Name: הדמיה סימולטנית וזיהוי מבוסס זרימה-ציטומטריה של סמני סנסנציה פלואורסצנטיים מרובים בתאי סרטן סנסנטיים המושרים על ידי טיפול (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: למדו שיטת זרימה-ציטומטריה מתקדמת לזיהוי סמני סנסנציה מרובים בתאי DLBCL בודדים. השיטה מייצרת תמונות ברזולוציה גבוהה ומאפשרת ניתוח מרחבי וכימות אותות פלואורסצנטיים במהירות ובדייקנות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק ליונג יו מאוניברסיטת יוהנס קפלר לינץ (BERM16108001).

1. קווי תאים DLBCL עם טיפול באפוספמיד או דאונורוביצין כדי לגרום לסנסנציה תאית
הערה: הפרוטוקול פועל גם עבור תאים סרטניים חסידיים. בהתאם לגודל התא, זרע 1-2 × 105 תאים לתוך באר אחת של צלחת 6 בארות ולדגום את הצלחת באינקובטור 5% CO2, 37 °C לילה לפני הטיפול. שלבי הפרוטוקול זהים לאלה של תאי ההשעיה אך עם שני יוצאים מן הכלל. ראשית, יש לנסות את התאים מהצלחת לאחר שלב 3.4. שנית, שלבי שטיפה מבוצעים ללא צנטריפוגה לפני טריפסיניזציה.
<ol><li>ספירת תאי DLBCL וזרע 1 × 106 תאים/מ"ל ב-4 מ"ל של בינוני לכל באר לתוך צלחת תרבית של 6 בארות. טפחו תאי DLBCL במדיום RPMI-1640 בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-100 פניצילין/סטרפטומיצין U/mL.</li>
	<li>הוסיפו MAF (5 מיקרוגרם/מ"ל) או DN (20 ננוגרם/מ"ל) לתרבית התאים ונדנדו בעדינות את הצלחת לערבוב. הערה: MAF ו- DN אינם יציבים. לאחר פירוק ב- DMSO, יש למקם את פתרון המניות ולאחסן אותו בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס. יש להימנע ממחזורי הקפאה/הפשרה.</li>
	<li>דגירה של הצלחת באינקובטור 5% CO2, 37 °C למשך 3 ימים.</li>
	<li>לאחר דגירה של 3 ימים, לאסוף את תאי DLBCL בצינורות צנטריפוגה סטריליים של 15 מ"ל ולסובב ב 100 × גרם, 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.</li>
	<li>השליכו את ה-supernatant, החיזרו את כדורי התאים עם 4 מ"ל של מדיום רענן, והוסיפו את המתלים בחזרה לצלחת בעלת 6 הבארות.</li>
	<li>טפחו את צלחת התא בחממה של 5% CO2, 37 מעלות צלזיוס במשך יומיים נוספים לפני הקטיף לניתוח.</li>
</ol>2. הכינו פתרונות לצביעה (טבלה 1)
3. כתם תאי DLBCL בסמני סנסנציה שונים
הערה: דגימות תאים מוכתמות בסמנים בודדים (כלומר, כחול-EdU פסיפי, C12FDG, או Alexa Fluor 647-γH2AX) מוכנות ליצור מטריצת פיצוי כדי לתקן את הזליגה הפלואורסצנטית במהלך המדידה. למרות שהוצע מאוד, ניתן להשעות שלב זה כאשר קיימת חפיפה ניתנת להשמטה (ערך מקדם הפיצוי ≤ 0.1) של ספקטרום הפליטה בקרב פלואורופורים שונים. עם זאת, על המשתמשים לקבוע שלבי פיצוי סטנדרטיים בעת שימוש במכשירים שונים ובלוחות פלורסנט שונים.
<ol><li>הוסף תמיסת EdU של 10 mM ביחס של 1:1,000 לתרבית התאים DLBCL הנוצרת משלב 1.6 (ריכוז EdU הסופי הוא 10 μM). נדנדו בעדינות את הצלחת כדי לערבב ולדגום באינקובטור 5% CO2, 37 מעלות צלזיוס למשך 3 שעות.</li>
	<li>מוציאים את הצלחת מהאינקובטור ומוסיפים תמיסת כלורוקין 100 מ"מ לריכוז סופי של 75 מיקרומטר (ראו דיון). נדנדו בעדינות את הצלחת כדי לערבב ולדגום באינקובטור 5% CO2, 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.</li>
	<li>הוציאו את הצלחת מהאינקובטור והוסיפו תמיסת 20 mM C12FDG ב-1: 1,000 לריכוז C12FDG סופי של 20 מיקרומטר.</li>
	<li>הוציאו את הצלחת מהאינקובטור והוסיפו תמיסת 100 mM 2-פנילאתיל-β-D-thiogalactoside (PETG) בשעה 1:50 כדי לעצור את תמיסת fSA-β-gal (ריכוז PETG סופי של 2 mM). סובבו בעדינות את הצלחת כדי לערבב.</li>
	<li>מעבירים את התאים לצינורות צנטריפוגה סטריליים של 15 מ"ל ומסובבים ב-100 × גרם, 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. יש להשליך את חומר העל ולשטוף את התאים ב-4 מ"ל של מלח בעל מאגר פוספט (PBS).</li>
	<li>חזור על שלב הכביסה של PBS. השליכו את הסופרנאטנט והחזירו את כדורי התא ב-500 μL של תמיסת קיבוע פרפורמלדהיד של 4%.</li>
	<li>לאחר 10 דקות דגירה בטמפרטורת החדר, צנטריפוגה ב 250 × גרם, טמפרטורת החדר במשך 5 דקות. השליכו את תאי הסופרנטנט ושטפו 4 מ"ל של PBS.</li>
	<li>חזור על שלב הכביסה של PBS. יש להשליך את הסופרנטנט, להחיות את גלולת התא ב-200 μL של חיץ חדירת סאפונין ולהעביר את ההשעיה לצינור חדש של 1.5 מ"ל. לאחר 10 דקות דגירה בטמפרטורת החדר, צנטריפוגה ב 250 × גרם, טמפרטורת החדר במשך 5 דקות.</li>
	<li>יש להשליך את הסופרנטנט ולהחיות את כדורי התאים ב-200 μL של תמיסת נוגדנים ראשונית (נוגדן 1:500 γH2AX בתמיסת הדגירה של נוגדנים). דגירה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה בחושך.</li>
	<li>צנטריפוגה את הצינורות ב 250 × גרם, 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. השליכו את ה-supernatant ושטפו עם תמיסת שטיפת סאפונין ב-100 μL.</li>
	<li>חזרו על שלב הכביסה פעמיים נוספות. השליכו את הסופרנטנט והחזירו את כדורי התא ב-500 מיקרול' של קוקטייל זיהוי EdU.</li>
	<li>דגירה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות בחושך. צנטריפוגה ב 250 × גרם, טמפרטורת החדר במשך 5 דקות. יש להשליך את ה-supernatant ולשטוף עם 1 מ"ל של תמיסת שטיפת ספונין.</li>
	<li>חזור על שלב הכביסה פעמיים. יש להשליך את הסופרנטנט ולהחיות את כדורי התא ב-20-50 מיקרול של PBS. המשך לסעיף 4 למדידת מדגם.</li>
</ol>4. הדמיה של סמני סנסנציה באמצעות מערכת ציטומטר זרימת ההדמיה
