Name: מדריך לבחינת היווצרות שומן תוך שרירי ומקורו התאי בשרירי השלד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: למדו פרוטוקול לוויזואליזציה וכימות שומן תוך שרירי בשלד באמצעות הזרקת גליצרול וקיבוע PFA. שיטה זו מאפשרת חקר מקורות תאיים של שומן ופיתוח טיפולים למחלות שריר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לחברי מעבדת קופנקה על שסייעו באיסוף נתונים ובקריאה ביקורתית של כתב היד. אנו מודים גם לחברי המכון למיולוגיה באוניברסיטת פלורידה על התשומות החשובות שלהם על כתב היד. העבודה נתמכה על ידי מענק NIH 1R01AR079449. איור 2 נוצר עם Biorender.

<ol><li>Milad, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+plasma+lipid+levels+exacerbate+muscle+pathology+in+the+mdx+mouse+model+of+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Increased plasma lipid levels exacerbate muscle pathology in the mdx mouse model of Duchenne muscular dystrophy.</a> Skeletal Muscle. 7 (1), 19(2017).</li>
<li>Goodpaster, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+regional+body+fat+distribution%2C+and+the+metabolic+syndrome+in+older+men+and+women%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Obesity, regional body fat distribution, and the metabolic syndrome in older men and women.</a> Archives of Internal Medicine. 165 (7), 777-783 (2005).</li>
<li>Goodpaster, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+regional+adipose+tissue+distribution+and+both+type+2+diabetes+and+impaired+glucose+tolerance+in+elderly+men+and+women%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Association between regional adipose tissue distribution and both type 2 diabetes and impaired glucose tolerance in elderly men and women.</a> Diabetes Care. 26 (2), 372-379 (2003).</li>
<li>Goodpaster, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+loss+of+skeletal+muscle+strength%2C+mass%2C+and+quality+in+older+adults%3A+the+health%2C+aging+and+body+composition+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journals+of+Gerontology%2C+Series+A%3A+Biological+Sciences+and+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The loss of skeletal muscle strength, mass, and quality in older adults: the health, aging and body composition study.</a> The Journals of Gerontology, Series A: Biological Sciences and Medical Sciences. 61 (10), 1059-1064 (2006).</li>
<li>Goodpaster, B. H., Thaete, F. L., Kelley, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thigh+adipose+tissue+distribution+is+associated+with+insulin+resistance+in+obesity+and+in+type+2+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Thigh adipose tissue distribution is associated with insulin resistance in obesity and in type 2 diabetes mellitus.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 71 (4), 885-892 (2000).</li>
<li>Goodpaster, B. H., Theriault, R., Watkins, S. C., Kelley, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+lipid+content+is+increased+in+obesity+and+decreased+by+weight+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Intramuscular lipid content is increased in obesity and decreased by weight loss.</a> Metabolism. 49 (4), 467-472 (2000).</li>
<li>Burakiewicz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+fat+replacement+of+muscle+by+quantitative+MRI+in+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Quantifying fat replacement of muscle by quantitative MRI in muscular dystrophy.</a> Journal of Neurology. 264 (10), 2053-2067 (2017).</li>
<li>Murphy, W. A., Totty, W. G., Carroll, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+of+normal+and+pathologic+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Roentgenology%22%5BJournal%5D)">MRI of normal and pathologic skeletal muscle.</a> American Journal of Roentgenology. 146 (3), 565-574 (1986).</li>
<li>Willcocks, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+longitudinal+study+of+magnetic+resonance+biomarkers+in+a+large+duchenne+muscular+dystrophy+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective longitudinal study of magnetic resonance biomarkers in a large duchenne muscular dystrophy cohort.</a> Annals of Neurology. 79 (4), 535-547 (2016).</li>
<li>Wokke, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+MRI+and+strength+measurements+in+the+assessment+of+muscle+quality+in+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscular+Disorders%22%5BJournal%5D)">Quantitative MRI and strength measurements in the assessment of muscle quality in Duchenne muscular dystrophy.</a> Neuromuscular Disorders. 24 (5), 409-416 (2014).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skeletal Muscle. 11 (1), 16(2021).</li>
<li>El Agha, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+fibrotic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in fibrotic disease.</a> Cell Stem Cell. 21 (2), 166-177 (2017).</li>
<li>Joe, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Liu, W., Liu, Y., Lai, X., Kuang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+adipose+is+derived+from+a+non-Pax3+lineage+and+required+for+efficient+regeneration+of+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Intramuscular adipose is derived from a non-Pax3 lineage and required for efficient regeneration of skeletal muscles.</a> Developmental Biology. 361 (1), 27-38 (2012).</li>
<li>Scott, R. W., Arostegui, M., Schweitzer, R., Rossi, F. M. V., Underhill, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hic1+defines+quiescent+mesenchymal+progenitor+subpopulations+with+distinct+functions+and+fates+in+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Hic1 defines quiescent mesenchymal progenitor subpopulations with distinct functions and fates in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Stem Cell. 25 (6), 797-813 (2019).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> Journal of Cell Science. 124, Pt 21 3654-3664 (2011).</li>
<li>Hogarth, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroadipogenic+progenitors+are+responsible+for+muscle+loss+in+limb+girdle+muscular+dystrophy+2B%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Fibroadipogenic progenitors are responsible for muscle loss in limb girdle muscular dystrophy 2B.</a> Nature Communications. 10 (1), 2430(2019).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 143-152 (2010).</li>
<li>Stumm, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odd+skipped-related+1+%28Osr1%29+identifies+muscle-interstitial+fibro-adipogenic+progenitors+%28FAPs%29+activated+by+acute+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Odd skipped-related 1 (Osr1) identifies muscle-interstitial fibro-adipogenic progenitors (FAPs) activated by acute injury.</a> Stem Cell Research. 32, 8-16 (2018).</li>
<li>Kopinke, D., Roberson, E. C., Reiter, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciliary+Hedgehog+signaling+restricts+injury-induced+adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Ciliary Hedgehog signaling restricts injury-induced adipogenesis.</a> Cell. 170 (2), 340-351 (2017).</li>
<li>Huang, Y., Das, A. K., Yang, Q. Y., Zhu, M. J., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zfp423+promotes+adipogenic+differentiation+of+bovine+stromal+vascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Zfp423 promotes adipogenic differentiation of bovine stromal vascular cells.</a> PLoS One. 7 (10), 47496(2012).</li>
<li>Sun, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGFR%CE%B1+regulated+by+miR-34a+and+FoxO1+promotes+adipogenesis+in+porcine+intramuscular+preadipocytes+through+Erk+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">PDGFRα regulated by miR-34a and FoxO1 promotes adipogenesis in porcine intramuscular preadipocytes through Erk signaling pathway.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (11), 2424(2017).</li>
<li>Te, L. J. I., Doherty, C., Correa, J., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification%2C+isolation%2C+and+characterization+of+fibro-adipogenic+progenitors+%28FAPs%29+and+myogenic+progenitors+%28MPs%29+in+skeletal+muscle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Identification, isolation, and characterization of fibro-adipogenic progenitors (FAPs) and myogenic progenitors (MPs) in skeletal muscle in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (172), e61750(2021).</li>
<li>Lukjanenko, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+disrupts+muscle+stem+cell+function+by+impairing+matricellular+WISP1+secretion+from+fibro-adipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging disrupts muscle stem cell function by impairing matricellular WISP1 secretion from fibro-adipogenic progenitors.</a> Cell Stem Cell. 24 (3), 433-446 (2019).</li>
<li>Santini, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+PDGFRalpha%28%2B%29+progenitor+cells+contribute+to+fibrosis+versus+healing+in+a+context-+and+spatiotemporally+dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident PDGFRalpha(+) progenitor cells contribute to fibrosis versus healing in a context- and spatiotemporally dependent manner.</a> Cell Reports. 30 (2), 555-570 (2020).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+PDGFRalpha%2B+mesenchymal+progenitors+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of PDGFRalpha+ mesenchymal progenitors in human skeletal muscle.</a> Cell Death & Disease. 5, 1186(2014).</li>
<li>Wosczyna, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+are+required+for+regeneration+and+homeostatic+maintenance+of+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells are required for regeneration and homeostatic maintenance of skeletal muscle.</a> Cell Reports. 27 (7), 2029-2035 (2019).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+potential+of+Hic1-expressing+cardiac+stromal+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic potential of Hic1-expressing cardiac stromal progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Chung, M. I., Bujnis, M., Barkauskas, C. E., Kobayashi, Y., Hogan, B. L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche-mediated+BMP%2FSMAD+signaling+regulates+lung+alveolar+stem+cell+proliferation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Niche-mediated BMP/SMAD signaling regulates lung alveolar stem cell proliferation and differentiation.</a> Development. 145 (9), Cambridge, England. (2018).</li>
<li>Hilgendorf, K. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omega-3+fatty+acids+activate+ciliary+FFAR4+to+control+adipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Omega-3 fatty acids activate ciliary FFAR4 to control adipogenesis.</a> Cell. 179 (6), 1289-1305 (2019).</li>
<li>Waisman, A., Norris, A. M., Elías Costa, M., Kopinke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+and+unbiased+segmentation+and+quantification+of+myofibers+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Automatic and unbiased segmentation and quantification of myofibers in skeletal muscle.</a> Scientific Reports. 11 (1), 11793(2021).</li>
<li>Kang, S. H., Fukaya, M., Yang, J. K., Rothstein, J. D., Bergles, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2%2B+CNS+glial+progenitors+remain+committed+to+the+oligodendrocyte+lineage+in+postnatal+life+and+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NG2+ CNS glial progenitors remain committed to the oligodendrocyte lineage in postnatal life and following neurodegeneration.</a> Neuron. 68 (4), 668-681 (2010).</li>
<li>Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Developmental Biology. 1, 4(2001).</li>
<li>Lukjanenko, L., Brachat, S., Pierrel, E., Lach-Trifilieff, E., Feige, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+reveals+that+transient+adipogenic+activation+is+a+hallmark+of+mouse+models+of+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling reveals that transient adipogenic activation is a hallmark of mouse models of skeletal muscle regeneration.</a> PLoS One. 8 (8), 71084(2013).</li>
<li>Mahdy, M. A., Lei, H. Y., Wakamatsu, J., Hosaka, Y. Z., Nishimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+muscle+regeneration+following+cardiotoxin+and+glycerol+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Anatomy+%3D+Anatomischer+Anzeiger%3A+Official+Organ+of+the+Anatomische+Gesellscaft%22%5BJournal%5D)">Comparative study of muscle regeneration following cardiotoxin and glycerol injury.</a> Annals of Anatomy = Anatomischer Anzeiger: Official Organ of the Anatomische Gesellscaft. 202, 18-27 (2015).</li>
<li>Pisani, D. F., Bottema, C. D., Butori, C., Dani, C., Dechesne, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+skeletal+muscle+adiposity%3A+a+glycerol+treatment+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Mouse model of skeletal muscle adiposity: a glycerol treatment approach.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 396 (3), 767-773 (2010).</li>
<li>Kawai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+glycerol+myopathy%3A+a+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Experimental glycerol myopathy: a histological study.</a> Acta Neuropathologica. 80 (2), 192-197 (1990).</li>
<li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+CT+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method.</a> Nature Protocols. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Bmp3b+expression+maintains+skeletal+muscle+integrity+and+decreases+in+age-related+sarcopenia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Bmp3b expression maintains skeletal muscle integrity and decreases in age-related sarcopenia.</a> The Journal of Clinical Investigation. 131 (1), 139617(2021).</li>
<li>Biferali, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prdm16-mediated+H3K9+methylation+controls+fibro-adipogenic+progenitors+identity+during+skeletal+muscle+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Prdm16-mediated H3K9 methylation controls fibro-adipogenic progenitors identity during skeletal muscle repair.</a> Science Advances. 7 (23), 9371(2021).</li>
<li>Biltz, N. K., Meyer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+quantification+of+fatty+infiltration+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Skeletal+Muscle%22%5BJournal%5D)">A novel method for the quantification of fatty infiltration in skeletal muscle.</a> Skeletal Muscle. 7 (1), (2017).</li>
<li>Vieites-Prado, A., Renier, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+3D+imaging+in+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and 3D imaging in developmental biology.</a> Development. 148 (18), Cambridge, England. (2021).</li>
<li>Gómez-Gaviro, M. V., Sanderson, D., Ripoll, J., Desco, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomedical+applications+of+tissue+clearing+and+three-dimensional+imaging+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Biomedical applications of tissue clearing and three-dimensional imaging in health and disease.</a> iScience. 23 (8), 101432(2020).</li>
<li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nature Reviews Neuroscience. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.

