Name: ניתוח של תפקוד לקוי של התכווצות הלב ו- Ca2 + טרנזיינטים במיוציטים של מכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-25T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: חקור תפקוד התכווצות לקוי וטרנזיינטי סידן במיוציטים מבודדים של מכרסמים. שיטה זו מאפשרת למדענים ללמוד על מנגנוני אי-ספיקת לב ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) מענק R01 HL144777 (MVW).

<ol><li>Reihle, C., Bauersachs, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure.</a> Cardiovascular Research. 115 (13), 1838-1849 (2019).</li>
<li>Peter, A. K., Bjerke, M. A., Leinwand, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+the+cardiac+myocyte+in+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Biology of the cardiac myocyte in heart disease.</a> Molecular Biology of the Cell. 27 (14), 2149-2160 (2016).</li>
<li>Rossman, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+frequency-dependent+responses+represent+the+pathophysiologic+signature+of+contractile+failure+in+human+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Abnormal frequency-dependent responses represent the pathophysiologic signature of contractile failure in human myocardium.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 36 (1), 33-42 (2004).</li>
<li>McDonald, K. S., Hanft, L. M., Robinett, J. C., Guglin, M., Campbell, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+myofilament+contractile+function+in+human+donor+and+failing+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Regulation of myofilament contractile function in human donor and failing hearts.</a> Frontiers in Physiology. 11, 468(2020).</li>
<li>Ravichandran, V. S., Patel, H. J., Pagani, F. D., Westfall, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+contractile+dysfunction+and+protein+kinase+C-mediated+myofilament+phosphorylation+in+disease+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Cardiac contractile dysfunction and protein kinase C-mediated myofilament phosphorylation in disease and aging.</a> The Journal of General Physiology. 151 (9), 1070-1080 (2019).</li>
<li>Chaudhary, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+myocardial+Ca2%2B+cycling+after+left+ventricular+assist+device+support+in+failing+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Altered myocardial Ca2+ cycling after left ventricular assist device support in failing human heart.</a> Journal of the American College of Cardiology. 44 (4), 837-845 (2004).</li>
<li>Walker, C. A., Spinale, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+function+of+the+cardiac+myocyte%3A+A+review+of+fundamental+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The structure and function of the cardiac myocyte: A review of fundamental concepts.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 118 (2), 375-382 (1999).</li>
<li>Lang, S. E., Westfall, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+into+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Gene transfer into cardiac myocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 1299, 177-190 (2015).</li>
<li>Davis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+heart+performance+by+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Designing heart performance by gene transfer.</a> Physiological Reviews. 88 (4), 1567-1651 (2008).</li>
<li>Sweitzer, N. K., Moss, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+loaded+shortening+velocity+in+single+cardiac+myocytes+permeabilized+with+a-hemolysin%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Determinants of loaded shortening velocity in single cardiac myocytes permeabilized with a-hemolysin.</a> Circulation Research. 73 (6), 1150-1162 (1993).</li>
<li>Yasuda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unloaded+shortening+increases+peak+of+Ca2%2B+transients+but+accelerates+their+decay+in+rat+single+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Unloaded shortening increases peak of Ca2+ transients but accelerates their decay in rat single cardiac myocytes.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 285 (2), 470-475 (2003).</li>
<li>Racca, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+developing+human+fetal+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of developing human fetal cardiac muscle.</a> The Journal of Physiology. 594 (2), 437-452 (2016).</li>
<li>Kim, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+protein+expression+and+basal+lamina+remodeling+in+human+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics+Clinical+Applications%22%5BJournal%5D)">Differential protein expression and basal lamina remodeling in human heart failure.</a> Proteomics Clinical Applications. 10 (5), 585-596 (2016).</li>
<li>Eckerle, L. G., Felix, S. B., Herda, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+antibody+effects+on+cellular+function+of+isolated+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Measurement of antibody effects on cellular function of isolated cardiomyocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e4237(2013).</li>
<li>Robbins, H., Koch, S. E., Tranter, M., Rubinstein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+history+and+future+of+probenecid%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The history and future of probenecid.</a> Cardiovascular Toxicology. 12 (1), 1-9 (2012).</li>
<li>Sakthivel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+and+in+vitro+analysis+of+cardiac+troponin+I+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">In vivo and in vitro analysis of cardiac troponin I phosphorylation.</a> Journal of Biological Chemistry. 280 (1), 703-714 (2005).</li>
<li>Qi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+sarcoplasmic+reticulum+Ca2%2B-ATPase+during+progression+of+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Downregulation of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase during progression of left ventricular hypertrophy.</a> The American Journal of Physiology. 272 (5), 2416-2424 (1997).</li>
<li>Sonnenblick, E. H., Spiro, D., Spotnitz, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+basis+of+Starling%27s+law+of+the+heart%3A+the+role+of+the+sarcomere+is+determining+ventricular+size+and+stroke+volume%5BTitle%5D)+AND+%22American+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure basis of Starling's law of the heart: the role of the sarcomere is determining ventricular size and stroke volume.</a> American Heart Journal. 68 (3), 336-346 (1964).</li>
<li>Kabaeva, Z., Zhao, M., Michele, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blebbistatin+extends+culture+life+of+adult+mouse+cardiac+myocytes+and+allows+efficient+and+stable+transgene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blebbistatin extends culture life of adult mouse cardiac myocytes and allows efficient and stable transgene expression.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 294 (4), 1667-1674 (2008).</li>
<li>Zak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+myofibrillar+proteins+in+the+normal+and+hypertrophic+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of myofibrillar proteins in the normal and hypertrophic heart.</a> Basic Research in Cardiology. 72 (2-3), 235-240 (1977).</li>
<li>Palmer, B. M., Thayer, A. M., Snyder, S. M., Moore, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shortening+and+%5BCa2%2B%5D+dynamics+of+left+ventricular+myocytes+isolated+from+exercise-trained+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Shortening and [Ca2+] dynamics of left ventricular myocytes isolated from exercise-trained rats.</a> Journal of Applied Physiology. 85 (6), 2159-2168 (1998).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים כספיים מתחרים או ניגודי עניינים אחרים.

