Name: סינתזה של ננו-גלים המגיבים לגירויים באמצעות קרוסלינקינג מימי חד-שלבי וקו-ננופילמריזציה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 26 s
Description: למד שיטת סינתזה חד-שלבית לננו-ג'לים טעוני חלבון בגודל מתחת ל-100 ננומטר בתנאי מים מתונים. שיטה זו שומרת על שלמות החומר הביולוגי ומתאימה למחקר משלוח תרופות ביולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. סינתזה של crosslinker מגיב חמצון-חיזור
<ol><li>הוסף 2-aminoethylmethacrylate hydrochloride (44.79 מ"ג, 0.270 mmol) ו 0.063 מ"ל של triethylamine ל 3 מ"ל של dichloromethane נטול מים ולאפשר לערבב במשך 20 דקות תחת גז אינרטי N2 בבקבוק 25 מ"ל עגול תחתית.</li>
	<li>להמיס 4,7,10,13,16,19,22,25,32,35,38,41,44,47,50,53-Hexadecaoxa-28,29-dithiahexapentacontanedioic acid di-N-succinimidyl ester (100 מ"ג, 0.045 mmol) ב 1 מ"ל של dichloromethane נטול מים ולהוסיף לצלוחית.</li>
	<li>מוסיפים 4 מ"ל של dichloromethane נטול מים לצלוחית. עוטפים את בקבוק התגובה ברדיד אלומיניום ומשאירים לערבב מתחת ל-N2 בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>אשר את היווצרות המוצר על-ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה. ודא הפניות נכונות לחומר המוצא תוך אישור היווצרות המוצר בשיטה זו.<ol><li>כרומטוגרפיה בשכבה דקה היא שיטה מבוססת זיקה המשמשת להפרדת תרכובות רצויות מתערובת התגובה. כאן, השתמש בצלחת סיליקה קוטבית מאוד סופג כמו שלב נייח. זהו את דגימת חומר המוצא ואת דגימת תערובת התגובה בקצה אחד של צלחת הסיליקה והניחו במאונך לתוך זכוכית סגורה עם האלואנט (שלב נייד: 5% מתנול: דיכלורומתאן).</li>
		<li>על ידי פעולה נימית, הפאזה הניידת נעה במעלה לוח הסיליקה ותרכובות הדגימה נודדות למרחקים משתנים בהתאם לזיקתן לשלב הנייח והנייד. כאשר חזית הממס חצתה 3/4מהצלחת , הסר את הצלחת וייבש אותה. התרכובות המופרדות מופיעות ככתמים על הלוח. כמת את גורם השימור (Rf) של התרכובת הרצויה כמרחק שעבר התרכובת/מרחק שעבר הממס. כאן, Rf של המוצר היה 0.35. אור UV או מכתים ניתן להשתמש כדי לדמיין את כתמים (permanganate אשלגן).</li>
	</ol></li>
	<li>רכזים את התערובת בוואקו ומטהרים באמצעות כרומטוגרפיה של עמוד הבזק (תערובת איזוקרטית של 5% מתנול: דיכלורומתאן)36. הכניסו את תערובת התגובה לחלק העליון של עמוד זכוכית עמוס בסיליקה (פאזה נייחת) ולאחר מכן נמלטו עם מערכת הממס (פאזה ניידת)36. אסוף את כל השברים והבדיקה באמצעות TLC כדי להבחין בין שברי המוצר באמצעות ערך Rf שנקבע קודם לכן.</li>
	<li>רכז את השברים המטוהרים על ידי אידוי הממס באמצעות מאייד סיבובי (טמפרטורה: 40 מעלות צלזיוס), הגדר את לחץ הוואקום ללחץ אטמוספרי כדי להסיר תחילה דיכלורומתאן רותח נמוך יותר. כאשר רמת הממס מפסיקה לרדת, הגדר את לחץ הוואקום ל -337 mbar כדי להסיר מתנול ולהשיג שמן צהוב בהיר, אשר לאחר מכן יהיה נתון לאפיון נוסף כדי לאשר היווצרות המוצר37.</li>
	<li>בצע ניתוח פורייה טרנספורמציה אינפרא אדום (FT-IR)38, 1H NMR (בדימתיל-סולפוקסיד deuterated (DMSO-d 6))39, 13C NMR39 וניתוח זמן ספיחה/יינון לייזר בסיוע מטריצה (MALDI-ToF)40 כדי לאשר את היווצרות המוצר לפני ביצוע השלבים הבאים.<ol><li>לניתוח FT-IR, יש להעמיס 1 מ"ג של השמן על המכשיר כדי לקבל את הספקטרה.</li>
		<li>עבור ניתוחי NMR, יש להמיס מחדש 10 מ"ג של המוצר ב-0.75 מ"ל של ממס ה-NMR הרלוונטי, להעביר לצינור NMR ולאטום היטב כדי למנוע דליפה. טען את הדגימה על מכשיר NMR, ולאחר מכן הספקטרום מתקבל39.</li>