פרוטוקול זה מתווה פרוטוקול נרחב ומפורט המאפשר הדמיה יעילה וכימות קפדני של שומן תוך שרירי. על ידי פיצול אותו שריר לשני חלקים, אחד משמש לאימונופלואורסצנציה והשני לניתוח RT-qPCR, פרוטוקול זה הוא גם מאוד תכליתי. ניתן גם לשלב אותו עם מעקב אחר שושלות גנטיות של FAPs כדי לחקור את ההמרה שלהם לאדיפוציטים בתנאים מסוימים, והוא מתאים מאוד לסימון ולתמונה של סוגי תאים נוספים מרובים.
הדרכים הנפוצות ביותר לדמיין שומן תוך שרירי הן מקטעי פרפין ואחריהם צביעת המטוקסילין ואאוזין או חלקים קפואים המוכתמים עבור צבעים ליפופיליים כגון שמן אדום O (ORO). עם זאת, בעוד שרקמות מעובדות פרפין שומרות על ההיסטולוגיה הטובה ביותר, אותו תהליך גם מחלץ את כל השומנים ומונע שימוש בצבעים ליפופיליים. אף על פי ששיטות צביעה ליפופיליות יעבדו הן על מקטעי רקמה קבועים ב-PFA והן על מקטעי רקמה לא מזוקקים, טיפות שומנים נעקרות בקלות על ידי הפעלת לחץ על הכיסוי, ובכך מעוותות את ההתפלגות המרחבית של השומן התוך שרירי. כדי לעקוף זאת, מחקר שנערך לאחרונה קבע פרוטוקול קפדני כדי לדמיין אדיפוציטים של ORO+ באמצעות גישה של הרכבה שלמה. לשם כך, המחברים עשו דה-תאיזציה של ה-TA כדי לדמיין את ההתפלגות המרחבית של השומן התוך-שרירי לאורך כל ה-TA41. עד כמה שטכניקה זו חזקה, היא גם מונעת שימוש בכתמים משותפים אחרים כדי לסמן מבנים תאיים נוספים. ניתן להשתמש בכל הגישה האימונופלואורסצנטית המוצגת כאן כדי להכתים יחד אדיפוציטים במגוון סמנים המאפשרים מיפוי עדין של הסביבה התאית. עם זאת, אחד האתגרים הגדולים הוא חדירת הרקמות של הנוגדנים. ככל שיותר סיבים נשמרים יחד, כך יהיה קשה יותר לנוגדנים לחדור באופן שווה ולקשור את כל האנטיגנים הזמינים. לכן, שיטה זו היא היעילה ביותר כאשר מסתכלים על קבוצות קטנות של סיבים. יחד עם זאת, זוהי גם מגבלה שכן המיקום האנטומי הכולל של שומן תוך שרירי הולך לאיבוד כאשר מתמקדים רק בחבילות סיבים קטנות וקלופים. עם זאת, עם הפיתוח הנוכחי של שיטות ניקוי רקמות חדשניות בתוספת טכנולוגיית הדמיה חדשה, חדירה והדמיה גדולות יותר של רקמות יתאפשרו בעתיד 42,43,44.
בעוד שקיבוע מוקדם של רקמת שריר משמר את המורפולוגיה של האדיפוציטים, הוא גם יוצר אתגר להעריך את גודל המיופיברים, מדידה חשובה של בריאות השריר. גודל מיופייבר נקבע על ידי מדידת שטח החתך של המיופיברים. דיווחנו בעבר כי קיבוע מוקדם של רקמת השריר יגרום לרוב הסמנים הזמינים לתאר מיופיברים להיכשל31. כדי להתגבר על מכשול זה, פיתחנו צינור סגמנטציה חדשני של תמונות, המאפשר מדידה של גודל מיופייבר אפילו בקטעי שרירים קבועים31. לפיכך, הקמנו צינור עיבוד רקמות חזק ויעיל, אשר בשילוב עם פרוטוקול זה, מתגבר על רוב החסרונות הנגרמים על ידי קיבוע קודם של רקמת שריר.
יתרון מרכזי נוסף של גישה זו הוא ורסטיליות. על ידי פיצול ה- TA לשני חלקים, כמות המידע שניתן לקבל משריר אחד היא מקסימלית. זה לא רק מקטין את מספר בעלי החיים, אלא גם מוסיף שכבה נוספת של שליטה על ידי אישור היסטולוגיה באמצעות ביטוי גנים ולהיפך. בנוסף, ניתן לבחון גנים רבים ושונים מעבר לגנים אדיפוגניים. הרנ"א המבודד יכול לשמש גם לניסוי RNAseq של שריר שלם. לבסוף, חתיכת השריר הקפואה יכולה לשמש גם לעבודת חלבון. מגבלה אחת של פרוטוקול זה היא האפשרות שהפציעה לא תהיה עקבית לכל אורכו של הת"א. זה עלול להוביל לתרחיש שבו שני חלקי השרירים מתפצלים בכמות השומן התוך שרירי שהם מכילים ועשויים להצדיק הרחקה של דגימה כזו מכל ניתוח במורד הזרם. לכן, מומלץ לא להסתמך רק על RT-qPCR כדי להסיק מסקנות עיקריות לגבי כמות השומן התוך שרירי, אלא כנתונים תומכים לכימות ההיסטולוגי.
יחד, פרוטוקול זה מתווה צינור עיבוד רקמות חזק, יעיל וקפדני שיאפשר הדמיה וכימות של שומן תוך שרירי, הצעד הראשון בפיתוח אפשרויות טיפול חדשניות למאבק בפיברוזיס שומני. יחד עם זאת, הוא רב תכליתי וניתן להתאים אותו לסוגי תאים רבים ושונים בתוך השריר, כמו גם אדיפוציטים ברקמות אחרות.

