Name: טכניקות מולקולריות ואימונולוגיות במודל עכבר מהונדס גנטית של גידול סטרומלי במערכת העיכול (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: למד טכניקות ניתוח ועיבוד דגימות בעכבר Kit V558Δ/+ לחקר גידול סטרומלי במערכת העיכול. פרוטוקול זה מאפשר בדיקת אימונותרפיות ומחקר תרגומי ב-GIST.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עכברי קיטV558Δ/+ הונדסו גנטית ושותפו על ידי ד"ר פיטר בסמר10. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH R01 CA102613 ו- T32 CA251063.

כל העכברים שוכנו בתנאים נטולי פתוגנים באוניברסיטת פנסילבניה על פי הנחיות NIH ובאישור אוניברסיטת פנסילבניה IACUC. המתת חסד בוצעה בעקבות נהלי ההפעלה הסטנדרטיים של משאבי בעלי חיים במעבדה של אוניברסיטת פנסילבניה.
1. ערכהV558Δ/+ גידול עכברים
<ol><li>החזירו את עכברי ה-KitV558Δ/+ יותר מ-10 פעמים לרקע C57BL/6J באמצעות עכברי C57BL/6J. לשם כך, מגדלים את זכר עכברי KitV558Δ/+ עם נקבת עכברי C57BL/6J ביחס של 1:2. הערה: הגנוטיפ של הערכה ההומוזיגוטיתV558Δ/V558Δ היא קטלנית ברחם. ניתן לגדל נקבות קיטV558Δ/+ עכברים עם עכברי C57BL/6J זכרים, אך גודל הפסולת הוא כמחצית מזה שנראה מנקבת עכברי C57BL/6J. יתר על כן, נקבות עכברי KitV558Δ/+ מייצרות המלטות מוגבלות לאחר גיל 4 חודשים.</li>
	<li>גנוטיפ הגורים בגיל 7-14 ימים על ידי חיתוך הבוהן כדי לאשר את נוכחותו של הגנוטיפ של Kit V558Δ/+ . השתמש בפריימר הקדמי: TCTCCTCCAGAAACCCATGTATGAA; כתב 1: CCTCGACAACCTTCCA; פריימר הפוך: TTGCGTCGGGTCTATGTAAACAT; וכתב 2: TCTCCTCGACCTTCCA לגנוטיפ.</li>
</ol>2. ערכהV558Δ/+ טיפול בעכבר
<ol><li>הגיל והמין תואמים את הערכהV558Δ/+עכברים לפני הטיפול. השתמש בעכברים תואמי גיל ומין בקבוצות, שכן גידולים מנקבת עכברי KitV558Δ/+ גדולים יותר מאלה שבעכברים זכרים. טפלו בעכברים בגיל 8-12 שבועות, ואז נוצרים גידולים (איור 1).</li>
	<li>תן מעכבי טירוזין קינאז בעל פה או על ידי הזרקה תוך-צפקית (i.p.); KitV558Δ/+ גידולים רגישים למעכבי טירוזין קינאז. ספקו אימטיניב במינון של 600 מ"ג/ל' במי שתייה או זריקות i.p. של 45 מ"ג/ק"ג פעמיים ביום. מדוד את הירידה במשקל הגידול באמצעות קשקשים דיגיטליים לאחר כריתת הגידול כפי שמוצג בשלב 3, שהם כ-50% בשבוע אחד ו-80% לאחר 4 שבועות לאחר הטיפול באימטיניב (איור 2).</li>
</ol>3. ערכהV558Δ/+ קצירת איברי עכבר
<ol><li>המתת עכברים על ידי נרקוזה CO2 בקצב זרימה של 60% נפח תא לדקה. השאירו את העכברים בחדר לפחות 2 דקות לאחר הפסקת הנשימה, ואז בצעו נקע צוואר הרחם כדי לאשר את המוות.</li>
	<li>לעקר את כל המכשירים, ללבוש כפפות לאורך כל ההליך, ולשמור על שדה סטרילי. הכן את העור עם 70% אתנול. בצע חתך אנכי בקו האמצע של 2 ס"מ באמצעות מספריים והיכנס לחלל הבטן. בחדות למדוד כל הידבקויות תוך-בטניות.</li>
	<li>כדי להסיר את בלוטת הלימפה המזנטרית המתנקזת, בצע את השלבים המתוארים להלן.<ol>
<li>זהה את ה-cecum והרים את המזנטריה שלו בצורה מעולה. בערך באמצע הדרך לבסיס המזנטריה המעי הגסית, זהה את בלוטת הלימפה המזנטרית ונתח אותה בחדות. בלוטת הלימפה היא אוף-ווייט וגודלה כ-0.5 ס"מ על 0.5 ס"מ.</li>
		<li>מחלקים את רקמת בלוטות הלימפה לשלישים לבידוד חלבונים, היסטולוגיה ותרחיף של תאים בודדים, לפי הצורך. עבור תרחיפים של תאים בודדים, יש להניח את רקמת בלוטת הלימפה ב-20 מ"ל של מדיה נטולת סרום (RPMI) ולשמור על קרח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לבידוד של ה-GIST וה-cecum, בצע את השלבים המתוארים להלן.<ol>
