Name: זריקות תוך ויטרליות בעין הבקר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 37 s
Description: למדו פרוטוקול זריקות תוך ויטרליות בעין הכבש כמודל לעין האנושית. שיטה זו מספקת אמצעי פחות פולשני להעברת טיפול גני לרשתית וטיפול בניוון רטינלי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לד"ר סטיב היפ (BVSc, CertVOphthal) על עזרתו בהקמת פרוטוקול זה ובביצוע הזריקות שתוארו על ידי Murray et al.15. המחברים מכירים גם במימון של CureKids ניו זילנד, קרן המחקר הרפואי של קנטרברי, Neurogene Inc, והאגודה לתמיכה ומחקר של מחלות באטן.

כל הפרוטוקולים הניסויים אושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של אוניברסיטת לינקולן והם עולים בקנה אחד עם הנחיות המכונים הלאומיים לבריאות בארה"ב לטיפול ושימוש בבעלי חיים במחקר ולחוק רווחת בעלי החיים של ניו זילנד (1999). כבשי בורדרדייל אובחנו בלידה14 והוחזקו בחוות מחקר של אוניברסיטת לינקולן. שלושה אווזים הומוזיגוטיים בני 3 חודשים (CLN5-/-) קיבלו זריקת IVT אחת לעין שמאל, כאשר עין ימין שלא טופלה משמשת כבקרה פנימית. נתוני אלקטרורטינוגרפיה ופתולוגיה הושוו לנתוני בקרה היסטוריים בריאים ומושפעים. הווקטור הנגיפי ששימש במחקר זה היה סרוטיפ נגיף 9 המשלים את עצמו הקשור לאדנו, המכיל את מקדם פעולת הבטא של עוף (CBh) ואת הביצית CLN5 המותאמת לקודון (scAAV9/CBh-oCLN5opt). הווקטור הנגיפי סופק על ידי אוניברסיטת צפון קרוליינה וקטור Core, צפון קרוליינה, ארה"ב.
1. טרום ניתוח
<ol><li>אוטוקלאב את ערכת הניתוח (איור 1).</li>
	<li>הזימו את הכבשים במשך 24 שעות לפני הניתוח.</li>
	<li>רשום משקולות חיות לפני הניתוח.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig01.jpg"> איור 1: ערכת ניתוח תוך-ורידית. המכשירים הדרושים לניתוח IVT כוללים (1) ספקולום להחזקת העפעפיים פתוחים ו-(2) זוג מלקחיים מעוקלים לאף כדי לתפוס את הלחמית הבולבארית ולסובב את העין. (3) המוסטאט אף ישר נכלל גם כמכשיר חלופי לאחיזת הלחמית הבולבארית ולהחזקת העין במקומה אם היא התגלגלה חזרה למסלול העין. ערכה זו עוברת בדיקה אוטומטית לפני הניתוח. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
2. הליך כירורגי
<ol><li>לרסן את החיה, באמצעות קוצץ אלקטרוני, לגלח את הצמר מצד אחד של הצוואר מעל הווריד jugular.</li>
	<li>Occlude את הווריד jugular על ידי הפעלת לחץ בבסיס חריץ jugular ולדמיין את הווריד מורם.</li>
	<li>יש לשאוב את הכמות המתאימה של דיאזפם (0.3 מ"ג/ק"ג) וקטמין (7.5 מ"ג/ק"ג) לתוך מזרק סטרילי ולחבר מחט סטרילית של 20 גרם. הכנס את המחט לווריד הג'וגולרי ומשוך בעדינות בחזרה על הבוכנה כדי לוודא שהדם נכנס לרכזת והמחט נמצאת בתוך הווריד. לאחר האישור, לגרום באמצעות מתן תוך ורידי (jugular).</li>
	<li>מיד לאחר אינדוקציה, מניחים את החיה בשכיבה הגבית, מרחיבים את הצוואר ומחזיקים את הלשון למעלה וקדימה, באמצעות לרינגוסקופ כדי לדמיין את הגרון. בצע אינטובציה אנדוטרכאלית על ידי החדרה עדינה של צינור אנדוטרכאלי (גודל 6.0-9.0 בהתאם לגודל הכבשה) בין מיתרי הקול כאשר החיה נושפת. לנפח את השרוול האנדוטרכאלי מיד ולאבטח את הצינור עם עניבה סביב הלסת התחתונה. אשר את זרימת האוויר דרך הצינור.</li>
	<li>מעבירים את הכבשה לשולחן הניתוחים ומניחים אותה בשכיבה צידית.</li>
	<li>מיד לחבר את צינור endotracheal צינורות של מכונת הרדמה למסירת isoflurane ב 100% חמצן. בתחילה מתחילים עם 3%-4% איזופלוראן ולאחר מכן מפחיתים ל-2%-3% לצורך תחזוקה. שימו לב לאוורור הספונטני של הכבשים.</li>