<ol><li>רוקנו את בקבוק נוזל הפסולת. בדקו את רמות החרוזים המהירים, המעקרים, המנקה, ההפרחות, הנדן וריאגנטי השטיפה (מים שעברו דה-יוניזציה) כדי להבטיח מספיק נוזלים לפני הפעלת המכשיר (ראו טבלת החומרים).</li>
	<li>הפעילו את המכשיר ואת תוכנת ההדמיה (ראו את ממשק התוכנה באיור 1A).</li>
	<li>לחץ על לחצן הפעלה כדי לאתחל נוזלים וכיול המערכת. הערה: הליך זה אורך כ-45 דקות.</li>
	<li>הגדר את ההגדלה ל-40x, הגדר את מהירות הנוזלים לנמוכה והפעל את הלייזרים הדרושים בניסוי. הפעל לייזרים של 405 ננומטר, 488 ננומטר ו-642 ננומטר כדי למדוד את הלייזרים הכחולים של EdU-pacific, C12FDG ו-Alexa Fluor 647-γH2AX (או Alexa Fluor 647-Ki67), בהתאמה. הגדר את Ch6 עבור ערוץ פיזור, ו- Ch1 ו- Ch9 עבור ברייטפילד.</li>
	<li>התחילו עם הדגימה שצפויה להיות בעלת הפלואורסצנציה הגבוהה ביותר כדי להגדיר את עוצמת הלייזרים. הפוך בעדינות את צינור הדגימה כדי לערבב. פתח את מכסה הצינור, והכנס את צינור הדגימה לרציף. לחץ על טען כדי להתחיל.</li>
	<li>פתח תרשים פיזור ובחר את התכונות Area_M01 ו - Aspect Ratio_M01 עבור צירי X ו - Y, בהתאמה. הגדר שער מעל יחס גובה-רוחב של 0.5 כדי לא לכלול כפלים וצבירת תאים מתחת ובצד ימין, ואת אוכלוסיית חרוזי המהירות בצד שמאל (איור 1B).</li>
	<li>פתח תרשים היסטוגרמה ובחר את התכונה מעבר צבע RMS_M01_Ch01 עבור ציר ה- X. בחרו את אוכלוסיית הסינגלטים והגדירו את השער לבחירה עבור תאים ממוקדים (איור 1C). הערה: מערכת ההדמיה תשתמש באופן אוטומטי בחרוזי מהירות כדי להתאים את המיקוד להדמיה. עם זאת, מומלץ לבחור את המחצית הימנית של שיא ההיסטוגרמה עבור האוכלוסייה הממוקדת ביותר.</li>
	<li>פתח תרשים היסטוגרמה ובחר עוצמות פיקסלים של Raw Max עבור ציר X עבור כל ערוץ צבע (Ch2, 7 ו- 11). התאימו את הספקות הלייזר (כלומר, לייזרים של 488 ננומטר, 405 ננומטר ו-642 ננומטר עבור Ch2, 7 ו-11, בהתאמה), כך שלכל פלואורוכרום יהיה ערך Raw Max Pixel בין 100 ל-4,000 כדי למנוע פיזור יתר. הערה: עבור ניסוי זה, הגדרת הספק הלייזר היא 50 mW, 200 mW ו - 50 mW עבור לייזרים 488 ננומטר, 405 ננומטר ו - 642 ננומטר, בהתאמה.</li>
	<li>בחר את האוכלוסייה הממוקדת שתקליט ולחץ על רכוש כדי למדוד את דגימות ה- DLBCL עם הגדרות עקביות. בעת שינוי דגימות למדידה, לחץ על Return כדי לשחזר את צינור הדגימה. לחץ על טען כדי להשליך את הדגימה.</li>
	<li>לאחר שכל הדגימות נמדדות, כבו את שדה הבהיר ופזרו את הלייזר. מדוד דגימות בקרה בצבע יחיד כדי ליצור מטריצת פיצוי.</li>
	<li>לחץ על כיבוי כדי לסגור את מערכת ההדמיה.</li>
	<li>נתח את הנתונים בתוכנת ניתוח התמונות.<ol><li>השתמש בכלי Spot Wizard של תוכנת ניתוח התמונות כדי לספור ולכמת באופן אוטומטי מוקדי γH2AX גרעיניים בתמונות של תאים חיים. בחר שתי אוכלוסיות תאים (אחת עם גבוהה ואחת עם ספירת נקודות נמוכה) כדי לאמן את אשף הנקודות לניתוח אוטומטי נוסף של ספירת הכתמים.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Kuilman, T., Michaloglou, C., Mooi, W. J., Peeper, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+essence+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">The essence of senescence.</a> Genes and Development. 24 (22), 2463-2479 (2010).</li>
<li>Di Micco, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogene-induced+senescence+is+a+DNA+damage+response+triggered+by+DNA+hyper-replication%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Oncogene-induced senescence is a DNA damage response triggered by DNA hyper-replication.</a> Nature. 444 (7119), 638-642 (2006).</li>
<li>Milanovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+reprogramming+promotes+cancer+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated reprogramming promotes cancer stemness.</a> Nature. 553 (7686), 96-100 (2018).</li>
<li>Passos, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feedback+between+p21+and+reactive+oxygen+production+is+necessary+for+cell+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Systems+Biology%22%5BJournal%5D)">Feedback between p21 and reactive oxygen production is necessary for cell senescence.</a> Molecular Systems Biology. 6 (1), 347(2010).</li>
<li>Lee, S., Schmitt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+nature+of+senescence+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The dynamic nature of senescence in cancer.</a> Nature Cell Biology. 21 (1), 94-101 (2019).</li>
<li>Toussaint, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+premature+senescence+or+stress-induced+senescence-like+phenotype%3A+one+in+vivo+reality%2C+two+possible+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Scientific+World+Journal%22%5BJournal%5D)">Stress-induced premature senescence or stress-induced senescence-like phenotype: one in vivo reality, two possible definitions.</a> The Scientific World Journal. 2, 230-247 (2002).</li>
<li>Collado, M., Blasco, M. A., Serrano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+in+cancer+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence in cancer and aging.</a> Cell. 130 (2), 223-233 (2007).</li>