<li>הצקום בעכברי KitV558Δ/+ מוחלף ברובו על ידי GIST. בזהירות לחלק את הצומת האילאוקולי מבסיס הגידול. כדי לאסוף את cecum, לחלק את המעי הגס שוב, 2 ס"מ פרוקסימלי לבסיס הגידול.</li>
		<li>ב-50%-60% מעכברי KitV558Δ/+ של Kit V558Δ/+ , ראש הגידול מכיל מכסה של רקמת צ'ק, שבדרך כלל מכילה נוזל סרוסי, אך לעתים רחוקות עשויה להכיל מוגלה (איור 3). לנתח בחדות את רקמת הכובע הרחק מרקמת הגידול.</li>
		<li>מחלקים את רקמת הגידול ו/או את ה-cecum לשלישים לצורך בידוד חלבונים, היסטולוגיה ותרחיף של תאים בודדים, לפי הצורך. עבור תרחיפים של תאים בודדים, יש למקם רקמת גידול או cecum ב-HBSS עם 2% FCS, מספיק כדי לכסות את הדגימה ולשמור על קרח.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ניתוח כתם מערבי של רקמת GIST
<ol><li>הכינו מאגר ליזה של רקמות המכיל 50 mM TrisHCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% חומר ניקוי שאינו מתכלה, 2 mM Na3VO4, 1 mM PMSF, 10 mM NaF ותערובת מעכבי פרוטאינאז של 20 μl/ml.</li>
	<li>הכינו תמיסת מלח משולשת אחת עם 1x Tween 20 (TBST) על ידי שילוב של 1800 מ"ל של מים שעברו דה-יוניזציה, 2 מ"ל של Tween 20 ו-200 מ"ל של 10x מי מלח עם חיץ Tris (TBS).</li>
	<li>יש לבצע החייאה של רקמה משלב 3.4.3 בצינור FACS ב-5 מ"ל/גרם של חיץ ליזיס רקמתי ולהומוגניזציה פעמיים עם הומוגנייזר מכני ב-15,000 סל"ד במשך 15 שניות על קרח. דגירה ליזאטה במשך 30 דקות על קרח.</li>
	<li>מעבירים את הליזאט לצינור מיקרוצנטריפוג' בגודל 1.5 מ"ל. צנטריפוגה במהירות מקסימלית למשך 20 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. מעבירים את ה-supernatant לתוך צינור מיקרו-צנטריפוג' חדש.</li>
	<li>הפעילו ליאסטים על ג'ל שיפוע של 4% עד 15%, ואז העבירו לקרום ניטרוצלולוז, כמתוארב-14.</li>
	<li>יש לשטוף את הממברנה פעם אחת ב-1x TBS למשך 5 דקות ולאחר מכן לחסום את הממברנה בחלב 5% למשך שעה אחת. שוב, לשטוף קרום פעם אחת 1x TBS במשך 10 דקות.</li>
	<li>ממברנת הדגירה בנוגדן ראשוני מדולל 1:1000 ב-5% BSA ב-4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה. יש לשטוף את הממברנה 3x ב-1x TBST למשך 10 דקות כל אחת. כתם דגירה עם נוגדן משני מדולל 1:2500 בחלב 2.5% למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>יש לשטוף את הממברנה פעם אחת ב-1x TBS למשך 5 דקות. הוסף מספיק מצע HRP כדי לכסות את הממברנה, בדרך כלל 200-500 μL, והשתמש בתמונה דיגיטלית כדי לזהות ולכמת chemiluminescence.</li>
</ol>5. אימונוהיסטוכימיה של רקמת GIST
<ol><li>תקן רקמה משלב 3.3.2 או 3.4.3 ב 4% paraformaldehyde ב 4 ° C לילה. אחסן רקמות ב-70% EtOH עד שיהיה מוכן לעיבוד. הטמעה וחתך בלוקים בעובי של 5 מיקרומטר על גבי מגלשות זכוכית, כמתואר15,16.</li>
	<li>זיהוי אימונוהיסטוכימי מלא באמצעות ערכת אימונודציה בסיסית, כפי שתואר קודם לכן17.</li>
</ol>6. השעיה חד-תאית של בלוטת המזנטרית
<ol><li>יוצקים מדיית RPMI עם דגימת בלוטות לימפה משלב 3.3.2 מעל מסנן של 100 מיקרומטר. העבר את המסנן לבלוטות לימפה חרוטיות ומחתיות חדשות של 50 מ"ל עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק 3 מ"ל. מסנן שטיפה עם 20 מ"ל של מדיית RPMI.</li>
	<li>צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g ב 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט.</li>