	<li>עקוב אחר קצב הלב (דופק), קצב הנשימה, ריווי החמצן, רמות CO2 בסוף הגאות וטמפרטורת הגוף הרקטלית לאורך כל ההליך. ראו טבלה 1 לערכים פיזיולוגיים לפרמטרים אלה בכבשים מורדמות (משתנה, אך משמש כהנחיה).</li>
	<li>מניחים וילון גדול, סטרילי ומרובע על עגלת ניתוח כירורגית, ואחריו המכשירים הסטריליים.</li>
	<li>מקמו וילון כירורגי סטרילי ופנסטרי מעל העין להזרקה.</li>
	<li>לחטא את העין באופן אספטי באמצעות מזרק סטרילי של 20 מ"ל להשקיית העין עם תמיסת 1-5% פובידון-יוד.</li>
	<li>יש למרוח 1-2 טיפות אלקאין 0.5% W/V תמיסת עיניים, כהרדמה מקומית, על העין.</li>
	<li>יש להתאים ספקולום עיניים נופה באראקר-קוליברי (10 מ"מ) לעפעפיים כדי להחזיק את העין פתוחה.</li>
	<li>לתפוס את הלחמית bulbar על ההיבט הגבי של העין עם מלקחיים, ולסובב את כדור העין ventromedial.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>בהכרה</td>
			<td>מורדם</td>
			<td>נקודת התערבות קריטית מומלצת</td>
		</tr><tr><td>דופק (פעימות לדקה)</td>
			<td>50-80 (מנוחה) עד 280 (פעיל)</td>
			<td>50-80</td>
			<td>&lt;50, &gt;100</td>
		</tr><tr><td>קצב נשימה (נשימות לדקה)</td>
			<td>15-40 (מנוחה) עד 350 (מחומם יתר על המידה)</td>
			<td>10-30</td>
			<td>&lt;8, &gt;40</td>
		</tr><tr><td>רוויון חמצן (מ"מ כספית)</td>
			<td>95-100</td>
			<td>98-100</td>
			<td>&lt;90</td>
		</tr><tr><td>CO2 סופני-גאות (מ"מ כספית)</td>
			<td>35-45</td>
			<td>35-45</td>
			<td>&gt;55</td>
		</tr><tr><td>טמפרטורת הגוף (°C)</td>
			<td>38.5-39.5</td>
			<td>38.5-39.5</td>
			<td>&lt;36, &gt;40</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: ערכים פיזיולוגיים של פרמטרים שיש לעקוב אחריהם בכבשים מורדמות.
3. הכנה ויראלית
<ol><li>יש לאחסן את ה-AAV בטמפרטורה של 80°C- עד לשימוש.</li>
	<li>ביום הניתוח, הפשירו את המספר הנדרש של בקבוקונים להעברת IVT על קרח.</li>
	<li>מיד לפני הניהול, מערבבים את הווקטור הנגיפי aliquot וצנטריפוגה ב 400 × גרם במשך 10 שניות כדי לאסוף את התוכן.</li>
	<li>יש לדלל כל אליקוט וקטורי נגיפי בתמיסת מלח מסוננת סטרילית 1x עם פוספט (PBS) למינון הרצוי בנפח סופי של 100 μL. הכן דילולים וקטוריים בצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי בקושר חלבון נמוך של 1.5 מ"ל באמצעות קצוות פיפטה של מסנן סטרילי. יש להשליך את כל החומרים המתכלים שהיו במגע עם הווקטור הנגיפי בתמיסת החיטוי (ראו טבלת חומרים). הערה: בפרסום המקורי15 המינון של החומר הטיפולי (AAV9. CLN5) היה 1.9 x 1010 גנומים נגיפיים. המינון המומלץ ישתנה בהתאם לסוכן הטיפולי הניתן; לכן, מינון לא נכלל בפרוטוקול הסטנדרטי המוצג כאן.</li>
	<li>שאבו את מלוא 100 μL של הכנת וקטור AAV לתוך מזרק סטרילי, שטח מת נמוך 1 מ"ל עם מחט המחוברת באופן קבוע 28 G x 1/2 להזרקה מיידית. ודא שמשך הזמן מההכנה להזרקה הוא פחות מ-2 דקות.</li>
</ol>4. ניהול ויראלי
<ol><li>יש להחדיר את המחט כ-7 מ"מ אחורית לסקלרה בצד הצדדי של העין ובזווית אחורית כדי להימנע מהעדשה (איור 2 ואיור 3). לתת את הזריקה היחידה של 100 μL כמו בולוס קרוב ככל האפשר לרשתית מבלי להפריע למשטח הרשתית.</li>
	<li>יש לשטוף את העין בכ-10-15 מ"ל של תמיסת 1-5% פובידון-יוד ואחריה 10 מ"ל מלח לפני הסרת הספקולום והווילונות.</li>