		<li>לניתוח ספקטרומטריית מסות, חותמים 1 מ"ג של המוצר בבקבוקון, מתמוססים ב- DMSO ומעמיסים על המכשיר. הערה: ניתוח אינפרא אדום מספק מידע לגבי הקבוצות הפונקציונליות העיקריות במוצר הרצוי, כלומר מתיחות קרבוניל (C=O) המזוהות על ידי השיא החד ב 1650 cm-1 מציין את היווצרות הקשר amide, ובכך מדגיש היווצרות המוצר. ה- 1H NMR וה- 13C מספקים מידע על הסביבה הכימית ובכך ניתן להשתמש בהם כדי לקבוע את ההרכב הכימי של המוצר הרצוי באמצעות זיהוי סביבות כימיות הקיימות בתרכובת. לבסוף, השימוש בספקטרומטריית מסות יכול לאמת את המסה המדויקת של המוצר הרצוי.</li>
	</ol></li>
</ol>2. בדיקת מחשוף של קרוסלינקר דיסולפיד עם גלוטתיון
<ol><li>יש לדגור על הקרוסלינקר דיסולפיד (לריכוז סופי של 4.55 מ"ג/מ"ל) עם החומר המחזר גלוטתיון (סופי [GSH]: 10 מ"ל), לנפח סופי של 1 מ"ל, למשך 24 שעות בבקבוקון זכוכית של 1.5 מ"ל.</li>
	<li>כדי לאשר את המחשוף של המקשר דיסולפיד, שלח את הבקבוקון לניתוח MALDI-ToF26,40.</li>
</ol>3. סינתזת ננו-ג'ל המגיבה לחמצון-חיזור
<ol><li>ודא שכל כלי הזכוכית שישמשו לתגובה נקיים מאבק על ידי שטיפה במים מסוננים (0.20 מיקרומטר) שעברו דה-יוניזציה ולאחר מכן ייבוש כלי הזכוכית באמצעות אוויר דחוס שניתן לגשת אליו דרך כלי השירות לאוויר דחוס בצד האדים. חבר פייה מאובטחת לשקע האוויר הדחוס כדי להקל על הנגישות. החזק את הבקבוקון היטב ומקם את הזרבובית לתוכו. הפעל את האוויר הדחוס, שחרור זרם מבוקר לתוך הבקבוקון. יש לבחון את התהליך כדי להבטיח ייבוש יעיל, ולבדוק אם נותרו מזהמים או לחות.</li>
	<li>הכינו בקבוקון זכוכית של 10 מ"ל על ידי מילויו במים נטולי יונים, ואטמו את הבקבוק במחיצת גומי. נטרלו את החמצן של המים על ידי בעבוע N2 דרכם במשך 30 דקות לפחות לפני תחילת התגובה. כדי לעשות זאת, למלא בלון עם גז N2 ולחבר מחט לבלון; הניחו אותו על המחיצה והשתמשו במחט כדי לחדור את מחיצת הגומי ולאפשר זרימת N2 . חבר מחט יציאה לבקבוק כדי להבטיח זרימה קבועה של N2.</li>
	<li>יש להמיס אלבומין בסרום בקר (BSA; 2 מ"ג, 30 ננומול) או BSA עם תווית Cy7 (2 מ"ג, 30 ננומול) ב-1 מ"ל של מים נטולי חמצון ולהוסיף לבקבוקון זכוכית נקי אחר של 10 מ"ל.</li>
	<li>הוסף [2-(acryloyloxy)ethyl]trimethylammonium כלוריד (AETC) פתרון (12.00 מ"ג / 10.86 μL, 0.060 mmol ) לבקבוק ואטם אותו באמצעות מחיצת גומי אחרת. יש לוודא שתערובת התגובה נשמרת תחת זרימה קבועה של גז N2 ולערבב במשך 30 דקות.</li>
	<li>ממיסים אקרילאמיד (9.21 מ"ג, 0.13 מילימול) ב 1 מ"ל של מים deionized deoxygenated ולהוסיף לתערובת בבקבוקון.</li>
	<li>להמיס crosslinker דיסולפיד (4.44 מ"ג, 0.004 mmol) ב 1 מ"ל של מים deionized ולהוסיף לתערובת בבקבוקון. שוטפים את התערובת בגז N2 למשך 20 דקות.</li>
	<li>ממיסים סודיום דודציל סולפט (2 מ"ג, 0.007 מילימול) ב-1 מ"ל מים נטולי חמצן ומוסיפים לתערובת באמצעות מזרק סמוק גז N2 ומערבבים את התערובת במשך 30 דקות. הערה: על ידי שטיפת המזרק עם N2 אנו ממזערים את החשיפה של תערובת התגובה לחמצן באטמוספירה אשר יכול לעכב את תגובת פילמור רדיקלי.</li>
	<li>הוסף N,N,N',N'-TETRAMETHYLETHYLENEDIAMINE (1.5 μL, 0.010 mmol) ותן לתערובת התגובה deoxygenate במשך 3 דקות תחת גז N2 .</li>