	<li>גלולת Resuspend ב-20 מ"ל של 1% FBS ב-PBS (מאגר חרוזים) ושופכת מעל מסנן של 40 מיקרומטר. לאסוף את תפיח התא. לספור תאים באמצעות המוציטומטר.</li>
	<li>צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g ב 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט. Resuspend במאגר חרוזים ב 6 x 107 תאים / מ"ל עבור ציטומטריה זרימה.</li>
</ol>7. השעיה של תא יחיד של GIST
<ol><li>הכינו את מאגר הקולג'אנאז על ידי הוספת 250 מ"ג של קולגן IV, טבליה אחת של מעכב פרוטאז ללא EDTA ו-100 μL של DNase I ל-50 מ"ל של HBSS. יש לסובב במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר עד להמסה.</li>
	<li>מניחים את GIST במנה סטרילית ומוסיפים 2.5 מ"ל של מאגר קולגןאז. גידול טחון באמצעות אזמל סטרילי ומספריים עד שהגידול נמצא בשברים עדינים. השתמשו בפיפטה בור גדולה כדי לשאוף את הגידול ואת הקולגן לתוך צינור 50 מ"ל.</li>
	<li>דגירה באינקובטור רועד ב-100 סל"ד ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. תגובת מרווה עם 2 מ"ל של FBS.</li>
	<li>יוצקים קולגן עם דגימת GIST על מסנן של 100 מיקרומטר וגידול מחית עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק 3 מ"ל ואסוף בצינור 50 מ"ל. לשטוף מסנן עם 20 מ"ל של HBSS. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g, 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט.</li>
	<li>בצעו החייאה של הכדור ב-20 מ"ל של מאגר חרוזים ושפכו מעל מסנן של 40 מיקרומטר. לאסוף את התסיסים ולספור את התאים באמצעות המוציטומטר. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g, 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט. Resuspend במאגר חרוזים ב 6 x 107 תאים / מ"ל עבור ציטומטריה זרימה.</li>
</ol>8. השעיה של תא יחיד של cecum
<ol><li>הכינו מאגר קולגן כמו בשלב 7.1. באמצעות מספריים, לפצל את cecum אורכית כדי לחשוף את הרירית הפנימית. חותכים למקטעים של 0.5 ס"מ ומניחים בצינור 50 מ"ל עם 5 מ"ל של HBSS עם 2% FBS. יש לנער במרץ במשך 30 שניות, לצנטריפוגה ב-450 x גרם במשך 20 שניות, ואז לשאוף לסופרנאטנט.</li>
	<li>הוסף 5 מ"ל של HBSS עם 2 mM EDTA. דגירה באינקובטור רועד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ב-100 סל"ד למשך 15 דקות. צנטריפוגה ב 450 x g עבור 20 s. לשאוף את הסופרנאטנט.</li>
	<li>הוסף 5 מ"ל של HBSS. יש לנער במרץ במשך 30 שניות, לצנטריפוגה ב-450 x גרם במשך 20 שניות, ואז לשאוף לסופרנאטנט. חזור על הפעולה פעם נוספת.</li>
	<li>הוסיפו 5 מ"ל של מאגר קולגןאז. דגירה באינקובטור רועד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות ב-100 סל"ד. לנער במרץ כל 10 דקות. תגובת מרווה עם 2 מ"ל של FBS.</li>
	<li>יוצקים קולגן עם דגימת cecum על מסנן של 100 מיקרומטר ומחית עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק 3 מ"ל. לשטוף מסנן עם 20 מ"ל של HBSS. לאסוף תבעיר.</li>
	<li>צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g במשך 5 דקות ב 4 ° C. לשאוף את הסופרנאטנט. גלולת Resuspend ב 20 מ"ל של מאגר חרוזים לשפוך מעל מסנן 40 מיקרומטר. לאסוף תסיסים ולספור תאים באמצעות המוציטומטר.</li>
	<li>צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g במשך 5 דקות ב 4 ° C. לשאוף את הסופרנאטנט. Resuspend במאגר חרוזים ב 6 x 107 תאים / מ"ל עבור ציטומטריה זרימה.</li>
</ol>