<li>Munoz-Espin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+cell+senescence+during+mammalian+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Programmed cell senescence during mammalian embryonic development.</a> Cell. 155 (5), 1104-1118 (2013).</li>
<li>Faget, D. V., Ren, Q., Stewart, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unmasking+senescence%3A+context-dependent+effects+of+SASP+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Unmasking senescence: context-dependent effects of SASP in cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 19 (8), 439-453 (2019).</li>
<li>Childs, B. G., Durik, M., Baker, D. J., van Deursen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+in+aging+and+age-related+disease%3A+from+mechanisms+to+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence in aging and age-related disease: from mechanisms to therapy.</a> Nature Medicine. 21 (12), 1424-1435 (2015).</li>
<li>Chandra, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+reorganization+of+the+nuclear+landscape+in+senescent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Global reorganization of the nuclear landscape in senescent cells.</a> Cell Rep. 10 (4), 471-483 (2015).</li>
<li>Rodier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+DNA+damage+signalling+triggers+senescence-associated+inflammatory+cytokine+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Persistent DNA damage signalling triggers senescence-associated inflammatory cytokine secretion.</a> Nature Cell Biology. 11 (8), 973-979 (2009).</li>
<li>Schleich, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H3K9me3-mediated+epigenetic+regulation+of+senescence+in+mice+predicts+outcome+of+lymphoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">H3K9me3-mediated epigenetic regulation of senescence in mice predicts outcome of lymphoma patients.</a> Nature Communications. 11 (1), 3651(2020).</li>
<li>Di Micco, R., Krizhanovsky, V., Baker, D., d'Adda di Fagagna, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+in+ageing%3A+from+mechanisms+to+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence in ageing: from mechanisms to therapeutic opportunities.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 22 (2), 75-95 (2021).</li>
<li>Fan, D. N., Schmitt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+markers+of+therapy-induced+senescence+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Detecting markers of therapy-induced senescence in cancer cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1534, 41-52 (2017).</li>
<li>Schmitt, C. A., Lowe, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+and+chemoresistance+in+transgenic+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Apoptosis and chemoresistance in transgenic cancer models.</a> Journal of Molecular Medicine. 80 (3), 137-146 (2002).</li>
<li>Dorr, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+lethal+metabolic+targeting+of+cellular+senescence+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synthetic lethal metabolic targeting of cellular senescence in cancer therapy.</a> Nature. 501 (7467), 421-425 (2013).</li>
<li>Fan, D. N. Y., Schmitt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genotoxic+stress-induced+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Genotoxic stress-induced senescence.</a> Methods in Molecular Biology. 1896, 93-105 (2019).</li>
<li>Noppe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+flow+cytometric+method+for+measuring+senescence+associated+beta-galactosidase+activity+in+human+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Rapid flow cytometric method for measuring senescence associated beta-galactosidase activity in human fibroblasts.</a> Cytometry A. 75 (11), 910-916 (2009).</li>
<li>Biran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+identification+of+senescent+cells+in+aging+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Quantitative identification of senescent cells in aging and disease.</a> Aging Cell. 16 (4), 661-671 (2017).</li>
<li>Rossi, M., Abdelmohsen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+senescent+surface+biomarkers+as+senotherapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">The emergence of senescent surface biomarkers as senotherapeutic targets.</a> Cells. 10 (7), 1740(2021).</li>
<li>Gonzalez-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Munoz-Espin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+FEBS+Journal%22%5BJournal%5D)">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> The FEBS Journal. 288 (1), 56-80 (2021).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