	<li>הופכים את הכבשים וחוזרים עם העין השנייה במידת הצורך.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig02.jpg"> איור 2: סיבוב ונטרומדיאלי של כדור הארץ של העין. (A) תפסו את הלחמית הבולבארית עם מלקחיים שאינם מטורפים ו-(B) סובבו את החוטם בצורה וונטרומדית (כלומר, כלפי מטה ולכיוון החוטם) כדי לחשוף את פני השטח הגביים של העין לצורך הזרקה. קיצורים: V = גחון, D = גב, M = מדיאלי, L = לרוחב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig03.jpg"> איור 3: מיקום ההזרקה ועומקה. המחט מוזרקת על ההיבט הגבי של כדור העין, ואת מלוא אורכו של פיר המחט (0.5 אינץ '/ 12.7 מ"מ) מוכנס לתוך העין. שימו לב לזווית המחט לכיוון החלק האחורי של העין כדי להימנע מהעדשה ולהזריק קרוב ככל האפשר לרשתית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
5. ניהול לאחר הניתוח
<ol><li>עם השלמת ההליך, להפסיק הרדמה גז isoflurane, לשטוף את הקו עם 100% חמצן, לנתק את הצינור מן הצינור endotracheal, ולהעביר את הכבשים לחדר ההתאוששות.</li>
	<li>מניחים את הכבשים במשענת עצם החזה, עם רגליים תחובות מתחת, ומוניטור עד להחלמה מלאה. ודא שהפה של החיה נקי מכל מכשול.</li>
	<li>כאשר רפלקס הבליעה הוא ציין, חלקית לנפח את השרוול של צינור endotracheal בעדינות להסיר את הצינור מן הפה.</li>
	<li>מתן נוגד דלקת לא סטרואידי תוך שרירי לתוך שריר הירך האחורי של הגפיים האחוריות, אנטיביוטיקה תת עורית בצד הצוואר או מאחורי הכתף, ו 0.5% כלורמפניקול טיפות עיניים על פני כדור הארץ העין.</li>
	<li>ספק מים ומזון (כדורי לוצרן ומוץ) ברגע שהכבשים יכולות לעמוד ללא הפרעה.</li>
	<li>לתת 0.5% כלורמפניקול טיפות עיניים 2-3 ליום במשך 7 ימים לאחר הניתוח.</li>
	<li>השאירו את הכבשים בתוך הבית למשך הלילה לפני שהן חוזרות למשטח החיצוני כ-24 שעות לאחר הניתוח.</li>
	<li>שיא טמפרטורות רקטליות מדי יום במשך 3 שבועות. עקוב אחר כל שינוי בדופק או בקצב הנשימה, צריכת מזון, התנהגות עצבית, טמפרטורת גוף, משקל, יציבה, בריאות העיניים וסימנים קליניים של בריאות לקויה. יש לפנות לטיפול וטרינרי מתאים אם יש אינדיקציות לתופעות לוואי.</li>
</ol>6. הערכת יעילות in vivo
<ol><li>אם מטרת הזרקת IVT היא לשמר את הראייה, עקוב אחר יעילות in vivo בשיטות כגון בדיקת מבוך או אלקטרורטינוגרפיה (ERG) כדי להעריך את תפקוד תאי הרשתית או טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT) להערכת מבנה הרשתית. הערה: אמצעי יעילות אלה תוארו היטב לאחר טיפול גנטי IVT11,15,16.</li>
</ol>7. ניתוח רקמות לאחר המוות
<ol><li>לבצע המתת חסד של כבשים בשיטה מאושרת בנקודת קצה מתאימה לאחר ניתוח הזרקה תוך ויטרלית. הערה: שיטות המתת חסד מוצעות, כגון תרופות המתת חסד וטרינריות תוך ורידיות או בורג שבוי חודר לעמוד השדרה הצווארי ואחריו exsanguination מהיר, מפורטים במקום אחר15,16.</li>
	<li>קציר גלובוסים לעין כבשים באמצעות מספריים מעוקלים חדים/קהים כירורגיים. חותכים את הקנטוס הלטרלי והמדיאלי כדי להגדיל את פתח ארובת העין ולאחר מכן חותכים באופן שיטתי דרך קפלי הלחמית, רקמת החיבור, השרירים ועצב הראייה כדי לשחרר את כדור העין מהשקע.</li>
	<li>תיקון טבילה שלם, כדורי עיניים מנוקבים ב-10% פורמלין למשך שעתיים, ולאחר מכן פוסט-פיקסינג בתמיסה של Bouin למשך 4 שעות, מה שהופך חתך קטן (0.5 ס"מ) בסקלרה כדי לאפשר זלוף מספיק. לחלופין, טבילה-תיקון גלובוס העין בפתרון של דוידסון למשך 48 שעות.</li>
	<li>מעבדים מקטעים של רקמת העין באמצעות הטבעה שגרתית של שעוות פרפין וחיתוך ב-3-5 מיקרומטר. הערה: הליכי צביעה עבור צביעה המטוקסילין ו eosin (H&amp;E) וניתוח אימונוהיסטוכימי תוארו בעבר15,16.</li>
	<li>הערך את היעילות ברקמות שלאחר המוות על ידי מדדים כגון עובי רשתית כולל, עובי שכבת הרשתית, ספירות של שורות תאי בשכבה גרעינית חיצונית, וכתמים אימונוהיסטוכימיים עבור סוגי תאי רשתית, גליה רשתית או חלבונים מעניינים. הערה: לפרוטוקולים עבור ניתוחים אלה, ראה פרסומים קודמים15,16.</li>
</ol>