<ol><li>Mastrangelo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+soft+tissue+sarcoma+and+beyond%3A+a+population-based+prospective+study+in+3+European+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Incidence of soft tissue sarcoma and beyond: a population-based prospective study in 3 European regions.</a> Cancer. 118 (21), 5339-5348 (2012).</li>
<li>Joensuu, H., DeMatteo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+management+of+gastrointestinal+stromal+tumors%3A+a+model+for+targeted+and+multidisciplinary+therapy+of+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The management of gastrointestinal stromal tumors: a model for targeted and multidisciplinary therapy of malignancy.</a> Annual Review of Medicine. 63, 247-258 (2012).</li>
<li>Blanke, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+results+from+a+randomized+phase+II+trial+of+standard-+versus+higher-dose+imatinib+mesylate+for+patients+with+unresectable+or+metastatic+gastrointestinal+stromal+tumors+expressing+KIT%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long-term results from a randomized phase II trial of standard- versus higher-dose imatinib mesylate for patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing KIT.</a> Journal of Clinical Oncology. 26 (4), 620-625 (2008).</li>
<li>Demetri, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+regorafenib+for+advanced+gastrointestinal+stromal+tumours+after+failure+of+imatinib+and+sunitinib+%28GRID%29%3A+an+international%2C+multicentre%2C+randomised%2C+placebo-controlled%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID): an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial.</a> Lancet. 381 (9863), 295-302 (2013).</li>
<li>Gold, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+metastatic+GIST+in+the+era+before+tyrosine+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Outcome of metastatic GIST in the era before tyrosine kinase inhibitors.</a> Annals of Surgical Oncology. 14 (1), 134-142 (2007).</li>
<li>Huynh, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorafenib+induces+growth+suppression+in+mouse+models+of+gastrointestinal+stromal+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Sorafenib induces growth suppression in mouse models of gastrointestinal stromal tumor.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 8 (1), 152-159 (2009).</li>
<li>Na, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+patient-derived+xenografts+from+patients+with+gastrointestinal+stromal+tumors%3A+analysis+of+clinicopathological+characteristics+related+to+engraftment+success%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7996(2020).</li>
<li>Balachandran, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imatinib+potentiates+antitumor+T+cell+responses+in+gastrointestinal+stromal+tumor+through+the+inhibition+of+Ido%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido.</a> Nature Medicine. 17 (9), 1094-1100 (2011).</li>
<li>Vitiello, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+immune+profiles+distinguish+the+mutational+subtypes+of+gastrointestinal+stromal+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Differential immune profiles distinguish the mutational subtypes of gastrointestinal stromal tumor.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (5), 1863-1877 (2019).</li>
<li>Sommer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+stromal+tumors+in+a+mouse+model+by+targeted+mutation+of+the+Kit+receptor+tyrosine+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (11), 6706-6711 (2003).</li>
<li>Cavnar, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIT+oncogene+inhibition+drives+intratumoral+macrophage+M2+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">KIT oncogene inhibition drives intratumoral macrophage M2 polarization.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2873-2886 (2013).</li>
<li>Medina, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+kinase+inhibition+limits+Batf3-dependent+dendritic+cell+development+and+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oncogenic kinase inhibition limits Batf3-dependent dendritic cell development and antitumor immunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 216 (6), 1359-1376 (2019).</li>
<li>Zhang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+and+CD8%28%2B%29+T+cells+mediate+the+antitumor+efficacy+of+combined+CD40+ligation+and+imatinib+therapy+in+gastrointestinal+stromal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Macrophages and CD8(+) T cells mediate the antitumor efficacy of combined CD40 ligation and imatinib therapy in gastrointestinal stromal tumors.</a> Cancer Immunology Research. 6 (4), 434-447 (2018).</li>
<li>General Protocol for Western Blotting. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf">https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf</a> (2022).</li>
<li>Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSadeghipour%2C+A+%22Biobanking%3A+Methods+and+Protocols%22">Biobanking: Methods and Protocols</a>. , Springer. New York. 253-268 (2019).</li>
<li>Sy, J., Ang, L. -C. Microtomy: Cutting formalin-fixed, paraffin-embedded sections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSy%2C+J+%22Biobanking%3A+Methods+and+Protocols%22">Biobanking: Methods and Protocols</a>. , Springer. New York. 269-278 (2019).</li>
<li>Seifert, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1%2FPD-L1+blockade+enhances+T-cell+activity+and+antitumor+efficacy+of+imatinib+in+gastrointestinal+stromal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">PD-1/PD-L1 blockade enhances T-cell activity and antitumor efficacy of imatinib in gastrointestinal stromal tumors.</a> Clinical Cancer Research. 23 (2), 454-465 (2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+KIT+modulates+Type+I+IFN-mediated+antitumor+immunity+in+GIST%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Oncogenic KIT modulates Type I IFN-mediated antitumor immunity in GIST.</a> Cancer Immunology Research. 9 (5), 542-553 (2021).</li>
<li>Rossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+Kit+signaling+and+therapeutic+intervention+in+a+mouse+model+of+gastrointestinal+stromal+tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Oncogenic Kit signaling and therapeutic intervention in a mouse model of gastrointestinal stromal tumor.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (34), 12843-12848 (2006).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

