אפיון ויסקואלסטי מהיר של ריר דרכי הנשימה באמצעות רומטר בנצ'טופ

מחלות חסימתיות ריריות מאופיינות בצמיגות לא תקינה של ריר דרכי הנשימה. הפרוטוקול מראה כיצד להשתמש בריאולוגיה כדי לכמת צמיגות ריר ולנתח נתונים כדי לבחון טיפולים המכוונים לריר. ריאולוגיה של ריר מספקת סמנים ביולוגיים כמותיים ספציפיים.

שימוש בהתקן ספסל מפשט מאוד את הלוגיסטיקה של מדידת סמנים ביולוגיים אלה בדגימות קליניות כמו דגימות כיח אנושיות. השימוש בריאולוגיה של ריר ככלי אבחון למחלות חסימתיות הוא עדיין אתגר. גוף הולך וגדל של ראיות מראה מתאם חזק בין תכונות ריאולוגיות, דלקת וזיהום חיידקי.

ריר תמיד נוכח בממשק הגוף שבו הוא משמן וממלא תפקיד מגן. ניתן ליישם ריאולוגיה של ריר על מערכות אחרות כמו מסלולי מערכת העיכול ואיברי המין. כדי להשיג מדידות מדויקות, טיפול נכון ומיקום של המדגם הוא קריטי.

הדגמה חזותית יכולה לשפר את הדיוק של בדיקה זו. מי שיוכיח את ההליך הזה יהיה קנדל שאפר, טכנאי מחקר ממעבדת האוויר. התחילו במיון כיח דרכי הנשימה שנאסף או ריר בכוסות דגימה סטריליות.

במקרה של כיח, יש להסיר רוק עודף מהדגימה מיד עם האיסוף. הניחו את הדגימות על קרח לצורך הובלה. הגבל את זמן ההובלה לפחות מארבע שעות.

לנתח את הדגימות בזמן האיסוף. הומוגניזציה של הריר על ידי פיפטה עדינה למעלה ולמטה שלוש עד חמש פעמים עם פיפטת תזוזה חיובית. או פיפטה ישירות לתוך צינורות microcentrifuge.

אחסן את הדגימות בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס עד לעיבוד. Aliquot הדגימות לאחסון בכמויות גדולות או שוות ערך ל-500 מיקרוליטרים כדי להבטיח נפח מספיק לניסויים. לפני ההצמדה, פיפטה כיח טרי וקפוא או ריר ישירות או הומוגני דגימות.

לתקן את האליקוטים הנדרשים למדידות וטיפולים חוזרים. דגירו את האליקוטים לבדיקה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות לפחות לפני המדידה. לבדיקת סוכנים פרמקולוגיים, השתמש בריכוזים גבוהים של פתרונות מלאי כדי למנוע דילול דגימה.

הוסף בין 1% ל -10% נפח של המגיב הרצוי ישירות על המדגם. וודאו שאף טיפה של התרכובת לא נשארת בצד הצינור. דגירה של הדגימות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הזמן הנדרש, כדי לאפשר תגובה כימית.

ערבבו את דגימת הריר והריאגנט על ידי הסטת החלק התחתון של צינור המיקרוצנטריפוגה כל שתי דקות כדי לאפשר חדירה הדרגתית של המגיב לתוך דגימת הריר מבלי להתפשר על רשת המוצין. כאשר משווים מספר ריאגנטים לתרופות, ודא שזמן הדגירה דומה. הפעל את המחשב ואתחל את התוכנה.

בחר מדידה חדשה. הזן את מספר הזיהוי לדוגמה תחת מזהה מדידה ואת שם המפעיל תחת מפעיל כדי להמשיך. הזן מידע נוסף או הערות תחת הערות.

בחרו סט גיאומטריה ובדקו היטב לוחות גדולים וקטנים, כדי לוודא שהלוחות נקיים ובמצב מושלם. הכנס את הצלחת הגדולה בחוזקה על הדוכן התחתון. הכניסו את הצלחת הקטנה בעדינות לדוכן העליון ונעלו את הצלחת בסיבוב קל עד לשמיעת לחיצה, מה שמעיד על כך שהצלחת מהודקת כראוי.

שים לב שהתנודה החופשית של הלוח העליון היא נורמלית. המתן עד שהטמפרטורה תגיע לערך היעד של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן הפעל כיול אוטומטי, כפי שהתבקש על ידי התוכנה.