<ol><li>Himawan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+retinal+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to retinal photoreceptors.</a> Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+therapies+for+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%3A+More+than+meets+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye.</a> Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Grzybowski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((update+on+intravitreal+injections%3A+Euretina+expert+consensus+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations.</a> Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).</li>
<li>Pavlou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+AAV+capsids+for+intravitreal+gene+therapy+of+photoreceptor+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392(2021).</li>
<li>Kousi, M., Lehesjoki, A. -E., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+mutation+spectrum+and+clinical+correlations+of+over+360+mutations+in+eight+genes+that+underlie+the+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Mutation%22%5BJournal%5D)">Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).</li>
<li>Wibbeler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerliponase+alfa+for+the+treatment+of+atypical+phenotypes+of+CLN2+disease%3A+A+retrospective+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series.</a> Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+intraventricular+cerliponase+alfa+for+CLN2+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).</li>
<li>Mitchell, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+monitoring+of+the+CNS+demonstrates+the+efficacy+of+gene+therapy+in+a+sheep+model+of+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease.</a> Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+retinal+degeneration+in+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Scientific Reports. 12 (1), 3670(2022).</li>
<li>Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinography+data+from+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Data+in+Brief%22%5BJournal%5D)">Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Data in Brief. 37, 107188(2021).</li>
<li>Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+determination+and+allometric+prediction+of+vitreous+volume%2C+and+retina+and+lens+weights+in+G%C3%B6ttingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in Göttingen minipigs.</a> Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).</li>
<li>Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topography+of+ganglion+cells+and+photoreceptors+in+the+sheep+retina%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).</li>
<li>Frugier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+large+animal+model+of+CLN5+neuronal+ceroid+lipofuscinosis+in+Borderdale+sheep+is+caused+by+a+nucleotide+substitution+at+a+consensus+splice+site+%28c.571%2B1G%3EA%29+leading+to+excision+of+exon+3%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G>A) leading to excision of exon 3.</a> Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).</li>
<li>Murray, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+gene+therapy+protects+against+retinal+dysfunction+and+degeneration+in+sheep+with+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease.</a> Experimental Eye Research. 207, 108600(2021).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+retinal+transduction+by+AAV2-7m8+following+intravitreal+injection+in+a+sheep+model+of+CNGA3+achromatopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia.</a> Gene Therapy. , (2021).</li>
<li>Boyd, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor-targeted+gene+delivery+using+intravitreally+administered+AAV+vectors+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs.</a> Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).</li>
<li>Dalkara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo-directed+evolution+of+a+new+adeno-associated+virus+for+therapeutic+outer+retinal+gene+delivery+from+the+vitreous%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous.</a> Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).</li>
<li>Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+visual+performance+with+intravitreal+administration+of+9-cis-retinal+in+Rpe65-mutant+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs.</a> Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+photoreceptor+transduction+efficacy+of+capsid-modified+adeno-associated+viral+vectors+following+intravitreal+and+subretinal+delivery+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).</li>
<li>Kotterman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+neutralization+poses+a+barrier+to+intravitreal+adeno-associated+viral+vector+gene+delivery+to+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates.</a> Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).</li>
<li>Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immune+responses+to+AAV+gene+therapy+in+the+ocular+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment.</a> Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).</li>
<li>Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -Y., Kim, S. -W., Huh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subconjunctival+hemorrhage+after+intravitreal+injection+of+anti-vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).</li>
<li>Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+needle+forces+and+acute+pressure+changes+during+intravitreal+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections.</a> Clinical & Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).</li>
<li>Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+pressure+and+injection+forces+during+intravitreal+injection+into+enucleated+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).</li>
<li>Ross, M., Ofri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+retinal+gene+therapy%3A+Evolving+from+subretinal+to+intravitreal+vector+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery.</a> Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).</li>
<li>Henein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics+of+intravitreal+injections+into+liquid+vitreous+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes.</a> Pharmaceutics. 11 (8), 371(2019).</li>
<li>Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+intraocular+pressure+variation+during+automatic+intravitreal+injections%3A+An+ex-vivo+experimental+study+using+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes.</a> PloS One. 16 (8), 0256344(2021).</li>
<li>Willekens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreally+injected+fluid+dispersion%3A+Importance+of+injection+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).</li>
<li>Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+ex+vivo+models+to+study+drug+delivery+barriers+in+the+posterior+segment+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).</li>
<li>Kiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector+Considerations+for+Ocular+Gene+Therapy.+Adeno-associated+virus+vectors+offer+a+safe+and+effective+tool+for+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Retinal+Physician%22%5BJournal%5D)">Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery.</a> Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+targeting+the+inner+retina+rescues+the+retinal+phenotype+in+a+mouse+model+of+CLN3+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+brain-directed+gene+therapy+rescues+a+mouse+model+of+neurodegenerative+CLN6+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease.</a> Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