מודל העכבר Kit V558Δ/+ הוא כלי מחקר רב עוצמה בניתוח מולקולרי ואימונולוגי של GIST. למרות שאסטרטגיית הרבייה דורשת צלב יחיד, שימוש בקבוצת עכברים Kit V558Δ/+ בניסויים המנתחים את תגובת הגידול דורש רבייה נרחבת. עכברים צריכים להיות מותאמי גיל ומין כדי להבטיח משקל גידול דומה, ו -10% מהעכברים מתים לפני גיל 8 שבועות כאשר הגידולים נוצרים. אסטרטגיות רבייה פחות נרחבות אפשריות אם משתמשים בטכניקות הדמיה מתקדמות כגון CT או MRI כדי לעקוב אחר נפח הגידול בתוך עכברים בודדים. אף על פי כן, עכברי Kit...

GIST היא הסרקומה הנפוצה ביותר בבני אדם עם שכיחות של כ -6,000 מקרים בארצות הברית של אמריקה1. נראה כי מקורו של GIST בתאי קוצב הלב במערכת העיכול הנקראים תאי הביניים של קאג'אל, והוא מונע בדרך כלל על ידי מוטציה בודדת בטירוזין קינאז KIT או PDGFRA2. ניתוח הוא עמוד התווך של הטיפול ב- GIST ויכול להיות מרפא, אך חולים עם מחלה מתקדמת עשויים להיות מטופלים עם מעכב טירוזין קינאז (TKI), imatinib. מאז הצגתו לפני למעלה מ-20 שנה, אימטיניב שינתה את פרדיגמת הטיפול ב-GIST, ושיפרה את ההישרדות במחלות מתקדמות מ-1 ליותר מ-5 שנים 3,4,5. למרבה הצער, imatinib הוא רק לעתים רחוקות מרפא בשל מוטציות KIT נרכש, ולכן יש צורך בטיפולים חדשים עבור גידול זה.
מודלים של עכברים הם כלי מחקרי חשוב בחקר טיפולים חדשניים בסרטן. מספר מודלים תת עוריים של קסנוגרפט וקסנוגרפט שמקורם בחולה פותחו ונחקרו ב-GIST 6,7. עם זאת, עכברים אימונו-יעילים אינם מייצגים באופן מלא את ה-GIST האנושי מכיוון ש-GISTs הם בעלי פרופיל חיסוני דיפרנציאלי בהתאם למוטציה האונקוגנית שלהם, ושינוי המיקרו-סביבה של הגידול במערכת העיכול משפר את ההשפעות של טיפול TKI 8,9. לעכבר KitV558Δ/+ יש מחיקה של חיידק הטרוזיגוטי ב-Kit exon 11, המקודדת את תחום ה-juxtamembrane, האתר בעל המוטציה הנפוצה ביותר ב-GIST10 האנושי. עכברי KitV558Δ/+ מפתחים GIST סקאל יחיד עם 100% חדירה, ולגידולים יש היסטולוגיה דומה, איתות מולקולרי, חדירה חיסונית ותגובה לטיפול כמו GIST 8,11,12,13 אנושי. כאן, אנו מתארים רבייה, טיפול ובידוד ועיבוד דגימות בעכברי KitV558Δ/+ לשימוש במחקר מולקולרי ואימונולוגי ב- GIST.

<table><tbody><tr><td>מסנן 100 מיקרון</td><td>EMSCO</td><td>1194-2360</td><td></td></tr><tr><td>1x מאגר ליזה RBC</td><td>Life Technologies</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 3 מ"ל</td><td>Thermo Fisher Scientific/BD Biosciences</td><td>14823435</td><td></td></tr><tr><td>4&ndash; 15% ג'ל חלבון טרומי Mini-PROTEAN TGX, 10 בארות, 30 ומיקרו; l</td><td>Bio-Rad</td><td>4561083</td><td></td></tr><tr><td>4% תמיסת פרפורמלדהיד</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>AAJ19943K2</td><td></td></tr><tr><td>מסנן 40 מיקרון</td><td>EMSCO</td><td>1194-2340</td><td></td></tr><tr><td>5M NaCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6546</td><td></td></tr><tr><td>מסנן 70 מיקרון</td><td>EMSCO</td><td>1194-2350</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן AKT (C67E7)</td> <td>איתות תאים</td><td>4691</td><td></td></tr><tr><td>עכברי C57BL / 6J</td> מעבדת <td></td><td></td><td>ג'קסון</td></tr><tr><td>קולגנאז IV</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>מעכב פרוטאז מיני EDTA ללא EDTA שלם</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>C852A34</td><td></td></tr><tr><td>הרוזנת II מונה תאים אוטומטי</td><td>תרמו פישר</td> אזמל חד פעמי מדעי <td></td><td></td></tr><tr><td>תרמו</td><td>פישר מדעי / אקסל אינטרנשיונל</td><td>14-840-00</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>C756V81</td><td></td></tr><tr><td>Dog1 נוגדן</td><td>abcam</td><td>ab64085</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>ERK נוגדן (p44/42)</td> <td>איתות סלולרי</td><td>9102</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>C788U23</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת FIJI</td><td>פיג'י</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji</td></tr><tr><td>פישרברנד 850 הומוגנייזר</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>15-340-169</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td> מרכז <td></td><td></td><td>התאים של אוניברסיטת פנסילבניה</td></tr><tr><td>Imatinib mesylate</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S1026</td><td></td></tr><tr><td>KIT נוגדן (D13A2)</td> <td>איתות תאים</td><td>3074</td><td></td></tr><tr><td>KitV558&Delta;/+ גנוטיפ</td><td>טרנסנטיקס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה (1.5 מ"ל)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>ערכת זיהוי חיסוני של עכבר על עכבר,</td><td>מעבדות וקטור</td> בסיסיות <td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>קרום ניטרוצלולוזה, חתוך מראש, 0.45 ומיקרו; m</td><td>Rio-Rad</td><td>1620145</td><td></td></tr><tr><td>חלב יבש ללא שומן</td><td>תרמו פישר Scientific</td><td>NC9121673</td><td></td></tr><tr><td>Nonidet P 40 תחליף</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>74385</td><td></td></tr><tr><td>p-AKT נוגדן (S473)</td><td>איתות תאים</td><td>4060</td><td></td></tr><tr><td>p-ERK נוגדן (p44/42)</td><td>איתות תאים</td><td>9101</td><td></td></tr><tr><td>p-KIT נוגדן (Y719)</td><td>איתות תאים</td><td>3391</td><td></td></tr><tr><td>מעכב פרוטאז PMSF</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36978</td><td></td></tr><tr><td>Proeinase K</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP170050</td><td></td></tr><tr><td>צינורות בדיקת פוליסטירן תחתון עגול (FACS)</td><td>בז / תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>14-959-2A</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>מרכז</td><td></td><td></td>התאים של אוניברסיטת פנסילבניה</tr><tr><td>נתרן פלואוריד (NaF)</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td></td><td></td>201154</tr><tr><td>נתרן אורתוונדאט (Na3VO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6508</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Dura מצע משך מורחב</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>34076</td><td></td></tr><tr><td>TBS buffer (10x)</td>צלחת תרבית רקמות <td>של מרכז</td><td></td><td></td>התאים של אוניברסיטת פנסילבניה</tr><tr><td>(100 מ"מ)</td><td>Thermo Fisher Scientific/Falcon</td><td>08-772E</td><td></td></tr><tr><td>TrisHCL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP1757500</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Rio-Rad</td><td>1706531</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; פלטפורמת vivaCT 80</td><td>Scanco Medical</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקות מולקולריות ואימונולוגיות במודל עכבר מהונדס גנטית של גידול סטרומלי במערכת העיכול