שיטה זו בחנה את יכולת הכניסה לסנסנציה של ארבעה קווי תאי DLBCL שונים עם טיפול כימותרפי, עם הדמיה בשדה בהיר וכימות מבוסס ציטומטריה של זרימה. ברמה של תא יחיד, זיהינו בהצלחה אוכלוסיות סנסנטיות עיקריות של C12FDG+EdU-Ki67+ בתאי KARPAS422 ו-WSU-DLCL2 שטופלו, ובמידה פחותה בתאי OCI-LY1, בעוד שקו התאים SU-DHL6 היה עמיד לטיפול. ההבדל ביכולת הכניסה לסנסנציה בין קווי התאים עשוי להיות מוסבר על ידי הפגמים הגנומיים המובהקים שלהם16,17. ...

מגוון גירויים יכולים לגרום לסנסנציה תאית, ולגרום לתאים להיכנס למצב של עצירה יציבה של מחזור התא. גירויים אלה כוללים שינויי איתות פנימיים או לחצים חיצוניים. אותות פנימיים כוללים קיצור טלומרים פרוגרסיבי, שינויים במבנה הטלומרים, שינוי אפיגנטי, הפרעות פרוטאוסטזיס, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה והפעלה של אונקוגנים. לחצים חיצוניים כוללים אותות דלקת ו/או נזק לרקמות, קרינה או טיפול כימי, וחסך תזונתי 1,2,3,4. מבין הסוגים המובהקים של סנסנציה, הנפוצים ביותר הנראים והנחקרים היטב הם סנסנציה משכפלת, סנסנציה המושרה על ידי אונקוגן (OIS), סנסנציה המושרה על ידי קרינה וסנסנציה המושרה על ידי טיפול (TIS). OIS היא תגובה תאית חריפה לנזק גנוטוקסי הנגרם על ידי עקה משכפלת הנוצרת על ידי הפעלת אונקוגן חריגה ויכולה במידה מסוימת למנוע את ההתקדמות הפתולוגית מנגע קדם-אופלסטי לגידול מלא. TIS קורה כאשר תאי הגידול נלחצים על ידי תרופות כימותרפיות או קרינה מייננת 5,6.
Senescence נחשב חרב פיפיות בפתולוגיה בשל אופיו הדינמי מאוד. הוא תואר בתחילה כמנגנון מדכא גידול מועיל להסרת תאים פגומים ממאגר התאים המתחלקים במחזור הדם, תוך שמירה על תפקודם התקין של האיברים ועיכוב צמיחת הגידול 7,8,9. עם זאת, עדויות חדשות מצביעות על צד אפל של סנסנציה. תאים סנסנטיים מפרישים ציטוקינים פרו-דלקתיים, הידועים בשם פנוטיפ הפרשה הקשור לסנסנציה (SASP), מה שמוביל לפיברוזיס ואיברים לא תקינים ומקדם את התחלת הגידול והתקדמותו10. יתר על כן, תאים סרטניים סנסנטיים עוברים תכנות מחדש אפיגנטי וביטוי גנים במקביל לשיפוץ כרומטין והפעלה של תגובה מתמשכת של נזק לדנ"א (DDR)11,12, תוך רכישת תכונות חדשות של תאי סרטן-גזע3. אף על פי שגידולים בעלי יכולת סנסנסנציה מגיבים טוב יותר להתערבות טיפולית בהשוואה לגידולים שאינם מסוגלים לסנסנציה13, ההתמדה של תאים סנסנטיים עלולה להוביל לפרוגנוזה גרועה לטווח ארוך אם הם לא יזוהו ביעילות ויסולקו על ידי תרופות סנוליטיות5. כך או כך, שיטה אמינה להערכת סנסנציה היא בעלת עניין קליני משמעותי, לא רק לפרוגנוזה של הטיפול, אלא גם לפיתוח אסטרטגיות חדשניות המכוונות לתאים סנסנטיים.
ללא קשר לטריגרים שונים, תאים סנסנטיים מציגים כמה מאפיינים נפוצים, כולל מורפולוגיה מוגדלת, שטוחה ורב-גרעינית עם ואקואולות גדולות, גרעינים מורחבים באופן משמעותי, היווצרות של הטרוכרומטין עשיר בסנסנציה H3K9me3 (SAHF) בגרעין, הצטברות מתמשכת של סמן נזק לדנ"א γH2AX מוקדים, מופעל p53-p21CIP1 ו- Rb-p16INK4a מנגנוני ויסות מחזור התא, עצירת מחזור תאי G1 יציבה, אינדוקציה מסיבית של SASP ופעילות מוגברת הקשורה לסנסנציה β-גלקטוזידאז (SA-β-gal)14. מכיוון שאין מספיק סמן יחיד כדי להגדיר סנסנציה, צביעה אנזימטית עבור פעילות SA-β-gal, הנחשבת לתקן הזהב לזיהוי סנסנציות, משולבת בדרך כלל עם צביעה אימונוהיסטוכימית עבור H3K9me3 ו- Ki67 כדי לזהות TIS15. עם זאת, קשה לכמת SA-β-gal המבוסס על כרומוגניה כימית. כאן, שילבנו 5-dodecanoylaminofluorescein-di-β-D-galactopyranoside (C12FDG) מבוסס פלואורסצנציה מבוסס SA-β-gal (fSA-β-gal) עם צביעה אימונופלואורסנטית עבור γH2AX ו- DNA משולב EdU כדי לזהות C12FDG+EdU-γH2AX+ תאים סנסנטיים באמצעות מערכת ציטומטר זרימת ההדמיה המתקדמת, המשלבת את המהירות, הרגישות ותמונות מפורטות של תא יחיד עם מידע מרחבי שלא ניתן לספק על ידי ציטומטריה של זרימה ומיקרוסקופיה. שיטה זו מאפשרת יצירה מהירה של תמונות ברזולוציה גבוהה המאפשרת מיקום וכימות של אותות פלואורסצנטיים בתוך תאים, תוך מתן רישיון לניתוח מהיר של דגימות מרובות על ידי בניית צינורות סטנדרטיים.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-H2A.X Phospho (Ser139) נוגדן</td><td>Biolegend</td><td>613407</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן חד שבטי לעכבר נגד Ki-67 (Alexa Fluor 647)</td><td>Biolegend</td><td>350509</td><td></td></tr><tr><td>C12FDG (5-Dodecanoylaminofluorescein Di-&beta;-D-Galactopyranoside)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11590276</td><td></td></tr><tr><td>כלורוקווין -דיפוספט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>C6628</td><td></td></tr><tr><td>תכשיר ניקוי (קולטר קלנץ)</td><td>בקמן קולטר</td><td>8546929</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU פסיפיק בלו זרימה ציטומטריה ערכת בדיקת</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>C10418</td><td></td></tr><tr><td>דאונורוביצין</td><td>Medchemexpress</td><td>HY-13062A</td><td></td></tr><tr><td>Debubbler (70% איזופרופנול)</td><td>Millipore</td><td>1.3704</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת ניתוח תמונות (Amnis&nbsp; רעיונות&nbsp; 6.3)</td> <td>Luminex</td><td>CN-SW69-12</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר ותוכנת הדמיה (Amnis&nbsp; אימג'סטריםX&nbsp; מערכת ציטומטר זרימת הדמיה Mk II ותוכנת INSPIRE)</td> <td>Luminex</td><td>100220</td><td></td></tr><tr><td>KARPAS</td><td>DSMZ</td><td>ACC 31</td><td></td></tr><tr><td>mafosfamide cyclohexylamine</td><td>Niomech</td><td>D-17272</td><td></td></tr><tr><td>OCI-LY1</td><td>DSMZ</td><td>ACC 722</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>11473704</td><td></td></tr><tr><td>PETG (2-פנילאתיל-ובטא;-D-thiogalactosid)&nbsp;</td><td>Sigma aldrich</td><td>P4902</td><td></td></tr><tr><td>saponin</td><td>Sigma aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Sheath</td><td>Millipore</td><td>BSS-1006-B</td><td></td></tr><tr><td>ערכת חרוזים עבור ImageStream</td><td>Luminex</td><td>400041</td><td></td></tr><tr><td>סטריליזטור (0.4-0.7% היפוכלוריט)</td><td>VWR</td><td>JT9416-1</td><td></td></tr><tr><td>SU-DHL6</td><td>DSMZ</td><td>ACC 572</td><td></td></tr><tr><td>WSU-DLCL2</td><td>DSMZ</td><td>ACC 575</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה סימולטנית וזיהוי מבוסס זרימה-ציטומטריה של סמני סנסנציה פלואורסצנטיים מרובים בתאי סרטן סנסנטיים המושרים על ידי טיפול