פרוטוקול הקצב הכרוני המתואר בשלב 1 מאריך את הזמן השימושי לחקר מיוציטים מבודדים ולהערכת ההשפעה של טיפולים ארוכים יותר. במעבדה שלנו, תוצאות עקביות התקבלו עד 4 ימים לאחר הבידוד בעת מדידת תפקוד התכווצות באמצעות אורך סרקומר על מיוציטים בקצב כרוני. עם זאת, תפקוד התכווצות המיוציטים מתדרדר במהירות בעת שימוש במדיה מעל שבוע אחד לקצב מיוציטים.
עבור מחקרי תפקוד התכווצות, הנתונים נאספים ב 37 מעלות צלזיוס, אשר קרוב לטמפרטורת הגוף עבור חולדות. כדי למטב את הכדאיות של מיוציטים ולקבל עקבות עקביים עבור כל מיוציט...

ניתוח תפקוד משאבת הלב דורש לעתים קרובות מגוון גישות כדי לקבל תובנה מספקת, במיוחד עבור מודלים של בעלי חיים של אי ספיקת לב (HF). אקוקרדיוגרפיה או מדידות המודינמיות מספקות תובנה לגבי תפקוד לב in vivo 1, בעוד שגישות in vitro משמשות לעתים קרובות כדי לזהות אם תפקוד לקוי נובע משינויים במיופילמנט ו/או ב-Ca2+ חולף האחראי על עירור צימוד, או פוטנציאל הפעולה, עם פונקציית התכווצות (למשל, צימוד עירור-כיווץ [E-C]). גישות במבחנה מספקות גם הזדמנות לסנן את התגובה התפקודית לנוירוהורמונים, שינויים גנטיים הנגרמים על ידי וקטורים, כמו גם סוכנים טיפוליים פוטנציאליים2 לפני נקיטת אסטרטגיות טיפול in vivo יקרות ו / או מייגעות.
מספר גישות זמינות כדי לחקור את תפקוד ההתכווצות במבחנה, כולל מדידות כוח בטרבקולה3 שלמה או מיוציטים מחלחלים4, כמו גם קיצור לא טעון ו- Ca2+ טרנזיינטים במיוציטים שלמים בנוכחות והיעדר HF 5,6. כל אחת מהגישות הללו מתמקדת בתפקוד התכווצות המיוציטים הלבביים, האחראי ישירות על תפקוד משאבת הלב 2,7. עם זאת, הניתוח של התכווצות וצימוד E-C יחד מבוצע לרוב על ידי מדידת קיצור אורך השריר ו- Ca 2+ חולפים במיוציטים בוגרים מבודדים, Ca2+ סובלניים. המעבדה משתמשת בפרוטוקול מפורט שפורסם כדי לבודד מיוציטים מלבבות חולדות עבור שלב8 זה.
גם Ca2+ חולף וגם מיופילמנטים תורמים לקיצור והארכה מחדש של מיוציטים שלמים ויכולים לתרום לתפקוד לקוי של התכווצות 2,7. לפיכך, גישה זו מומלצת כאשר ניתוח פונקציונלי במבחנה דורש מיוציט שלם המכיל את מכונות המחזור Ca2+ בתוספת המיופילמנטים. לדוגמה, מיוציטים מבודדים שלמים רצויים לחקר תפקוד התכווצות לאחר שינוי תפקוד המיופילמנט או Ca2+ מחזורי באמצעות העברת גנים9. בנוסף, גישת מיוציטים שלמים מוצעת לניתוח ההשפעה התפקודית של נוירוהורמונים כאשר חוקרים את ההשפעה של מסלולי איתות שליח שני במורד הזרם ו / או תגובה לסוכנים טיפוליים2. מדידה חלופית של כוח תלוי עומס במיוציטים בודדים מבוצעת לרוב לאחר חדירת ממברנה (או עור) בטמפרטורות נמוכות (≤15 מעלות צלזיוס) כדי להסיר את התרומה החולפת Ca2+ ולהתמקד בפונקציית מיופילמנט10. מדידת כוח תלוי עומס בתוספת Ca2+ חולפים במיוציטים שלמים היא נדירה בעיקר בשל האתגר המורכב והטכני של גישה11, במיוחד כאשר יש צורך בתפוקה גבוהה יותר, כגון למדידת תגובות לאיתות נוירוהורמונים או כמסך לסוכנים טיפוליים. הניתוח של טרבקולה לבבית מתגבר על אתגרים טכניים אלה, אך עשוי להיות מושפע גם משינויים שאינם מיוציטים, פיברוזיס ו/או מטריצה חוץ-תאית2. כל אחת מהגישות שתוארו לעיל דורשת תכשיר המכיל מיוציטים בוגרים מכיוון שמיוציטים ילודים ומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים בלתי ניתנים להשראה (iPSCs) עדיין אינם מבטאים את ההשלמה המלאה של חלבוני מיופילמנט בוגרים ובדרך כלל חסרים את רמת ארגון המיופילמנט הקיימת במיוציטים בצורת מוט בוגר2. נכון להיום, עדויות ב- iPSCs מצביעות על כך שהמעבר המלא לאיזופורמים בוגרים עולה על יותר מ -134 ימים בתרבית12.
בהתחשב בהתמקדות של אוסף זה ב- HF, הפרוטוקולים כוללים גישות וניתוח כדי להבדיל בין תפקוד התכווצות במיוציטים שלמים כושלים לעומת מיוציטים שלמים שאינם נכשלים. דוגמאות מייצגות מסופקות ממיוציטים של חולדות שנחקרו 18-20 שבועות לאחר כריתה על-כלייתית, שתוארה קודםלכן 5,13. לאחר מכן נעשות השוואות למיוציטים מחולדות שטופלו בבושה.
הפרוטוקול ופלטפורמת ההדמיה המתוארים כאן משמשים לניתוח וניטור שינויים בקיצור ו- Ca2+ חולפים במיוציטים לבביים בצורת מוט במהלך התפתחות HF. לצורך ניתוח זה, 2 x 104 Ca 2+-סובלניים, מיוציטים בצורת מוט מצופים על22 מ"מ 2 מ"מ 2 כיסויי זכוכית מצופים למינין (CSs) ומתורבתים לילה, כפי שתואר קודםלכן 8. הרכיבים שהורכבו עבור פלטפורמת הדמיה זו, יחד עם המדיה והמאגרים המשמשים להדמיה אופטימלית, מסופקים בטבלת החומרים. מדריך לניתוח נתונים באמצעות תוכנה והתוצאות המייצגות מסופקים גם כאן. הפרוטוקול הכולל מחולק לתתי-סעיפים נפרדים, כאשר שלושת החלקים הראשונים מתמקדים במיוציטים של חולדות מבודדות ובניתוח נתונים, ולאחר מכן ניסויים ארעיים של Ca2+ וניתוח נתונים במיוציטים.

