיים.

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

מאמר זה מתאר טכניקת הדמיית וידאו ומיפוי מרחבי-זמני ברזולוציה גבוהה לזיהוי שינויים בוויסות העצבי של תנועתיות המעי הגס בעכברים בוגרים. ניתן לזהות השפעות עדינות על תפקוד מערכת העיכול באמצעות גישה זו בתכשירי רקמות מבודדים כדי לקדם את ההבנה שלנו לגבי מחלות מערכת העיכול.

הדמיה וידאו ומפות Spatiotemporal לנתח תנועתיות מערכת העיכול של עכברים

תוך ניצול של מיקרוסקופ תוך-ויטאל, השיטה המוצגת כאן מאפשרת הדמיה בזמן אמת של שפיכת תאי אפיתל במעיים בבעלי חיים חיים. לכן, רירית מעיים מוכתמת topically (acriflavine ו rhodamineB-dextran) של עכברים מרדימים הוא תמונה עד רזולוציה של תא יחיד באמצעות מיקרוסקופית confocal.

גישה תוך-ויטאלית המבוססת על מיקרוסקופיה להערכת חמלה במעיים וביצועי שפיכת תאים אפיתל

תפקוד מחסום אפיתל מעיים Dysregulated ותגובות חיסוניות הם סימני היכר של מחלות מעי דלקתיות שנותרו נחקרות בצורה גרועה בשל מחסור במודלים פיזיולוגיים. כאן, אנו מתארים מודל לולאת מעיים של עכברים המעסיק מקטע מעיים בעל כלי דם וחיצוניים כדי לחקור חלחיליות רירית וגיוס לויקוציטים ב- vivo.

הערכה תפקודית של חלחיליות מעיים ונדידה טרנס-אפיתלית נויטרופילית בעכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת

מחקר זה מציג שיטת הדמיה תלת מימדית המשתמשת ברקמות מעי שלמות ומיקרוסקופיה מרובת פוטונים כדי לכמת ריר מופרש, המאפשר ניתוח נפחי מדויק והדמיה של דינמיקת ריר בתגובה לגירויים כמו קרבמוילכולין כלוריד.

כימות תלת מימדי של ריר המעי באמצעות הדמיית רקמות שלמות

מאמר זה מתאר: (1) העברת מולקולות בדיקה לעכברים יילודים כבר ב-DOL 6; ו-(2) הערכה חיצונית של תפקוד מחסום אפיתל המעי הגס בביופסיות מגורי DOL 10 לגמילה (DOL 20) על ידי הערכת חדירות פארא-תאית וטרנס-תאית עם תאי Ussing.

גוואג' אורלי בגורי עכבר יילודים והערכה תפקודית של שלמות מחסום המעי באמצעות תאי שימוש

חקור מעבר חומרים במעי הדק הקטן באמצעות שיטת גאבג' מתקדמת עם צינור הזנה בקוטר 18. שיטה זו מאפשרת ניתוח רזולוציה גבוהה של תנועת חלקיקים לומינליים והבנת מכנורצפטורים מעיים.

חקר מורין מעיים קטנים מכנוסנס של חלקיקים לומינליים

גלה סרטונים נוספים