	<li>להמיס אמוניום persulfate (1 מ"ג, 0.004 mmol) ב 1 מ"ל של מים deoxygenated deionized ולהוסיף לתערובת התגובה. ודא כי גז N2 מבעבע דרך תערובת התגובה במשך 10 דקות. הערה: אם שלב החיבור N2 מושמט, סביר להניח שייווצרו חלקיקים לבנים בצלוחית התגובה. מדובר בחלקיקים ו/או אגרגטים גדולים יותר שיכולים לבלבל כל אפיון נוסף.</li>
	<li>אטמו את הבקבוק תחת אטמוספירה N2 והשאירו לערבוב במשך 3 שעות ו-30 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>כדי לסיים את התגובה, להסיר את החותם מן הבקבוק ולתת את תערובת התגובה לערבב לפחות 10 דקות. זה יחשוף את תערובת התגובה לרמות אטמוספריות של גז O2 , אשר לאחר מכן ירווה את כל הרדיקלים שנותרו בתערובת התגובה. התגובה מסתיימת כאשר התערובת מקבלת מראה אטום כחול ברור.</li>
	<li>על מנת לטהר את הננו-ג'לים, הוסף את תערובת התגובה ליחידת מסנן צנטריפוגלית של 15 מ"ל (100 kDa MWCO) והוסף מים נטולי יונים, כדי למלא את היחידה הצנטריפוגלית. צנטריפוגה את תערובת התגובה ב 1000 x גרם במשך 10 דקות. פעולה זו תסיר כימיקלים שלא הגיבו (או מטען לא מכוסה) הקטנים מ-100 kDa ותרכז את דגימת הננו-ג'ל.</li>
	<li>ברגע שמפלס המים ביחידה הצנטריפוגלית יורד, מוסיפים 2 מ"ל מים שעברו דה-יוניזציה כדי לדלל את דגימת הננו-ג'ל וצנטריפוגה כדי לרכז את המוצר. חזור על שלב זה 3x.</li>
	<li>אחסנו את הדגימה בטמפרטורה של 2-8°C כדי למנוע את התפרקות החלבון העטוף.</li>
	<li>בצע ניתוח FT-IR ו- 1H NMR (בדימתיל סולפוקסיד מנוטרל (DMSO-d6)) כדי לאשר פילמור39,41. כדי להכין את הדגימה, יבש בהקפאה 1 מ"ל של תמיסת ננוג'ל בבקבוקון 1.5 מ"ל. תהליך הייבוש בהקפאה כולל הקפאת הדגימה ולאחר מכן מריחת ואקום כדי להסיר את הממס הקפוא באמצעות סובלימציה, תוך השארת שאריות אבקה. לאחר ייבוש בהקפאה, יש להמיס מחדש את הדגימה בממס ה-NMR הרלוונטי, להעביר לצינור NMR ולאטום אותה היטב. טען את הדגימה למכונת NMR, כמתואר לעיל39. עבור ניתוח FT-IR, יש להעמיס 1 מ"ג של האבקה היבשה על המכשיר כדי לקבל את הספקטרה.</li>
</ol>4. אפיון מורפולוגי ננוג'ל
<ol><li>פיזור אור דינמי (DLS) הערה: קוטר הידרודינמי (nm), אינדקס polydispersity (PI) ופוטנציאל zeta נמדדו ב- 25 ° C, אורך גל לייזר 632.8 ננומטר וגלאי אותות 173° באמצעות מכונת DLS. בכל ריצה נמדדו 25 מחזורי סריקה משנה.<ol><li>מדידת גודל הידרודינמי (nm)<ol><li>הכינו קובטה או תא נימי מקופל חד פעמי על ידי ניקויו במים מסוננים שעברו דה-יוניזציה. נשפו אוויר דחוס לתוך הקובטה (מתאים למדידות פוטנציאליות של DLS וזטה) כדי להבטיח שהיא נקייה מחלקיקי אבק גדולים.</li>
			<li>ממלאים את הקובטה בלפחות 50-100 μL של הדגימה ומדללים ב 750-1000 μL של מים מסוננים deionized. בעת השימוש בקובט פוטנציאלי zeta, ודא כי cuvette כבר מלא דגימה ללא היווצרות בועות, אשר יכול להפריע מדידות.</li>
			<li>שים את הקובט בתוך מכשיר DLS, ודא שהוא הוכנס כראוי. לשם כך, פתח את מכסה תא הדגימה של מכשיר ה-DLS. החזק את הקובטה בקצוות העליונים שלה כדי למנוע טביעות אצבע על החלונות האופטיים. ודא שהקובטה יושבת כראוי במחזיק הקובט וודא שהיא ישרה ומיושרת עם הנתיב האופטי של המכשיר. סגור את תא הדגימה כדי למנוע הפרעות לאור הסביבה. הערה: מדיית הדילול מסוננת באמצעות מסנן מזרק בגודל נקבוביות 0.45 מיקרומטר.</li>
			<li>לחץ כדי להתחיל את מדידת גודל החלקיקים בתוכנת מכונת DLS הרלוונטית.</li>
			<li>בחר את התוצאות המתאימות למדגם כדי לקבל את ממוצע z (גודל חלקיקים ממוצע), PI ממוצע, ספירת קילו לשנייה (kcps), פוטנציאל zeta וגרפיקה רלוונטית. ודא שפונקציית המתאם מציגה עקומה סיגמואידית חלקה, מכיוון שהדבר מצביע על מדגם אחיד.</li>