Simultaneous Imaging and Flow-Cytometry-based Detection of Multiple Fluorescent Senescence Markers in Therapy-Induced Senescent Cancer Cells

תרופות כימותרפיות יכולות לגרום לנזק בלתי הפיך לדנ"א בתאים סרטניים, מה שמוביל לאפופטוזיס או לסנסנציה מוקדמת. שלא כמו מוות של תאים אפופטוטיים, סנסנציה היא מנגנון שונה במהותו המרסן את התפשטותם של תאים סרטניים. עשרות שנים של מחקרים מדעיים חשפו את ההשפעות הפתולוגיות המורכבות של תאי סרטן סנסנטיים בגידולים ובמיקרו-סביבה המווסתים תאים סרטניים ותאים סטרומליים. ראיות חדשות מצביעות על כך שסנסנציה היא גורם פרוגנוסטי רב עוצמה במהלך הטיפול בסרטן, ולכן זיהוי מהיר ומדויק של תאים סנסנטיים בדגימות סרטן הוא חיוני. מאמר זה מציג שיטה לדמיין ולזהות סנסנציה הנגרמת על ידי טיפול (TIS) בתאים סרטניים. קווי תאים מתפזרים של לימפומה של תאי B גדולים (DLBCL) טופלו באמצעות מאפוספמיד (MAF) או דאונורוביצין (DN) ונבדקו לאיתור סמן הסנסנציה, β-גלקטוזידאז הקשור לסנסנציה (SA-β-gal), סמן סינתזת הדנ"א 5-אתניל-2′-דאוקסיורידין (EdU), וסמן הנזק לדנ"א gamma-H2AX (γH2AX). הדמיית ציטומטר זרימה יכולה לסייע ביצירת תמונות חד-תאיות ברזולוציה גבוהה בפרק זמן קצר כדי לדמיין ולכמת בו-זמנית את שלושת הסמנים בתאים סרטניים.