<table><tbody><tr><td><חזק>מדיה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בסרום בקר</td><td>סיגמא (רוש)3117057001</td><td></td> <td>ריכוז סופי = 0.2% (w/v)</td></tr><tr><td>גלוטתיון</td><td>סיגמא</td><td>G-6529</td><td>ריכוז סופי = 10 מ"מ</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H-7006</td><td>ריכוז סופי = 15 מ"מ</td></tr><tr><td>M199</td><td>סיגמא</td><td>M-2520</td><td>בקבוק אחד מייצר 1 ליטר; pH 7.45</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S-8875</td><td>ריכוז סופי = 4 מ"מ</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>פישר</td><td>15140122</td><td>ריכוז סופי = 100 U/mL פניצילין, 100 &mu; גרם/מ"ל סטרפטומיצין</td></tr><tr><td><ריאגנטים חזקים>ריאגנטים במיוחד עבור Ca2+ הדמיה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>דימתילסולפוקסיד (DMSO)</td><td>סיגמא&nbsp;</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Fura-2AM</td><td>Invitrogen (בדיקות מולקולריות)</td> <td>F1221</td><td>50 &mu; גרם/בקבוקון; &nbsp; הכן תמיסת מלאי של 1 מ"מ Fura-2AM + 0.5 M probenicid ב-DMSO; &nbsp; ריכוז סופי של Fura2-AM במדיה הוא&nbsp; 5 &mu; M</td></tr><tr><td>Probenicid</td><td>Invitrogen (Fisher)</td> <td>P36400</td><td>הוסף 7.2 מ"ג probenicid (0.5 מ') ל-1 מ"מ מלאי Fura-2AM; הריכוז הסופי במדיה הוא 2.5 מ</td></tr><tr><td><מחזק>חומרים עבור קוצב מיוציטים של חולדות</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>#1 22&nbsp; mm2 כיסויי זכוכית</td><td>Corning</td><td>2845-22</td><td></td></tr><tr><td>3 x 36 אינץ' כבלים עם שקעי בננה</td><td>Pomona Electronics</td><td>B-36-2</td><td>איור משלים 1, פאנל C</td></tr><tr><td>37oC אינקובטור&nbsp; עם 95% O2:5% CO2&nbsp;</td><td>Forma</td><td>3110</td><td>איור משלים 1, פאנל E.&nbsp; דגמים מרובים מתאימים</td></tr><tr><td>Class II A/B3 ארון בטיחות ביולוגית עם מנורת UV</td><td>Forma</td><td>1286</td><td>דגמים מרובים מתאימים</td></tr><tr><td>מלקחיים - Dumont #5 5/45</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11251-35</td><td></td></tr><tr><td>מעקר חרוזים חמים</td><td>Fine Science Tools</td><td>1800-45</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך בהגדלה נמוכה</td><td>Leica</td><td>DM-IL&nbsp;</td><td>מקם את המיקרוסקופ הזה בסמוך לאינקובטור כדי לנטר מיוציטים בקצב להתכווצות בתחילת הקוצב ולאחר שינויי מדיה; &nbsp; יעדי 4X ו-10X מומלצים</td></tr><tr><td>תא קצב</td><td>משלים מותאם אישית</td><td></td><td>איור 1, פאנל A. מערכת Ionoptix C-pace היא אלטרנטיבה זמינה מסחרית או ראה 22</td></tr><tr><td>Stimulator</td><td>Ionoptix</td><td>Myopacer</td><td>Supplemental איור 1, פאנל D.</td></tr><tr><td><חומרים חזקים> לתפקוד התכווצות ו/או Ca2+ ניתוח הדמיה</חזק></td><td></td><td></td><td>מזהה באיור משלים 2 & חלופות/אפשרויות מומלצות</td></tr><tr><td>רכיבים נוספים לניתוח הדמיה Ca2+</td><td>רכיבי</td><td>מערכת Ionoptix Essential: -- מערכת ספירת פוטונים&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; --&nbsp; ספק כוח קסנון עם מקור אור עירור כפול&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; --&nbsp; ממשק פלואורסצנטי</td> <td>- מערכת ספירת הפוטונים מכילה שפופרת פוטו-מכפיל (PMT) ומראה דיכרואית ומותקנת בצמוד למצלמת CCD. (פאנל A #4).&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; - ספק הכוח למקור האור של נורת הקסנון (ראה פאנל A #5 ופאנל C, משמאל) משולב עם ממשק עירור כפול (עירור 340/380 ננומטר ופליטה של 510 ננומטר) המוצג בפאנל A #6.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; - ממשק הקרינה בין המחשב ל-&nbsp; מקור האור מוצג בפאנל B, #12.