			<li>לאחר השלמת הניתוח, הסר את הקובטה מה- DLS.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>מיקרוסקופ אלקטרונים תמסורת (TEM)<ol><li>הכן דגימות על ידי הנחת 10 μL של תמיסת ננו-חלקיקים (0.077 מ"ג / מ"ל) על רשתות נחושת מצופות פחמן. יש לייבש באוויר בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת.</li>
		<li>יש לשטוף את הרשתות במים מסוננים ולכתם עם 5 מיקרוליטר של אורניל אצטט מסונן 1% במים למשך 2 דקות.</li>
		<li>לאחר השריית חומר הצביעה העודף בנייר פילטר, יבשו את הרשתות למשך הלילה בטמפרטורת החדר. צלם תמונות TEM למחרת בהגדלה של 45,000x באמצעות מצלמת שדה בהיר.</li>
		<li>השתמש בתוכנה שסופקה לעיבוד תמונה (רזולוציה: 2048 x 2048 פיקסלים).</li>
	</ol></li>
</ol>5. כימות של חלבון (BSA) עטוף בתוך ננו-ג'ל באמצעות בדיקת חומצה מיקרו-ביכונכונית (BCA)
<ol><li>על פי פרוטוקול בדיקת microBCA (שניתן באתר היצרן), נוצר עקומה סטנדרטית המבוססת על ריכוז חלבוןמוגדר מראש 42.</li>
	<li>לאחר הסינתזה שלהם, לטהר את הננו-ג'לים העוטפים את החלבון באמצעות יחידות מסנן צנטריפוגלי של 15 מ"ל עם MWCO של 100 kDa (1000 x גרם, 10 דקות) כמתואר בשלבים 3.12-3.14.</li>
	<li>לאסוף את התסנין ולנתח באמצעות בדיקת microBCA (פרוטוקול זמין באתר האינטרנט של היצרן). מדוד את הספיגה ב- 562 ננומטר באמצעות קורא לוחות. מכיוון שמדידה זו מתואמת עם ריכוז החלבון הלא עטוף, קבעו את מסת החלבון העטוף. כדי לחשב את יעילות האנקפסולציה (EE) %, השתמש במשוואה הבאה: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63981/63981eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>6. כימות שחרור חלבונים מננו-ג'לים בנוכחות גלוטתיון
<ol><li>לדגור 200 μL של 5 מ"ג/מ"ל של ננו-ג'לים טעונים Cy7BSA עם 200 μL של 10 mM גלוטתיון (GSH) ביחידות מסנן צנטריפוגלי 0.5 מ"ל (100 kDa MWCO). מקם את יחידות המסנן באמבט מים כדי לשמור על הטמפרטורה ב 37 °C (77 °F).</li>
	<li>צנטריפוגה ב 1000 x גרם במשך 3 דקות כל 10 דקות לפחות 1 שעה - ואז כל 2-8 שעות.</li>
	<li>לאסוף את התסנין ולהשתמש לניתוח נוסף. שמור על נפח המסנן בתוך יחידות המסנן הצנטריפוגלי על 500 μL על ידי הוספת מים נטולי יונים, או PBS.</li>
	<li>מדדו את כמות החלבון בתסנין על ידי התייחסות לעקומה סטנדרטית עבור ננו-ג'לים עמוסי Cy7BSA, שם נמדדה ספיגת החלבון הפלואורסצנטי באמצעות מכשיר ננו-טיפה ב-750 ננומטר. הערה: ניתן לחשב עקומה סטנדרטית זו על ידי הכנת דילולים סדרתיים של Cy7BSA בטווח של 0 מ"ג/מ"ל עד 2 מ"ג/מ"ל. ערכים המתקבלים מהננו-טיפה ניתנים לאינטרפולציה כנגד עקומת כיול זו כדי לקבוע את יעילות האנקפסולציה.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><חזק>כימיקלים</חזקים></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2-( אקרילואילוקסי)אתיל]תמיסת טרימתילאמוניום כלוריד&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>496146</td><td></td></tr><tr><td>2-אמינואתיל מתקרילטהידרוכלוריד&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>516155</td><td></td></tr><tr><td>4,7,10,13,16,19,22,25,32,35,38,41, 44,47,50,53-Hexadecaoxa-28,29-dithiahexapentacontanedioic acid di-N-succinimidyl ester&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>671630</td><td></td></tr><tr><td>אקרילאמיד</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>23701</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום פרסולפט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>248614</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>B6917</td><td></td></tr><tr><td>Cy7- מסומן אלבומין סרום בקר</td><td>Nanocs</td><td>BS1-S7-1</td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד דוטראט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>547239</td><td></td></tr><tr><td>דיכלורומתאן</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>270997 (נטול מים) ו-D65100</td><td></td></tr><tr><td>גלוטתיון</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>G4251</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>411019</td><td></td></tr><tr><td>פוספט מלח חומצי&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>436143</td><td></td></tr><tr><td>טריאתילאמין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>471283</td><td></td></tr><tr><td>אורניל אצטט</td><td>אגר סיינטיפיק&nbsp;</td><td>AGR1260A</td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד הדרוש לסינתזה ואפיון ננו-ג'ל </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon יחידות סינון צנטריפוגליות אולטרה-15 (100kDa MWCO)&nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>C7715</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה</td><td>אולימפוס&nbsp;</td>רשתות נחושת מצופות פחמן של <td>Veleta</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Agar Scientific&nbsp;</td>צינורות דיאליזה <td>AGS160</td><td></td></tr><tr><td>(100kDa MWCO)</td><td>ספקטרום מעבדות</td><td>11405949</td><td></td></tr><tr><td>פיזור אור דינמי&nbsp;</td><td>מלברן&nbsp;</td><td>מייבש Zetasizer Nano Ultra</td><td></td></tr><tr><td>Freeze</td><td>Labconco</td><td>WZ-03336-01</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרוסקופיה אינפרא אדום</td><td>Agilent&nbsp;</td><td>תוכנת Cary 630 FTIR</td><td></td></tr><tr><td>iTEM</td><td>אולימפוס&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטריית מסה</td><td>, מיקרו-מסה מים,</td><td>MALDI microMX, MALDI, Q-ToF&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מסנן ממברנה MF-MilliporeTM (0.45/0.2&mu; m גודל נקבוביות)</td><td>Merck Millipore, בריטניה</td><td>HAWP04700, GSWP04700&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת חלבון מיקרו BCA</td><td>ThermoFisher</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>קורא צלחות</td><td>בקמן</td><td>קולטר-פרדיגמה</td><td></td></tr><tr><td>נתוני תהודה מגנטית גרעינית פרוטון ופחמן-13</td><td>Bruker</td><td>400MHz AV-400 NMR ספקטרומטר</td><td></td></tr><tr><td>מאייד סיבובי&nbsp;</td><td>בוצ'י&nbsp;</td><td>R-114 מערכת</td><td></td>Vap סיבובית</tr><tr><td>מחטים חד פעמיות&nbsp;</td><td>Sterican</td><td>4665643</td><td></td></tr><tr><td>Suba-Seal&nbsp; מחיצה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>Z124575</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אלקטרונים שידור</td><td>פיליפס&nbsp;</td><td>ס"מ 100 TEM&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר UV-vis</td><td>Nanodrop Nanodrop</td><td>One/One C מיקרו-נפח&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