זריקות תוך-ורידיות הן אחד ההליכים הכירורגיים הנפוצים ביותר ברפואת עיניים אנושית והוכחו כיעילות במתן טיפולים גנטיים בתיווך AAV לרשתית הכבשים. הוכחנו בעבר את היעילות של AAV9. טיפול גנטי CLN5 הניתן באופן תוך-ורידי בהחלשת תפקוד לקוי של הרשתית וניוון בכבשים עם CLN5 NCL15. יש לקוות כי התרגום של מסלול זה של מתן לחולי NCL אנושיים יועיל גם הוא.
הפרוטוקול להזרקות IVT בנפח קטן לעין כבש הוא פשוט יחסית ולא פולשני, ניתן לשחזור בקלות וקל למי שאינו מומחה ללמוד. ההצלחה תלויה בתאי המטרה ...

ניתן להשתמש במספר שיטות כדי להעביר חומרים טיפוליים לרשתית, כולל intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, או ניהול מקומי. כל מסלול של מתן כרוך בהתגברות על מחסומים כגון מחסום הדם-רשתית או הממברנות המגבילות הפנימיות והחיצוניות ויש לו שיעורי יעילות משתנים בהתאם לתרופה המועברת וליעד הרשתיתהספציפי 1,2.
אספקת תרופות IVT כוללת זריקה לתוך ההומור הזגוגי של העין, חומר ג'לטיני התופס את החדר האחורי של העין. תפקידו העיקרי של ההומור הזגוגי הוא לשמור על צורת כדור הארץ של העין ולשמור על רקמות העין, כגון העדשה והרשתית, במקום. ההומור הזגוגי מורכב ברובו ממים, עם כמויות קטנות של קולגן, חומצה היאלורונית וחלבונים אחרים שאינם קולוגניים3. הזרקת IVT היא הליך פשוט ונפוץ המשמש באופן שגרתי לטיפול במגוון רחב של מחלות עיניים, כולל ניוון מקולרי תלוי גיל, בצקת מקולרית סוכרתית, רטינופתיה סוכרתית, חסימת ורידים ברשתית ומספר ניוון רשתיתתורשתי 4,5.
ליפופוסצינוזות עצביות (NCL; מחלת באטן) הן קבוצה של מחלות אחסון ליזוזומליות קטלניות הגורמות לניוון חמור של המוח והרשתית. כיום ידועות 13 גרסאות של NCL הנובעות ממוטציות בגנים שונים (CLN1-8, CLN10-14) המשפיעות בעיקר על ילדים, אך יש להן גילאים משתנים של התפרצות וחומרת המחלה6. ה-NCLs חולקים תסמינים פרוגרסיביים נפוצים, כולל ירידה קוגניטיבית ומוטורית, התקפים ואובדן ראייה. אין תרופה ל-NCL; עם זאת, טיפול בתחליפי אנזימים מוכווני מוח נמצא כיום בניסויים קליניים למחלת CLN27,8, וטיפול גנטי בתיווך AAV הראה הבטחה רבה במחקרים פרה-קליניים, כאשר ניסוי קליני לטיפול גנטי CLN5 צפוי להתחיל בשנת 2022 9,10.
מינים רבים אחרים מפתחים צורות טבעיות של NCL, כולל חתולים, כלבים, כבשים ופרות. שני מודלים של ביצות NCL נמצאים כעת במחקר פעיל בניו זילנד: מודל מחלת CLN5 בכבשי בורדרדייל ומודל מחלת CLN6 בכבשים בדרום המפשייר. כבשים מושפעות מציגות רבים מהמאפיינים הקליניים והפתולוגיים של המחלה האנושית, כולל ניוון רשתית ואובדן ראייה10,11. למרות שטיפול גנטי CLN5 מכוון מוח בכבשים עם מחלת CLN5 יכול למנוע או לעצור ניוון מוחי וירידה קלינית, הכבשים המטופלות עדיין מאבדות את ראייתן9. זה הדגיש את הצורך לטפל ברשתית כדי לשמר את הראייה ולשמור על איכות חיים טובה יותר, מה שהוביל להקמת פרוטוקול לטיפול גנטי בעיניים בכבשים.
עין הכבשה מייצגת מודל טוב של העין האנושית בשל הדמיון שלה בממדי הגלובוס של העין, נפח הזגוגית ומבנה הרשתית10,12,13. מאמר זה מפרט את הפרוטוקול הניתוחי להעברת IVT בנפח קטן (≤100 μL) של וקטור ויראלי טיפולי לעין הביצית.

