18 במאי 2022
מאמר זה מתאר טכניקה לחתך מהיר של העצם הטמפורלית האנושית המשתמשת במיקרו-מסור עם להבי יהלום תאומים כדי ליצור פרוסות דקות לצורך טשטוש מהיר וניתוח של אימונוהיסטוכימיה של העצם הטמפורלית.
פרוטוקול זה מפחית את הזמן לעיבוד עצם טמפורלית מ-9 ל-10 חודשים ל-10 עד 14 יום. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת הערכה מהירה של אוטופתולוגיה, אשר במקרה שלנו רלוונטית להערכת הפתולוגיה של האוזן התיכונה הקשורה ל- COVID-19. טכניקה זו עשויה להיות מועילה במיוחד למחקרים תלויי זמן של העצם הטמפורלית.
בעתיד, זה עשוי להיות מותאם עוד יותר לשימוש בחקר הפתולוגיה של האוזן הפנימית. מתחילים את הקציר במהלך הנתיחה ומחלקים את העצבים הגולגולתיים בחדות לתעלת השמיעה הפנימית. הפוך את החתך הגרמי הראשון עם האוסטאוטום במקביל לחלק הקשקשי של העצם הטמפורלית ופשוט מדיאלי.
לאחר מכן, בצע את החתך הגרמי השני במקביל לראשון בגבול המדיאלי של העצם הטמפורלית. הפוך את החתך השלישי בשלושה עד ארבעה סנטימטרים קדמי ובמקביל לרכס פטרוס. לאחר מכן, הפוך את החתך הרביעי בערך מקביל לשלישי בשני סנטימטרים אחוריים לרכס פטרוס.
השתמש בניתוח חד כדי לשחרר את הרקמה הרכה המחוברת לאורך הקצה הנחות של הדגימה ולהסיר את העצם הטמפורלית. לאחר הקציר, מיד להטביע את הרקמה ב 200 עד 300 מיליליטר של 10% פורמלין buffered. לאחר מכן, קבעו מיקרו-מסור מדויק עם שני להבי יהלום למרחק של חמישה מילימטרים.
עבור דקלסיפיקציה מהירה של רקמות, חותכים כל דגימה לשלושה חלקים כך שהחלק המרכזי של העצם הטמפורלית הוא בעובי של חמישה מילימטרים ואלה משני הצדדים הם בעובי של שלושה עד חמישה מילימטרים. מקם את החלקים ב 200 עד 300 מיליליטר של 0.37-טוחנת EDTA במשך שבעה עד 10 ימים בטמפרטורת החדר לריכוך. צביעת המטוקסילין ואאוזין של רירית האוזן התיכונה וצינור האוסטכיה הראתה כי הרקמה נשמרת לאחר העיבוד באמצעות פרוטוקול זה.
ניתוחים אימונוהיסטוכימיים הראו נוכחות של חלבוני ACE2, טרנסממברנה פרוטאז סרין ופורין בתוך רקמות אלה, וסיפקו שורש אפשרי לזיהום SARS-CoV2 באפיתל הנשימתי של האוזן התיכונה. חשוב למקם כראוי את רקמת העצם הטמפורלית בתוך מסור היהלום. טכניקות חלופיות שניתן לשלב עם שיטה זו כוללות אימונוהיסטוכימיה לחלבונים שונים, כתמי רקמות שונים ותעתיק.
טכניקה זו אפשרה לנו להעריך במהירות את נוכחותם של החלבונים המעורבים בזיהום SARS-CoV2 בתוך האוזן התיכונה במהלך מגיפת COVID-19.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מתאר טכניקה לחיתוך מהיר של עצב הרקה אנושי באמצעות מיקרו-מסור בעל להבי יהלום כפולים. שיטה זו מפחיתה משמעותית את הזמן הנדרש לעיבוד עצב הרקה, ובכך מאפשרת ניתוח מהיר יותר של אימונוהיסטוכימיה.
חיתוך מואץ של עצם הרקה מאפשר הערכה היסטופתולוגית מהירה של רקמות האוזן התיכונה, ובכך נותן מענה לצרכים מחקריים דחופים במהלך התפרצויות של מחלות זיהומיות כגון COVID-19. על ידי קיצור זמן עיבוד הרקמה מחודשים לימים, שיטה זו תומכת בתיקוף מטרות (target validation) ובמחקרים מכניסטיים תלויי-זמן באוטופתולוגיה. גישה זו מגבירה את הגמישות התפעולית של צוותי מחקר תרגומי החוקרים נתיבי חדירה נגיפיים וביטוי חלבונים ספציפי לרקמה.
פרוטוקול חיתוך מהיר זה משתלב ברצף השלב שבין הגילוי לשלב הפרה-קליני, ומאפשר בדיקה及מהירה של השערות ותיקוף מטרות במודלים של רקמות אנושיות.