חדירת רקמת שריר בריאה עם פיברוזיס שומני היא תכונה בולטת של ניוון שרירים דושן (DMD) ומחלות נוירומוסקולריות אחרות, כמו גם סרקופניה, השמנת יתר וסוכרת 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 . למרות שחדירת שומן מוגברת במצבים אלה קשורה מאוד לירידה בתפקוד השרירים, הידע שלנו מדוע וכיצד נוצר שומן תוך שרירי עדיין מוגבל. FAPs הם אוכלוסיית תאים סטרומליים מזנכימליים רב-תכליתיים הנמצאת ברוב האיברים הבוגרים, כולל שרירי השלד11,12. עם הגיל ובמחלות כרוניות, לעומת זאת, FAPs מייצרים רקמת צלקת פיברוטית ומבדילים לתוך אדיפוציטים, אשר ממוקמים בין myofibers בודדים ויוצרים שומן תוך שרירי 13,14,15,16,17,18,19,20.
כדי להתחיל להילחם ביצירת שומן תוך שרירי, יש להגדיר את המנגנונים של האופן שבו FAPs הופכים לאדיפוציטים. PDFGFRα הוא הסמן "תקן הזהב" בתחום לזיהוי FAPs בתוך השריר של מספר מינים 13,16,17,18,20,21,22,23,24,25,26,27. כתוצאה מכך, נוצרו מספר קווי Cre שאינם ניתנים להשראה של מורין טמוקסיפן, תחת שליטתו של מקדם Pdgfrα, המאפשרים מניפולציה גנטית של FAPs in vivo באמצעות מערכת Cre-LoxP 27,28,29. לדוגמה, על ידי שילוב של קו Cre אינדוקטיבי זה עם כתב גנטי, ניתן לבצע מעקב אחר שושלת של FAPs, אסטרטגיה שיישמנו בהצלחה על מפת גורל FAPs בשרירים ורקמת שומן לבנה20,30. מלבד מעקב אחר שושלת, קווי Cre אלה מספקים כלים חשובים לחקר המרת FAP לשומן.
אחד המכשולים העיקריים בהגדרת המנגנון של ההמרה האדיפוגנית של FAPs לשומן תוך שרירי הוא היכולת לכמת בקפדנות ובשכפול את כמות השומן התוך שרירי שנוצרה בתנאים שונים. המפתח הוא לאזן את השימור של רקמת השריר והשומן ולהתאים זאת לשיטות ההכתמה הזמינות כדי לדמיין אדיפוציטים. לדוגמה, שרירי השלד מוקפאים לעתים קרובות ללא קיבוע מוקדם, מה שמשמר את המיופיברים אך משבש את המורפולוגיה של האדיפוציטים (איור 1). לעומת זאת, קיבוע ואחריו הטבעת פרפין, תוך הצגת היסטולוגיית הרקמות הטובה ביותר, כולל אדיפוציטים, מסירה את כל השומנים, ובכך הופכת את רוב הצבעים הליפופיליים, כגון הצבע הנפוץ שמן אדום O, לבלתי שמישים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig1v2.jpg"> איור 1: תמונות מייצגות של שומן תוך שרירי ברקמות שריר קפואות לעומת קבועות. תמונות אימונופלואורסצנטיות המציגות אדיפוציטים (צהוב), מיופיברים (אפורים) וגרעינים (ציאן) בתוך TAs (B) מוקפאים ו-(C) קבועים ב-(C) לאחר 21 יום לאחר פגיעה בגליצרול. סרגלי קנה מידה: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
הפרוטוקול המתואר כאן משמר את המורפולוגיה של מיופייבר ואדיפוציטים ומאפשר הדמיה, וניתוח, של סוגי תאים מרובים. גישה זו מבוססת על צביעה אימונופלואורסצנטית של אדיפוציטים ברקמת שריר קבועה של פרפורמלדהיד (PFA), המאפשרת צביעה משותפת עם נוגדנים מרובים. ניתן גם להתאים אותו בקלות לתצוגה מרחבית של שומן תוך שרירי ברקמה שלמה באמצעות הדמיה בהרכבה מלאה, ובכך לספק מידע על המיקרו-סביבה התאית של השומן בתוך השריר. בנוסף, ניתן לשלב פרוטוקול זה עם הגישה שלנו שפורסמה לאחרונה כדי לקבוע את אזור החתך של myofibers ברקמות שריר קבועות31, מדידה חשובה להערכת בריאות השרירים. שילוב גישה זו עם מעקב אחר שושלת גנטית כדי למפות את ההבחנה של FAPs לתוך אדיפוציטים מתואר גם כאן. לפיכך, הפרוטוקול הרב-תכליתי המתואר כאן מאפשר הערכה קפדנית וניתנת לשחזור של FAPs והתמיינותם לשומן תוך שרירי בחתכי רקמות ורקמות שלמות.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig2v2.jpg"> איור 2: סקירה כללית של פרוטוקול סכמטי. סקירה סכמטית של עיבוד רקמות שבו שליש מה- TA מוסר, מוקפא ומוזן והומוגני לצורך בידוד RNA וניתוח שעתוק לאחר מכן באמצעות RT-qPCR. שני השלישים האחרים של ה-TA הם קבועים ב-PFA ומעובדים לצורך שמירה חיסונית על חלקים קפואים או סיבים בהרכבה מלאה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig2v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>