באמצעות פיפטה תזוזה חיובית, לאט לאט pipette בין 250 ל 500 microliters של הדגימה על מרכז הלוח התחתון הגדול. לאחר הפקדתם על הצלחת, דגימות צמיגות יאמצו צורת כיפה, בעוד שדגימות אלסטיות מאוד עשויות לדרוש ניתוק פיזי. הנמיכו את ראש המדידה הנושא את הצלחת הקטנה באמצעות התוכנה והתבוננו בדגימה.

אם תועמס כראוי על הלוח התחתון, הדגימה תיצור מגע ותהיה ממורכזת בין שתי הלוחות. כדי להבטיח שהמדגם ימלא את הפער, השתמש בפונקציית הפער המופחתת עד שהמדגם כבר לא יהיה בצורת דו-קונקיה או מיושר עם קצה הלוח. פונקציית הפער המופחת מורידה את קצה המדידה במרווחים של 0.1 מילימטר ומוגבלת ל-7 דרגות.

אם נותר פער לאחר 7 ההפרשים, לחץ על התקנת ביצוע חוזר כדי לחזור למיקום ההתחלתי ולהתאים את מיקום הדגימה ואת עוצמת הקול שלה. אם הפער מצטמצם ביותר, הסר את הדגימה העודפת עם מרית על ידי תנועה מעגלית לאורך קצה הלוח העליון. קצצו את הדגימה העודפת בעדינות כדי למנוע לחץ גזירה.

הנמיכו את כיסוי המגן כדי למנוע הקרנה מקרית של נוזלים מזוהמים במהלך תנודה. כדי להתחיל מדידה, לחץ על התחל ניתוח. מחזור שלם ייקח ארבע עד שבע דקות.

הימנעו מלדבר בקול רם ולגעת במכשיר או בספסל לאורך כל המחזור. סביבה שקטה היא קריטית בשתי הדקות הראשונות. לאחר השלמת המחזור, לחץ לצד להרים את ראש המדידה וצור את דוח ניתוח הדגימה.

לאחר שראש המדידה נסוג לחלוטין, הרימו את כיסוי המגן. השליכו את הדגימה והסירו בזהירות את הצלחות. נקו וחטאו את הצלחות באמצעות מים חמים וסבון.

המאפיינים הוויסקואלסטיים של שמונה מגה-דלטון PEO נמדדו בחמישה ריכוזים והושוו ישירות בין ריאמטר הספסל המוערך לבין רומטר בתפזורת מסורתי. בניגוד לתמיסות PEO, ליחה מסוג סטטוס אסטמטיקוס מייצגת התנהגות נשלטת אלסטית דמוית מוצק במתח נמוך וכוללת קרוסאובר במתח גבוה. בנוסף, מדידות משולשות שבוצעו בתמיסת PEO של 1.5% ומדגם ליחה של בדיקה קלינית, אישרו כי מאפיינים ויסקואלסטיים ליניאריים היו ניתנים לחזרה רבה עבור הערכים שהתקבלו מהדגימה הביולוגית.

השינויים נמדדו בתכונות הוויסקואלסטיות של הריר לאחר טיפול בחומר רירי. השפעות TCEP על צמיגות ריר הבדיקה נבדקו בסביבה קלינית באמצעות מד הספסל. טיפול בריכוליטי הביא לדגימה דמוית נוזל יותר עם ירידה במודולוס המורכב פי 4.6, מודולוס אלסטי פי 5.1, מודולוס צמיג פי 1.9, מאמץ קרוסאובר פי 3.3 ומתח תשואת קרוסאובר פי 5.7, ועלייה ביחס השיכוך פי 2.8.

מדידת צמיגות הריר של דרכי הנשימה בסביבה קלינית בקצב מהיר יכולה לסייע בהתאמת הטיפול בחולים על בסיס כל מקרה לגופו, כמו גם לספק פרוטוקול סטנדרטי לבדיקת תרכובות פרמקולוגיות חדשניות. טכניקה זו משמשת כיום לבחינת ההשפעות של אפנני CFTR יעילים ביותר על כיח סיסטיק פיברוזיס ולבדיקת העוצמה של תרופות שונות שמטרתן לשנות את תכונות הריר.