</td></tr><tr><td>מצלמת CCD עם רכישת תמונה&nbsp; חומרה ותוכנה (240 פריימים לשנייה)</td><td>Ionoptix&nbsp;</td><td>Myocam עם בקר CCD&nbsp;</td><td>בקר Myocam ו-CCD מוצגים באיור משלים 2, פאנל A #4&nbsp; ו-&nbsp; פאנל A #5 ופאנל C #5 (מימין), בהתאמה.&nbsp; הבקר משולב במערכת מחשב PC (פאנל B #14).&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp; ממריץ קאמרי</td><td>Ionoptix&nbsp;</td><td>פאנל Myopacer</td><td>B, #13; אלטרנטיבה:&nbsp; דשא דגם S48</td></tr><tr><td>תא זלוף רכוב על כיסוי</td>, <td>תא מותאם אישית לכיסוי 22 מ"מ2 עם מתאם סיליקון ו-2-4 ברגים פיליפס פאן-ראש #0&nbsp; (חץ, לוח F)</td><td></td><td>פאנל A #10 ופאנל F; &nbsp; &nbsp; טמפרטורת החדר מכוילת ל-37oC באמצעות בדיקה TH-10Km ובקר הטמפרטורה TC2BIP (ראה בקר טמפרטורה).&nbsp; חלופות מסחריות:&nbsp; תא Ionoptix FHD או C-stim&nbsp; צ'יימברס; מערכת גירוי תרבית Cell MicroControls</td></tr><tr><td>מחשב ותוכנה ייעודיים לאיסוף נתונים וניתוח של פונקציות/מעברי Ca2+</td><td>מחשב Ionoptix</td><td>עם לוח מחשב Ionwizard ותוכנה</td><td>לוח B, #14; פונקציית ההתכווצות נמדדת באמצעות מודולי רכישה SarcLen (אורך סרקומר) או SoftEdge (אורך מיוציטים) של תוכנת IonWizard. תוכנת Ionwizard כוללת גם תוכנת רכישת PMT עבור ratiometric&nbsp; הדמיית Ca2+ ב-myoyctes טעונים ב-Fura-2AM. - ארון ומדפים להרכבה על מתלה אלקטרוני עם 4 עמודים מומלצים לשיכון ה-somputer ו-Cell Stimulator.&nbsp; ממשק הקרינה להדמיית Ca2+ שוכן גם הוא בארון זה (ראה להלן).</td></tr><tr><td>מלקחיים - Dumont #5 TI</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-40</td><td>Panel F</td></tr><tr><td>מחזיק צינור מבודד למדיה פאנל</td><td>מותאם אישית</td><td></td><td>A #9; מחזיק זה מורכב בקלות באמצעות קלקר & חבילת ג'ל מחוממת מראש לשמירה על חום המדיה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שדה בהיר הפוך</td><td>Nikon</td><td>TE-2000S</td><td>התקן צריח מסתובב לאפי-פלואורסצנציה (פאנל A #2) להדמיית Ca2+.&nbsp; &nbsp; מומלץ גם מסנן מעבה אדום עמוק (590 ננומטר) כדי למזער את הלבנת הקרינה במהלך הדמיית Ca2+.</td></tr><tr><td>שולחן מבודד</td><td>TMC בקרת רטט</td><td>30 x 36 אינץ'</td><td>לוח A, #1; רצוי:&nbsp; מדפים מוגבהים, מיגון פאראדיי&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>עיניות מיקרוסקופ ואובייקטיביות</td><td>Nikon</td><td>10X CFI עיניות 40X מים CFI תוכנית פלואור אובייקטיבי</td><td>פאנל A #3; 40X מטרה:&nbsp; n.a. 0.08; משקל 2 מ"מ.&nbsp; מחמם אובייקטיבי Cell MicroControls HLS-1 מותקן סביב המטרה (ראה בקר טמפרטורה למטה).&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; הערה:&nbsp; מתקני טבילה במים זמינים כעת גם למטרות מבוססות מים.&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>משאבה פריסטלטית</td><td>גילסון</td><td>מיניפולס 3</td><td>פאנל A #8 ופאנל E</td></tr><tr><td>סירת משקל קטנה</td><td>פישר&nbsp;</td><td>08-732-112</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה</td><td>תא MicroControls</td><td>TC2BIP</td><td>פאנל A #7; לוח ד'. בקר טמפרטורה זה מחמם את תא הכיסוי ל-37oC.&nbsp; &nbsp; &nbsp; מחמם מראש ומחמם אובייקטיבי מומלצים לפלטפורמה זו.&nbsp; מחמם מקדים של Cell MicroControls HPRE2 ו&nbsp; מחמם אובייקטיבי HLS-1 נשלטים&nbsp; על ידי בקר הטמפרטורה TC2BIP עבור המחקרים שלנו.</td></tr><tr><td>נורת לד מתחת לארון עם חיישן תנועה&nbsp;</td><td>Sylvania</td><td>#72423 נורת LED</td><td>מומלצת לאיסוף נתונים במהלך הדמיה חולפת Ca2+ בתאורה מינימלית בחדר. &nbsp; אלטרנטיבה:&nbsp; קליפס על פנס/פנס ספר עם צוואר גמיש - מספר ספקים זמינים.</td></tr><tr><td>קו ואקום עם בקבוק ארלנמאייר ומסנן מגן</td> צינורות <td>פישר</td><td>טיגון - E363; &nbsp; בקבוק פוליפרופילן ארלנמאייר - 10-182-50B; מסנן ואקום - 09-703-90</td><td>פאנל A #11</td></tr></tbody></table>