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

גידול סטרומלי במערכת העיכול (GIST) הוא הסרקומה האנושית הנפוצה ביותר והוא מונע בדרך כלל על ידי מוטציה אחת בקולטן KIT. על פני סוגי גידולים, פותחו מודלים רבים של עכברים על מנת לחקור את הדור הבא של הטיפולים בסרטן. עם זאת, ב- GIST, רוב מחקרי in vivo משתמשים במודלים של עכברי קסנוגרפט שיש להם מגבלות מובנות. כאן, אנו מתארים מודל עכברי בעל יכולת חיסונית, מהונדס גנטית, של גידול סטרומלי במערכת העיכול עם מוטציה של KitV558Δ/+ . במודל זה, KIT המוטנטי, האונקוגן האחראי על רוב ה-GISTs, מונע על ידי המקדם האנדוגני שלו המוביל ל-GIST המחקה את המראה ההיסטולוגי ואת החדירה החיסונית שנראית ב-GISTs אנושיים. יתר על כן, מודל זה שימש בהצלחה כדי לחקור הן טיפולים מולקולריים ממוקדים והן טיפולים חיסוניים. כאן, אנו מתארים את הרבייה והתחזוקה של מושבת עכברים Kit V558Δ/+ . בנוסף, מאמר זה מפרט את הטיפול והרכש של GIST, ניקוז בלוטות לימפה מזנטרית, וצקום צמוד בעכברי KitV558Δ/+ , כמו גם הכנה לדוגמה לניתוחים מולקולריים ואימונולוגיים.

מודל העכבר Kit V558Δ/+ מאפשר לחקור טיפולים במודל עכברים אימונו-תחרותי. לערכהV558Δ/+ לעכברים יש תוחלת חיים ממוצעת של 8 חודשים עקב חסימת מעיים מתקדמת (איור 4). גידולים מ-KitV558Δ/+ עכברים מבטאים סמנים קנוניים של GIST כולל הטירוזין קינאז KIT ותעלת הטרנס-ממברנה DOG1 (איור 5), כמו גם גורם השעתוק ETV1 (לא מוצג). ניתן לחקור גידולים לשינויים במ...

מטרת כתב יד זה היא לתאר את מודל העכבר Kit V558Δ/+ ואת הטכניקות לניתוח ועיבוד מוצלחים של דגימות עכברים.