<table><tbody><tr><td>16% PFA (חבילה של 12, בקבוקי 10 מ"ל)</td> <td>Electron Miscroscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>2.0 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>05-408-138</td><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה להקפאה / הכאת חרוזים</td></tr><tr><td>2-מתילבוטן (4 ליטר)</td> <td>פישר כימיקל</td><td>O3551-4</td><td>איזופנטן</td></tr><tr><td>אתנול מוחלט (200 הוכחה)</td> <td>ThermoFisher Scientific</td><td>BP2818100</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Fab fragment חמור נגד עכבר</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-007-003</td><td>חסימת עכבר על עכבר</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 נוגדן משני נגד עוף</td><td>חמור Jackson ImmunoResearch</td><td>703-545-155</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 נוגדן משני נגד עכבר</td><td>חמור Invitrogen</td><td>A21202</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 נוגדן</td> <td>משני נגד ארנב חמורInvitrogen</td><td>A21206</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 נוגדן משני לחמור</td><td>Invitrogen</td><td>A11057</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 נוגדן משני נגד ארנב חמור</td><td>Invitrogen</td><td>A11037</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 568 נוגדן פלואידין</td><td>Invitrogen</td><td>A12380</td><td>מומס ב-1.5 מ"ל מתנול (~66 ומיקרו; פתרון עבודה M)</td></tr><tr><td>BioLite 24-well Multidish</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>930186</td><td>צלחת 24 באר לדגירת רקמות PFA</td></tr><tr><td>Biometra TOne</td><td>analytikjena</td><td>8462070301</td><td></td></tr><tr><td>תרמי cycler עוף נוגדן נגד GFP</td><td>Aves Labs</td><td>GFP-1020</td><td></td></tr><tr><td>אלכוהול כלורופורם/איזואמיל 24:1 (v/v) לביולוגיה מולקולרית, DNAse, RNAse ופרוטאז</td><td>ללא ThermoFisher שמן</td><td></td> תירס מדעי AC327155000 <td></td></tr><tr><td></td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>DAPI כתם</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>150 ומיקרו; פתרון עבודה M בסרום חמור dH2O</td></tr><tr><td>(100 מ"ל)</td><td>Millipore Sigma</td><td>5058837</td><td>לחסימת תמיסה</td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td>פינצטה עם קצה חד</td></tr><tr><td>מספריים עדינים ישר 9 ס"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td>מדיום הרכבה</td></tr><tr><td>גליצרול, 99.5%, לביולוגיה מולקולרית (500 מ"ל)</td><td>Acros Organics</td><td>327255000</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-PDGFR&alpha; נוגדן</td><td>R& D</td><td>AF1062</td><td></td></tr><tr><td>תנור היברידיזציה</td><td>VWR</td><td>230301V</td><td>לדגירת טמוקסיפן</td></tr><tr><td>ImmEdge מחסום הידרופובי PAP עט</td><td>וקטור מעבדות</td><td>H-4000</td><td>עט הידרופובי</td></tr><tr><td>מזרק אינסולין עם מחט מיקרו-פיין IV (28 גרם)</td> <td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין עם קצה החלקה, 1 מ"ל</td><td>BD</td><td>329654</td><td>מזרק אינסולין ללא מחט, לפה </td></tr><tr><td>ערכת סינתזה iScript cDNA</td><td>Bio-Rad</td><td>1708890</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson וטרינרי</td><td>78938441</td><td></td></tr><tr><td>Leica DMi8 מיקרוסקופ הפוך</td><td>Leica</td><td></td><td>מיקרוסקופ המשמש לשדה רחב IF והדמיה קונפוקלית</td></tr><tr><td>מיקרו שקופיות</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td>מיקרוסקופ טעון חיובי שקופיות</td></tr><tr><td>עכבר נוגדן</td> <td>נגד MYODInvitrogen</td><td>MA1-41017</td><td></td></tr><tr><td>עכבר אנטי-PAX7 נוגדן (סופרנטנט)</td><td>DSHB</td><td>AB 428528</td><td></td></tr><tr><td>MX35 Premier+ להבי מיקרוטום</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>3052835</td><td>מיקרוטום</td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 ספקטרופוטומטר</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ND2000</td><td>ספקטרופוטומטר לתפוקת RNA</td></tr><tr>תרכובת דוגמנות<td>Play-Doh</td><td>Hasbro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A25742</td><td>צבע ירוק PCR מאסטר מיקס</td></tr><tr><td>Puralube Vet משחה</td><td>Puralube</td><td>17033-211-38</td><td>משחת עיניים וטרינרית</td></tr><tr><td>QuantStudi 6 Flex בזמן אמת 384 בארות PCR מערכת</td><td>יישומית ביו-סיסטמס</td><td>4485694</td><td>qPCR מכונת</td></tr><tr><td>ארנב נוגדן נגד פריליפין</td><td>טכנולוגיית איתות תאים</td><td>9349S</td><td></td></tr><tr><td>שייקר רוטור אדום</td><td>Hoefer Scientific</td><td>PR70-115V</td><td>שייקר ל IF מכתים</td></tr><tr><td>ריצ'רד-אלן סיינטיפיק סליפ-רייט, כיסוי זכוכית</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>152460</td><td>כיסויים</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>QIAGEN</td><td>74106</td><td>מכיל מיני עמודי סיבוב</td></tr><tr><td>צינורות נעילה בטוחה 1.5 מ"ל,</td> צינורות דגימה <td>טבעיים של Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>RB (2 מ"ל)</td><td>QIAGEN</td><td>990381</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אזיד</td><td>אלפא Aesar</td><td>14314</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי נירוסטה, 2.8 מ"מ</td><td>Precellys</td><td>KT03961-1-101. BK</td><td>חרוזים קטנים</td></tr><tr><td>חרוזי נירוסטה, 5 מ"מ</td><td>QIAGEN</td><td>69989</td><td>חרוזים בינוניים</td></tr><tr><td>חרוזי נירוסטה, 7 מ"מ</td><td>QIAGEN</td><td>69990</td><td>חרוזים</td></tr><tr><td>גדולים נירוסטה חד פעמי אזמל</td><td>Miltex</td><td>327-4102</td><td>אזמל</td></tr><tr><td>צינור הזנה מנירוסטה, 20 G x 38 מ"מ, ישר</td><td>Instech Laboratories</td><td>FTSS-20S-3</td><td>מחט</td></tr> <tr><td>gavageטמוקסיפן</td><td>טורונטו מחקר כימיקלים</td><td>T006000</td><td></td></tr><tr><td>רקמות בתוספת O.C.T. תרכובת</td><td>פישר HealthCare</td><td>4585</td><td>הטמעת</td></tr><tr><td>רקמה בינוניתLyser LT</td><td>QIAGEN</td><td>85600</td><td>מקצף חרוזים</td></tr><tr><td>TissueLyser LT מתאם, 12 צינורות</td><td>QIAGEN</td><td>69980</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Sakura</td><td>4566</td><td>תבניות דגימה</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16046</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15596026</td><td>גואנידיום תיוציאנט</td></tr><tr><td>Tween20 (500 מ"ל)</td> <td>Fisher BioReagents</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>VWR Micro Slides - Superfrost Plus</td><td>VWR</td><td>48311703</td><td></td></tr><tr><td>צנצנות צביעה של Wheaton Coplin צנצנת</td><td>קופלין Millipore Sigma</td><td>S6016</td><td></td></tr></tbody></table>