סינתזה של ננו-ג'לים המגיבים לגירויים באמצעות קרוסלינקינג מימי חד-שלבי וקו-ננופילמריזציה

Synthesis of Stimuli-responsive Nanogels using Aqueous One-step Crosslinking and Co-nanopolymerization

סינתזה ואפיון של פולי(אתילן גליקול) (PEG) דיסולפיד דיאקרילט crosslinker הקרוסלינקר המגיב לחמצון-חיזור סונתז על-ידי החלפה נוקלאופילית של אסטר N-הידרוקסיסוקסינימיד (NHS) על-ידי 2-אמינואתיל מתקרילט באמצעות יצירת קישור אמיד (איור 1). הסינתזה של המוצר הנדרש אומתה בעיקר על ידי 1H NMR (איור משלים 1), שבוצע על ידי המסת דגימת המוצר ב- DMSO deuterated, כאשר השילוב של התהודה המתאימה ליחידות האתילן של שרשראות ה- PEG ב- δ3.48-3.53 והשלישיות המתאימות ל...

Nanogels consisting of crosslinked-polymeric nanoparticles have been developed for the delivery of numerous chemical and biological therapeutics, owing to ...

synthesis-stimuli-responsive-nanogels-using-aqueous-one-step

Research

JoVE Journal

Chemistry

כימיה

מאמר זה מתאר שיטה nanoprecipitation לסנתז פולימר מבוסס חלקיקים באמצעות diblock שיתוף פולימרים. אנו נדון את הסינתזה של diblock שיתוף פולימרים, הטכניקה nanoprecipitation, יישומים פוטנציאליים.

גיבוש חלקיקים פולימריים Diblock באמצעות טכניקה Nanoprecipitation

המעבדה שלנו פיתחה הידרוג-crosslinked DNA polyacrylamide, מערכת הידרוג'ל דינמית, כדי להבין טוב יותר את ההשפעות של ויסות רקמות נוקשות על תפקוד תא. כאן, אנו מספקים שרטוטים, תיאור, ופרוטוקולים להכנת הידרוג אלה.

הכנת-crosslinked DNA polyacrylamide הידרוג

אנו מציגים פרוטוקול לסינתזה של מיקרו-הידרוג'לים של Janus המורכבים כולו מאותו חומר בסיס, poly(N-isopropylacrylamide) (PNIPAAm), עם בסיס מבנה ממודר בבירור על הפרדת הפאזה של תמיסת מונומר NIPAAm סופר-רוויה. המיקרו-הידרוג'לים המסונתזים של Janus מראים תכונות ייחודיות כגון היענות תרמו-אניזוטרופית ויכולת העמסה אורגנופילית/הידרופילית.