מטריצת פיצוי נוצרה באמצעות תוכנת ניתוח תמונות על ידי טעינת נתונים מוקלטים של דגימות בקרה בצבע יחיד. כפי שניתן לראות באיור המשלים S1, זליגת אור לא זניחה (ערך מקדם ≥ 0.1) מ-EdU ל-C12FDG זוהתה עם ערך מקדם crosstalk 0.248, בעוד שה-crosstalk בין ערוצים אחרים לא היה משמעותי. ארבעה קווי תאים שונים של DLBCL טופלו ב-5 מיקרוגרם/מ"ל MAF או 20 ננוגרם/מ"ל DN כדי לגרום לסנסנציה תאית ונותחו באמצעות צביעת SA-β-gal קונבנציונלית או בשיטת ההדמיה של זרימה-ציטומטריה.
יותר מ-70% מתאי KAR...

כאן אנו מציגים שיטה מבוססת ציטומטריית זרימה להדמיה וכימות של סמנים מרובים הקשורים לסנסנציה בתאים בודדים.

Chemotherapeutic drugs can induce irreparable DNA damage in cancer cells, leading to apoptosis or premature senescence. Unlike apoptotic cell death, ...

שיטה זו יכולה ליצור במהירות תמונות ברזולוציה גבוהה המאפשרות ניתוח של התפלגות מרחבית וכימות של אותות פלואורסצנטיים בתוך תאים תוך מתן אפשרות לניתוח מהיר של דגימות מרובות. התאים נמדדים באמצעות מערכת ציטומטריה מתקדמת של זרימת הדמיה, המשלבת מהירות, רגישות ותמונות מפורטות של תאים בודדים עם מידע מרחבי המניב נתונים ייחודיים שלא ניתן לספק על ידי אופטומטריה של זרימות או מיקרוסקופיה. עצה חשובה אחת היא לספק מספיק תאים כדי לקבוע את הגדרות המכשיר ואנחנו משעים את התאים בצפיפות הגבוהה עבור המדידות.מלבד זאת רכישת נתונים היא פשוטה ודומה לציטומטריית זרימה קונבנציונלית. ראשית ליצור את קווי התא DLBCL כפי שמתואר בכתב היד. לאחר מכן הוסיפו תמיסת EdU של 10 מילימולאר ביחס של 1 ל-1000 לתוך תרבית התאים DLBCL ודגרו את הצלחת באינקובטור של 5% פחמן דו חמצני בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שלוש שעות לאחר ערבוב הצלחת על ידי נדנדה עדינה.הוציאו את הצלחת לאחר הדגירה והוסיפו תמיסת כלורוקווין 100 מילימולר לריכוז סופי של 75 מיקרומולר. מערבבים על ידי נדנדה עדינה ודוגרים במשך 30 דקות. לאחר מכן הוסיפו 20 מילימולר C12 FDG לריכוז סופי של 20 מיקרומולר.לאחר ערבוב עדין, דגרו את הצלחת למשך שעה כפי שהוכח קודם לכן. לאחר מכן, הוסף 100 מילימולר 2-פנילתיל-בטא-d-thiogalactoside פתרון אחד עד 50 כדי לעצור את כתמי בטא-גל FSA. ומסובבים בעדינות את הצלחת כדי לערבב.מעבירים את התאים לצינורות צנטריפוגה סטריליים של 15 מיליליטר ומסתובבים פי 100 G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר שהסופרנטנט מושלך, שטפו את התאים בארבעה מיליליטר של PBS וצנטריפוגה ב-100 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן השהה מחדש את כדורי התא ב-500 מיקרוליטרים בתמיסת קיבוע של 4% פרפורמלדהיד.לאחר דגירה של 10 דקות בטמפרטורת החדר, צנטריפוגה ב-250 פעמים G למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. השליכו את הסופר-נטנט ושטפו את התאים עם ארבעה מיליליטר של PBS פעמיים וצנטריפוגה ב-100 פעמים G למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הכביסה, יש להשליך את הסופר-נטנט ולהשעות מחדש את גלולת התא ב-200 מיקרוליטרים של מאגר חלחול של סאפונין.עכשיו להעביר את ההשעיה לצינור חדש 1.5 מיליליטר לדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. גלולו את התאים ב-250 פעמים G למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן להשעות מחדש את התאים ב-200 מיקרוליטרים של תמיסת נוגדנים ראשונית ולדגור בארבע מעלות צלזיוס בן לילה, בחושך.צנטריפוגה של הצינורות ב 250 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. יש להשליך את הסופר-נטנט ולשטוף עם 100 מיקרוליטרים של תמיסת שטיפת סאפונין. לאחר שטיפת התאים פעמיים, יש להשליך את הסופר-נאטנט ולהשעות מחדש את כדורי התאים ב-500 מיקרוליטרים של קוקטייל זיהוי EdU.דגירה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות בחושך וצנטריפוגה ב-250 פעמים G במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. יש להשליך את הסופר-נטנט ולשטוף עם מיליליטר אחד של תמיסת שטיפת סאפונין. חזרו על הכביסה פעמיים, השליכו את הסופר-נטנט והשעו מחדש את כדורי התא ב-20 עד 50 מיקרוליטרים של PBS.