מדריך לבחינת היווצרות שומן תוך שרירי ומקורו התאי בשרירי השלד

A Guide to Examining Intramuscular Fat Formation and its Cellular Origin in Skeletal Muscle

אבות פיברו-אדיפוגניים (FAPs) הם תאים סטרומליים מזנכימליים הממלאים תפקיד מכריע במהלך הומאוסטזיס והתחדשות של שרירי השלד. FAPs בונים ומתחזקים את המטריצה החוץ-תאית הפועלת כפיגום מיופייבר מולקולרי. בנוסף, FAPs הם הכרחיים להתחדשות מיופייבר מכיוון שהם מפרישים מספר רב של גורמים מועילים שחשים תאי גזע השריר (MuSCs). במצבים חולים, לעומת זאת, FAPs הם המקור התאי של שומן תוך שרירי ורקמת צלקת פיברוטית. פיברוזיס שומני זה הוא סימן ההיכר של סרקופניה ומחלות נוירומוסקולריות, כגון ניוון שרירים דושן. אחד המחסומים המשמעותיים בקביעת הסיבה והאופן שבו FAPs מתמיינים לשומן תוך שרירי הוא שימור יעיל והדמיה לאחר מכן של אדיפוציטים, במיוחד בקטעי רקמות קפואות. שיטות קונבנציונליות של עיבוד רקמת שריר השלד, כגון הצמדה-הקפאה, אינן משמרות כראוי את המורפולוגיה של אדיפוציטים בודדים, ובכך מונעות הדמיה וכימות מדויקים. כדי להתגבר על מכשול זה, פותח פרוטוקול קפדני המשמר את המורפולוגיה האדיפוציטים בחתכי שרירי השלד ומאפשר הדמיה, הדמיה וכימות של שומן תוך שרירי. הפרוטוקול גם מתאר כיצד לעבד חלק מרקמת השריר עבור RT-qPCR, ומאפשר למשתמשים לאשר שינויים שנצפו ביצירת שומן על ידי צפייה בהבדלים בביטוי של גנים אדיפוגניים. בנוסף, ניתן להתאים אותו כדי לדמיין אדיפוציטים על ידי אימונופלואורסצנציה מלאה של דגימות שרירים. לבסוף, פרוטוקול זה מתאר כיצד לבצע מעקב אחר שושלת גנטית של FAPs המבטאים Pdgfrα כדי לחקור את ההמרה האדיפוגנית של FAPs. פרוטוקול זה מניב באופן עקבי תמונות אימונופלואורסצנטיות ברזולוציה גבוהה ומדויקת מבחינה מורפולוגית של אדיפוציטים, יחד עם אישור על ידי RT-qPCR, ומאפשר הדמיה וכימות חזקים, קפדניים וניתנים לשחזור של שומן תוך שרירי. יחד, צינור הניתוח המתואר כאן הוא הצעד הראשון לשיפור ההבנה שלנו לגבי האופן שבו FAPs מבדילים לשומן תוך שרירי, ומספק מסגרת לאימות התערבויות חדשניות למניעת היווצרות שומן.