ניתוח של תפקוד לקוי של התכווצות הלב ו- ca2 + טרנזיינטים במיוציטים של מכרסמים

Analysis of Cardiac Contractile Dysfunction and Ca2+ Transients in Rodent Myocytes

תפקוד לקוי של התכווצויות ו-Ca2+ מנותחים לעתים קרובות ברמה התאית כחלק מהערכה מקיפה של פגיעה הנגרמת על ידי הלב ו / או שיפוץ. גישה אחת להערכת שינויים תפקודיים אלה משתמשת בקיצור פרוק ובניתוחים חולפים של Ca2+ במיוציטים לבביים בוגרים ראשוניים. לצורך גישה זו, מיוציטים בוגרים מבודדים על ידי עיכול קולגן, הופכים את Ca2+ לסובלני, ולאחר מכן נדבקים לכיסויים מצופים למינין, ולאחר מכן לקצב חשמלי במדיה נטולת סרום. הפרוטוקול הכללי משתמש במיוציטים לבביים של חולדות בוגרות, אך ניתן להתאים אותו בקלות למיוציטים ראשוניים ממינים אחרים. ניתן להשוות שינויים תפקודיים במיוציטים מלבבות פגועים למיוציטים ו/או לטיפולים במבחנה . המתודולוגיה כוללת את המרכיבים החיוניים הדרושים לקצב מיוציטים, יחד עם מרכיבי תא התא והפלטפורמה. הפרוטוקול המפורט לגישה זו משלב את השלבים למדידת התקצרות נפרקת על ידי זיהוי אורך סרקומר וטרנזיינטים סלולריים Ca2+ שנמדדו באמצעות מחוון היחס Fura-2 AM, כמו גם לניתוח נתונים גולמיים.