<table><tbody><tr><td>מזרק בטיחות נמוך 1 מ"ל עם מחט 0.5 אינץ' מחוברת לצמיתות</td><td>פישר סיינטיפיק, אוקלנד, ניו זילנד</td><td>05-561-28</td><td>Covidien Monoject Tuberculin מזרק בטיחות או דומה</td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינור מיקרוצנטריפוגה</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS4323</td><td>צינורות חיטוי לעיקור לפני השימוש</td></tr><tr><td>מכונת הרדמה עם ספסל גז ומוניטור&nbsp;</td><td>Hyvet Anesthesia, קרייסטצ'רץ', ניו זילנד</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טיפות עיניים אנטיביוטיות&nbsp;</td><td>טבע פארמה בע"מ, אוקלנד, ניו זילנד</td><td></td><td>שם מסחרי: Chlorafast (0.5% chloramphenicol)</td></tr><tr><td>BrightMount plus מדיום הרכבה נגד דהייה</td><td>Abcam, קיימברידג', בריטניה</td><td>ab103748</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&prime; ,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride)</td><td>Sigma Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארצות הברית</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>תרופת</td> <td>הרגעה DiazepamIlium, Troy Laboratories Pty Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td></td><td>5 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>צינורות אנדוטרכיאליים</td><td>Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, בריטניה</td><td></td><td>Standard, אזיקים. מידות 7, 7.5 או 8 בהתאם לגודל הכבשה</td></tr><tr><td>ספקולום עיניים</td><td>Capes Medical Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>KP151/14</td><td>Nopa Barraquer-Colibri (10 מ"מ)</td></tr><tr><td>וילון כירורגי מנוסה</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, ניו זילנד</td><td>DI583</td><td>או דומה&nbsp;</td></tr><tr><td>טיפים לסינון</td><td>Interlab, אוקלנד, ניו זילנד</td><td></td><td>10, 200 ו-1,000 &micro; L&nbsp;</td></tr><tr><td>תמיסת פורמלדהיד (37%)</td><td>פישר סיינטיפיק, אוקלנד, ניו זילנד</td><td>AJA809-2.5PL</td><td>הכינו עד 10% במים מזוקקים עם 0.9%</td></tr><tr><td>NaCl עז נגד ארנב Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen Carlsbad, CA, USA</td><td>&nbsp; A-11012</td><td>שימוש בדילול של 1:500</td></tr><tr><td>חומר הרדמה איזופלורן</td><td>Attane, Bayer Animal Health, אוקלנד, ניו זילנד</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קטמין HCl חומר הרדמה/משכך כאבים</td><td>PhoenixPharm Distributors Ltd, אוקלנד, ניו זילנד</td><td></td><td>100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>לרינגוסקופ (וטרינרי)</td><td>KaWe Medical, דנמרק</td><td></td><td>להב Miller C, גודל 2</td></tr><tr><td>מחטים&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>302025</td><td>BD מחטים היפודרמיות, או דומות</td></tr><tr><td>נוגדות דלקת לא סטרואידיות</td><td>Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, אוקלנד, ניו זילנד</td><td>49402/008</td><td>שם מסחרי: Metacam 20 (20 מ"ג/מ"ל מלוקסיקם)</td></tr><tr><td>מלקחיים ללא שיניים</td><td>Capes Medical Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>AB864/16</td><td>או דומה&nbsp;</td></tr><tr><td>המוסטט ללא שיניים</td><td>Capes Medical Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>AA150/12</td><td>או דומה&nbsp;</td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק, קרייסטצ'רץ', ניו זילנד</td><td>16210072</td><td></td></tr><tr><td>חמצן (רפואי)</td> <td>גז BOC, קרייסטצ'רץ', ניו זילנד</td><td></td><td>צילינדר D2, קוד גז 180</td></tr><tr><td>מי מלח חוצץ פוספט&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, קרייסטצ'רץ', ניו זילנד</td><td>10010023</td> תמיסת <td>פובידון-יוד סטרילית ומסוננת</td></tr><tr><td></td><td>Capes Medical Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>005835</td><td>שם מסחרי: Betadine (10% povidone-iodine)</td></tr><tr><td>ארנב חלבון חומצי סיבי גליה (GFAP)</td><td>Dako, Glostrup, דנמרק</td><td>Z0334</td><td>שימוש בדילול של 1:2,500</td></tr><tr><td>סרוטיפ 9 של נגיף הקשור לאדנו, המשלים את עצמו, המכיל את מקדם פעולת בטא של עוף (CBh) ו-CLN5 Vector</td> Core של אוניברסיטת <td>צפון קרוליינה, צפון קרוליינה, ארה"ב.</td><td>scAAV9 / CBh-oCLN5opt</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי 0.9% IV תמיסת</td><td>שכמיות רפואיות בע"מ, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>AHB1322</td><td>שם מסחרי: תמיסת מלח&nbsp;</td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה תת עורית</td><td>Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, וולינגטון, ניו זילנד</td><td></td><td>שם מסחרי: Duplocillin LA (150,000 IU/mL פרוקאין פניצילין ו-115,000 IU/mL בנזאטין פניצילין)</td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים קהים ומעוקלים&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, טאורנגה, ניו זילנד</td><td>SSSHBLC130</td><td></td></tr><tr><td>מזרק Terumo Luer Lock</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, ניו זילנד</td><td>SH159/SH160</td><td>מזרקים סטריליים; 10 מ"ל לעריכת תרופות אינדוקציה, 20 מ"ל לעריכת</td></tr><tr><td>אבקת חיטוי מלח Virkon</td><td>קבוצת EBOS בע"מ, קרייסטצ'רץ', ניו זילנד</td><td>28461115</td><td></td></tr></tbody></table>