לפני הפעלת המכשיר, רוקן את בקבוק נוזל הפסולת ובדוק את רמות SpeedBeads, מעקר, מנקה, debubbler ו נדן מספיק נוזלים. לאחר הפעלת המכשיר ותוכנת ההדמיה, לחץ על כפתור ההפעלה כדי לאתחל fluidics וכיול המערכת. הגדר את ההגדלה ל- 40 פעמים והגדר את מהירות הזרימה לנמוכה.לאחר הפעלת הלייזרים, הפעל לייזר של 405 ננומטר כדי למדוד את EdU Pacific Blue, 488 ננומטר כדי למדוד C12-FDG ו-642 ננומטר כדי למדוד את Alexa-Fluor-647-gamma-H2AX. הגדר ערוץ שש לערוץ הפיזור, ערוץ 1 וערוץ תשע לשדה הבהיר. לאחר מכן התחל עם הדגימה שצפויה להיות בעלת הפלואורסצנטיות הגבוהה ביותר כדי להגדיר את עוצמת הלייזרים והפוך בעדינות את צינור הדגימה כדי לערבב.לאחר פתיחת מכסה הצינור, הכנס את צינור הדגימה לרציף. לחץ על טען כדי להתחיל ולפתוח עלילת פיזור. לאחר מכן, בחר את אזור תכונות, קו תחתון MO1 ויחס גובה-רוחב מדגישים MO1 עבור צירי X ו- Y בהתאמה.הגדר שער מעל יחס גובה-רוחב של 0.5 כדי לא לכלול כפילים וצברי תאים מתחת ובצד ימין ואת אוכלוסיית SpeedBead בצד שמאל. כעת, פתחו את 'התוויית היסטוגרמה' ובחרו בריבוע הממוצע של שורש מעבר הצבע של מסיכה 1 ובערוץ 1 עבור ציר X. בחר את אוכלוסיית הסינגלט והגדר את השער לבחירה עבור תאים ממוקדים.פתחו התוויית היסטוגרמה ובחרו עוצמות פיקסלים מרביות גולמיות לערוץ שתיים, שבע ו-11 בציר X. לאחר מכן התאם את עוצמות הלייזר של 488 ננומטר, 405 ננומטר ו- 642 ננומטר לייזרים לערוץ שתיים, שבע ו -11 בהתאמה, כך שלכל פלואורוכרום יש ערך פיקסלים מקסימלי גולמי בין 100 ל -4, 000 כדי למנוע פיזור יתר. בחר את האוכלוסייה הממוקדת להקלטה ולחץ על רכוש כדי למדוד את דגימות DLBCL עם הגדרות עקביות.בעת שינוי דגימות למדידה, לחץ על חזור כדי לשחזר את צינור הדגימה. לחצו על 'טען' כדי למחוק את הדגימה. לאחר מדידת כל הדגימות, כבה את השדה הבהיר ופיזר לייזר.מדוד דגימות בקרת צבע בודדות כדי ליצור מטריצת פיצוי. לחץ על כיבוי כדי לסגור את מערכת ההדמיה. נתח את הנתונים בתוכנת ניתוח התמונות.השתמש בכלי Spot Wizard של תוכנת ניתוח התמונות כדי לספור ולכמת באופן אוטומטי מוקדי גמא H2AX גרעיניים ותמונות של תאים חיים. בחר שתי אוכלוסיות תאים, אחת עם ספירת נקודות גבוהה ואחת עם ספירת נקודות נמוכה כדי לאמן את אשף הספוט לניתוח אוטומטי נוסף של ספירת נקודות. שיטת הציטומטריה של זרימה בתמונות של תאים בודדים הראתה עלייה ב-C12-FDG חיובי, נגטיב EdU, גמא H2AX חיובי, אוכלוסייה סנסקית ו-KARPAS422.תאי WSU-DLCL2 ו-OCI-LY1, אך לא בתאי SU-DHL6. הניתוח מבוסס ההדמיה הציג מספרים גבוהים משמעותית של מוקדי גמא H2AX ו-KARPAS422, WSU-DLCL2 ו-OCI-LY1, אך לא בתאי SU-DHL6. תוצאות דומות היו מיוצגות על ידי נתוני תדירות וכימות.הוספת סאפונין לתרחיף התא היא חיונית, אחרת הנוגדנים אינם יכולים להגיע לאנטיגנים הפנימיים של התא ודטרגנטים קשים מובילים לאובדן אות C12-FTG הדמיה ציטומטריה אופטימלית לניתוח שינויים בלוקליזציה של סמנים כמו טרנסלוקציה של גורם שעתוק לגרעין בתגובה לגירויים מסוימים. ניתוח כזה יכול להיות מושגת גם עם הפרוטוקול שלנו. שיטה זו מאפשרת הדמיה של סמנים פלואורסצנטיים מרובים ברמה של תא יחיד המסייעת לזהות את הנוכחות, העוצמה והלוקליזציה של האותות הבודדים.

simultaneous-imaging-flow-cytometry-based-detection-multiple

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מדגים בדיקה מבוססת ציטומטריה של זרימה לכימות תאי סרטן מזדקנים הנגרמים על ידי טיפול עם סמני הזדקנות כפולים. הגילוי והכימות של תאים מזדקנים כרוכים בשימוש במצע β-גלקטוזידאז. המצע נבקע על ידי β-גלקטוזידאז ליזוזומלי פעיל בתוך התאים המזדקנים, ומייצר תוצר פלואורסצנטי אשר, בשילוב עם גרגרי ליפופוסצין אוטופלואורסצנטיים, מסמן את תאי הסרטן המזדקנים.

כימות מבוסס ציטומטריה של זרימה של תאי סרטן מזדקנים הנגרמים על ידי טיפול

סרטון זה מדגים טכניקת הדמיה מולטיספקטרלית פלואורסצנטית באתרה לניתוח תת-אוכלוסיות שונות של תאי T חודרים ברקמת הגידול. קריוסקציה של רקמת קרצינומה של תאי הכליה מטופלת בנוגדנים כדי לתייג תאי T CD8+ המבטאים קולטנים מעכבים ספציפיים ומציגים פנוטיפ עמיד לאימונותרפיה. החלק המסומן מוצג באמצעות מיקרוסקופ מולטיספקטרלי כדי לזהות את תת-האוכלוסיות השונות של תאי CD8+ T.