הדמיה אימונופלואורסצנטית של שומן תוך שרירי בעקבות השלבים לעיל וצפייה באיור 1A, נתחי רקמות TA נאספו מפציעה שלאחר הגליצרול במשך 21 יום, אשר הוקפאו מיד לאחר הקטיף באיזופנטן מקורר LN2 או תוקנו ב-4% PFA למשך 2.5 שעות. לאחר ההקפאה והכתמת שתי הדגימות, צולמו תמונות באמצע הבטן, האזור הגדול ביותר של ה-TA. אדיפוציטים PERILIPIN+ מה-TAs הלא מזוהים (איור 1B) שינו באופן משמעותי את המורפולוגיה בהשוואה למקטעים קבועים (איור 1C), מה שהופך את הזיהוי, ההדמיה והכימות שלאחר מכן להרבה יותר קשים ובלתי מדויקים. יש לציין כי טיפות השומנים הראשונות של PERILIPIN+ זוהו בסביבות 5 ימים לאחר הפציעה, כאשר רוב האדיפוציטים נוצרו עד יום 7. עד 21 יום לאחר הפציעה, האדיפוציטים הבשילו לחלוטין.
מכיוון שכמות השומן לכל TA מתואמת מאוד עם חומרת הפציעה המושרה, יש לפצוע את ה- TAs באופן משמעותי כדי לצפות ולחקור ביעילות היווצרות שומן תוך שרירית. תרגול זריקות באמצעות דיו לתוך TAs cadaver הוא דרך מצוינת לשפר את חומרת הפציעה. פציעות מוצלחות נוטות להיות מעל 50% מהשריר. שימו לב, אזורים פצועים בשריר מייצגים אזורים נטולי סיבי שריר או אזורים המאוכלסים על ידי סיבי שריר המכילים לפחות גרעין אחד במיקום מרכזי, סימן היכר ידוע של סיב שריר מתחדש.
פרוטוקול זה יכול להיות מותאם בקלות לכתם עבור FAPs ושומן בתלת-ממד. לשם כך הופרדו בקפידה מספר מיופיברים מהת"א לאחר הקיבעון, ואחריהם אימונופלואורסצנציה שלם. המפתח הוא לאבטח כראוי את הסיבים למגלשת הזכוכית, ובמקביל, כדי למנוע דחיסת יתר של הרקמה. על-ידי שימוש בכפות חרסיתיות הניתנות לתבנית, המשתמש יכול להתאים את העובי הנדרש ולהדק את הכיסוי למגלשה, ואף לאפשר שימוש במיקרוסקופ הפוך (איור 4A). שיטה זו שימשה בהצלחה לסימון PDGFRα+ FAPs, פלואידין+ מיופיברים ואדיפוציטים המבטאים PERILIPIN (איור 4B, סרטון משלים 1 ווידאו משלים 2). לאחר קבלת תמונות במישורי z מרובים בעובי של עד 150 מיקרומטר, מודול העיבוד התלת-ממדי בתוך תוכנת המיקרוסקופ שימש ליצירת שחזור תלת-ממדי.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig4v3.jpg"> איור 4: צביעה אימונופלואורסנטית בהרכבה מלאה. (A) מבט עליון וצידי על אופן ההרכבה של הדגימה והוספת כיסוי לצביעה בהרכבה מלאה. (B) שחזורים תלת-ממדיים מייצגים של FAPs (ירוק; שמאל) ואדיפוציטים (אדום; מימין) יחד עם מיופיבר (אפור) וגרעינים (כחולים). סרגלי קנה מידה: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig4v3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
כימות של שומן תוך שרירי לאחר שצולמו תמונות של שומן תוך שרירי, פונקציית ה-Cell Counter ב-ImageJ/FIJI שימשה לספירה ידנית של מספר האדיפוציטים של PERLIPIN+ (איור 5A). לאחר מכן, נקבע השטח הכולל של חלק השרירים, כמו גם האזור הפגוע, המוגדר על ידי גרעינים הממוקמים במיקום מרכזי בתוך myofibers. כדי לשלוט בחומרת הפציעה, המספר הכולל של אדיפוציטים חולק באזור הפגוע וכתוצאה מכך מספר תאי השומן לכל 1 מ"מ2 של שריר פצוע. בדרך כלל, TAs המציגים &lt;30% פגיעה אינם נכללים בכימותים. יש לציין, למרות שאדיפוציטים הם נדירים ללא פגיעה, הנעים בין אפס לשמונה לכל אזור חתך, המספר הכולל של אדיפוציטים עדיין מנורמל לפי שטח כולל. כפי שהודגש באיור 5B, פגיעה בגליצרול גורמת לכמויות אדירות של שומן תוך שרירי בהשוואה לשריר TA לא פגום. לחלופין, מכיוון שצביעת פריליפין נקייה מאוד עם יחס אות לרעש גבוה, ניתן גם להשתמש בפונקציית Analyze Particle כדי לקבוע את השטח הכולל שנכבש על ידי פריליפין. עם זאת, שיטה זו לא תוכל להבחין בין אדיפוציטים קטנים יותר לעומת פחות אדיפוציטים. עד שלושה קטעים מתוך לפחות ארבעה בעלי חיים בודדים צולמו וכימתו, והמספר הממוצע של תאי השומן הקיימים בכל עכבר דווח.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig5v2.jpg"> איור 5: כימותים של שומן תוך שרירי. (A) תמונה מייצגת של אופן ספירת אדיפוציטים PERILIPIN+ (לבן) באמצעות פונקציית מונה התאים ב-ImageJ. סרגל קנה מידה: 50 μm. (B) כימות אדיפוציטים שלם של TA 21 יום לאחר הזרקת גליצרול מנורמל ל -1 מ"מ2 של האזור הפצוע. כל נקודה מייצגת את הממוצע של עכבר אחד. פסי שגיאה המוצגים כ- SEM. **** = p &lt; 0.0001. (C) שכבת RNA לאחר הומוגניזציה והפרדת פאזות עוקבת על ידי כלורופורם משמשת לניתוח RT-qPCR. (D) קיפול שינויים ברמות הביטוי של Pparg ו-Cepbα, גנים אדיפוגניים מוקדמים, ו-Plin1 ו-Adipoq, שני סמנים אדיפוציטים בוגרים, בנקודות זמן שונות לאחר פגיעה בגליצרול. כל נקודה מייצגת את הממוצע של עכבר אחד. פסי שגיאה המוצגים כ- SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig5v2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
כדי לאשר באופן עצמאי את כמות השומן התוך שרירי הקיים, ניתן לקבוע רמות ביטוי גנים של סמנים אדיפוגניים שונים. לשם כך, ניתן לבודד RNA מחלק מאותו שריר ת"א המשמש לאימונופלואורסצנציה (ראו שלבים למעלה) בנקודות שונות לאחר הפציעה. מקציף חרוזים שימש בשילוב עם guanidium thiocyanate כדי הומוגניזציה של הרקמה. לאחר הוספת כלורופורם ואחריו צנטריפוגה, השכבה העליונה המכילה RNA חולצה בקפידה, ועמודי ספין קטנים שימשו לניקוי RNA (איור 5C). שיטה זו מייצרת באופן שגרתי איכות וכמות גבוהה של RNA המתאים לכל הניתוחים במורד הזרם כגון RT-qPCR ו- RNAseq. עבור RT-qPCR נקבעו רמות הביטוי היחסיות של גנים אדיפוגניים לגנים של משק בית, וכל השינויים היחסיים הוערכו בעקבות שיטת ΔΔCT38. כפי שמתואר באיור 5D, בהשוואה לשרירי TA לא פגועים, פגיעה בגליצרול גורמת לביטוי של סמנים אדיפוגניים מוקדמים כמו Pparg ו-Cebpα כבר 3 ימים לאחר הפציעה. סמנים בוגרים, כגון אדיפונקטין (Adipoq) ופריליפין (Plin1), ניתן לזהות כבר 5 ימים לאחר פציעת גליצרול.
מעקב אחר שושלת גנטית של אדיפוציטים ניתן להתאים בקלות את פרוטוקול צביעת האדיפוציטים המוצג כאן כך שיכלול מעקב אחר שושלת גנטית של FAPs כדי למפות ולעקוב אחר גורלם לתוך אדיפוציטים. לדוגמה, הוכחנו בעבר כי רקומבינציה יכולה להיות מושרית באמצעות מתן טמוקסיפן ב- PdgfrαCreERT2; עכברי Rosa26EYFP שבועיים לפני הפציעה, מסירים למעשה את קידוד העצירה של floxed ומפעילים באופן בלתי נמנע ביטוי EYFP ב-FAPs (איור 6A). השגנו יעילות רקומבינציה גבוהה עם משטר הטמוקסיפן שהוצג כאן, כאשר כ-75% מה-PDGFRα+ FAPs מבטאים את EYFP20, בדומה למה שמעבדות אחרות דיווחו על 27,39,40. כדי להוכיח ש-FAPs הם אכן המקור התאי של שומן תוך שרירי, רוב ה-FAPs הפכו לאדיפוציטים המבטאים EYFP+ PERILIPIN 7 ימים לאחר פגיעה בגליצרול (איור 6B).
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig6v3.jpg"> איור 6: מעקב אחר שושלת של FAPs. (A) סקירה סכמטית של מערך הניסוי. (B) תמונות אימונופלואורסצנטיות מייצגות המציגות רקומבינציה והפעלה מוצלחת של EYFP (צהוב) בתוך PDGFRα+ FAPs (אדום, ראשי חץ) ואדיפוציטים PERILIPIN+ (אדום, כוכביות). סרגלי קנה מידה: 25 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig6v3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
זיהוי של סוגי תאים מרובים פרוטוקול זה יכול לשמש גם כדי לדמיין את התא המיוגני. באמצעות נוגדנים נגד PAX7 ו-MYOD1, תאי גזע שריריים (MuSCs) ומיובלסטים, בהתאמה, יכולים להיות מזוהים בקלות 5 ימים לאחר פגיעה בגליצרול אפילו בקטע רקמת שריר קבוע PFA (איור 7). לפיכך, הפרוטוקול המוצג הוא רב-תכליתי וניתן להתאמה לא רק לתווית ותמונה של אדיפוציטים ו- FAPs אלא גם לסוגי תאים אחרים של השושלת המיוגנית.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63996/63996fig7v2.jpg"> איור 7: תאי גזע שריריים וכתמים אימונופלואורסצנטיים של מיובלסט. (B) תמונות אימונופלואורסצנטיות מייצגות המציגות צביעה מוצלחת של תאי גזע שריריים (MuSC) (צהוב, שמאל) עם PAX7 ומיובלסטים (צהובים, מימין) עם MYOD1. LAMININ מתאר את המיופיברים (לבן), וגרעינים נמצאים בציאן. סרגלי קנה מידה: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/63996fig7v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
וידאו משלים 1: עיבוד תלת-ממדי של FAPs. שחזור תלת-ממדי של מיופיבר, FAPs וגרעינים מוכתמים עבור PHALLOIDIN (אפור), PDGFRα (ירוק) ו-DAPI (כחול), בהתאמה, 21 יום לאחר הפציעה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/FAPs.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרטון הזה.</a>
סרטון משלים 2: עיבוד תלת-ממדי של שומן תוך שרירי. עיבוד נפחי של צרורות מיופייבר (אפור, PHALLOIDIN) ושומן תוך שרירי (אדום, PERILIPIN), שהחליף מיופייבר 21 יום לאחר פגיעה בגליצרול. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63996/FAT.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הסרטון הזה.</a>

החלפת רקמת שריר בריאה בשומן תוך שרירי היא מאפיין בולט של מחלות ומצבים אנושיים. פרוטוקול זה מתווה כיצד לדמיין, לדמות ולכמת שומן תוך שרירי, ומאפשר מחקר קפדני של המנגנונים העומדים בבסיס היווצרות שומן תוך שרירי.