מחקרי תפקוד התכווצות מבוצעים על מיוציטים של חולדות החל מהיום שלאחר הבידוד (יום 2) ועד 4 ימים לאחר הבידוד. למרות שניתן לרשום מיוציטים יום לאחר הבידוד (כלומר, יום 2), לעתים קרובות נדרשים זמני תרבית ארוכים יותר לאחר העברת גנים או טיפולים כדי לשנות את תפקוד ההתכווצות8. עבור מיוציטים שגודלו בתרבית במשך יותר מ-18 שעות לאחר הבידוד, פרוטוקול הקצב המתואר בסעיף 1 מסייע בשמירה על t-tubules ועל תוצאות קיצור והארכה מחדש עקביות.
חלק מייצג של CS המכיל מיוציטים למחקרי קיצור מוצג <stron...

מוצגת סדרה של פרוטוקולים המתארים את מדידת פונקציית ההתכווצות באמצעות זיהוי אורך סרקומר יחד עם מדידת סידן (Ca2+) במיוציטים של חולדות מבודדות. היישום של גישה זו למחקרים במודלים של בעלי חיים של אי ספיקת לב נכלל גם הוא.

ניתוח של תפקוד לקוי של התכווצות הלב ו- Ca2 + טרנזיינטים במיוציטים של מכרסמים

Contractile dysfunction and Ca2+ transients are often analyzed at the cellular level as part of a comprehensive assessment of cardiac-induced injury ...