הדמיה אימונופלואורסצנטית מרובת משתתפים לניתוח תת-אוכלוסיות תאי T עמידים לאימונותרפיה

אם מונעת הזדקנות או מקדמת tumorigenesis נותר שנוי במחלוקת. מאז תרופות chemotherapeutical יכולות לגרום לתאים סרטניים להזדקן, לומד הזדקנות הוא חיוני למציעים טיפולים חדשים. עם זאת, assay β-גלקטוזידאז הסטנדרטי ומשמש באופן נרחב מציג חסרונות עיקריים. אנו מציעים כאן assay מבוסס זרימת cytometry מהירה ורגיש לכמת הזדקנות.

שיטה רגישה לכמת תאי סרטן senescent

מערכות פיצול פליטת מצלמה כפולה למיקרוסקופ פלואורסצנטי שני צבעים ליצור רצפי תמונה בזמן אמת עם רזולוציה אופטית ובזמן חריג, דרישה של מבחני תא חי מסוימים, לרבות מבחני זרימת צלחת קאמרית הידבקות מקבילות. כאשר תוכנה היא מועסק למזג תמונות מערוצי פליטה רכשו בו זמנית, רצפי תמונת pseudocolored מיוצרים.

במקביל לכידת תמונות בזמן אמת בשני ערוצי פליטה באמצעות מערכת פיצול כפולה מצלמה פליטה: יישומים לסלולריים הידבקות

הזדקנות תאית היא הגורם העיקרי בפיתוח של הפתווגיות הקשורות לגיל כרונית. זיהוי של הtherapeutics שתאי היעד מציגים הבטחה להרחבת הזדקנות בריאה. כאן, אנו מציגים את הבקשה הרומן על המסך לזיהוי של senotherapeutics מבוסס על מדידה של פעילות ביולוגית β-גלטוסידאז הקשורים בתאים בודדים.

א-β-גלטוסידאז-מבוסס על הקרנת ההקרנה לזיהוי תרופות הסאותרפיה

אנו מציגים שיטת הזרמה cy, כדי לזהות בו סוגי תאים שונים שאוחזרו ממוח העכבר או חוט השדרה. שיטה זו יכול להיות מנוצל כדי לבודד או לאפיין אוכלוסיות תאים טהורה במחלות ניווניות או לכמת את היקף המיקוד של התא על vivo ניהול של וקטורים ויראליות או חלקיקים.

אפיון מרובה של סוגי תאים שאוחזרו ממוח העכבר/חוט השדרה דרך שיטות הומוקות שונות

אנו מתארים שיטת הצביעה מהירה לביצוע הדמיה רב ספקטראלית על רקמות קפואות.

שיטה מהירה לדימות מרובה ספקטרלי של רקמות קפואות

פרוטוקול לכימות ציטומטרי פלואורסצנטי, זרימה של תאים סרטניים סנסנטיים המושרים על ידי תרופות כימותרפיות בתרבית תאים או במודלים של גידולי מורין. הליכים אופציונליים כוללים co-immunostaining, קיבוע דגימה כדי להקל על אצווה גדולה או ניתוח נקודת זמן, והעשרה של תאים senescent קיימא על ידי מיון ציטומטרי זרימה.

בדיקה פלואורסצנטית פלואורסצנטית β-גלקטוזידאז הקשורה לזיהוי והעשרה של תאי גידול סנסנטיים על ידי ציטומטריה של זרימה

אימונופלואורסצנציה מרובה מאפשרת תיוג רציף של מספר סמני נוגדנים בתוך חתך רקמה אחד כדי לתמוך בניתוח מרחבי של ארכיטקטורת הרקמה ואוכלוסיות התאים. כאן מוצגת זרימת עבודה לזיהוי מולטיפלקס של סמנים מבניים וחיסוניים הקשורים להזדקנות, הכוללת הכנת שקופיות ידנית ואוטומטית, הדמיה איטרטיבית וניתוח תאים בודדים באמצעות תוכנת פתולוגיה דיגיטלית.

מבחן אימונופלואורסצנציה מרובה לצורך הערכה מרחבית של סמני הזדקנות ב-vivo

פרוטוקול הקרנה יעילים מוצג לצורך זיהוי מולקולות קטנות המקדמים astroglial התמיינות בתאי גזע glioblastoma (GSCs). וזמינותו מבוסס על עיתונאי התמיינות תאי גזע לפיה הביטוי GFP משופרת (eGFP) הוא מונע על ידי האמרגן GFAP האנושית.

סמים מבוססי Cytometry זרימה מערכת הסינון לצורך זיהוי מולקולות קטנות המקדמים התמיינות של תאי גזע גליובלסטומה

למדו שיטת זרימה-ציטומטריה מתקדמת לזיהוי סמני סנסנציה מרובים בתאי DLBCL בודדים. השיטה מייצרת תמונות ברזולוציה גבוהה ומאפשרת ניתוח מרחבי וכימות אותות פלואורסצנטיים במהירות ובדייקנות.

הדמיה סימולטנית וזיהוי מבוסס זרימה-ציטומטריה של סמני סנסנציה פלואורסצנטיים מרובים בתאי סרטן סנסנטיים המושרים על ידי טיפול

גלה סרטונים נוספים