Fibro-adipogenic progenitors (FAPs) are mesenchymal stromal cells that play a crucial role during skeletal muscle homeostasis and regeneration. FAPs build ...

אחד המחסומים המשמעותיים בחקר שומן תוך שרירי, סימן היכר של סרקופניה ומחלות נוירומוסקולריות, הוא שימור יעיל והדמיה לאחר מכן של אדיפוציטים, במיוחד בקטעי רקמות קפואות. הפרוטוקול משמר מורפולוגיה של אדיפוציטים ומקטעי שרירי שלד המותאמים להדמיה וכימות חזקים, קפדניים וניתנים לשחזור של שומן תוך שרירי. צינור הניתוח שלנו מספק מסגרת לאימות התערבויות חדשניות למניעת היווצרות שומן במחלות כמו ניוון שרירים דושן מדגים שההליך יהיה קונור ג'ונסון, טכנאי מחקר מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, לנקות את הרגל כדי להיות מוזרק עם מגבון אלכוהול טרי לחיטוי. משכו 30 עד 50 מיקרוליטרים של 50% גליצרול לתוך מזרק האינסולין. יש להבריש בעדינות את השיער שעל השוק כדי לחשוף את מיקום ה-TA. לאחר איתור ה- TA, הכנס את המחט לתוך TA באופן דיסטלי ליד הקרסול.מכניסים את המחט במלואה לשריר ומזריקים לאט לאט גליצרול, תוך כדי משיכת המחט בהדרגה המסייעת לפצוע את רוב השריר. יש לרסס באופן חופשי את כל האזורים בעכבר שיש לחתוך לתוכם ב-70% אתנול כדי לסייע בשמירה על שיער מחוץ לאזור הניתוח ולמכשירים. השתמש במספריים כדי לחתוך את העור סביב החלק העליון של הרגל ליד האגן.משכו בעדינות את עור הרגל מלמעלה למטה ועד הקרסול. ראשית, הסר את שכבת רקמת החיבור החיצונית באמצעות פינצטה חדה לפני קצירת ה- TA. החליקו את הפינצטה מתחת לת"א מתחתית השריר, החל מהגיד הדיסטלי ומשכו בעדינות כלפי מעלה לכיוון הברך. עצור בקצה השריר.אין לדחוף מעבר להתנגדות שהורגשה בברך התחתונה. אם יש התנגדות משמעותית לפני ההגעה לברך התחתונה, עצרו והמשיכו להסיר שאריות של שכבות של רקמת חיבור. לאחר שהת"א הוסר חלקית מהרגל עם הפינצטה, השתמש באותה תנועה עם אזמל כדי לנתק את החיבור של ה- TA לברך התחתונה.מעיים את הגיד בקרסול עם מספריים כדי להסיר את ה- TA במלואו. לטפל רק בשריר בגיד כדי למנוע פגיעה בסיבים. חותכים שליש מהת"א בקצה, מול הגיד. שים אותו בצינור המיקרו צנטריפוגה והצמד להקפיא אותו על ידי הטלתו לחנקן נוזלי.הטביעו את שני השלישים האחרים של הרקמה בבאר מסומנת עם 4% PFA להיסטולוגיה. הקפד לעקוב אחר מתי הרקמה הראשונה והאחרונה הונחה בקיבוע. מניחים על אגוז במשך שעתיים עד שעתיים וחצי בארבע מעלות צלזיוס.לאחר הקיבוע, הסר PFA מהבארות. יש לשטוף את הרקמות עם PBS אחד קר פעמיים עד שלוש פעמים ולאחר מכן לשטוף פעמיים עד שלוש פעמים עם PBS קר 1X למשך חמש דקות לכל שטיפה. הסר את ה- PBS מהבארות והוסף מספיק 30% סוכרוז ב- 1X PBS כדי לאפשר לרקמה לצוף.מניחים על המנומר בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. הפעל את המיקרוסקופ והפעל את תוכנת ההדמיה. אבטח את השקופית על הבמה.השתמש בכל ערוץ כדי לזהות את האזור שיש להצטלם. בתוכנת ההדמיה, התאימו את זמן הרווח והחשיפה עבור כל ערוץ. צלם תמונות של כל הרקמה בכל ערוץ ומזג אריחים בודדים כדי ליצור מרוכב של חתך TA המלא.לפני ההתחלה, מחממים מראש את המים החופשיים של RNase ל-45 מעלות צלזיוס ומכינים 70% אתנול טרי. הוסף 1000 מיקרוליטרים של guanidinium thiocyanate לכל צינור המכיל את הדגימה. חשוב כי נעשה שימוש בצינורות המאושרים על ידי Bead Beater.הוסיפו שלושה חרוזים בינוניים, או חרוז אחד גדול וחרוז אחד קטן, לכל צינור. הומוגניזציה של הרקמה ב-50 הרץ למשך שתיים עד ארבע דקות באמצעות מכה חרוזים. בהתאם לסוג הרקמה ולגודל המדגם, זה עשוי להימשך עד 10 דקות.להוסיף 200 מיקרוליטרים של כלורופורם. יש לנער את הדגימות למשך 15 שניות. דגירה למשך שתיים עד שלוש דקות בטמפרטורת החדר.צנטריפוגה במשך 15 דקות ב 12, 000 פעמים G.Pipette החוצה 350 microliters של supernatant שקוף ולהוסיף לצינור מיקרו צנטריפוגה חדש המכיל 350 microliters של 70% אתנול. היזהרו שלא לשאוף לשכבות החלבון ו/או הדנ"א הנמוכות יותר. העבר עד 700 מיקרוליטרים של תערובת זו לעמוד ספין קטן הממוקם בצינור איסוף של שני מיליליטר.המשך עם בידוד RNA בהתאם להוראות היצרן. Elute עם 30 עד 50 microliters של מים חופשיים RNase, בהתאם לתפוקה הצפויה. שמור RNA על קרח ומדוד את התשואה באמצעות ספקטרופוטומטר.שמור את הרנ"א מאוחסן במינוס 80 מעלות צלזיוס. השתמש בעד מיקרוגרם אחד של RNA כדי לסנתז cDNA עם ערכת סינתזה של cDNA, בהתאם להוראות היצרן. לאחר השלמת הריצה, הוסף 80 מיקרוליטרים של מים חופשיים RNase.אחסן את הדגימות במינוס 20 מעלות צלזיוס. באמצעות פורמט קידוח 384, הוסף מיקרוליטר אחד של פריימר לתחתית כל באר. פריימרים לייבוש חופשי גורמים לשכפולים טכניים הדוקים יותר.השאירו מכוסים עד שהפריימרים התאדו לחלוטין. הגדר תגובות לדוגמה עם ארבעה עד שמונה שכפולים טכניים. לאחר השלמת ריצת ה-PCR, נרמלו את ערכי סף המחזור הגולמי לרמות הגנים של משק הבית וקבעו שינויים בקיפול על ידי חישוב דלתא-דלתא Ct.פריליפין ואדיפוציטים חיוביים מה-TAs הלא מזוהים שינו באופן משמעותי את המורפולוגיה בהשוואה למקטעים קבועים, מה שהופך את הזיהוי, ההדמיה והכימות שלאחר מכן להרבה יותר קשים ועלולים להיות לא מדויקים.לעומת זאת, קיבוע PFA משמר את המורפולוגיה האדיפוציטים, ומאפשר זיהוי מדויק של שומן תוך שרירי. בהשוואה לשריר TA לא פגום, פגיעת גליצרול גורמת לביטוי של סמנים אדיפוגניים מוקדמים, כגון גמא PPAR ו- CEBP alpha כבר שלושה ימים לאחר הפציעה. סמנים בוגרים כגון אדיפונקטין ופריליפין ניתן לזהות כבר חמישה ימים לאחר פציעת הגליצרול.באמצעות מעקב אחר שושלת גנטית, רוב הקולטנים של PDGF אלפא FAPs מבטאים את סמן השושלת EYFP. שבעה ימים לאחר פציעת הגליצרול, FAPs חיוביים של EYFP הפכו לפריליפין חיובי של EYFP המבטא אדיפוציטים, מה שמוכיח כי FAPs הם אכן המקור התאי של שומן תוך שרירי. ניתן גם להתאים את הפרוטוקול כדי לדמיין את התא המיוגני.באמצעות נוגדנים נגד PAX7 ו- MYOD1, תאי גזע שריריים וסמני מיובלסט, בהתאמה, ניתן לזהות בקלות חמישה ימים לאחר פציעת גליצרול, אפילו בקטעי רקמת שריר קבועים של PFA. פרוטוקול זה יכול גם להיות מותאם כדי לדמיין ולכמת אדיפוציטים ורקמות בוגרות אחרות. בנוסף, טכניקת שימור הרקמות שלנו תואמת את מגוון טכניקות העמידה השונות.