זריקות תוך ויטרליות בעין הבקר

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

ישנן מספר שיטות להעברת סוכנים טיפוליים לרשתית, כולל intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, או ניהול מקומי. אספקת תרופות IVT כוללת זריקה לתוך ההומור הזגוגי של העין, חומר ג'לטיני הממלא את החדר האחורי של העין ושומר על צורת כדור הארץ. למרות שמסלול ה- IVT פחות ממוקד באופן ספציפי מאשר לידה תת-קרקעית, הוא הרבה פחות פולשני ונמצא בשימוש נרחב במסגרות קליניות למגוון מחלות עיניים. 
בעבר הדגמנו את היעילות של העברה תוך-גופית של מוצר טיפול גנטי בתיווך נגיף אדנו (AAV) (AAV9). CLN5) בכבשים עם צורה טבעית של CLN5 של ליפופוסינוזיס עצבי (NCL). כבשים מושפעות קיבלו טיפול גנטי IVT בעין אחת, כאשר העין השנייה לא מטופלת משמשת כבקרה פנימית. מבנה ותפקוד הרשתית נשמרו בעין המטופלת עד 15 חודשים לאחר הטיפול, בעוד שהעין הלא מטופלת הפגינה ירידה הדרגתית בתפקוד וניוון חמור במהלך הבדיקה שלאחר המוות. בהתבסס על מחקרי הכבשים, מוצר הטיפול הגנטי CLN5 אושר כתרופה חדשה ניסיונית מועמדת (IND) על ידי מנהל המזון והתרופות של ארצות הברית בספטמבר 2021. מאמר זה מפרט את הפרוטוקול הכירורגי להעברת IVT של וקטור ויראלי טיפולי לעין הביצית.

היעילות של העברת IVT של וקטור טיפול גנטי CLN5 בהחלשת תפקוד לקוי של הרשתית וניוון בכבשים עם CLN5 NCL הוכחה בעבר על ידי קבוצת מחקר זו15. הכבשים המושפעות קיבלו זריקה אחת של 100 μL IVT של CLN5 ארוזה בסרוטיפ AAV 9 (AAV9) וקטור (AAV9). CLN5) לעין אחת, כאשר העין הנגדית משמשת כבקרה פנימית לא מטופלת. הראייה הוערכה מדי חודש מגיל ההזרקה (3 חודשים) ועד למחלה סופנית (18 חודשים). ניתוח לאחר המוות של היסטולוגיה רשתית בוצע על עיניים מטופלות ולא מטופלות, כמו גם על בקרות בריאות תואמות גיל ו- CLN5.
<p class="jov...

זריקות תוך-גופיות בוצעו בעין הכבשה במטרה להעביר טיפול גנטי בתיווך ויראלי לרשתית.

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

זריקות intravitreal ניתן להשתמש כדי לספק סוכנים טיפוליים לרשתית. פרוטוקול להזרקות תוך ויטרליות לעין הכבש, כמודל לעין האנושית, מוצג כאן. זריקות תוך ויטרליות הן הרבה פחות פולשניות מזריקות עיניים אחרות.ניתן להשתמש בהצלחה בזריקות תוך-ורידיות כדי לספק מוצר של טיפול גנטי ולטפל בניוון רשתית בכבשים עם ליפופוסינוזות עצביות נוירואידיות טבעיות. לאחר הרדמת הכבשים, התחל לחטא את העין באופן אספטי כדי להזריק אותה על ידי השקיה עם 1 עד 5% povidone יוד פתרון באמצעות מזרק 20 מיליליטר. לאחר מכן, מקם וילון כירורגי סטרילי, fenestrated מעל העין.התאימו ספקולום עין לעפעפיים כדי להחזיק את העין פתוחה. לתפוס את הלחמית bulbar על ההיבט הצדדי הגבי של העין עם מלקחיים ולסובב את כדור העין ventromedially. יש להחדיר את המחט כשבעה מילימטרים לאחור לסקלרה בצד הצדדי של העין, וזוויתית אחורית כדי להימנע מהעדשה.לנהל את הזריקה היחידה של 100 microliters כמו בולוס, קרוב ככל האפשר הרשתית, מבלי להפריע למשטח הרשתית. יש לשטוף את העין בכ-10 עד 15 מיליליטר של תמיסת יוד של 1% עד 5% פובידון ואחריה 10 מיליליטר של מי מלח, לפני הסרת הספקולום והווילונות. ניתוח אלקטרורטינוגרפיה הדגים תפקוד רשתית משומר בעין המטופלת, בעוד שהעין הלא מטופלת ירדה באופן דומה לבעלי חיים שנפגעו מ-CLN5.היסטולוגיה של הרשתית הייתה קרובה לנורמליזציה בעין המטופלת עם עובי רשתית כולל הדומה לחיות בקרה בריאות ברשתית המרכזית. לעומת זאת, עובי הרשתית שלא טופלה היה דומה לבעלי חיים שנפגעו מ-CLN5. הביטוי של החלבון החומצי של גליה, או GFAP, סמן של לחץ ברשתית ואסטרוגליה, היה נמוך יותר בעיניים שטופלו מאשר בעיניים שלא טופלו, מה שמעיד על כך שדלקת הקשורה למחלה הוחלשה לאחר הטיפול.עם קביעת פרוטוקול להזרקות תוך-ורידיות לעין הכבש, ניתן כעת להשתמש בכבשים כדי לבחון את הבטיחות והיעילות של חומרים טיפוליים רבים המועברים תוך ורטיטרי.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הזרקת Intravitreous היא טכניקה בשימוש נרחב במחקר מדעי חזותיים מחלות עיניים או כיישום ישירה של טיפול מקומי. סרט הווידאו הזה הוכיח פרוטוקול להזרקה intravitreous שימוש במזרק 1ml עם כוס פיפטה. טיפים שימושיים לגבי מניעת דימום מסיבי נזק העדשה מקבלים.