גישה זו מזהה שינויים בתפקוד התכווצות במהלך התפתחות אי ספיקת לב. התגובה התפקודית במיוציטים לנוירוהורמונים ולסוכנים טיפוליים פוטנציאליים יכולה גם להיות מוקרנת. מיקום המיוציטים עשוי לקחת תרגול אך הוא חיוני בהשגת הדמיה עקבית באורך סרקומר.המדגימה את ההליך היא מרגרט ווסטפול, פרופסור חבר והחוקרת הראשית של המעבדה. לפני תחילת הניסוי, לחמם מראש חבילת ג'ל מדיה באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. מפעילים את רכיבי פלטפורמת הפונקציה המכווצת כפי שמוזכר בכתב היד ומרכיבים צינורות לתוך המשאבה הפריסטלטית.לאחר מכן, העבר את חבילת הג'ל שחוממה מראש למחזיק הצינור והפעל את הוואקום בעוצמה למגרה התא. הניחו צינור של 50 מיליליטר עם מדיה במחזיק הצינור המבודד כדי להתחיל זלוף במהירות של 0.5 מיליליטר לדקה דרך צינורות המשאבה הפריסטלטיים. לאחר מכן, הוסיפו שני מיליליטר של מדיה שחוממה מראש לסירת שקילה קטנה והעבירו תלוש כיסוי אחד המכיל מיוציטים מתא הגירוי לסירת השקילה.החזירו את תא הגירוי לאינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. הסר את מחליק הכיסוי מסירת השקילה ונגב בעדינות את החלק התחתון לפני העברתו לתא כיסוי משומן טרי והוספת טיפת מדיה על תלוש הכיסוי. הניחו תושבת אלקטרודת פלטינה מעל משטח הכיסוי, ולאחר מכן הניחו כיסוי חדש מעל החלק העליון עם מלקחיים והניחו תושבת עליונה מעל כריך החלקת הכיסוי.התקן שניים או ארבעה ברגי panhead מספר אפס כדי לסיים את הרכבת התא. במשאבה הפריסטלטית כאשר המדיה נוכחת לאורך כל הצינורות, חברו את הצינורות למחמם המקדים ואת הקדם-מחמם לתא ההחלקה של הכיסוי. לאחר מכן, התחל זלוף ב 0.5 מיליליטר לדקה והניח מגבון רקמות מתחת לתא כדי להבטיח שאין דליפות.לאחר הצבת תא ההחלקה של הכיסוי במתאם הבמה של המיקרוסקופ, הפעל את מערכת החימום ושקול את המכלול למשך חמש עד 10 דקות כדי להשיג טמפרטורת מדיה קבועה של 37 מעלות צלזיוס במרכז התא. שימו לב למדיה המחורבנת שנאספת בקצה הנגדי של התא עם צינורות המחוברים למערכת ואקום. במהלך זמן שיווי המשקל, דמיינו מיוציטים עם מטרת טבילת המים פי 40 במיקרוסקופ.כדי להפעיל את מגרה הקצב, הגדר את המתח ל -35 עד 40 וולט והתאם את תדר הגירוי ל -0.2 הרץ כדי לייעל את תפקוד ההתכווצות ואת הישרדות המיוציטים. כדי לאסוף עקבות קיצור sarcomere, לפתוח את התוכנה במחשב ובחר בסדר, קובץ וכרטיסיות חדשות. הכן תבנית מסך על-ידי בחירת מעקבים, עריכת מגבלות משתמש ואורך סרקומר.הקליטו עקבות באורך סרקומר עם הקובץ וכרטיסיות חדשות, זיהו מיוציט מתכווץ ומקמו את המיוציט לאורך ציר האורך של המצלמה כך שתבנית הסטריאציה תהיה אנכית. השתמש בעכבר המחשב כדי למקם את אזור העניין או את תיבת החזר ההשקעה מעל המיוציט. בחר אסוף והתחל להקליט פונקציית חוזה.קיצור שיא למשך 60 שניות מכל מיוציט בתדרי גירוי נמוכים של 0.5 הרץ. שיא הקיצור של סרקומר מחמישה לעשרה תאים לכל תלוש. כדי למדוד את הקיצור בטווח התדרים, מקם את המיוציטים בכל תדר כדי לקבל קיצור מצב יציב לפני ההקלטה.הכפילו את קצב הזליפה והתחילו להקליט 15 עד 20 שניות לאחר הגירוי בתדר חדש בטווח של 0.2 עד שני הרץ ותרשמו לא יותר משני מיוציטים לכל כיסוי החלקה לקיצור בטווח הנתון של תדרי הגירוי. רשום לפחות שבע התכווצויות לכל תא כדי לקבל נתונים ממוצעים אמינים של אותות. בחר את הקובץ, בחר מעקב מוקלט ולאחר מכן בחר פתח.בחר טאב אחד ממעקב הבסיס ולאחר מכן הגדר את החלונית הצהובה בחלק העליון של העקיבה כדי לקבל אורך קשת. הכן תבנית ניתוח עם אפשרויות ניתוח ארעיות מונוטוניות וסימן אירוע TTL בהגדרה של תיבת T Zero באפשרויות הדרושות מהתפריט. שמור אפשרויות ניתוח אלה על-ידי בחירת תבניות ושמירת תבנית ניתוח באמצעות מזהה.טען את תבנית הניתוח לפני ניתוח כל מעקב. כדי לנתח את הנתונים, בחר סימנים, שער, הוסף ארעי ולאחר מכן המר מסימן אירוע וטווח ניתוח. הגדר את טווח הזמן ממינוס 0.01 עד 1.20 שניות עבור מיוציטים בקצב של 0.2 הרץ.בחר טווח זמן קצר יותר עבור מיוציטים מגורה בתדרים גבוהים יותר. בחר פעולות ואירועים ממוצעים כדי להפיק הקלטה ממוצעת של אות מתחת למעקב הבסיס המקורי. לאחר מכן, בחר טאב אחד מהמעקב הממוצע של האות ולאחר מכן עבור לסימנים בתפריט העליון ואחריו הוסף ארעי, בחר פעולות וניתוח ארעי מונוטוני כדי להציג את ערכי ממוצע האות עבור פרמטרים בסיסיים של sarcomere בלוח התצוגה הממוצע של האות.בחר ייצוא ניתוח ארעי מונוטוני וזרם לוח והעבר ניתוח סרקומר חולף לגיליון אלקטרוני לניתוח מרוכב של מיוציטים מרובים. כדי להעתיק את המעקב הממוצע של האות, בחר ייצוא, מעקב נוכחי, ולאחר מכן כרטיסיות לוח ואפשרויות לפי הסדר והגדר את המקומות העשרוניים לחמישה. בחר מפריד טאבים ולחץ על אישור.קצב האות ממוצע עקבות עבור כל הקלטת מיוציטים לגיליון אלקטרוני שני. המחקר הראה כי עומס הלחץ או PO, הפחית את תפקוד התכווצות של המיוציטים בהשוואה לקבוצת הבושה. עם זאת, ארבעה ימים לאחר העברת הגן של טרופונין לב IT 144D או cTnIT144D, יכולת ההתכווצות במיוציטים של PO חזרה לכיוון רמות הבושה, מה שמצביע על כך שניתן לשחזר את תפקוד המיוציטים.במחקרים הראשוניים, העברת גנים של cTnIT144D שיפרה את קיצור השיא ואת רמות הסידן הדיאסטולי הגבוהות בהשוואה ל-CTnI. התאמות עדינות במיקום של myocyte הלב נדרשים לעתים קרובות כדי להשיג עקבות קיצור ברור. פרוטוקול זה יכול להתבצע גם על מיוציטים לבביים עמוסים בצבעים פלואורסצנטיים רגישים לסידן כגון Fura-2 AM כדי לזהות טרנזיינטים של סידן בנוסף לקיצור.

analysis-cardiac-contractile-dysfunction-ca2-transients-rodent

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

כאן אנו מתארים את הבידוד של cardiomyoctyes עכבר המבוגר באמצעות מערכת זלוף Langendorff. תאים וכתוצאה מכך הם Ca2 +, סובלניים, חשמלי שקט ויכולים להיות מתורבת וtransfected עם אדנו או lentiviruses כדי לתפעל ביטוי גנים. הפונקציונליות שלהם יכולה גם להיות מנותחת באמצעות מערכת MMSYS וטכניקות תיקון מהדק.

בידוד, תרבות ואפיון פונקציונלי של Cardiomyoctyes מאוס למבוגרים

ניתן לבודד קרדיומיוציטים בודדים מעכברים פראיים ועכברים מוטנטיים מהלב על מנת לחקור את ההתכווצות שלהם ואת מעברי הסידן שלהם. זה מאפשר לאפיין את התרומה של תפקוד לקוי של התאים לתפקוד לקוי של הלב מכל סיבה שהיא.