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

הפרוטוקול שלנו מתאר את הרבייה, התחזוקה, הניתוח ועיבוד הדגימה של מודל העכברים החיסוני היחיד, GIST, הנמצא כיום בשימוש. אנו מקווים שחוקרים עתידיים יוכלו להשתמש במודל העכברים הזה כדי להמשיך את המחקר התרגומי ב-GIST. טיפולים מסורתיים ב- GIST כוללים טיפול מולקולרי ממוקד עם מעכבי טירוזין קינאז.מודל זה מאפשר לחוקרים לבחון אימונותרפיות ב-GIST. כדי להתחיל, לעקר את כל המכשירים, ללבוש כפפות לאורך כל ההליך, ולשמור על שדה סטרילי. הכן את אזור החתך עם 70% אתנול.באמצעות מספריים, לעשות חתך אנכי בקו האמצע של שני סנטימטרים ולהיכנס לחלל הבטן. בחדות למדוד כל הידבקויות תוך-בטניות. כדי להסיר את בלוטת הלימפה המזנטרית המתנקזת, זהה את הצקום והרם את המזנטריה שלו בצורה מעולה.בערך באמצע הדרך לבסיס המזנטריה המעי הגסית, זהה את בלוטת הלימפה המזנטרית ונתח אותה בחדות. לפי הצורך, חלקו את רקמת בלוטות הלימפה לשלישים לבידוד חלבונים, היסטולוגיה ותרחיף של תאים בודדים. מניחים רקמת בלוטות לימפה ב-20 מיליליטרים של מדיום RPMI לתרחיפים חד-תאיים ושומרים על קרח.הצקום מוחלף ברובו על ידי GIST בעכברי Kit558. לבידוד של GIST ו cecum, בזהירות לחלק את הצומת האילאוקולי מבסיס הגידול. לאחר מכן, מחלקים שוב את הצקום, שני סנטימטרים דיסטליים לבסיס הגידול.ב-50% עד 60% מהעכברים Kit558, ראש הגידול מכיל מכסה של רקמת צ'ק, שבדרך כלל מכילה נוזל סרוסי, אך לעיתים רחוקות עשויה להכיל מוגלה. לנתח בחדות את רקמת הכובע הרחק מרקמת הגידול. מחלקים את רקמת הגידול ואת ה-cecum לשלישים לצורך בידוד חלבונים, היסטולוגיה ותרחיף של תאים בודדים.עבור תרחיפים חד-תאיים, הניחו רקמת גידול או cecum ב-HBSS עם 2%FCS, מספיק כדי לכסות את הדגימה, ולשמור על קרח. יש לשפוך מדיית RPMI עם דגימת בלוטות הלימפה על גבי מסנן של 100 מיקרומטר. העבירו את המסנן לחרוט חדש של 50 מיליליטר, ומעכו את בלוטת הלימפה עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק בעל שלושה מיליליטר.לשטוף מסנן עם 20 מיליליטרים של מדיית RPMI. צנטריפוגה את הדגימות ושואפים את הסופרנטנט. שופכים מחדש את הכדור ב-20 מיליליטרים של מאגר חרוזים ושופכים על מסנן של 40 מיקרומטר.לאסוף את תפיח התא. לספור תאים באמצעות המוציטומטר. צנטריפוגה את הדגימות והשליכה את הסופרנאטנט.לאחר מכן, resuspend במאגר חרוזים עבור ציטומטריה זרימה. הכינו את מאגר הקולג'אנאז כמתואר בכתב היד של הטקסט. מניחים את ה-GIST בצלחת סטרילית ומוסיפים 2.5 מיליליטר של מאגר קולגןאז.באמצעות אזמל סטרילי ומספריים, לטחון את הגידול עד שהוא בשברים עדינים. השתמשו בפיפטה בעלת בור גדול כדי לשאוף את הגידול ואת הקולגן לתוך צינור של 50 מיליליטר. דגירו אותו ב-37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות ב-100 סיבובים לדקה, ואז מרווים את התגובה עם שני מיליליטרים של FBS.יוצקים קולגןאז עם דגימת GIST על גבי מסנן של 100 מיקרומטר ומעכים את הגידול עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק של שלושה מיליליטר ומלקטים בצינור 50 מיליליטר. לשטוף מסנן עם 20 מיליליטרים של HBSS. צנטריפוגה של התסיס ב-450 RCF למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס, ואז השליכו את הסופרנאטנט.בצעו שימוש חוזר בכדור ב-20 מיליליטרים של מאגר חרוזים ושפכו מעל מסנן של 40 מיקרומטר אספו את התסיסים וספרו תאים באמצעות המוציטומטר. צנטריפוגה ושואפים לסופרנאטנט, ואז משחזרים את החיץ בחיץ חרוזים לציטומטריית זרימה. באמצעות מספריים, לפצל את cecum אורכית כדי לחשוף את הרירית הפנימית.חותכים אותו למקטעים של 0.5 ס"מ ומניחים אותו בצינור של 50 מיליליטר עם חמישה מיליליטרים של HBSS ו-2% FBS. יש לנער במרץ במשך 30 שניות ולצנטריפוגה ב-450 RCF למשך 20 שניות. לאחר מכן, השליכו את הסופרנטנט.הוסף חמישה עד 20 מיליליטרים של HBSS עם EDTA דו-מילימולרי. דגירו אותו ב-37 מעלות צלזיוס ב-100 סיבובים לדקה במשך 15 דקות. צנטריפוגה והשלכת הסופרנאטנט, ואז החייאת הכדור בחמישה עד 20 מיליליטרים של HBSS.יש לנער את התערובת במרץ למשך 30 שניות, ולאחר מכן לבצע צנטריפוגה ב-450 RCF למשך 20 שניות ולהשליך את הסופרנטנט. חזור על תהליך זה פעם נוספת. משחזרים את הכדור בחמישה מיליליטרים של מאגר קולגןאז, ואז דוגרים אותו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות ב-100 סיבובים לדקה.לנער במרץ כל 10 דקות ולהרווה את התגובה עם שני מיליליטרים של FBS. יוצקים קולגן עם דגימת cecum על גבי מסנן של 100 מיקרומטר ומחית עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק של שלושה מיליליטר. לשטוף את המסנן עם 20 מיליליטרים של HBSS ולאסוף את התסיס.צנטריפוגה ולהשליך את הסופרנאטנט. שופכים מחדש את הכדור ב-20 מיליליטרים של מאגר חרוזים ושופכים על מסנן של 40 מיקרומטר. לאסוף תסיסים ולספור תאים באמצעות המוציטומטר.חזור על תהליך הצנטריפוגה פעם נוספת והחייא את הכדור במאגר חרוזים לציטומטריית זרימה. לעכברי Kit558 הייתה תוחלת חיים ממוצעת של שמונה חודשים עקב חסימת מעיים מתקדמת. גידולים מעכברי Kit558 ביטאו סמנים קנוניים של GIST, כולל ה-KIT של טירוזין קינאז, ערוץ הטרנס-ממברנה Dog1 וגורם השעתוק ETV1.גידולים נחקרו עבור שינויים במסלול האיתות KIT כגון הסמנים במורד הזרם ERK ו- AKT או מיקרו-סביבה חיסונית, אשר חיקו באופן הדוק את ה- GIST האנושי. MRI או CT שימשו למעקב אחר נפח הגידול כמדידה מדויקת של תגובת הגידול. ניתוח הגידול הרחק מהצומת האילאוקולי והרחק מהכובע הצחי חשוב כדי ללכוד את משקל הגידול האמיתי ואת הניתוח החיסוני והמולקולרי.בתוך GIST, מודל זה איפשר לחקור את המיקרו-סביבה של הגידול, כמו גם אימונותרפיות.