a-guide-to-examining-intramuscular-fat-formation-its-cellular-origin

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

סוגי התאים הדבקים העיקריים שמקורם בשריר אנושי הם תאים מיוגניים ופיברובלסטים. כאן, אוכלוסיות התאים מועשרות באמצעות מיון תאים מופעל מגנטי המבוסס על אנטיגן CD56. תיוג חיסוני לאחר מכן עם נוגדנים ספציפיים ושימוש בטכניקות ניתוח תמונה מאפשר כימות של מאפיינים ציטופלזמיים וגרעיניים בתאים בודדים.

בידוד וכמוני Immunocytochemical אפיון של תאים ראשוניים myogenic וFibroblasts משרירי שלד אדם

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

אדיפוציטים קיימות במחסנים נפרדים ויש להם תפקידים מגוונים בתוך המיקרו-סביבות הייחודיות שלהם. כמו הבדלים אזוריים אופי ותפקוד הפונקציה נחשפים, זיהוי סטנדרטית בידוד של מחסני חיוני לקידום השדה. בזאת, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לגבי כריתה של מחסני שומן בעכבר.

זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים

עדויות הולכות וגוברות מצביעות על כך שחדירה מוגזמת של שומנים בתוך שרירי השלד גורמת לליפטוקסיות ולסוכרת. כאן אנו מציגים פרוטוקול שלם, כולל עיבוד רקמות, צביעה עם Bodipy, רכישת תמונה וניתוח, כדי לכמת את הגודל, הצפיפות וההתפלגות התת-תאית של טיפות שומנים באופן ספציפי מסוג סיבים.

סוג הסיבים וניתוח ספציפי תת-תאי של תכולת טיפות השומנים בשרירי השלד

פרדיפוציטים מבודדים מהמקטע הווסקולרי של רקמת השומן החום הבין-סקפולרי מעכברים שזה עתה נולדו ומתמיינים לתאים שצוברים טיפות שומנים, מבטאים סמנים מולקולריים ומראים את המורפולוגיה המיטוכונדריאלית של אדיפוציטים חומים בוגרים. תאים אלה מנותחים עוד יותר על ידי immunofluorescence ומיקרוסקופ אלקטרונים הולכה.

התמיינות והדמיה של אדיפוציטים חומים מהמקטע הווסקולרי של רקמת השומן הבין-סקפולרית מעכברים שזה עתה נולדו

המחקר הנוכחי מתאר מתודולוגיות מבוססות דה-צלולריזציה להדמיה וכימות של שקיעת רקמת שומן תוך-שרירית (IMAT) באמצעות נפח שריר שלם, כמו גם כימות מדדים של אדיפוציטים בודדים המרכיבים IMAT.

כימות מבוסס דה-צלולריזציה של חדירת שומן בשרירי השלד

חקרנו רקמת שרירי שלד ב-Bos indicus וב-crossbred bulls כדי להסביר הבדלים באיכות הבשר. כוח הגזירה של וורנר-ברצלר (WBSF) נמצא בטווח שבין 4.7 ק"ג ל-4.2 ק"ג. איזופורמים של שרשרת כבדה של מיוזין חשפו הבדלים בין בעלי חיים, ומדד הפיצול של מיופיבריל סיפק תובנות נוספות לגבי וריאציות של רגישות (WBSF).

חקר שריר הלונגיסימוס: חשיפת הקשר שלו לאיכות הבשר אצל Bos indicus ו-Crossbred Bulls

הביולוגיה של רקמת השומן הבין-שרירית (IMAT) לא נחקרה במידה רבה בשל הנגישות המוגבלת של רקמת האדם. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לבידוד גרעינים והכנת ספרייה של IMAT אנושי קפוא לריצוף RNA של גרעינים בודדים כדי לזהות את ההרכב התאי של מחסן שומן ייחודי זה.

בידוד גרעינים מרקמת שומן בין-שרירית אנושית וריצוף RNA חד-גרעיני במורד הזרם

במחקר זה, אנו מתארים שיטה פשוטה לביצוע ניתוח צבע כחול של אוונס (EBD) על זחלי דג הזברה.  טכניקה זו היא כלי רב עוצמה לאפיון שלמות שרירי השלד ותיחום מודלים של דג זברה של ניוון שרירים, והיא שיטה רבת ערך לפיתוח טיפולים חדשים.

ניתוח של יושרה שריר שלד דג הזברה זחלים עם אוונס הכחול צבע

דג הזברה הם מודל מצוין לחקר תפקוד שרירים ומחלות. במהלך העובר המוקדם דג הזברה מתחיל התכווצויות שרירים קבועות המייצרות התנהגות שחייה קצבית, המשתנה כאשר השריר מופרע. כאן אנו מתארים תגובה מעוררת מגע ובדיקת תנועה לבחינת ביצועי שחייה כמדד לתפקוד השרירים.

באמצעות תגובת מגע עוררת ו תנועת מבחנים להעריך שריר ביצועים ופונקציות של דג זברה

למדו פרוטוקול לוויזואליזציה וכימות שומן תוך שרירי בשלד באמצעות הזרקת גליצרול וקיבוע PFA. שיטה זו מאפשרת חקר מקורות תאיים של שומן ופיתוח טיפולים למחלות שריר.

מדריך לבחינת היווצרות שומן תוך שרירי ומקורו התאי בשרירי השלד

גלה סרטונים נוספים