בידוד ופיזיולוגי ניתוח של שריר לב העכבר

שריר פפילרי חדרית עזב Murine יכול לשמש כדי לחקור התכווצות לב במבחנה. מאמר זה מתאר בפירוט את הבידוד ופרוטוקולי ניסוי ללמוד מאפייני התכווצות לב.

מדידות התכווצות שרירים בpapillary מבודדים לחקירת הלב Inotropy בעכברים

מאמר זה מתאר את הפרוטוקול מפורט וציוד הכרחי למיפוי כפול אופטי של (מ 'V) פוטנציאל הטרנסממברני וחופשי רשתית תוך-sarcoplasmic (SR) Ca 2 + בלב ארנב Langendorff-perfused. שיטה זו מאפשרת לתצפית ישירה וכימות של מטר V ו2+ דינמיקת Ca SR בלב שלם.

מיפוי אופטי של Intra-sarcoplasmic reticulum Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; ופוטנציאל הטרנסממברני בלב ארנב Langendorff-perfused

מאמר זה מתאר פרוטוקול המעריך את השינויים ברגישות לשריר Ca2+ במהלך התכווצות במיוציטים לבביים מבודדים מלב חולדה. יחד עם אלקטרופיזיולוגיה של הלב, רמות ציטוזול סיסטולי/דיאסטולי Ca2+ והתכווצות/הרפיה, מדידה זו הכרחית בבסיס המנגנונים המתווכים צימוד עירור-התכווצות לב בלב בריא וחולה.

הערכת Myofilament Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; עירור-התכווצות לב ביסוד רגישה זיווגים

אנו מציגים את המתודולוגיה עבור בידוד של מוציטים מורטין וכיצד להשיג מתח או סימני הסידן במקביל עם הקיצור סרקומר באמצעות מכשירי האור הפלואורסצנטית עם מדידות הגיאומטריה הדיגיטלית בו.

הדמיה אופטית של מודציטים מבודדים המוח החדרית

פרוטוקול זה נועד לתאר צעד אחר צעד את הטכניקה של מיצוי והערכה של תפקוד הלב באמצעות cardiomyocytes עור. מתודולוגיה זו מאפשרת מדידה ואימודולציה חריפה של תפקוד myofilament באמצעות ביופסיות קפואות קטנות שניתן לאסוף ממקומות לב שונים, מעכברים לגברים.

להערכת ויטרו של תפקוד הלב באמצעות קרדיומיוציטים עור

אנו מציגים פרוטוקול להערכת ההשפעות האלקטרו-מאלקטרומכניים של הפעלת GtACR1 בקרדיוציטים בארנבים. אנו מספקים מידע מפורט על בידוד התא, culturing ו אדנונגיפי התמרה, ועל ניסויים פונקציונליים עם מלחציים טלאי וסיבי פחמן.

הערכה אלקטרו-מגנטית של אלקטרואופטיקה פעילות מודולציט

מודלים עכבריים מאפשרים ללמוד מנגנוני מפתח של arrhythmogenesis. לשם כך, קרדיומיוציטים באיכות גבוהה נחוצים לביצוע מדידות מהדק תיקון. כאן מתוארת שיטה לבידוד מיוציטים פרוזדוריים וחדרי מורין באמצעות זילוח לנגנדורף מבוסס אנזים מדרדר, המאפשר מדידות בו זמנית של סידן חולף וזרם סידן מסוג L.

בידוד מיוציטים פרוזדוריים וחדריים באיכות גבוהה למדידות בו זמנית של Ca2+ Transients וזרם סידן מסוג L

פרוטוקול זה מתאר כיצד למדוד התכווצות בקרדיומיוציטים ראשוניים אנושיים בוגרים מלבבות תורמים באמצעות מערכת MyoBLAZER, פלטפורמה אמינה להערכת שינויים בהתכווצות הנגרמת על ידי תרופות במהלך הפיתוח הפרה-קליני.

מדידת התכווצות הלב בקרדיומיוציטים ראשוניים אנושיים בוגרים מבודדים

פרוטוקול זה מציג מיפוי אופטי דו-צבעי של לבבות עכברים המתקבלים מחיות בר וחיות בר המושפעות מטכיקרדיה חדרית פולימורפית קטכולמינרגית, כולל מדידות אלקטרופיזיולוגיות של מתח טרנסממברנה וטרנזיאנטים תוך-תאיים Ca2+ ברזולוציה טמפורלית ומרחבית גבוהה.

מיפוי אופטי של לבבות בצבע כפול מעכברי RyR2R2474S של טכיקרדיה חדרית פולימורפית קטכולמינרגית

חקור תפקוד התכווצות לקוי וטרנזיינטי סידן במיוציטים מבודדים של מכרסמים. שיטה זו מאפשרת למדענים ללמוד על מנגנוני אי-ספיקת לב ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

ניתוח של תפקוד לקוי של התכווצות הלב ו- Ca^{2 +} טרנזיינטים במיוציטים של מכרסמים

גלה סרטונים נוספים