molecular-immunologic-techniques-genetically-engineered-mouse-model

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

הדור והאפיון של תאי T ספציפיים סרטניים באמצעות עכבריים מתואר כאן. רקמה הרתי אדם ותאי גזע hematopoietic מהונדס גנטי אדם מושתלת לעכברי מדוכאי חיסון. התוצאה הוא הכינון מחדש של מערכת חיסון אנושית מהונדסת מאפשרת בבדיקת vivo של תגובות חיסוניות אנטי סרטניות.

שימוש בעכבר האנושי של BLT כמודל לתאי גזע מבוסס Gene Therapy גידול

כאן אנו מתארים פרוטוקול יעיל ורב-תכליתי להשראה, ניטור וניתוח גליובלסטומה חדשה (GBM) באמצעות DNA טרנספוזון המוזרק לחדרים של עכברים יילודים. תאים של האזור התת-חדרי, התופסים את הפלסמיד, הופכים, מתרבים ומייצרים גידולים בעלי מאפיינים היסטו-פתולוגיים של GBM אנושי.

Transposon מתווך האינטגרציה של פלסמיד דנ&quot;א לתוך אזור Subventricular של עכברים בילוד ליצירת מודלים חדשניים של גליובלסטומה

כאן אנו מתארים את המודל והגישה לחקר הפונקציות של מקרופאגים מכתשית ריאתית בגרורות סרטניות. כדי להדגים את תפקידם של תאים אלה בגרורות, נעשה שימוש במודל הסינגני (4T1) של סרטן השד בשילוב עם דלדול המקרופאגים המכתשית עם ליפוזומים קלודרונאטיים.

לומד את התפקיד של מכתשיים מקרופאגים סרטן שד גרור

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

פרוטוקול להקמת מודל עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס על ידי זיהום adeno-cre קטע ו מעקב שלה באמצעות קולונוסקופיה ברזולוציה גבוהה מוצג.

דגם עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס ספוראדי

לייזר לחיתוך מיקרו (LMD) היא טכניקה רגישה ומאוד לגילוי שניתן להשתמש בה כדי לחשוף מסלולים כי בתווך glioma טרוגניות ופלישה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול ממוטב כדי לבודד אזורים נפרדים מרקמת glioma באמצעות LMD לייזר ואחריו ניתוח טרנססקריפט.

לכידת לייזר מיקרודיסקציה של גלימה Subregions עבור אפיון מרחבית ומולקולרית של טרוגניות Intrאטומוראלי, הנחלים, ופלישה

מאמר זה מתאר זרימת עבודה של טכניקות המשמשות לבדיקת מתווכים מועמדים חדשים של גרורות מלנומה ומנגנוני הפעולה שלהם.

פלטפורמת גילוי חזקה לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה

שימוש במודל גידול אוטוכתוני חיסוני המונע על ידי מוטציות נפוצות של חולים לבדיקות פרה-קליניות הוא קריטי לבדיקות אימונותרפיות. פרוטוקול זה מתאר שיטה ליצירת מודלים של עכברי גידול במוח באמצעות העברה מבוססת אלקטרופורציה של DNA פלסמיד המייצגים מוטציות נפוצות של חולים, ובכך מספקים מודל עכבר מדויק, ניתן לשחזור ועקבי.

מידול גידולי מוח in vivo באמצעות העברה מבוססת אלקטרופורציה של DNA פלסמיד המייצג חתימות מוטציה של מטופל

פיתחנו מתודולוגיה להערכה אם גידולים במערכת העצבים בעכברים מהונדסים גנטית משחזרים במדויק את הפתולוגיה של עמיתיהם האנושיים. כאן, אנו מיישמים טכניקות היסטולוגיות אלה, קריטריונים פתולוגיים מוגדרים ומתודולוגיות תרבית על נוירופיברומות וגידולים ממאירים במעטפת העצבים ההיקפית הנובעים במודל העכבר P 0-GGFβ3.

זיהוי, אבחון ודירוג גידולי מעטפת עצב היקפיים ממאירים במודלים של עכברים מהונדסים גנטית

פרוטוקול זה מדגים כיצד ליצור מסומן פלורסנטי, גידולים המשובטים מוגדר גנטית בעין תסיסנית / דיסקים דמותי מחושים (EAD). הוא מתאר כיצד לנתח את EAD והמוח מן הזחלים instar השלישי וכיצד לעבד אותם לחזות ולכמת שינויים בהתבטאות גנים הפולשנות הגידול.

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

למד טכניקות ניתוח ועיבוד דגימות בעכבר Kit V558Δ/+ לחקר גידול סטרומלי במערכת העיכול. פרוטוקול זה מאפשר בדיקת אימונותרפיות ומחקר תרגומי ב-GIST.

טכניקות מולקולריות ואימונולוגיות במודל עכבר מהונדס גנטית של גידול סטרומלי במערכת העיכול

גלה סרטונים נוספים