הזרקת Intravitreous להקמת Ocular דגם מחלות

מקור: Park, S. W., et al. גישה לימבלית - הזרקה תת-רשתית של וקטורים נגיפיים לטיפול גנטי באפיתל פיגמנט רשתית של עכברים. J. Vis. Exp. (2015)הסרטון מתאר את השיטה להזרקה תת-רשתית של וקטורים נגיפיים לאפיתל פיגמנט הרשתית (RPE) במודל עכבר. הוא מפרט את ההליך מהרדמה והכנת עיניים ועד לאספקה מדויקת של וקטור לנטי-ויראלי, מה שמבטיח אינטגרציה וביטוי גנים ב-RPE.

הזרקה תת-רשתית של וקטורים נגיפיים לאפיתל פיגמנט הרשתית במודל עכבר

ארנבים נמצאים בשימוש נרחב לחקר הפרמקוקינטיקה של תרופות תוך עיניות. אנו מתארים שיטה לביצוע מחקרים פרמקוקינטיים של תרופות תוך עיניות באמצעות עיני ארנב.

שימוש עיני ארנב ב פרמקוקינטיקה מחקרים של סמי תוך עיניים

כאן אנחנו מדגימים גישה מוזרה לשימוש טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי ברזולוציה גבוהה (HR-SD-אוקטובר) כדי לסייע משלוח של סוכנים טיפול גנטי לחלל subretinal להעריך את פעולתה אמיתיות, לאפיין את קולט אור חיוניות.

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית יכול לשמש כטיפול חלופי תא עבור הטופס מתקדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש. פרוטוקול זה מתאר את הדור של מודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית והשתלות את subretinal של תאי אפיתל כנגד האדם מתחלקים נגזר תאי הפיגמנט ברשתית לתוך מודל זה של המחלה.

השתלת subretinal של תאי גזע עובריים אנושיים לתאי האפיתל של פיגמנט הרשתית נגזר למודל גדול-עיניים של אטרופיה גיאוגרפית

אנו מתארים כאן שיטה של הזרקה תוך-ואטראלית וכמות חיידקית עוקבת במודל העכבר של אנדופתלמיטיס חיידקי. ניתן להאריך פרוטוקול זה למדידת תגובות חיסוניות מארחות וביטוי גנים חיידקי ומארח.

הזרקה תוך-ואטראלית וכמות של פרמטרי זיהום במודל עכבר של אנדופתלמיטיס חיידקי

בכתב יד זה, הזרקה תת-קרקעית מודגמת כשיטת העברה וקטורית תקפה לרקמות עיניים בעכברים באמצעות מערכת הזרקה המורכבת ממשאבת מזרק אינפוזיה/נסיגה ומזרק נשלף גז בשילוב עם מחטי מיקרו-הזרקה. מערכת הזרקה זו ניתנת להתאמה גם לנתיבי ניהול תוך עיניים אחרים.

מתן תת-לחמית של וקטורים של וירוסים הקשורים לאדנו במודלים של בעלי חיים קטנים

פרוטוקול זה מתאר טכניקה להזרקה תוך-מצלמה בחולדות באמצעות חתך מרכזי בקרנית ומנהרה ארוכה לתוך החדר הקדמי. שיטת הזרקה זו ממזערת את הסיכון לגרימת נזק לא מכוון לרקמות ובכך משפרת את הדיוק והשחזור.

הזרקה תוך-מצלמה בחולדות עם סיכון נמוך לתופעות לוואי

פרוטוקול זה מתאר טכניקה ייחודית המשתמשת בגישה טרנס-לחמית לגישה לעצב הראייה של החולדה לצורך זריקות.

גישה טרנס-לחמית להזרקה לעצב הראייה של החולדה

מחקר זה מציג מתודולוגיה להעברת טיפולים לרשתית ולעצבי הראייה של החולדה הבוגרת. בנוסף, מוצגת שיטה ייחודית לאחזור רקמות לאיסוף מלמעלה למטה של עצב הראייה והרשתית בחולדה בוגרת.

מתן טיפולי בעיניים ושליפת רקמות מתקדמת בחולדות בוגרות

למדו פרוטוקול זריקות תוך ויטרליות בעין הכבש כמודל לעין האנושית. שיטה זו מספקת אמצעי פחות פולשני להעברת טיפול גני לרשתית וטיפול בניוון רטינלי.

זריקות תוך ויטרליות בעין הבקר

גלה סרטונים נוספים