סינתזה של פולי (<em&gt; N</em&gt; -isopropylacrylamide) יאנוס Microhydrogels בשל חוסר תגובה Thermo אניזוטרופי ו Organophilic / טוען הידרופיליות יכולת

אנו מדווחים על פרוטוקולים ל"פילמור" סוגים שונים של ננו-חלקיקי מתכת עטופים בפולימר לשרשראות ארוכות של "הומו-" ו"קו-פולימרים".

באמצעות Polystyrene-<em&gt; בלוק</em&gt; -poly (חומצה אקרילית) -coated מתכת חלקיקים כמו מונומרים להומו- ושיתוף פילמור

פילמור ממטרים ללא עוררה מספק גישה אבי טיפוס ודגמים, לשחזור לסינתזה של פולי גירויים רגיש (-isopropylacrylamide N) microgels של התפלגות גודל הצרה. בסינתזה בפרוטוקול זה, אפיון פיזור אור ומעקב קרינת חלקיק בודד של microgels אלה או בהתקנה של מיקרוסקופיה רחב בתחום הם הפגינו.

סינתזה מבוקרת מעקב הקרינה של פולי אחיד מאוד (<em&gt; N</em&gt; -isopropylacrylamide) Microgels

פרוטוקולים מתוארים להרכבת מתכלה thermoresponsive hydrogels מבוסס על hydrazone cross-linking של oligomers פולימריים על הסולם בתפזורת, microscale, ו ננו, והשני עבור הכנת ג'ל חלקיקים והן nanofibers.

בדיית Thermoresponsive Hydrogels מתכלה-פיסיקליות מרובים באמצעות שחול תגובתי, מיקרופלואידיקה, הרכבה עצמית, Electrospinning

מאמר זה מתאר תהליך עבור כוונון הצפיפות crosslinking ובגודל של covalently תפור חלקיקים מן ליניארית אחרים-פולימרים וסופולימרים המכיל פונקציונליות תליון. על-ידי התאמת הפרמטרים סינתזה (משקל מולקולרי פולימר, תליון פונקציונליות התאגדות, ושווי crosslinker), צפיפות crosslinking ובגודל הרצויים ננו-חלקיק יכולה להיות מושגת ליישומים משלוח סמים.

Nanosponge Tunability ב גודל וצפיפות Crosslinking

פרוטוקול זה מתאר את הסינתזה והניסוח של ביו-חומרים הידרוג'ל הידרוג'ל להזרקה, סופראמולקולריים (PNP). יישומים של חומרים אלה לאספקת תרופות, ייצוב ביופארמה, אנקפסולציה של תאים ואספקה מודגמים.

הידרוג'ל פולימר-ננו-חלקיקי להזרקה עבור יישומי אספקת תאים ותרופות

פרוטוקול זה מתאר סדרה של שיטות לסינתזה של אבני הבניין של המיקרוג'ל עבור פיגומים של חלקיקים חישוליים מיקרו-נקבוביים, אשר יכולים לשמש למגוון יישומי רפואה רגנרטיבית.

סינתזה מיקרופלואידית של אבני בניין מיקרוג'ל עבור פיגום חלקיקים מחושלים מיקרו-נקבוביים

סינתזה, הפעלה, ואפיון של חומרי מסגרת מתכת אורגנית במכוון נועדו הוא מאתגרת, במיוחד כאשר אבני בניין הוא הפולימורפים לא תואמים או לא רצויים הם העדיפו thermodynamically על צורות הרצויות. אנו מתארים כיצד יישומים של שער סייע ממס מקשר, עקיפה X-ray אבקה בנימים והפעלה באמצעות CO 2 ייבוש סופר קריטי, יכולים לתת מענה לחלק מהאתגרים האלה.

מסגרות סינתזה ואפיון של פונקציונליות מתכת אורגנית

למד שיטת סינתזה חד-שלבית לננו-ג'לים טעוני חלבון בגודל מתחת ל-100 ננומטר בתנאי מים מתונים. שיטה זו שומרת על שלמות החומר הביולוגי ומתאימה למחקר משלוח תרופות ביולוגיות.

סינתזה של ננו-ג'לים המגיבים לגירויים באמצעות קרוסלינקינג מימי חד-שלבי וקו-ננופילמריזציה

גלה סרטונים נוספים